Способ получения иммунологически активного вещества из мочи млекопитающих, в том числе и человека, обладающего биологической активностью сывороточного тимического фактора



 

Способ включает двухэтапную хроматографию мочи на геле Toyperl HW 40, помещенном в колонке с различными геометрическими параметрами, с последующим обессоливанием конечного продукта на колонке с сефадексом G-15. Технический результат: разработан способ получения из мочи млекопитающих, в том числе и человека, материала, обладающего иммунологическими свойствами, сходными с таковыми тимических факторов. 3 ил.

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии, а именно к иммунологии и может быть использовано для получения иммунотропного вещества из мочи для профилактики и/или иммунокоррекции тимусзависимых иммунодефицитных состояний у человека и животных. Более того, это изобретение может помочь и в решении научных задач.

Известно, что в периферической крови млекопитающих (в том числе и людей) содержится секретируемый тимусом полипептидный фактор, получивший название сывороточного тимического фактора (СТФ). Этот фактор играет важную роль в поддержании иммунного статуса организма, в контроле реакций распознавания своего и чужого (чужеродных опухолевых клеток в том числе), в способности организма адекватно противостоять неблагоприятным внешним воздействиям. До настоящего времени не выяснен вопрос взаимосвязи между СТФ и другими пептидами тимуса, хотя показано, что СТФ отщепляется от предшественника или носителя. Неизвестна и судьба самого СТФ в организме.

С другой стороны нами было показано, что в моче здорового человека присутствует материал, проявляющий свойственную для СТФ активность в тесте Баха (этот тест используется для определения уровня тимических факторов, циркулирующих в крови млекопитающих) (1). По результатам исследования нами получен патент, позволяющий выявлять иммунодефицитное состояние человека, обусловленное недостатком тимических факторов в организме, не по крови, а по моче (2). Однако, сравнительное изучение иммунобиологических и физико-химических свойств СТФ и иммунологически активного материала мочи невозможно, поскольку до настоящего времени не разработан способ получения из мочи материала, обладающего иммунологической активностью, сходной с таковой СТФ. Это связано прежде всего со спецификой фракционирования смеси большого количества низкомолекулярных веществ, каковой является моча.

Целью изобретения является создание способа получения из мочи материала, обладающего иммунологической активностью, сходной с таковой сывороточного тимического фактора.

Заявка не имеет прототипа ни по способу получения иммунопропного материала, ни по сырью, которое для этой цели используется.

Предлагаемый способ включает в себя этапы: 1. Забор мочи, ее центрифугирование для удаления взвеси частиц.

2. Определение наличия в осветленной моче материала, проявляющего свойственную для СТФ активность в тесте Баха.

3. Хроматография образца осветленной мочи на геле Toyopearl HW-40 в колонке с геометрическими размерами 2,5 х 30 см. Отбор материала и его лиофилизация.

4. Хроматография лиофилизированного материала на геле Toyopearl HW-40 в колонке с геометрическими размерами 1 х 100 см, отбор материала и его лиофилизация.

5. Обессоливание материала на колонке с сефадексом G-15 и его лиофилизация По этой схеме иммунологически активный материал был выделен из мочи 7 пациентов.

Ниже приводим пример получения иммунологически активного материала из мочи по предлагаемому способу.

Пример.

1. Из баночки с мочой пациента А отбирают 10 мл образца и центрифугируют 1200 об/мин 10 мин., 10oC.

2. 3 мл осветленной мочи хроматографируют на колонке с сефадексом G-15 и проверяют материал, выходящий в зоне между свободным объемом колонки и областью выхода витамина В-12 (м.м. 1355 Д) на способность восстанавливать чувствительность фоновых розеткообразующих клеток селезенки тимэктомированных мышей к ингибирующему действию азатиоприна. При наличии материала, обладающего активностью СТФ, исходную мочу используют для дальнейшей работы.

