Способ определения криозащитных свойств консерванта для длительного хранения эритроцитов

 

Способ определения криозащитных свойств консерванта для длительного хранения эритроцитов. Использование: для быстрого определения криозащитных свойств консерванта эритроцитов. Цель : сокращение времени анализа и упрощение способа. Сущность изобретения: путем многократного (до 15 р.аз) замораживания до - 196°С и нагревания смеси консерванта с эритроцитами до температуры стеклования консерванта и последующего нагрева до 45°С смеси, в которой определяется степень повреждения эритроцитов по уровню гемолиза. Положительный эффект: применение способа позволяет упростить анализ криозащитных свойств консервантов дли длительного хранения эритроцитов и сократить время анализа до 10-12 ч.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 А 01 N 1(02

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4754035/14 (22) 30.10.89 (46) 07.06.92. Бюл. М 21 (71) Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР (72) А.В.Зинченко и В.А.Моисеев (53). 615.475(088.8) . (56) Воротилин А.М. Замораживание клеток крови до- 196 С под защитой низкомолекулярных гликолей и глицерина. Повышение эффективности криоконсервации. Криобиология, 1985, МЗ, с, 15 — 20. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КРИОЗАЩИТНЫХ СВОЙСТВ КОНСЕРВАНТА ДЛЯ

ДЛИТЕЛЬНОГО ХРАНЕНИЯ ЗРИТРОЦИТОВ (57) Способ определения криозащитных свойств консерванта для длительного храИзобретение относится к криобиологии и может быть использовано для быстрого определения криозащитных свойств консерванта эритроцитов, Известен способ выбора консерванта, основанный на анализе эвтектических характеристик водного раствора криопротектора, как основного компонента консерванта.

Для анализа эвтектических характеристик строят диаграммы плавкости системы вода— криопротектор, и криопротектор считывается тем лучще, чем ниже температура плавления эвтектической смеси.

Недостатком известного способа является его длительность и сложность, которые обусловлены рядом факторов. Построение диаграммы плавкости криопроектор — вода во всем диапазоне концентраций — проце, >SU<„1738198 Al

2 кения эритроцитов. Использование: для быстрого определения криозащитных свойств консерванта эритроцитов. Цель: сокращение времени анализа и упрощение способа.

Сущность изобретения: путем многократного,(до 15 раз) замораживания до — 1,96 С и нагревания смеси консерванта с эритроцитами до температуры стеклования консерванта и последующего нагрева.до 45 С смеси, в которой определяется степень повреждения эритроцитов по уровню гемолиза. Положительный эффект: применение способа позволяет упростить анализ криозащитных свойств консервантов для длительного хранения эритроцитов и сократить время анализа до 10 — 12 ч. ъГ дура длительная и трудоемкая, растягивающаяся, как правило, на месяцы.

Многие из известных эффективных.криопротекторов обладают свойствами стекловаться при охлаждении, что затрудняет нахождение эвтектических температур и ОО концентраций. ювао

Так, глицерин обладает свойством стек- 4О ловаться в водных растворах при концент- QQ .рации более 40 g, и поэтому найти температуру кристаллизации эвтектической смеси с достаточной степенью точности сложно. Состав, близкий к эвтектическому, пв»>й не кристаллизуется даже при весьма длительных выдержках в соответствующей зоне температур. Аналогичным свойством обладают и другие криопротекторы: 1, 2 про. пандиол, полиэтиленгликоль и т,д.

1738198

25, хлористы и натрий 0,7 и остальное — вода.

Гемолиз эритроцитов в исходе и после

5, 10 и 15 циклов изменений температуры консерванта от -196 C до Тс (до -75 С для данного консерванта) составил, %: 5,35.

Составитель Г.Тюнина

Редактор B.Бугренкова Техред М.Моргентал Корректор Н.Король

Заказ 1945 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

На диаграммах плавкости таких систем обычно линия ликвидуса, отвечающая температурам кристаллизации криопритектора, не регистрируется, и найти эвтектическую температуру и концентрацию таких систем трудно.

Цель изобретения — сокращение времени анализа криозащитных свойств консерванта и упрощение способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Эритроциты, отмытые от плазмы, смешивают с консервантом и замораживают до — 196 С.

Затем образцы нагревают до температуры стеклования (Тс) криозащитной среды и повторно замораживают до -196 С.

Такое периодическое изменение температуры осуществляют 5-15 раз под контролем дифференциального сканирующего калориметра. После образцы размораживают и нагревают на водяной бане до+45 С- и оценивают степень повреждения эритроцитов по уровню гемолиза. .Уровень гемолиза, выявленный после однократного замораживания образца в консерваторе до — 196 С и нагревания до

+45ОС, принимают за исходный.

Пример 1. Донорскую кровь человека, полученную на глюгицире, центрируют при

800 ф втечение 5 мин, отделяют плазму, Полученные эритроциты смешивают с консер,вантом на основе глицерина в соотношении

1:2, с другими консервантами 1:1.

А. Пропандиосахароль содержит в мас.%:

1,2-пропандиола 35, сахарозы 3, хлористого натрия 0,7 и воды 61,3.

Гемолиз эритроцитов в данном консерванте в исходе и после 5, 10 и 15 циклов измененйя температуры от -196 до -110 С, %; 0;7, 1,05, 1,33 и 1,65 соответственно, Пример 2, Донорские эритроциты смешивают с консервантом на основе полиэтиленгликоля (ПЭГ) в соотношении 1:1.

Б. Консервант с ПЭГ молекулярной массы 1500 содержит в мас,%: ПЭГ1500

9,33, 9,83 и 10,0.

Пример 3. Донорские эритроциты смешивают с консервантом на основе гли10 церина в соотношении 1:2.

8; Консервант, мас%: глицерин 60, вода

40, температура стеклования — 114 С, "

Гемолиз эритроцитов в исходе и после

5, 10, 15 циклов изменений температуры

15 консерванта от-196ОС до — 114 С равны, %:

1,17, 7,5, 8,66 и 9,33.

Пример 4; Донорские эритроциты смешивают с консервантом в соотношении

1:2.

20 Г. Состав консерванта: маннит 40,0 г, хлористый натрий -7,0 г, двузамещенный .фосфорнокислый натрий 0,3 г, глицерин400 мл, вода бидистиллированная до 1 л.

Температура Тс равна -108 С, Гемолиз

25 эритроцитов.в исходе и после 5, 10 и 15 циклов изменений температуры консервантаот-196 Сдо-108 С составил, %:4,5; 5,67;

7,0 и 8,66.

Применение способа позволяет упро30 стить анализ криозащитных свойств различных консервантов для длительного хранения эритроцитов и сократить время анализа до 10 — 12 ч.

Формула изобретения

35 Способ определения криозащитных свойств консерванта для длительного хранения эритроцитов, включающий првинкубацию клеток в криозащитной среде, замораживание-оттаивание и последующее

40 определение уровня гемолиза, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью сокращения времени анализа и упрощения способа, гемолиз эритроцитов определяют после периодических 5-15-кратных изменений

45 температуры замороженного образца в диапазоне от-196 С до температуры стеклования консерванта.