Штамм респираторного коронавируса свиней для изготовления вакцины против трансмиссивного гастроэнтерита свиней

 

Использование: ветеринария, вирусология , разработка средств специфической профилактики против трансмиссивного гастроэнтерита свиней. Сущность изобретения: изолирован штамм респираторного коронавируса свиней, который прошел необходимый тест контрольных испытаний, чтобы называться вакцинным штаммом CAPM-V355 респираторного коронавируса свиней. Вакцинный штамм CAPM-V355 стабильно накапливается в высоких титрах в культуре клеток и обладает выраженными иммуногенными свойствами. Данный штамм апробирован с положительным результатом в лабораторных условиях . 6 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (l 9) (I I ) (5()5 С 12 N 7/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4864608/13 (22) 17,07.90 (46) 07.05,92. Бюл. ¹ 17 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р,Коваленко (72) В.А.Сергеев, Г.Г.Рухадзе, Т.И.Алипер и Е.А.Непоклонов (53) 576.8.094.29 (088.8) (56) Сергеев B.À., Рухадзе Г.Г., Алипер Т,И, Респираторный коронавирус свиней, — Вестник с.-х, науки, 1989, ¹ 8 (396), с. 96 — 100. (54) ШТАММ РЕСПИРАТОРНОГО КОРОНАВИРУСА СВИНЕЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ

ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ТРАНСМИССИВНОГО

ГАСТРОЭНТЕРИТА СВИНЕЙ

Цель изобретения — специфическая профилактика трансмиссивного гастроэнтерита (ТГС) при помощи природно-аттенуированного штамма респираторного коронавируса свиней (PKC).

В 1987 г из бронхоальвеолярной ткани здоровой свиньи был изолирован цитопатический агент, который в дальнейшем был идентифицирован как РКС, имеющий тесное антигенное родство с вирусом ТГС, Данный штамм прошел 50 пассажей в пермиссивной ткани линии клеток почки свиньи(линия СПЭВ). В результате был получен модифицированный вариант вируса, который прошел необходимый тест контрольных испытаний, чтобы называться аттенуированным штаммом РКС, обозначенным

"ЛУК".

Штамм депонирован под номером

CAP М вЂ” V355, (57) Использование: ветеринария, вирусология, разработка средств специфической профилактики против трансмиссивного гастроэнтерита свиней. Сущность изобретения; изолирован штамм респира-,орного коронавируса свиней, который прошел необходимый тест контрольных испытаний, чтобы называться вакцинным штаммом

CAPM-V355 респираторного коронавируса свиней. Вакцинный штамм CAPM-V355 стабильно накапливается в высоких титрах в культуре клеток и обладает выраженными иммуногенными свойствами.

Данный штамм апробирован с положительным результатом в лабораторных условиях. 6 табл.

Предложенный штамм обладает следующими свойствами. Величина вирионов

90 — 130 нм. Вирусные частицы имеют сферическую форму и характерную для коронавирусов ультраструктуру с отходящими от тела вириона пепломерами. Плавучая плотность в градиенте сахарозы 1,19-1,21 г/см .

Штамм чувствителем к эфиру и хлороформу, умеренно чувствителен к трипсину.

Прогревание при 60 С в течение 120 мин приводит к инактивации культурального вируса, Замораживание при — 20 С и оттаивание снижаеттитр инфекционной активности в культуре клеток. Фоточувствителен.

Штамм не агглютинирует эритроциты морской свинки, крупного рогатого скота, свиней и птиц.

Размножается с развитием цитопатического действия в пермиссивных линиях почки и щитовидной железы свиньи (СПЭВ, 1731812

П П С и ЩС), достигая инфекционного титра

10 — 10 ТЦД50/мл.

Рассматриваемый штамм респираторного коронавируса свиней индуцирует синтез вируснейтрализующих антител к вирусу

ТГС в организме свиней и морских свинок.

Антигенные свойства САРМ вЂ” V355 респираторного коронавируса свиней (и = 5) приведены в табл, 1.

Антигенное родство с вирусом ТГС изучали при помощи перекрестной реакции нейтрализации.

Антигенное родство штамма CAPM—

V355 РКС и штамма ТМК ТГС в реакции нейтрализации приведено в табл, 2.

Приведенные данные свидетельствуют о тесном антигенном родстве штамма

CAP M — \/355 респираторного коронавируса свиней и штамма ТМК вируса ТГС.

Реактогенные свойства штамма CAPM—

V355 и патогенность штамма CAPM — Ч355для естественно-восприимчивых и лабораторных животных(n = 10) приведены в табл. 3.

Приведенные данные свидетельствуют об отсутствии реактогенных свойств у штамма CAPM — V355, Приобретенные эволюционные свойства авирулентности штамм CAPM — V355 PKC сохраняет в течение 6 последовательных пассажей на естественно-восприимчивых животных (поросятах-гнотобиотах).