3. 4 мл осветленной мочи наносят на колонку с Toyoperl HW 40 гелем с геометрическими параметрами 2,5 х 30 см, уравновешенную 0,2 М NaCl. Колонку предварительно откалибровали смесью веществ с известной молекулярной массой: голубой декстран (2106 Д), ингибитор трипсина (6500 Д), витамин В 12 (1355 Д). Элюцию проводят 0,2 М раствором NaCl, скорость элюции - 24 мл/час, объем собираемых фракций - 4 мл. Интересующий нас материал выходит в интервале 80 - 100 мл элюата. Этот материал собирают и лиофилизируют. Полученный профиль элюции представлен на фиг. 1. Стрелками отмечены области выхода маркерных веществ; заштрихована область сбора материала.

4. Лиофилизированный материал, полученный в п.3 примера, растворяют в 2 мл дистиллированной воды и наносят на колонку с Toyopearl HW-40 с геометрическими параметрами (1х100 см), уравновешенную 0,2 М раствором NaCl. Колонка предварительно откалибрована смесью веществ с известной молекулярной массой: голубой декстран (2106 Д), ингибитор трипсина (6500 Д), витамин В 12 (1355 Д). Элюцию проводят 0,2 м раствором NaCl, скорость элюции: мл/час, объем собираемых фракций - 1 мл. Интересующий нас материал выходит в интервале 35-40 мл элюата. Его собирают и лиофилизируют. Полученный профиль элюции представлен на фиг.2. Стрелками отмечены области выхода маркерных веществ; заштрихована область сбора материала.

5. Лиофилизированный материал, полученный в п.4 примера, растворяют в 2 мл дистиллированной воды и обессоливают на колонке с сефадексом G-15 с геометрическими параметрами 2,5 х 10 мл. Колонка предварительно откалибрована маркерами известной молекулярной массы голубой декстран (2106 Д), витамин В 12 (1355 Д), динитрофениллейцин (ДНФ) 300 Д. Элюцию проводят дистиллированной водой со скоростью 60 мл/час. Материал, соответствующий интервалу 30 - 40 мл элюата (фиг.3) представляет собой искомый продукт, который собирают и лиофилизируют. Полученный профиль элюции представлен на рис.3, заштрихована область сбора материала.

После лиофилизации материал представляет собой пушистый белый порошок, молекулярная масса 1000-6000 дальтон (по хроматографии на сефадексе G-15 в присутствии маркеров) В диапазоне доз 20 - 40 мкг на 6 106 клеток селезенки тимэктомированных мышей этот материал вызывает 50% восстановление чувствительности последних к ингибирующему действию азатиоприна, т.е. проявляет иммунологическую активность, характерную для СТФ и других тимических факторов.

Более того, в дозе 1 мкг/мышь (по сухому весу) этот материал в методе Ерне вызывает стимуляцию антителообразующих клеток в 2,5 раза по сравнению с контролем.

Литература 1. Dardenne М., Bach J-F. The sheep-cell rosette assay for the evaluation of thymic hormones. In Biological activity of thymic hormones. Ed. by Van Bekkum. Rotterdam 1975, p.235 - 245.

2. Патент "Способ выявления иммунодефицитного состояния" N 2077057, зарегистрированный в Государственном реестре изобретений 10 апреля 1997 года с приоритетом от 18 апреля 1994. С.Н.Москвина, В.Я.Арион, Е.О Дорошенкоъ

Формула изобретения

Способ получения иммунологически активного вещества из мочи млекопитающих, в том числе и человека, обладающего биологической активностью сывороточного тимического фактора, заключающийся в том, что мочу, содержащую этот материал, последовательно хроматографируют на колонке 2,5 х 30 см с Toyoperl HW-40 гелем, уравновешенным 0,2 М NaCl, материал в области 80-100 мл элюата лиофилизируют, хроматографируют на колонке 1 х 100 см с Toyoperl гелем, уравновешенным 0,2 М NaCl, материал в области 35-40 мл элюта лиофилизируют и обессоливают на сефадексе G-15, отбирая конечный продукт в области мол.м 6000-1000 Дальтон.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 21.10.2003

Извещение опубликовано: 20.12.2004        БИ: 35/2004



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, в частности к технологии получения лекарственных, косметических и прочих препаратов на основе гормоносодержащего сырья животного происхождения, используемых для лечения различных заболеваний, стимуляции иммунной и нервной систем, повышения общего тонуса и сопротивляемости организма, в геронтологической практике, для снижения веса, нормализации сна и аппетита, улучшения памяти, при импотенции и расстройствах овариально-менструального цикла, для купирования явлений выпадения при климаксе и сенсорных расстройств при аменореях и дисменореях, в психиатрии и т.д., а также в ветеринарии и животноводстве для повышения привеса и увеличения производительности

Изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности
Изобретение относится к медицинской промышленности и касается способа получения сырца гонадотропина хорионического
Изобретение относится к области производства медицинских препаратов, а именно получение биологически активного вещества - хондроитинсульфата
Изобретение относится к мочевому фолликулостимулирующему гормону, фармацевтическим композициям, содержащим его, и способу его очистки

Изобретение относится к медицине, а именно к способу очистки гонадотропина хорионического

Изобретение относится к препаратам, содержащим органическое активное соединение, которое может быть использовано в качестве лекарственного препарата, а также пищевой добавки, предупреждающих развитие свободнорадикальных процессов и нарушение антиоксидантной системы живых организмов

Изобретение относится к генной инженерии и медицине, а именно к новому полипептиду

Изобретение относится к способу получения экстрактов природной смеси конъюгированных эстрогенов из мочи жеребых кобыл (МЖК)
Изобретение относится к способу получения содержащего природную смесь конъюгированных лошадиных эстрогенов экстракта
Изобретение относится к медицине и предназначено для лечения пациенток с хроническими рецидивирующими циститами и резистентным гиперактивным мочевым пузырем. Лечение пациенток с резистентным ГМП и хроническими циститами проводят в 2 этапа. 1 этап - 10-дневный курс антибактериальной терапии, выбор антибиотика осуществляется согласно чувствительности выделенного микроорганизма по данным культурального исследования мочи и наличия урогенитальной инфекции при исследовании отделяемого уретры методом ПЦР. 2 этап - курс из 4-5 внутрипузырных введений раствора гиалуроната натрия по 50 мл 1 раз в неделю. После самостоятельного опорожнения мочевого пузыря и обработки наружных половых органов 0,2% раствором октенисепта производится катетеризация мочевого пузыря стерильным уретральным катетером малого размера. После введения раствора гиалуроната натрия пациенткам рекомендуется не опорожнять мочевой пузырь в течение 1-2-х часов для увеличения экспозиции препарата. Способ позволяет повысить эффективность лечения и увеличить длительность безрецидивного периода. 2 пр.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения из тканей человека белкового экстракта, обогащенного сфингомиелинсинтазой 1. Способ заключается в последовательной экстракции ткани, выбранной из ткани коры почки человека, легкого или семенников, буфером, содержащим сапонин в концентрациях 0,05 и 1 мг/мл. Способ, описанный выше, позволяет получить экстракты с большим выходом сфингомиелинсинтазы 1. 4 ил., 4 пр.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения протеогликанов из мочи. Способ заключается в том, что мочу первоначально охлаждают, выдерживают до образования агрегатов, центрифугируют для выпадения осадка, не содержащего протеогликана, после чего к надосадочной жидкости для осаждения протеогликана добавляют осадитель в соотношении 1:1, состав которого включает 4 объема 96° этилового спирта и 1 объем 0,01 N раствора гидроксида натрия, после чего смесь оставляют, не изменяя температурный режим, на 20 мин для образования агрегатов, которые отделяют центрифугированием, а затем осадок протеогликана отделяют от надосадочной жидкости в режиме охлаждения при 0°C центрифугированием, осадок отмывают повторным добавлением охлажденного до 0°C осадителя в соотношении 1:10, выдерживают в течение 5 мин для образования агрегатов, вновь центрифугируют, отделяют надосадочную жидкость, полученный осадок растворяют добавлением 0,01 N раствора HCl, снижая значения pH конечного продукта до pH 7,2, оставшийся незначительный нерастворимый осадок отделяют центрифугированием, а надосадочную жидкость, содержащую очищенный протеогликан, используют по назначению. Способ, описанный выше, обеспечивает получение высокоочищенного протеогликана. 2 з.п. ф-лы, 6 ил., 6 табл., 3 пр.
© Патентный поиск, поиск патентов на изобретения - FindPatent.RU 2012-2024
Политика конфиденциальности 2013-03-24T20:35:58
Наверх