Способ качественного определения стероидных соединений спиростанового ряда

 

(19) RU (11) (51) 5 G01N31 22

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТКНИ

К ПАТЕНТУ (фД

Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам (21) 4934593/04 (22) 05.05.91 (46) 15.12.93 Бюл. Иа 45 — 46 (71) Азербайджанский медицинский университет им.Н.Нариманова (72) Искендеров Г.Б. (73) Азербайджанский медицинский университет имН.Нариманова (54) СПОСОБ КАЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕРОИДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ СПИРОСТАНОВОГО РЯДА (57) Изобретение относится к аналитической химии.

Сущность изобретения: способ осуществляют путем нанесения исследуемой пробы на хроматографическую бумагу, опрыскивания 0,5%-ным спиртовым раствором ванипина, высушивания при 90 С в течение 3 мин. опрыскивания хлорной кислотой {42%), высушивания при 100 С в течение 3 мин и получения характерного желто-окрашенного пятна

2004907

Изобретение относится к медицине, в гастности к фармации, и может быть применено для качественного анализа спиростановых стероидов, их производных и лекарственных препаратов.

Известен способ качественного обнаружения стероидов, заключающийся в том, что исследуемое вещество предварительно растворяют в 0,5 мл этанола, добавллют 2 мл

0,5% íîãî раствора ванилина в концентрированной серной кислоте, при этом раствор окрашиваетсл, при последующем добавлении по каплям воды наблюдается изменение интенсивности и окраски раствора.

Недостатками известного способа являютсяя; неспецифичность и неселективность по отношению к спиростановым стероидам, так как способ явллется общей цветной реакцией на все известные группы стероидов и тритерпеноидов; трудоемкий, выполнение анализа затяги в а ется.

Известен способ качественного обнаруженил стероидных соединений при тонкослойной хроматографии, заключающийся в том, что стероиды на хроматограмме проявляют опрыскиванием свежеприготовленным,0,5% íûì раствором ванилина в смеси серной кислоты и эталона (4;1). Стероиды проявляются при комнатной температуре или в ряде случаев с нагреванием при 100 С в течение 5 мин (2), Недостатками способа явллются; приготовление pacroopa требует большой осторо>кности с соблюдением техники безопасности; раствор не стабилен при хранении, должен быть свежеприготовленным. Поэтому каждый раз приходитсл готовить новую порцию реактива. это занимает время и не выгодно с экономической точки зрения; использование спирта HQ вь годно; температурный режим не постоянен; значительное содер>кание серной кислоты представллет собой угрозу для исследователя.

Известен способ качественного определенил спиростановых стероидных сапогенинов с помощью реактива Санье, заключающийсл в том, что исследуемую пробу наносят на хроматографическую бумагу, высушивают на воздухе, опрыскивают

1%-ным спиртовым раствором ванилина, сушат в сушильном шкафу при 85 С в течение 3-5 мин и снова опрыскивают раствором серной кислоты в уксусном ангидриде (1:12), высушивают при 85 — 90 С. При наличии спиростановых стероидов через 3 мин на бумаге появляется характерное желтое пятно (прототип).

Недостатками описанного способа являются; приготовление раствора серной кислоты в уксусном ангидриде занимает определенное время и требует большой осторожности с соблюдением требованил техники безопасности; уксусный ангидрид, являющийся основной составной частью реактива Санье, обладает сильным раздра>кающим действием и в первую очередь на слизистые оболочки верхних дыхательных путей, вызывая аллергические реакции, сопровождающиеся бронхоспазмами; раствор серной кислоты в уксусном ангидриде стабилен в течение 3-4 дней, после истечения данного срока вследствие взаимодействия компонентов раствор приобретает желту10, а затем красно-бурую окраску, TGM самым окраски, накладываясь друг на друга, мешают точно выявить воз никающую желтую окраску, характерную длл спиростановых соединений, поэтому раствор готовится при Iiåoáõoäèìoñòè на непродолжительный срок; предусмотреннал концентрация ванилина, дорогого и не всегда доступного реактива, не выгодна с зкономической точки зрения; присутствие серной кислоты способствует обугливанию бумаги, тем самым невозможно четко заметить окраску пятна на бумаге, Целью изобретения лоляетсл упрощение способа качественного определения стероидных соединений спиростанового ряда. Эта цель достигается тем. что в качестве химического реагента используют хлорную кислоту (42%) и высушивание после обработки кислотой ведут при 100 С.

Сущность предлагаемого способа качественного определенил спиростгновых стероидов, Каплю раствора исследуемого спиро-4

Станового стероида наносят на хроматографическую бумагу, высушивают на открытом воздухе при комнатной температуре, опрыскивают 0,5%-ным спиртовым раствором ванилина, высушивают в сушильном шкафу при 90 С в течение 3 мин, а затем опрыскивают хлорной кислотой (42%), высушивают при 100 С в течение 3 мин, На бумаге полвллетсл характерное желтое пятно.

Предлагаемый способ по сравнению с известными способами имеет следующие преимущества.

Сокращается в 2-2,5 раза затрата времени, Предлагаемый способ выполняется за

8- IO мин, а прототип за 20 мин. Приготов, ление раствора серной кислоты в уксусном

2004907 ангидриде (1:12) по прототипу занимает

10-12 мин (измерение составных частей, осторожное постепенное смешивание их с постоянным охлаждением под открытым краном и соблюдение техники безопасности).