Реверсибельность штамма CAPM—

V355 на поросятах-гнотобиотах (n = 3) приведена в табл. 4, В лиофилизированном состоянии при

4 — 10 С штамм хранится в течение года, практически не снижая инфекционной активности, У вакцинированных поросят-гнотобиотов и свиноматок штамм CAPM — V355 стимулирует формирование локального и системного иммунитета (табл, 5 и 6) при контрольном заражении вирулентным штаммом вируса ТГС в дозе 2 х 10 ЛДво, Иммуногенность штамма САРМ вЂ” V355

PKC (индукция активного иммунитета) приведена в табл. 5.

Сравнительная иммуногенность штаммов CAPM — V355 и ЛУК респираторного коронавируса свиней (индукция пассивного иммунитета) приведена в табл. 6.

Установлено, что титры специфических антител к вирусу ТГС в молозиве и молоке свиноматок, иммунизированных штаммом

CAPM — V355 вируса РКС,достигают уровня

1:5000 — 1;10000 в ИФА и сохраняют на достаточно высоком уровне до конца лактации.

Пример 1. Расплодку контрольного штамма CAPM — V355 для приготовления

5 Хенкса и вносили 10 мл культурального

15 ной активности культурального штамма

20 САРМ вЂ” V355 составлял 10 ТЦД5о/мл. Сви9 номаток вакцинировали двукратно, на 70 и

100 дни супоросности, интраназально и внутримышечно, Оценку иммуногенности вакцины проводили по результатам конт25 рольного заражения поросят вирулентным штаммом вируса ТГС в дозе 2 х 10 ЛД5о, Сохранность поросят в группе вакцинированных свиноматок составила 76 /, а в группе контрольных свиноматок — 80 .

Предлагаемый штамм апробирован с положительным результатом в лаборатор-. ных условиях.

55 В отличие от известного штамма ЛУК штамм CAPM — V355 РКС стабильно накапливается с высоким титром в культуре клеток (не ниже 10 ТЦД5о/мл) и обладает более в выраженными иммуногенными свойствами, 35

50 вакцины проводили в роллерной культуре клеток СПЭВ. Из роллера со сформированным монослоем сливали ростовую среду, отмывали монослой 3 раза раствором штамма CAPM — V355 РКС при множественности заражения 10 ТЦД/клетка, После адсорбции при 37 С в течение 1,5 ч инокулят удаляли и вносили поддерживающую среду с добавлением трипсина 5 мкг/мл, Урожай культурального вируса собирали через 48 ч после заражения и инкубирования вируса в культуре клеток до проявления цитопатического действия на 50%. После замораживания — оттаивания культуральную вируссодержащую жидкость соединяли со средой высушивания, антибиотиками и лиофилизировали. При этом титр инфекционПример 2. Выращивание культурального штамма CAPM — V355 РКС проводили аналогичным способом с некоторыми изменениями. Монослой при заражении раствором Хенкса отмывали 4 раза, Температура при адсорбции и инкубировании вируса составляла 38 С, Множественность заражения составляла 1 ТЦД/клетка, Время инкубирования вируса после заражения составляло 60 ч при проявлении цитопатического действия на 60 . Лиофилизацию проводили в условиях (по примеру

1). Титр инфекционной активности культурального штамма CAPM — V355 РКС составлял 10 ТЦДво/мл. Схема вакцинации свиноматок и условия контрольного заражения поросят были аналогичными примеру 1.

Сохранность поросят в группе вакцинированных свиноматок составила 74, à в пометах контрольных свиноматок — 3/.

1731812

Таблица 1

Таблица 2

П р и м е ч а н и е. * — реципрокные величины среднегеометрических титров.

Таблица 3

Таблица 4

Штамм CAPM — V355 найдет широкое применение при разработке средств специфической профилактики трансмиссивного гастроэнтерита свиней в свиноводческих хозяйствах страны, Формула изобретения

Штамм респираторного коронавируса свиней САРМ вЂ” V355 для изготовления вакцины против трансмиссивного гастроэнте5 рита свиней.

1731812

Таблица 5

Таблица 6

Доза вакцины (ТЦДцо/мл) Результаты контрольного заражения по осят

Схема иммунизации свиноматок

Вакцинный штамм

PKC

Группа свиноматок сохранности заболело погибло заражено

70 день супоросности: интраназально внутримышечно

100 день супоростности; внутримышечно

70 день супоросности интраназально внутримышечно

100 день сопоросн ости: внутримышечно

CAPMV355

Зх10

2х10 п=5

76

37

2х10

ЛУК

Зх10

2х10

n=5

50о

16

2х10

3 п=2

8 оО

12

15

Составитель В.Свиридова

Техред М.Моргентал Корректор Н.Король

Редактор О,Хрипта

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 1557 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35. Раушская наб., 4/5