Питательная среда для культивирования калуссной ткани бегонии краснолистной
Использование, биотехнология, культивирование тканей и клеток, фармакология, медицина. Сущность изобретения: в питательную среду, содержащую необходимый набор источников азота, фосфора, калия, углерода дополнительно вводят витамины и фитогармоны. 1 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
27,8
37,3
6,2
223 !
8,6
0,83
0,025
0,025
0,25
0.1
0,1
0,5
40 (21) 4877028/13 (22) 30.07,90 (46) 15.09.92. Бюл. ¹ 34 (71) Центральный ботанический сад АН
БССР (72) С.В,Горленко, Л.B.Ôðoëoâà и В.А.Тимофеева (56) l akayma S„Misawa М. Factors affecting
Differentiation and growth in vitro and a
masp-ropagation scheme for Begonia x
hiemalis., Sc. hortic, 1982, 16, 1, 65 — 75.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к технологии выращивания пересадочных культур растительных тканей. Область применения — сельское хозяйство, в частности цветоводство закрытого грунта; медицинская промышленность (получение нового вида сырья биологически активных веществ растительного происхождения для получения новых высокоэффективных лекарственных препаратов).
Известно применение состава среды
Мурасиге и Скуга для индуцирования каллусной ткани бегонии гибридной.
Наиболее близким по технической сущности к предложенному составу питательной среды для пассирования каллусной ткани, является вышеуказанный состав среды, Недостатком ее является сложность состава и низкий выход биомассы неорганизованно растущей ткани из-за высокой пролиферации каллуса.
Целью изобретения является повышение выхода биомассы каллуса, Указанная цель достигается культивированием каллусной ткани бегонии краснолистной в закрытой емкости в темноте при температуре 25 С и относительной влажно„„Я „„1761799 А1 (я)з С 12 N 5/04, А 01 Н 4/00 (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КАЛЛУСНОЙ ТКАНИ БЕГОНИИ КРАСНОЛИСТНОЙ (57) Использование: биотехнология, культивирование тканей и клеток, фармакология, медицина. Сущность изобретения; в питательную среду, содержащую необходимый набор источников азота, фосфора, калия, углерода дополнительно вводят витамины и фитогармоны. 1 табл. сти 70% на агаризованной модифицированной питательной среде следующего состава, мг/л
Макроэлементы:
Натрий фосфорнокислый однозамещен н ы и 170
Азотнокислый аммоний 1650
Кальций хлористый 440
Калий азотнокислый 1900
Магний сернокислый 370
Калий фосфорнокислый однозамещенный
Железо сернокислое закисное
2 ЕДТА
Микроэлементы:
Борная кислота
Марганец сернокислый
Цинк сернокислый
Калий иодистый
Хлорид кобальта
Купорос медный
Натрий молибденовокислый
Витамины:
Пиридоксин
Тиамин
Никотиновая кислота
Иноэитол
1761799
30000
0,2
6000
Сахароза
Дрожжевой экстракт
6-БАП
2,4-Д
Агар
Вода бидистиллированная 1 л
Внесение в питательную среду 2,4-Д защищает натуральные ауксины ткани от разрушения и делает возможным ее рост, 6-БАП в сочетании с 2,4-Д обладает сильным действием индукторов роста каллусной ткани, Повышение уровня ауксина (2,4-Д) приводит к гипертрофии клеток и угнетению роста ткани, дедифференциации и образованию корней.
П реобладание 6-БАП способствует образованию побегов, Изобретение иллюстрируется следующим примером, Для получения в пересадочной культуре гомогенно растущей биомассы каллусной ткани бегонии краснолистной использовали три модификации питательной среды предлагаемого нами состава с различным соотношением фитогормонов: 6-БАП 0,2 мг/л, 2,4-Д 1 мг/л; 6-БАП 0,4 мг/л, 2,4-Д 2 мг/л;
6-БАП 0,1 мг/л, 2,4-Д 0,5 мг/л.
