Способ определения стрессореактивности животных

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к физиологии, . , и может быть использовано для определения стрессореактивности животных. Цель изобретения - сокращение времени анализа и сохранение жизни подопытных животных, (ивотных подвергают стрессируютчему воздействию путем иммобилизации , затем берут кровь и определяют в ней уровень бласттрансфотэмации и при увеличении этого уровня до 30% в пробе крови, взятой после иммобилизации, по сравнению с уровнем в пробе, взятой до иммунизации, определяют высокую стрессореактивность, а. при уровне ниже 30% - низкую стрессор еактиБНость. По сравнению с прототипом сокращается время анализа на 235 мин, при этом подопытные животные остаются живыми.

Со}ОЗ ССЕЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК ням ),а } 71

gq )q 0 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

r}G ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ П.}НТ ССО (21) 4669135/14 (22) 30.03.89 (46) 29.02.92. Бюл. }"- 8 (71) Институт зоологии и физиологии

АН МССР (72) E.Â.Áàåíà и З.Я.Лрестова (53) 615. 375 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Y - 1293677, кл. Г 01 N 33/48, 1987. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТРЕССОРЕАКтИВНостк >а}вотНЫХ (57) Изобретение относится к области медицины, а именно к физиологии, и может быть использовано для определения стрессореактивности животных.

Изобретение относится к биологии, медицине и ветеринарии, а именно к иммунофизиологии, и может быть использовано лля выявления степени реактивности иммунной системы животных к действию стресс-факторов.

Целью изобретения является сокра- щение времени анализа и сохранение жизни подопытных животных.

Способ осуществляют следующим об-. разом.

В опытах используют беспородных морских свинок-самцов весом 500-551 г

\ и крыс-самцов гетерозиготной популяции Vistar с массой тела 150-180 г.

Ъ

Морские свинки подвергаются стрессу иммобилизацией путем жесткой фиксации на спине, крысы — путем помешения в пенале. Кровь берут посредством кардиал ьн ой .пункции (у крыс в р яде, Цель изобретения — сокращение времени анализа и сохранение жизни подопытных животных. животных подвергают стрессирующему воздействию путем иммобилизации, за"åè берут кровь и определяют в ней уровень бласттрансфовмации и при у-величении этого уровня до 307 в пробе крови, взятой после иммобилизации, по сравнению с уровнем в пробе, взятой до иммунизации, определяют высокую стрессореактивность, а при уровне ниже 30Š— низкую стрессореактивность. По сравнению с прототипом сокращается время анализа на

235 мин, при этом подопытные животные остаются живыми. случаев из хвостовой вены) до и на °

5-й, 10 — й, 15-й и 30-й минутах воздействия. /}ля определения показатеЛей клеточного иммунитета используют макро- и микрометоды бласттрансформации. При постановке микрометода

5 мкл цельной крови инкубируют в планшетах на протяжении 72 ч в 100 мкл инкубационной смеси, в состав которой вводят среду Игла, глютамин, гентамицин, 2-мер каптоэтанол, эмбриональную телячью сыворотку. Ва 4 ч ло окончания культивирования добавляют 1 мКи

Э

:.Н-тимидина. Ьлетки осаждают на мемГ бранные фильтры; промывают трихлорук- 40 сусной кислотой, этанолом. Растворимость кислотно-растворимой фракции подсчитывают методом сцинтилляционной радиометрии. Для активации Т-лимфоцктов используют фитогемагглютинин

1716448

Фор мул а и з о бр е т ения

Составитель В .Литовченко

Техред А.Кравчук Корректор А,Обручар

Редактор N.,Питкина

Заказ 610 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям .и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Рауигская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент",, r.Óærîðîä, ул. Гагарина,101 (ФГА) в дозе 5 мкг/мп, а для В-лимфоцитов — 100 мкг/мл липополисахарипа (ЛПС) .

Иакрометод отличается от микропо5 становки получением лейкоцитарной взвеси цептрифугированием в одноступенчатом градиенте плотности фикол— верографин. При этом клетки инкубируют в количестве (1 — 5) х 1 г /мл.

О

Для подтверждения стресс-реакции и степени ее выраженности определяют уровень адренокортикотропного гормона (AI(TI в крови методом радиоиммунного анализа (РИЛ), у морских свинок допол-5 нительно определяют концентрацию кор— тизола в сыворотке крови (наборы Института биоорганической химии, r. Минск) .

Пример. 1 (ивотных содержат в течение 7 дней при световом режиме день: ночь = 15:12 ч в условиях, максимально приближенных к комфортным, после чего берут из хвостовой BPHr.i

10 мкл крови и вносят ее в культу- 2-" ральную среду беэ добавления и с до— бавлением ФГА. Ливотных подвергают иммобилизационному стрессу (сажают каждое животное в пластиковый пенал) .

Через 5, 10, 15 мин после начала дей- 30 ствия стресс-фактора. берут кровь из хвостовой вены и добавляют ее в заранее приготовленные планщеты с культуральной средой без и с добавлением

ФГЛ. По окончании забора крови обрабатывают хвост йодом и возвращают крысу в привычнгме условия, предварительно пометив ее.

Пробы инкубируют в термостате при

37оС в течение 72 ч. За 4 ч до окон- 40 чания инкубации вносят 1 мКи Н-тини3 дина. После окончания инкубационного периода пробы переносят на мембранные фильтры, которые затем промывают трихлоруксусной кислогой, этанолом, за- -4» ливают сиинтилляционной жидкостью и подсчитывают радиоактивность кислотно-растворимой фракции.

Спонтанный синтез ДНК до возпействия стрессового фактора составляет !

1058 имп/мин, а при добавлении в куль1.ypv 5 мкг/мл < >ГЛ 5328 имп/мин (индекс стииуляггии Т-ггимАоцитов составляет 5,03) .

Таким образом. Уже на 5-й минуте действия стресс-Аактора HHTfpKc стимуляции бласттрансформации лимфоцитов снизился на 48%. Следовательно, ис-! следуемое животное обладает высокой степенью реактивности иммунной системы.

Способ позволяет проводить отбор животных, предназначенных для лромыщленного и племенного использования при интенсивных условиях содержания с учетом реактивности иммунной системы, которая является одной из составных частей спегвгфической резистент— ности и таким образом предотвращает отсутствие эффекта от вакцинации и других ветеринарных мероприятий, ис-, клгсчает выбраковку животных задолго до истечения срока продуктивного периода.

Предложенный способ позволяет сократить время анализа на 235 мин и сохранить жизнь подопытных животных.

Способ определения стрессореак— тивности животных, включагощий воздействие стрессором на животного, забор крови до и после воздействия с последуюцим ее исследованием, о т л ич а ю шийся тем,, что, с целью сокращения времени анализа и сохранения жизни подопытных животных, в,ка- честве стрессора используют ограниче-, ние подвижности животного, а в пробах крови после ее забора определяют уровень бласттрансформации лимфоцитов и при снижении уровня бласттрансформации до 30% в пробе крови после воздействия стрессора по сравнению с пробой до его воздействия определяют высокую стрессореактивность животного, при уровне бласттрансформации ниже 30% †низкую стрессореактивность.