Экономически выгодный; а) предлагаемый способ предусматривает использование 0,5 / раствора ванилина, а прототип — 1 . Ванилин является дорогим и не всегда доступным реактивом. б) непригодную к использованию испорченную часть стабильного в течение 3 — 4 дней раствора серной кислоты в уксусном ангидриде выбрасывают(прототип). В предлагаемом способе применяется продажная хлорная кислота (42 /), которая хранится в обычных условиях длительное время и используется при необходимости.

Совершенно безопасен и безвреден для организма, Уксусный ангидрид обладает сильным раздражающим действием на слизистые оболочки верхних дыхательных путей при опрыскивании, вызывая аллергические реакции, сопровождающиеся бронхоспазмами (прототип). Концентрированная серная кислота, как вещество, оказывающее местное разьедающее действие, также не лишена отрицательного побочного влияния (прототип). Хлорная кислота (42 ) не обладает побочным отрицательным действием (предлагаемый способ), Позволяет четка заметить окраску продукта реакции. Хлорная кислота (42 /) не вызывает обугливание хроматографической бумаги при нагревании (предлагаемый способ), а серная кислота, входящая в состав раствора, способствует обугливанию хроматографической бумаги, вследствие чего нечетко наблюдается окраска продукта реакции (прототип).

Примеры проведения способа с указанием стадий и результатов определения конкретных веществ.

Пример 1. Каплю 0,001 -ного спиртового раствора диосгенина наносят на полоску хроматографической бумаги, высушивают на открытом воздухе при комнатной температуре, опрыскивают 0,5 -ным спиртовым раствором ванилина, высушивают в сушильном шкафу при 90 С в течение

3 мин, затем опрыскивают хлорной кислотой (42 ), высушивают при 100 С в течение

3 мин, На бумаге появляется характерное желтое пятно, подобное яичному желтку.

Чувствительность реакции 1:100 000.

Пример 2. Каплю 0,001 /,-ного спиртового раствора рускагенина наносили на полоску хроматографической бумаги, высушивали на открытом воздухе при комнатной температуре, опрыскивали 0,5 /-HblM спиртовым раствором ванилина, высушивали в сушильном шкафу при 90 С в течение 3 мин, затем опрыскивали хлорной кислотой (42 " ) высушивали при 100 С в течение 3 мин. На бумаге появлялось характерное желтое пятно. Чувствительность реакции 1:100 000.

Пример 3. Каплю 0.005 /-ного спиртового раствора рускозида А наносили на полоску хроматографической бумаги, высушивали на открытом воздухе, опрыскивали

0,5/о-ным спиртовым раствором ванилина, высушивали в сушильном шкафу при 90 С в течение 3 мин, затем опрыскивали хлорной кислотой (42 ), высушивали при 100 С в течение 3 мин. На бумаге появлялось характерное желтое пятно. Чувствительность реакции 1:20 000.

Пример 4. Каплю 0,05 -ного спиртового раствора полиспонина наносили на полоску хроматографической бумаги, высушивали на открытом воздухе, опрыскивали

0,5 /-ным спиртовым раствором ванилина, высушивали s сушильном шкафу при 90 С в течение 3 мин, затем о.;рыскивали хлорной кислотой (42 ), высушивали при 100 С в течение 3 мин. На бумаге появлялось характерное желтое пятно. Чувствительность реакции 1:2000.

Пример 5. Каплю 0,001 /-ного спиртового раствора тигогенина наносили на полоску хроматографической бумаги, высушивали на открытом воздухе, опрыскивали 0,5 -ным спиртовым раствором ванилина, высушивали в сушильном шкафу при

90 С в течение 3 мин, затем опрыскивали хлорной кислотой (42%), высушивали при

100 С в течение 3 мин. На бумаге появлялось характерное желтое пятно. Чувствительность реакции 1:100 000. (56) Пономарев В.Д. Обнаружения стероидов и тритерпеноидов при помощи альдегидов. Журнал аналитической химии, 1963, т.18, выпуск 1, с.137 — 140.

Matthews Toseph Stегоids CCXXilI. Color

reagent for Stегоids ln thin — laver

chromatography. Blochem et biophysIc acta

1963, 69, М 1, 163-165.

Мадаева О.С., Серова Н.А.. Четверикова

fl.С. и др.: Труды Всесоюзного научно-«сследовательского института лекарственных и ароматических растений, Выпуск XI. 1959, М.: Медицина, стр. 229-236.

2004907

Составитель С.Хованская

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор О.Кравцова

Редактор Т.Самерханова

Тираж Подписное

НПО "Поиск" Роспатента

Заказ 3395

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат flBTGHT", r, Ужгород, ул.Гагарина, 101

Формула изобретения

СПОСОБ КАЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕРОИДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ

СПИРОСТАНОВОГО РЯДА путем нанесения анализируемой пробы на хроматографическую бумагу, обработки спиртовым раствором ванилина, высушивания и обработки кислотой с последующим высушиванием с образованием окрашенного соединения. отличающийся тем, что, с

5 целью упрощения способа, в качестве кислоты используют 42 -ную хлорную кислоту и высушивание после обработки кислотой ведут при 100 С,