Способ получения биологически активных веществ элеутерококка колючего еlеuтнеrососсus sеnтiсоsus rupr. ет махiм.

 

Использование: биотехнология, медицина . Сущность изобретения: биологически активные вещества элёутёрЬкокка колючего получают из биомассы, полученной и выращиваемой в два этапа на модифицированной питательной среде Мурасиге-Скуга. 3 табл. Ч- Ё

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

1792356 АЗ (sl)s С 12 М 5/04

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ. (21) 4928036/13 (22) 15,04.91

:..(46) 30,01.93. Бюл. ¹ 4 (71) Институт молекулярной биологии и генетики АН УССР (72) В.А.Кунах, Т.П.Гулько, С.И.Губарь и

Л.И. Войтюк (73) Институт молекулярной биологии и генетики АН Украины (56) Березнеговская Л.Н. и др. Культура тканей и клеток алкалоидных растений, Томск;;

Издательство Томского университета, 1975, . с.196.

Калинин Ф.Л. и др. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений, Киев: Наукова думка, 1980, с,488, Бутенко P.Ã. Культура клеток растений и биотехнология. M.: Наука, 1986, с.3 — 20.

Авторское свидетельство СССР

Изобретение относится к биотехнологии и касается способа получения культуры ткани элеутерококка колючего, продуцирующей биологически активные вещества— фенольные гликозиды (элеутерозиды), используемые в медицине в качестве общестимулирующих препаратов, обладающих адаптогенным действием.

Известны способы получения биологически активных веществ из культивируемых, клеток растений. Однако получаемая на искусственных питательных средах клеточная биомасса накапливает, как правило, значительно. меньше биологических веществ, чем это свойственно растениям в природе. В большинстве случаев спектр биологически активных вещества, идентифицируемых в культивируемых клетках, также резко отличается от такового в исходных растениях.

N 885252, кл. С 12 N 9/00, 1981, (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ЭЛЕУТЕРОКОККА КОЛЮЧЕГО E LEUTH егоCOCCUS

SENTIC0SUS RUPR, ЕТ MAXIM. (57) Использование; биотехнология, медицина. Сущность изобретения: биологически активные вещества элеутерококка колючего получают из биомассы, полученной и выращиваемой в два этапа на модифицированной питательной среде Мурасиге-Скуга. 3 табл. л

Существуют разли чные с.посо6 ы йол- учения продукти вн ых клеточ н ы х кул ьтур.

Сводятся они чаще всего к подбору оптимальных условий культивирования и подбору оптимальных составов питательных сред, Для элеутерококка такйе способы не разработаны. ,I

Цель изобретения — разработка способа получения культуры ткани эутерококка колючего, биомасса которой накапливает фенольные гликозиды (элеутерозиды), свойственные интактному растению.

Способ состоит в том, что культуру тканей элеутерококка получают на питательной среде Мурасиге-Скуга, дополненной 1 мг/л

2,4-Д и 0,1 мг/л кинетна, и в дальнейшем выращивают в пересадочной культуре на агаризованной либо жидкой питательной

1792356

Табли ца 1

Каллусообразование элеутерококка колючего на разных типах питательных сред

Каллусообразование на разных тиг-ах эксплантатов

Минеральная основа среды

Содержание фитогормонов, мг/л

2,4- Д листовая пластинка стебель черешок листа кинетин

Мурасиге- Скуга.

1

1

0,1

0.1

0,02

Эриксона

П р и м е ч а н и е: + образование первичного каллуса

- отсутствие каллусообразования среде Мурасиге-Скуга, дополненной 4 мг/л гк- НУК и 1 мг/л БАП, Пример. Различные части молодых листьев, стеблей или корней после поверхностной стерилизации общепринятыми методами высаживают на питательную среду

Мурасиге-Скуга, дополнительно содержащую 1 мг/л 2.4-Д и 0,1 мг/л кинетина. Пробирки или колбы с высаженными в асептических условиях первичными эксплантатами переносят в термостатированное темйоЪ" помещейие (с = 24-28 С. относительная влажность — 70 — 807), Через

30-50 суток на эксплантатах появляется каллус. На средах, содержащих другие концентрации ауксина и цитокинина каллусообразование не происходило (табл.1).

Полученные каллусы характеризуются медленным темпом роста и имеют коричневый цвет. С целью повышения темпа роста каллуса и получения пассируемой продуктивной культуры ее переносят в жидкую или агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, дополненную 4 мг/л а -НУК и 1 . мг/л БАП. На других типах питательных сред пассируемая культура характеризуется более медленным темпом роста и темным цветом (табл.2).

Биомассу, полученную указанным способом, на 30 — 40 сутки роста отделяют от питательной среды, высушивают до воздушно-сухого состояния при t = 50 — 55 С и определяют в ней наличие фенольных гликозидов (элеутерозидов). Результаты хроматографического анализа показывают наличие в полученной биомассе всех главных элеуте5 розидов, свойственных фармакопейному экстракту (табл.3).

Количественный анализ показал, что в 1 г сухой биомассы культивируемых клеток злеутерококка содержится 10,5 мг феноль10 ных гликозидов и 167 мкг элеутерозида В, Продуктивность культуры тканей элеутерококка по фенольным гликозидам и элеутерозиду В составляет. соответственно, 116 мг и

1,47 мг на 1 л питательной среды на 20-е

15 сутки роста культуры.

Формула изобретения

Способ получения биологически активных веществ элеутерококка колючего

20 Eleuthегоcoccus senticosus Rupr. et Maxim„ включающий индукцию роста и выращивание биомассы культуры ткани на модифицированной питательной . Среде

Мурасиге-Скуга и получение целевого про25 дукта, отличающийся тем, что индукцию роста биомассы проводят на питательной среде в присутствии 1 мг/л 2,4 Д и 0,1 мг/k кинетина, а выращивание биомассы осуществляют в жидкой или на агазированной пи30 тательной среде в присутствии 4 мг/л а - нафтилуксусной кислоты и1 мг/л 6-бензиламинопурина, 17Я235б

Таблица 2

Темп роста кульивируемых клеток элеутерококка колючего на разных типах питательных сред

- отсутствие роста;

+ увеличение биомассы за пассаж не более чем в 2 раза:

++увеличение биомассы за пассаж не менее чем в 2,5 раза, Таблица 3

Хроматографический анализ содержания злеутерозидов в биомассе культивируемых клеток

1792356

Продолжение табл 3

Составитель

Техред M.Mîðãåíòàë

Корректор С.Лисина

Редактор Н.Павлова

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина. 101

Заказ 16 6 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государсгвенного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5