Способ получения водного раствора инсулина

 

Изобретение относится к медицинской промышленности и может быть использовано в производстве лекарственных форм инсулина. Целью изобретения является повышение стабильности водных растворов инсулина к воздействию низких температур. Сущность изобретения состоит в последовательном проведении следующих операций: приготовление раствора 1 - субстрацию инсулина растворяют из расчета 4,1 - 5,1 мг в 1 мл 0,05 н. водного раствора уксусной кислоты; приготовление раствора 2 - растворяют нипагин в 0,1 н. водном растворе гидроокиси натрия из расчета его содержания в растворе 4,6 - 6,8 мг. Затем проводят смешивание этих растворов, добавляют глицерин, воду - до требуемого объема. Препарат подвергают стерилизующей фильтрации, выдерживают при температуре 1 - 5°С в течение 14 - 30 дн и после повторной стерилизации разливают во флаконы. 1 табл.

Изобретение относится к области медицины, в частности к способу получения лекарственных форм инсулина для инъекций, и может быть использовано в медицинской промышленности в производстве водного раствора инсулина для инъекций.

Известны различные способы приготовления водных растворов инсулина, содержащих 40 ЕД/мл, которые включают следующие стадии: растворение субстанции инсулина в подкисленной дистиллированной воде, добавление консерванта (фенола, крезола или их смесей, метилового эфира параоксибензойной кислоты - нипагина), при необходимости смешивание с буферным компонентом и раствором натрия гидроокиси, корректировку рН до нейтрального значения. Раствор подвергают стерилизующей фильтрации и разливают в асептических условиях во флаконы.

Указанными способами получают препараты инсулина, обладающие быстрым, но коротким действием: актрапид (фирма "Ново" Дания), илетин (фирма "Эли-Лилли" США) и т.д.

Наиболее близким к предлагаемому является способ приготовления препарата фирмы "Эли Лилли" США. В состав препарата включены следующие компоненты: субстанция инсулина 40 ЕД; глицерин 0,014 - 0,016 г; м-крезол 0,0025 г; вода для инъекций - до 1 мл.

Способ приготовления препарата заключается в следующем.

Субстанцию инсулина в виде цинковой соли растворяют в подкисленной соляной кислотой дистиллированной воде. Отдельно готовят водные растворы глицерина и м-крезола. Полученные растворы объединяют, гидроокисью натрия корректируют рН до нейтрального значения и объем раствора до требуемой величины. Приготовленный водный раствор инсулина подвергают стерилизующей фильтрации с помощью мембранных фильтров и разливают во флаконы. Препарат имеет нейтральный рН, прозрачен, бесцветен и хранится при температуре 4 - 5^оС. Для данного препарата исключено его замораживание, так как при низких температурах (от -5^о до -21^оС) в растворе наблюдается агрегация белка (опалесценция в растворе), что приводит к невозможности его дальнейшего использования. Следует отметить, что указанный недостаток присущ и другим быстродействующим инъекционным формам инсулина.

Необходимость повышения стабильности водного раствора инсулина, подвергающегося воздействию низких температур, вызвана тем, что в зимних условиях возможно нарушение режима хранения препарата, например при его складировании, транспортировке и т.д.

Целью изобретения является получение водных растворов инсулина, сохраняющих свои физико-химические и фармакологические свойства при воздействии низких температур, т.е. более стабильных в процессе хранения.

Поставленная цель достигается путем последовательного проведения следующих операций: приготовление раствора 1: субстанцию инсулина растворяют из расчета 4,1 - 5,1 мг в 1 мл 0,05 н. водном растворе уксусной кислоты; приготовление раствора 2: растворяют нипагин в 0,1 н. водном растворе гидроокиси натрия из расчета его содержания в 1 мл раствора 4,6 - 6,8 мг; при перемешивании со скоростью 50 - 60 об/мин к раствору 1 добавляют раствор 2; после смешивания растворов добавляют глицерин и воду до требуемого объема препарата; полученный водный раствор подвергают стерилизующей фильтрации, выдерживают при температуре 1 - 5^оС в течение 14-30 дн и после повторной стерилизующей фильтрации разливают во флаконы.

Предложен следующий компонентный состав препарата: Субстанция инсулина 40 ЕД Уксусная кислота 0,9-1,1 мг Глицерин 14-17 мг Нипагин 1,0-1,3 мг Вода для инъекций До 1 мл Предложенный способ позволяет получить препарат инсулина, сохраняющий свои физико-химические и фармакологические свойства, при воздействии экстремальных температурных режимов.

