Способ получения фибриногена

 

Изобретение относится к трансфузиологии, в частности к способам получения препаратов из крови, и может быть использовано для получения фибриногена/Целью изобретения является повышение выхода и степени очистки препарата от плазминогена. Способ осуществляется посредством перфузии плазмы крови через сорбент - сшитый сополимер акриламида, М,м -метиленбисакриламида и (мет)акрильного производного лизина со степенью набухания в воде 700-1000%, при объемном соотношении набухший сополимер: плазма, равном 1 ;(10-12,5). Путем последующего осаждения протромбина, криофибриногена и переосаждения фибриногена сернокислым натрием и фосфатным буферным раствором. Способ позволяет повысить выход фибриногена и получить препарат, очищенный от примесей плазминогена, что повышает его устейчивость при хранении. 2 табл. сл С

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 А 61 К 35/16

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

IlO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

0PI ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4848196/14 (22) 30.05.90 (46) 23.04.92. Бюл. М 15 (71) МГУ им, М.В.Ломоносова и Научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Министерства здравоохранения БССР (72) В.В.Чупов, В.В.Николайчик, Г.Н,Бычка, С.В.Гаврилюк, Я.M.Oñïîâàò, Э.И.Тайц, Л.А.Чупова и Н.А,Платэ (53) 615,316,018:51/55 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

N. 1054955, кл; А 61 К 35/16, 1983, (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФИБРИНОГЕНА (57) Изобретение относится к трансфуэиологии, в частности к способам получения препаратов из крови, и может быть испольИзобретение относится к трансфузиологии, а именно к способу получения препаратов из крови, и может быть использовано для получения фибриногена, Целью изобретения является повышение выхода и степени очистки от плазминогена целевого продукта.

Пример. 1250 мл донорской плазмы пропускают через колонку со 100 мл равновесно набухшего сополимера акриламида, N,N метиленбисакриламида и метакрилоил- =лизина (степень набухания сополимера в воде 700%), так что соотношение сорбента к плазме составляет 1:12,5, со скоростью 800 мл/ч. К полученной плазме при постоянном перемешивании добавляют 250 мл 30%-ной взвеси сульфата бария и инку.. Ж 1727839 А1 зовано для получения фибриногена. Целью изобретения является повышение выхода и степени очистки препарата от плазминогена, Способ осуществляется посредством перфузии плазмы крови через сорбент— сшитый сополимер акриламида, N,N -мети-! ленбисакриламида и (мет)акрильного производного лизина со степенью набухания в воде 700 — 1000%, при объемном соотношении набухший сополимер. плазма, равном

1:(10 — 12,5). Путем последующего осаждения протромбина, криофибриногена и переосаждения фибриногена сернокислым натрием и фосфатным буферным раствором.

Способ позволяет повысить выход фибриногена и получить препарат, очищенный от примесей плазминогена, что повышает его устейчивость при хранении. 2 табл. бируют в течение 20 мин. Осадок отделяют центрифугированием при 2000 об/мин в течение 10 мин. К полученному супернатанту (1450 мл) при постоянном перемешивании QO добавляют 300 мл 30 -ной взвеси сульфата (ь) бария и инкубируют еще 20 мин, Осадок О отделяют центрифугированием при 2000 об/мин в течение 10 мйн. К супернатанту (объем 152 мл) при постоянном перемешивании добавляют 150 мл глицинового буфера (рН 9,1) и 900 мл 16%-ного раствора сульфата натрия так, что конечная концентрация соли в растворе составляет 5,0 . После 20-минутной инкубации осадок (криофибриноген) отделяют центрифугированием при 2000 об/мин в течение 15 мин.

К надосадочной жидкости прибавляют 20 мл

16%-ного раствора сульфата натрия (конеч1727839

Таблица 1

Выход фибриногена по количеству све рты вающего белка,%

Объемное соотношение сорбент: плазма

Содержание плазминогена в фибриногене, мас, %

УстойчиПример вость сгустка фибрина, ч

Метакрилоил-1=л из и н

Акрилоил-Lлизин

Акрилоил-1.лизин

99,8 0,1

1;12,5

700

1;11,0 99,8 0,1

850

1:10,0

1000

99,7 + 0,1

Таблица 2 ная концентрация соли составляет 8,5%).

Смесь инкубируют 20 мин, осадок фибриногена отделяют центрифугированием; затем растворяют его в 800 мл 0,2 М раствора хлорида натрия и из полученного раствора. выделяют центрифугированием осадок, который растворяют в 800 мл 1/12 М фосфатного буфера. К раствору вновь добавляют

800 мл 2 M фосфатного буфера, инкубируют

20 мин и осадок отделяют центрифугированием. Полученный белок растворяют в 150 мл 0,2 M раствора хлорида натрия и после лиофилизации хранят на холоду. Все операции проводят при 4 С, общее время выделения 7 — 8 ч. Белок свободен от примесей

Лиз-плазминогена и Глу-плазминогена полностью (по данным гель-электрофореза степень чистоты белка 100%), Устойчивость сгустка фибрина, полученного из выделенной указанным способом фибриногена, составляет 12 ч, свертывающая способность

99,8 0,1 с (табл, 1).

Данные стабильности препаратов фибриногена, выделенных с помощью лизинсоХа акте истика со бента

Производ- Степень наное L-лизи- бухания, % на держащих сорбентов, при хранении в сухом виде при 20 С приведены в табл, 2, Таким образом, при использовании способа повышают выход фибриногена и пол5 учают препарат, очищенный от примеси плазминогена, что повышает его устойчивость при хранении.

Формула изобретения

Способ получения фибриногена путем

10 пропускания плазмы крови через сорбент с ковалентно иммобилизованным L-лизином и последующего осаждения протромбина сернокислым барием, осаждением криофибриногена и переосаждения фибриноге15 на сернокислым натрием и фосфатным буферным раствором, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода и степени очистки от плазминогена, в качестве сорбента используют сшитый сополимер ак20 риламида, N,N -метиленбисакриламида и

l (мет)акрильног0 производного L-ëèçèíà со степенью набухания в воде 700-1000%, а плазму пропускают при объемном соотношении набухший сополимер:плазма—

25 1;10,0 — 12,5.