Способ получения мононуклеотидов из нуклеиновых кислот
203837
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
) Сома Ссввтскик
Социалистически), Республик
, 110 ! ь11 6ЛЛ01 Е. «, т
Зависимое от авт. свидетельства М
Кл. 30h, 2/04
6а, 22/04
Заявлено 19,1Х,1966 (№ 1102993/28-13) с присоединением заявки №
Приоритет
Опубликовано 18.VII.1969. Бюллетень № 24
Дата опубликования описания 11.XII.1969
МПК А 61k
С 121<
УДК 663.11:547.963.32 (088,8) Комитет по делам иаобрвтвний и открытий при Совете Министров
СССР
Авторы изобретения
Р. И. Татарская, А. А. Баев, T. Н. Пахомова, В. М. Кочкина, В. Ж. Цыренов, В. Д, Аксельрод и А. И. Кореняко
Институт молекулярной биологии АН СССР
Заявитель
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОНУКЛЕОТИДОВ
ИЗ НУКЛЕИНОВЬ!Х КИСЛОТ
Йзвестен способ получения мононуклеотидов из нуклеиновых кислот путем ферментативного гидролиза последних, проводимого обычно различными ферментами, например фосфодиэстеразой змеиного яда, и выделения полученных мононуклеотидов одним из известных способов, например хроматографией на ионообменных колонках.
Для удешевления и упрощения процесса получения мононуклеотидов (фосфодиэстераза змеиного яда — дорогостоящий фермент) предложено ферментативпый гидролиз проводить с помощью фосфодиэстераз, выделяемых актиномицетами в культуральную жидкость в ходе ферментации.
Способ заключается в следующем.
На нуклеиновую кислоту, например рибонуклеиновую, действуют культуральной жидкостью актиномицетов фосфодиэстеразных штаммов, которую вносят либо непосредственно после выращивания, либо после некоторой обработки, В результате этого полинуклеотиды переходят в соответствующие мононуклеотиды, которые далее отделяют обычными способами, например хроматографией, на колонке.
Количество побочных продуктов не нуклеотидной природы, получающихся на этом невелико.
П р и.м е.р. Культуральную жидкостьActinomyces типа сое11со1ог штамм № 5, содержащую экзонуклеазу типа фосфодиэстеразы змеиного яда, т. е. фермент, дающий при гидролизе нуклеиновых кислот 5 -мононуклеотиды, берут от зрелой (например девяти-десятидневной) культуры. Жидкость освобождают or
5 мицелия, например, с помощью сепаратора и подкисляют соляной кислотой до рН около 3.
После выдерживания на холоду при таком рН ь течение трех суток отстой сливают, декантацпей, а осадок, содержащий активный ферко мент, растворяют в небольшом количестве воды при перемешивании и подщелачивании до рН около 9. К раствору добавляют хлористый магний до конечной концентрации 0,001 М и гпбонуклеиновую кислоту в виде аммониевой
1s плн натриевой соли. После часовой инкубации прп 37 С и перемешивании реакция раствора доводится до нейтральной, и раствор для инактивацпп всех ферментов прогревают 10—
15 мпн прп 60 — 70 С. Затем 5 -мононуклеотиды
2î выделяют на понообменнпках типа дауэкс-1 пли дауэкс-2 в ацетатной форме в растянутом градиенте уксусной кислоты (0,0 — 3 М). На колонке не задерживаются побочные продукты реакции — нуклеотиды и основания. Суммар2s ное количество таких побочных продуктов составляло в разных опытах от 6 до 10%.
Остальной материал выходит при элюции в градиенте СНаСООН в виде нескольких пиков, каждый из которых соответствует опредеЗ0 ленному 5 -мононуклеотиду.
М3837
Предмет изобретения
Составитель М. И. Андреева
Редактор В. Ф. Смирягина Техред 3. Н. Тараненко Корректор P. И. Крючкова
Заказ 3221/4 Тираж 480 Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2
Способ получения мононуклеотидов из нуклеиновых кислот путем ферментативного гидролиза последних и выделения полученных мононуклеотидов одним из известных способов, например хроматографией на ионообменных колонках, отличающийся тем, что, с целью упрощения и удешевления процесса, ферментативный гидролиз проводят с помощью фосфо5 диэстераз, выделяемых актиномицетами в культуральную жидкость в ходе ферментации.
