Способ очистки гонадотропина хорионического

 

Изобретение относится к медицине, а именно к способу очистки гонадотропина хорионического. Изобретение позволяет улучшить выход и качество получаемого продукта. Это достигается за счет того, что очистка сырца гонадотропина хорионического осуществления путем пропускания раствора сырца через кальций-тартратный гель в водно-солевом буфере. При таком способе очистки балластные примеси связываются сорбентом, а гонадотропин хорионический элюируется и его выделяют из элюата известными методами - осаждением органическими растворителями или лиофилизацией с последующим обессоливанием. 2 с. п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается способа очистки сырца гонадотропина хорионического - гормонального препарата, применяемого при лечении нарушений половой функции у мужчин и женщин.

Известен способ очистки сырцов гонадотропина хорионического путем приготовления раствора препарата с рН 6,0-9,0 в 0,4 М этаноле, содержащем ацетат аммония, доведении рН в растворе до 3,0-6,0 с помощью соляной или уксусной кислоты и осаждении гормона путем повышения концентрации этанола. Активность очищенного гонадотропина хорионического составляет 2000 ЕД/мг, выход 80-90% .

Недостатком этого метода является низкая удельная активность очищенного продукта.

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому изобретению является способ очистки гонадотропина хорионического согласно которому сырец гонадотропина хорионического растворяют в 0,004-0,05 М фосфатном буфере, рН 5,8-7,1, пропускают через колонну с сефадексом Г-25 и затем сорбируют гонадотропин хорионический на ДЭАЭ-целлюлозе или ДЭАЭ-сефадексе в исходном буфере. Для удаления балластных примесей колонку промывают 5-6 объемами исходного буфера и затем элюируют гонадотропин хорионический фосфатным буфером более высокой молярности (0,0175-0,4 М) и низким рН (6,3-4,4). Белковую фракцию собирают с помощью коллектора, диализуют против воды и лиофилизируют. Активность сырца возрастает от 1000 ЕД/мг до 3000 ЕД/мг, выход составляет 30-40% .

Недостатком указанного способа является низкий выход конечного продукта.

Целью изобретения является повышение выхода и активности целевого продукта.

Поставленная цель достигается тем, что очистка сырца гонадотропина хорионического осуществляется сорбцией балластных веществ на кальций-тартратном геле в водно-солевом буфере при рН 8,2-9,5. В данных условиях очистки балластные примеси связываются сорбентом, а гонадотропин хорионический элюируется.

Способ получения гонадотропина хорионического в соответствии с предлагаемым способом осуществляется следующим образом. Сырец гонадотропина хорионического растворяют в водном 0,02-0,2 М солевом буфере (ацетат аммония, трис-НСl), рН 8,2-9,5, вносят в колонку, заполненную кальций-тартратным гелем, и пропускают раствор сырца гонадотропина хорионического, используя исходный буфер. В элюате с помощью спектрофотометра определяют белковую фракцию и выделяют из нее гонадотропин хорионический известными методами - добавлением органического растворителя (ацетон, этанол) или лиофилизацией с последующим обессоливанием. Активность очищенного гонадотропина хорионического составляет 3000-4000 ЕД/мг, выход 80-90% .

В предлагаемом способе очистка сырца гонадотропина хорионического осуществляется при рН 8,2-9,5. В этих условиях гонадотропин хорионический обладает хорошей растворимостью и не сорбируется кальций-тартратным гелем. Очистка сырца гонадотропина хорионического при рН менее 8,2 приводит к потерям целевого продукта за счет частичной сорбции. Использование буферных растворов с рН более 9,5 приводит к потерям гонадотропина хорионического за счет его инактивации. Кроме того, в указанном интервале рН используемые буферные растворы обладают большой емкостью.

П р и м е р 1. 300 мг сырца гонадотропина хорионического с активностью 750 ЕД/мг растворяют в 3 мл 0,2 М буфера трис-НСl, рН 8,2, наносят на колонку с 30 мл кальций-тартратного геля (Д: H= 1: 20) и элюируют гонадотропин хорионический исходным буфером со скоростью 30 мл/ч см2. Пробы собирают коллектором, с помощью спекторфотометра выделяют белковую фракцию. К белковому раствору добавляют 10 объемов ацетона, выпавший осадок очищенного гонадотропина хорионического промывают ацетоном и сушат в вакуум-сушильном шкафу. Масса очищенного гонадотропина хорионического 64 мг, активность 3000 ЕД/мг, содержание гонадотропина хорионического в очищенном образце 192 тыс. ЕД, что составляет 85% от исходноо сырца.

П р и м е р 2. Обработку 1 г сырца гонадотропина хорионического с активностью 1000 ЕД/мг проводят как описано в примере 3 с тем отличием, что используется 0,05 М буфер трис-НСl, рН 8,5. Элюат собирают с помощью коллектора фракций по 4 мл в пробирку и объединяют пробы с показателем приведенной активности (ЕД/опт. плотн. ) не менее 15,0 ˙10³. Белковую фракцию лиофилизируют, а затем проводят обессоливание гель-фильтрацией на сефадексе Г-25 с последующей лиофилизацией целевого продукта. Масса очищенного гонадотропина хорионического 100 мг, активность 6000 ЕД/мг, выход 60% от исходного сырья.

В таблице приведены результаты анализа фракций, полученных при выделении высокоочищенного гонадотропина хорионического. (56) Патент США N 3453363, кл. 424-100, 1966.

Формула изобретения

1. СПОСОБ ОЧИСТКИ ГОНАДОТРОПИНА ХОРИОНИЧЕСКОГО путем хроматографии сырца, отличающийся тем, что хроматографию осуществляют на кальций-тартратном геле при pH 8,2 - 9,5, а целевой продукт осаждают органическим растворителем.

2. Способ очистки гонадотропина хорионического путем хроматографии сырца с последующим обессоливанием целевого продукта и его лиофилизацией, отличающийся тем, что хроматографию проводят на кальций-тартратном геле при pH 8,5, перед обессоливанием целевой продукт лиофилизируют.

РИСУНКИ

Рисунок 1