Для приготовления питательной среды используют химически чистые реактивы (классификации ч, хч, чда) и бидистиллированную воду. В тщательно вымытую и высушенную посуду (250 мл химические колбы) разливают по 50 мл питательной среды. Колбы закрывают ватномарлевыми пробками, автоклавируют в автоклаве для уничтожения микроорганизмов при 0,7 — 0,8 атм 15 мин, Инструмент (пинцеты, скальпеля) стерилизуют в суховоздушном шкафу при 180
С, завернутые в бумагу Крафт. В стерильном боксе перед началом работы инструменты опускают в спирт и обжигают в пламени спиртовки. Каллусную ткань пассируют, удаляя опробковевшие некротизированные участки, Культивирование каллусной ткани проводится в термостате при 25 С в условиях непрерывной темноты.
Результаты исследований представлены B таблице 1.
Основное количество биомассы накапливается между 21 и 28 сутками культивирования, а затем ткань переходит к фазе замедленного роста и к 42 суткам ее рост практически прекращается, При дальнейшем культивировании к 45 суткам проявляются некрозы, ткань темнеет и теряет способность к дальнейшему росту. Оптимальным по накоплению биомассы каллусной ткани бегонии краснолистной является
28-суточный цикл культивирования на предлагаемой нами среде. Поэтому концентрации всех компонентов среды даны в абсолютных величинах.
170;
27,8;
37.3;
6,2;
22,3;
8,6;
0,83;
0,025;
0,025;
0,25;
0,1;
Применением предлагаемого состава среды достигается следующее:
Обеспечение направленной регуляции процессов морфогенеза.
5 На модифицированной среде — рост неорганизованно растущей каллусной ткани, Эталон (на среде Мурасиге и Скуга)— пролиферация каллусной ткани.
Оптимизация цикла пассирования кал10 лусной ткани.
На модифицированной среде — 28 дней.
Эталан (на среде Мурасиге и Скуга) — 15 дней.
Повышение ростового индекса каллус15 ной ткани за 28 дней.
На модифицированной среде — 14,5
Эталон (на среде Мурасиге и Скуга)—
0,33
Увеличение выхода сырой биомассы
20 каллусной ткани за 28 дней.
На модифицированной среде — 16,7 г!л
Эталон (на среде Мурасиге и Скуга) — 0,4 г/л.
Формула изобретения
25 Питательная среда для культивирования каллусной ткани бегонии краснолистной, содержащей натрий фосфорнокислый однозамещенный, азотнокислый аммоний, кальций хлористый, калий азотнокислый, 30 магний сернокислый, калий фосфорнокислый однозамещенный, железо сернокислое закисное, 2 ЕДТА, борную кислоту, марганец сернокислый, цинк сернокислый, калий иодистый, хлорид кобальта, купорос мед35 ный, натрий молибденовокислый, агар, воду бидистиллированную, отличающаяся тем, что, с целью повышения выхода биомассы каллуса, она дополнительно содержит пиридоксин, тиамин, никотиновую
40 кислоту, инозитол, сахарозу, дрожжевой экстракт, 6-БАП, 2,4-Д при следующем соотношении компонентов, мг/л:
Натрий фосфорнокислый однозамещенный 170;
45 Азотнокислый аммоний 1650;
Кальций хлористый 440;
Калий азотнокислый 1900;
Магний сернокислый 370;
Калий фосфорнокислый
50 однозамещенный
Железо сернокислое закисное
2 ЕДТА
Борная кислота
Марганец сернокислый
55 Цинк сернокислый
Калий иодистый
Хлорид кобальта
Купорос медный
Натрий молибденовокислый
Пиридоксин
1761799
Составитель В.Тимофеева
Редактор М.Самерханов Техред М.Моргентал Корректор M.ÏåòðoBà
Заказ 3235 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101
Тиамин
Никотиновая кислота
Сахароза
Дрожжевой экстракт
6-БАП
0,1;
40;
30000;
40, 0,2; 5
2,4-Д
Агар
Иноэитол
Вода бидистиллированная
6000;
40;
1 л.
