Способ определения ревматического осложнения у больных с травмой спинного мозга

 

Изобретение относится к медицине, в частности к нейрохирургии, и касается способа иммунодиагностики ревматических проявлений у больных с травмой спинного мозга. Целью изобретения является раннее выявление осложнений. Для этого у больных берут кровь, получают сыворотку и с помощью диагностической тест-системы на основе метода иммуно-ферментного анализа определяют ревматоидный фактор. Способ позволяет в более ранний срок выявить наличие ревматического осложнения и назначить соответствующее лечение.

COIO3 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)л G 01 N 33/535

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4902691/14 (22) 15.01.91 (46) 07,08.93. Бюл, ¹ 29 (71) Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н.Габричевского и Московская медицинская академия им. И.И.Сеченова (72) В,А.Алешкин, А,T.Åëèñååâ, Н,В.Петрова, А.M.Ïoíîìàðåâà и Г,С.Юмашев (56) Push Р, J. Seminars In arthritis and

rheumatism, 1989, 19, № 2, 77. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕВМАТИЧЕСКОГО ОСЛОЖНЕНИЯ У БОЛЪНЫХ С

ТРАВМОЙ СПИННОГО МОЗГА

Изобретение относится к медицине, в частности к нейрохирургии и касается способа иммунодиагностики ревматических проявлений у больных с травмой спинного мозга.

Целью изобретения является ранее определение наличия ревматических осложнений у больных с травматической болезнью спинного мозга.

Поставленная цель достигается тем, что в сыворотке крови больного одновременно выявляются ревматоидные факторы к иммуноглобулинам М и G (РФ-I g M и РФ-IgG) и по наличию любого из двух факторов можно диагностировать наличие ревматических проявлений заболевания. Определение сывороточных РФ-IgM и РФ-IgG проводят методом иммуно-ферментного анализа (ИФА), где в качестве антигена используют Fcфрагмент IgG человека, стафилококковый белок А и антитела к IgM, меченные пероксидазой хрена.

Способ осуществляют следующим образом.

„... Ж„„1832200 А1 (57) Изобретение относится к медицине, в частности к нейрохирургии, и касается способа иммунодиагностики ревматических проявлений у больных с травмой спинного мозга. Целью изобретения является раннее выявление осложнений. Для этого у больных берут кровь, получают сыворотку и с помощью диагностической тест-системы на основе метода иммуно-ферментного анализа определяют ревматоидный фактор, Способ позволяет в более ранний срок выявить наличие ревматического осложнения и назначить соответствующее лечение.

1. Полистироловые 96-луночные микроплаты инкубируют при 4 С в течение ночи с раствором Fc-фрагмента IgG человека (10 мкг/мл в 0,1 М карбонатном буфере рН 9,6).

Для удаления несвязавшегося с носителем. после инкубации материала микроплаты промывают раствором Твина 20 (0,05%).

2, Микроплаты покрывают раствором желатины (1 мг/МЛ в Na-фосфатном буфере рН 7,2 — PBS) и оставляют на 1,5 ч в термостате при 37 С.

3. Наносят исследуемые сыворотки в разведении 1:30 — 1:100. В качестве стандарта используют препараты РФ-ig M и РФ-IgG, выделенные и очищенные методом аффинной хроматографии. Оставляют в термостате при 37 С в течение 1 ч.

4. Наносят соответствующие пероксидаэные коньюгаты, разведенные в PBS до рабочей концентрации. Платы инкубируют в течение 1 часа при 37 С и тр жды отмывают.

5. Добавляют субстратную смесь — ортофенилендиамин с перекиг.ью водорода и инкубируют в темноте до появления окраски.

1832200

6. После остановки реакции 50 g, серной кислотой измеряют интенсивность окраски (ОП) на автоматическом фотометре при длине волны 492 нм, Результаты оценивают по показателю отношения значений ОП исследуемого образца и отрицательной контрольОПх нои сиеоротки -- — т, которые сравнивают с дискриминирующим показателем (ДП), определяемом при исследовании сывороток здоровых доноров по

Х Опх1 х„/ОП фо,м,ле " +2 (У,,-д. и

ОП(х1-xn) — сумма значений ОП сывороток доноров, ОП(-) — значение отрицательного контроля, n — количество сывороток доноров, Выявление сероположительных сывороток позволяет ставить диагноз — наличие ревматических осложнений у больных с травмой спинного мозга. Ценность предлагаемого способа диагностики была выявлена при анализе 45 больных с травмой спинного мозга, а также группы доноров (7 человек); Проведенное исследование выявило сероположительность по lgG у 11 из 25 обследованных больных с травмой спинного мозга в позднем периоде болезни (44%). . Из 11 сероположительных больных 6 человек обнаружили высокое содержание обоих факторов — IGM и lgG, у 5 человек (20% от обследованных) присутствовал только фактор IgG, Известно, что появление в крови

РФ-IGM может указывать на нарушение деятельности сердца, развитие гипохромной анемии, нарастание патологических процессов в суставах (Насонова 1989). У людей продукция IgG способствовала образованию РФ-lgG, что вело к хроническому воспалительному процессу. Описано, что при ряде заболеваний РФ-IgG мо>кет усиливать васкулярные болезни, вызванные иммунными комплексами. Сопоставление результатов серологического обследования больных с результатами клинических наблюдений показало, что развитие системных проявлений заболевания сопровождается появлением, ревматоидных факторов определенного класса. В зависимости от класса ревматоидного фактора, присутствующего в крови у больного можно прогнозировать развитие определенных клинических проявлений. Проведенное исследование показало, что при наличии в крови одного или обоих ревматоидных факторов можно о>кидать у больных с травмой спинного мозга развитие ревматических осложнений, Для иллюстрации данного вывода приводим описание двух клинических случаев; I — выявление в крови ревматоидных факторов позволило диагностировать развитие ревматических осложнений, для купирования которых и подготовки больного к операции потребовалось провести соответствующее терапевтическое лечение, I l - у больного ревматоидный фактор в крови в норме, и подготовка больного к операции не потребовала дополнительных лечебных мероприятий.

