Способ изготовления вирусвакцины против инфекционного ларинготрахеита кур

 

Использование: ветеринарная вирусология и биотехнология. Сущность изобретения: при изготовлении вирусвакцины в качестве стабилизирующей защитной среды используют стандартную лактозопептонную смесь в соотношении 1:2 с вирусным материалом и лиофилизируют по предлагаемому режиму в течение 60-65 ч, В отличие от известных эмбриональных вакцин против ИЛТ кур вирусвакцина, полученная по предлагаемому способу, ареактогенна, высокоиммуногенна, более экономична, сохраняет биологическую активность и иммуногенную эффективность в течение 12 мес хранения при 2-6°С. 1 табл.

„„5U ÄÄ1750683 А1

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 А 61 К 39/245

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗО6РЕТЕНИЕ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Изобретейие относится к ветеринарной мйи вирусы с биолотической активностью вирусологии и биотехнологии, в частности к — (10 -10 )ЛДБо или ЭИД5о, при этом в каспособу изготовления вирусвакцины против честве стабилизатора используют стерильинфекционного ларинготрахеита (ИЛТ) кур, ное обезжиренное коровье молоко (обрат) в и может быть использовано в научных и: соотношении 1;1. Однако эти вакцины облапроизводственныхлабораториях, занимаю- дают выраженной реактогенностью и низщихся изготовлением биопрепаратов., кой иммуногенностью.

;. Известны способы изготовления виру- . Известен также способ изготовления свакцины против ИЛТ кур, включаюЩие сухой вирусвакцины против ИЛТ кур из кловЫращивание вируса в различных системах на "НТ" штамма "ЦНИИПП", включающий (культурах клеток и куриных эмбрионах) с выращивание его на 10-дневных куриных последующим сбором вируссодержащего эмбрионах в течение 120 ч, инкубироеание материала, его стабилизацию и высушива- . прй 33,5+0,5 С, охлаждение при+2 — 6 С в ние под вакуумом.:::.:, -: - течение 6 — 12 ч, сбор вирусного материала, Все вакцины идентичны, так как выра- его размол на коллоидной мельнице (К щивание вакцинных штаммов проводят по: 100/0, К 60/$) при роторе, ввинченном до общепринятой методике, используют штам-. деления 0,1-0,52 в течение 10-12 мин, филь1 - "; . "::.. .2 (21) 4839720/13 . ":: :: (54) СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВИРУСВАК(22) 03.05,90 .....: - . .... ЦИНЫ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО ЛА(46) 30.07.92. Бюл. Q 28,:, :, - РИНГОТРАХЕИТА КУР (71) Всесоюзный научно- исследовательский (57) Использование: ветеринарная вирусоинститут ветеринарной вирусологии и мик-" логия и биотехнология; Сущность изобретеробиологии .;.,:.:: .:.::- ..: ния . при изготовлении вирусвакцины в (72) А.А. Шевченко, Ю;С, Дутко, Н.А. Изото- качестве стабилизирующей защитной срева, В.M. Евсеев, Н,В. Малоголовкййа и М.А. ды используют стандаргйую лактозопепЛавров .-:- ::,,:: .::::: .: :: тонную смесь в соотношений 1:2 с вирусным (56) Демин М;А. и др, Усовершенствование .: материалом и лиофилизируют по предлагатехнологии изготовления вакцины против, . емому режиму в течение 60-65 ч. В отличие инфекционйого ларинготрахеита, тезисы от известных эмбриональнйх вакцин продокладов научной конференции, посвящен-:: тив ИЛТ кур вирусвакцина, полученная по ной 30-летию ВНИИВВиМ. Покров, 1988, предлагаемому сйособу, ареактогеннэ, выс.84-85, =.:,: .,:- ::(:..-,::.- .: .. - :.: сокоиммуногенна, более экономична, соДмитриева Л.А„Малуако В.В, Вирусо- -храняет биологическую актйвность и вакцина против инфекционного ларингот- иммуногенную эффективность в течение 12 рахеита птиц.-Ветеринария, 1986, и 6, с.. мес хранения при 2 — 6 С, 1 табл.

32-34.