1. Больная 3-а, 33 лет, поступила в клинику 2.11.89 с диагнозом — осложненный перелом 12 грудного позвонка (Дд), с клиникой нижней спастической параплегии, нарушением функции тазовых органов, Травма получена 2,5 года назад в автоаварии, При поступлении общее состояние средней тяжести, определялись двигатель- . ные и чувствительные нарушения с уровня

10-ro грудного сегмента, Больная на протяжении последних 8 месяцев страдает воспалительным процессом в мочевом пузыре, почках, с короткими ремиссиями и бурными обострениями. При поступлении температура 36,6 С, моча мутная, боли в поясничной и надлобковой области, Отмечает слабость, быструю утомляемость при выполнении комплекса лечебной физкультуры, одышка, сердцебиение. В стационаре при обследовании на электрокардиограмме — синусовая аритмия, изменения миокарда левого желудочка, снижение электрической активности миокарда. В моче лейкоциты покрывают все поле зрения, белок — 0,565 г . В крови СОЭ вЂ” 38 мм/час, фибриноген 488%, эритроцитов 3,2 мил, Учитывая длительность воспалительного процесса, отсутствие стойкого терапевтического эффекта, частые рецидивы, поражение сердечной мышцы нами было расценено как развитие ревматических осложнений при травматической болезни спинного мозга. С целью выявления ревматоидных факторов у больной исследовали сыворотку крови и установили присутствие высоких уровней ревматоидных факторов к иммуноглобулину G и иммуноглобулину М, На основании данного серологического исследования у больной было подтверждено развитие ревматодного заболевания. С учетом этого факта больной был проведен курс неспецифической противовоспалительной терапии, Воспалительный процесс в течение 3-х недель был купирован, в моче белок снизился до 0,06 r-",ь, лейкоцитов 3-6 в поле зрения микроскопа. в крови СОЭ снизилось до 18 мм/ч, исчезла аритмия, нормализовалась температура, Таким образом, у данной больной своевременное выявление ревматоидного фактора и и проведение соответствующего лечения позволило в короткие

1832200

Составитель С.Мартыненко

Редактор С.Кулакова Техред М.Моргентал Корректор О.Густи

Заказ 2608 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 сроки купировать воспалительный процесс, нарушения сердечного ритма и подготовить больную к операции на спинном мозге.

И. Больной Э-т, 25 лет, поступил в клинику 4.10,89 с клиникой осложненного ком- 5 прессион ного перелома 5 грудного позвонка (Д5), нижний спастической параплегией, нарушением функции тазовых ор ганов. Травму получил 9 лет назад при падении с высоты. В стационаре у больного 10 выявлено обострение хронического пиелонефрита, При лабораторном исследовании

-крови CO3 — 18 мм/час, эритроцитов 3,6 мил, фибриноген — 1154 мг . В моче следы белка, лейкоциты — 15 — 25 в поле зрения, 15 эритроциты — единичны. Учитывая длительность повреждения спинного мозга, частые обострения пиелонефрита больной обследован серологически на ревматоидный фактор. Исследование сыворотки крови не 20 выявило повышения уровней ревматоидных факторов по сравнению с нормой. С учетом результатов данного исследования больному был проведен стандартный курс лечения пиелонефрита (промывание антисептиком). 25

Клиника пиелонефрита была купирована в течение недели. В моче лейкоцитов — единицы, в крови фибриноген снизился до нормы.

В данном случае отсутствие грубых иммуных нарушений (РФ в пределах нормы) спо- 30 собствовало быстрому клиническому восстановлению функции тазовых органов.

Таким образом, у больных с осложненной травмой позвоночника возможно развитие ревматоидного заболевания, которое 35 негативно влияет на состояние функции почек, печени, сердечно-легочной системы и требует проведения специфического курса лечения. При отсутствии серологических

40 признаков ревматоидного заболевания осложнения протекают более легко и поддаются стандартной терапии. Следовательно исследование крови у больных с травмой спинного мозга на присутствие ревматоидных факторов способствует ранней диагностике ревматических осложнений и выбору правильной тактики лечения.

Технико-экономическая эффективНОСТЬ.

Использование предлагаемого способа даст возможность по капле сыворотки крови в стационаре и амбулаторно быстро по единой методике даже при отсутствии выраженных клинических признаков определить наличие ревматических осложнений у обследуемого с травматической болезнью.

Это позволит клиницистам 1) выявить группы серопозитивных и серонегативных больных и определить тактику лечения; 2) своевременное обнаружение факторов, приводящих к развитию ревматических осложнений, будет способствовать большей эффективности проводимой терапии; 3) ранняя диагностика позволит ускорить подбор путей лечения, что приведет к сокращению срока пребывания в стационаре.

Формула изобретения

Способ определения ревматического осложнения у больных с травмой спинного мозга путем обследования больного, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью раннего выявления осложнений в исследуемой крови больного, определяют ревматоидные факторы к иммуноглобулинам M u G с помощью иммуно-ферментного анализа и при наличии одного или обоих ревматоидных факторов определяют ревматическое осложнение.