1750683

Технология получения обезжиренного коровьето молока сложная. Она включает получение и сепарирование свежего молока до йолучения обрата с жирйостью не выше

0,1%, стерилизацию при 110ОС текучим паром дробно, триждй, каждый раз по 20-40 мин с интервалом 24 ч, Обезжиренное коровье молоко должно иметь величину рН не ниже 6,6, плотность в пределах 1,029-1,034, храниться при температуре 4 — 6 С не более

1,5 мес. Это не всегда гарантирует его xopoшее качество, так как среда нестандартная и имеет различный состав компонентов, который зависит от качества кормов, условий содержания дойоров и времени года. Кроме того, использование обезжиренного коровьего молока в качестве защитной среды приводит к удорожанию конечного продукта за счет расходов на содержание доноров, длительную подготовку молока и его хранение.

50 трование через два слоя стерильной марли, смешивание с равным количеством стерильного обезжиренного коровьего молока, замораживание при - 40-50 С в течение 1248 ч, высушивание под вакуумом 60 — 100 5 мкм в течение 112 — 114 ч, Вакцина имеет активность 10 — 10 ЭИД ю/мл, применяется только аэрогенно, обладает слабой реактогенностью, В процессе хранения в течение 6 — 9 мес при+ 4-6 С инфекционная 10 активность снижается до 10 -10 ЭИД

50/мл.

При изготовлении этой вакцины используют в качестве стабилизирующей защитно"й. среды, пр.и,:лиофилизации, 15 обезжиренное коровье молоко (обрат) — пищевой продукт, нестандартный компонент.

Лиофильное высушивание проводят по сле- дующему режиму: предварительное замораживание при-40 — 50 C втечение 12-48ч, 20 полки сублимационной камеры охлаждают до -40 — 44 С, затеМ ампулы с вакцйной помещают в камеру. В течение 74 ч температуру полок в камере доводят до ООС, выдерживая материал в зоне эвтектических температур (- 37 — 39 С) в течение 50 ч. Затем в течение 18 ч температуру полок в камере поднимают до+ 23 С и удерживают на этом уровне до конца лиофилизации. Температуру койденсатора в процессе лиофйлиэации 30 поддерживают в пределах 70-75 С, вакуум . 60-.100 мкм. Весь цикл лиофилизации длится 112 — 114 ч. Длительный процесс лиофилизации влияет на физические показатели (растворимость, относительйую влажность) 35 и биологические свойства (активность, иммуногенность, реактогенность). При хранении снижается биологическая активность на 1,5 — 2,0 lg ЭИД5о/мл, Цель изобретения — ускорение способа, снижение ареактивности и повышение стабильности при хранении целевого продукта, Поставленная цель достигается тем, что в качестве стабилизирующей защитной среды вирусвакцины используют не пищевой продукт, а стандартную 10%-ную лактозопептонйую смесь в соотнощении 1:2 к вируссодержащему материалу, Такая вакцина сохраняет биологическую и иммуногенную активность s течение .12 мее хранения при

2-6ОС, ареактогенна для цыплят с 15-дневйого возраста, Пример. При иэготовлейии вирусвакцины против инфекционного ларинготрахеита кур испбльзуют клон НТ штамма

ЦНИИПП вируса ИЛТ (регистрационный N.

61 в коллекции ВГНКИ) с биологической активностью 10 . -10. ЭИД5о/мл, В качестве

6,8 7.0 стабилизирующей защитной среды высуши- вания 10% смесь стайдартиых компонентов .: . лактозы (ТУ 6-09-2293-79) и пептойа (ГОСТ .:

13805-76) отечественного производства, взятых в соотношении 1.1, которую добав- ляют к вируссодержащему материалу в соотношении, 1;2, Затем фасуют при помощи дозатора(AT-5) в стерильные ампулы по 4 мл .. или флакойы rio 6 мл, лйофилйзацию проводят при вакууме 100 мкм, замораживают при — 48 С в течейие 9 ч, затем выдерживают материал при - 30 С в течение 40 ч, после чего доводят температуру до 22ОС в течение

16 ч и йроводят досушивание. Это позволило ускорить способ изготов- . ленйя вирусвакцины, снизить ареактивность и и овысить стабиль ность при .: хранении целевого готового продукта, что подтверждено опытами tio Сравнительной оценке вакцины с предлагаемой защитной средой и режимом лиофилизации, а также с известной .(обезжиренным коровьим молоком) и известным режимом лиофилизации.

Эти данные приведены в таблице, Иэ таблицы видно. что лиофильное высушйвание вирусвакцины с обезжиренным, коровьим молоком, в качестве защитной. среды, в соотношении 1:1 с вирусным сйрьем происходит в течение длительного времени 112»-2 ч. Отрйцательное давление:в. процессе сублимационной сушки составляет 90+.5 мкм. Замораживание проводят при минус 40»+.2 С в течение 42» 2 ч, выдержи- вают материал в зоне эвтектической температуры (минус 37»-2 С) в течение 50»-1 ч, после чего доводят температуру до плюс

22».1 С в течение 62"=2 ч и йроводят досушивание. Длительный процесс лиофилизации влияет на растворимость (время растворения 4»-1 мин), массовую долю вла5 . 1750683

6 ги (1,2+0,5%), изменяют иммуйобиологиче- : водительность труда в 1,5 — 2 -раза; снижаютские свойства препарата (активность сни- ся зкономические затраты за счет использожается на 1,5-2,0 !ц ЭИД5о/мл), а зто вания стандартной защитной среды и негативно отражается на иммуногенной зф- исключения нестандартного пищевого профективности препарата, Срок хранения и 5 дукта - молока. примененияегоснижаетсядо7м мес.. ..; .. Формула и.зобрете н ия .- При использованйи предлагаемой за-: ..::- Способ изготовления вирусвакцины щитной средй в виде 10%-ной смеси лакто- " против инфекцйонного ларинготрахеита

:зы и пептона,- взятых в соотноШеййи 1:1 и кур, включэющий- выращивание вируса инсмешанной с вирусным материалом 1:2 сни- 10 фекционйого ларинготрахеита кур штамма жает .расход среды вдвое, лиофильное вы-.. " ЦНИИПП, его стабилизацию .и лиофилиза сушивание по предложенному режиму цию.отлич ающий ся тем,что,сцелью ., протекает на 60 ч бйстрее и стабильнее; зто ускорения способа, снижения ареактивноспособствует сниженйю арективности"и йо-.. " сти и повышения стабильности при храневышению стабйльности при хранении гото- 15 нии целевого продукта, в качестве ., вого продукта, При изготовлении . стабилизируюЩей среды используют 10Дпредлагаемой вакцийы используется более . ную смесь лекторы и пептона, взятых в соэкономическая, удобная, доступная, стан- отношении 1:1, которую добавляют к дартная стабйлизирующая лактозопептон-::. вируссодержащему материалу в соотноше: ная смесь; йсключается" из технологии 20 нии1:2, лиофилизацию проводят при вакуу- пищевой продукт(молоко); вакцина в пред- -:. ме 60-150 мкм, замораживание — при минус ложенном соСтаве ареактогенна, иммуно-: . 45-50ОС в течение 8-10ч, затем выдержива: генна, легко растворима, имеет хороший: : ют материал-при-28-32ОC в течение 40-45 вид, сохраняет биологйческие свойства в .. ч, после чего довОдят температуру до плюс течение 12 мес хранения при 2-6 С;: при 25 22-23ОС в течение 15-18 ч и проводят досуизготовлении вакцины повышается произ - - . ::шивание. I с

1750683

Е 7

"« е м1 е е

1

t I

I бб о

II

1 3

CIC

+I

Д

CIl о

CII Р бЧ

gl

1 C ФФ е v

I Й сф3

ICC о

+1 ю в !

Й бЧ

+I

Ol й!!

Б:!

1 ЗФ 1...1

1 1

+I, !

Ч"

1Ч 1

М бЛ 1 !

З!а! II, 1 ! g!ð

3Z !I *

I g & g y !ба !б„сц

I О 1- сб,в !

1 бЧ б ф 1

Ф 1

+! бб!

IA I

+1 1 о

ОЪ

1 1

1 !

1- >М е а

1 Е Е

1 8 Я

1!, бб Е ! еБ

Z CC е О

1 бО

I

Ф 1

Е I

Сб е 1

I" 1

I И, 1- g Ф;)в 4 ! Ф

31

j I KR *.II .б f 1

3"СЧ ф бб

CL -Cl Z М