Результаты анализа препаратов сведены в таблицу.

Заявленный способ апробирован на предприятиях, выпускающих инсулиновые препараты: Киевском производственном химико-фармацевтическом объединении "Дарница", Львовском мясокомбинате и ПО "Белмедпрепараты". Описанные препараты прошли доклиническое, клиническое изучение и решением Фармакологического комитета N 13 от 12.09.91 разрешены к производству и выпуску в аптечную сеть.

Использование предлагаемого способа в промышленных условиях даст возможность обеспечить здравоохранение стабильным, прозрачным, нейтральным препаратом инсулина быстрого действия, который может подвергаться температурным воздействиям от + 40^о до -21^оС.

П р и м е р 1. 1,54 г (общая активность 40000 ЕД) субстанции свиного инсулина с биологической активностью 26 ЕД/мг, с содержанием цинка 0,42% растворяют в 340 мл 0,05 н. раствора уксусной кислоты (1020 мг СН₃СООН) (раствор 1). Далее готовят раствор 2, прибавляя к 200 мл 0,1 н. гидроокиси натрия (800 мг NaOH) 350 мл воды и 1,2 г нипагина и перемешивая до растворения нипагина. К раствору 1 при перемешивании со скоростью 50 об/мин прибавляют раствор 2,15 мл глицерина и воду для инъекций до 1 л. Полученный водный раствор инсулина подвергают стерилизующей фильтрации с помощью фильтров "Сарториус" (Швеция) с диаметром пор 0,22 мкм, предфильтром 0,45 мкм и выдерживают 21 день при температуре 1 - 5^оС. Стерильный раствор инсулина в асептических условиях разливают во флаконы.

Результаты испытаний полученного раствора приведены в таблице.

П р и м е р 2. 1,54 г (40000 ЕД) субстанции свиного инсулина активностью 26 ЕД/мл с содержанием цинка 0,42 % растворяют в 367 мл (1101 мг СН₃СООН) 0,05 н. раствора уксусной кислоты (раствор 1). Затем готовят раствор 2, прибавляя к 250 мл 0,1 н. раствора гидроокиси натрия (1000 мг NаОН) 350 мл воды и 1,2 г нипагина. Полученный раствор 1 смешивают с раствором 2 при перемешивании со скоростью 60 об/мин и далее опыт проводят как описано в примере 1.

Стерильную фильтрацию полученного водного раствора инсулина проводят с использованием стерильных фильтров фирмы "Палл" (ФРГ) на фильтровальной установке, состоящей из 2-х фильтродержателей типа "Силклин", установленных последовательно с помещенными в них фильтровальными элементами SLК7002NBP, размер пор фильтрующих мембран 0,45, и фильтровальными элементами SLК7002NFZP, размер пор 0,2 мкм. После выдержки раствора в течение 14 дн при температуре 1 - 5^оС процесс ведут, как описано в примере 1.

Результаты испытаний полученного раствора приведены в таблице.

П р и м е р 3. 1,54 г (общая активность 40000 ЕД) субстанции свиного инсулина с биологической активностью 26 ЕД/мг, с содержанием цинка 0,4 % растворяют в 300 мл (900 мг СН₃СООН) 0,05 н. раствора уксусной кислоты (раствор 1). Затем готовят раствор 2, прибавляя к 175 мл (700 мг NаОН) 0,1 н. раствора гидроокиси натрия 350 мл воды и 1,2 г нипагина. Полученный раствор 1 смешивают с раствором 2 и далее после 30-дневной выдержки процесс проводят как описано в примере 1.

Результаты испытаний полученного раствора приведены в таблице.

П р и м е р 4. 1,53 г (40000 ЕД) субстанции свиного инсулина фирмы "Ново" (Дания) с биологической активностью 26,1 ЕД/мг, с содержанием цинка 0,43% растворяют в 340 мл 0,05 н. раствора уксусной кислоты (1020 мг СН₃СООН) (раствор 1). Далее процесс ведут как указано в примере 1. Результаты испытаний полученного раствора приведены в таблице.

Как видно из таблицы, водный раствор инсулина в примерах 1 - 4 на момент приготовления и после замораживания в криотермостате при температуре -21^оС в течение 48 ч и последующего размораживания до температуры 5 - 10^оС представляет собой бесцветную прозрачную жидкость, а в аналогичных препаратах фирм "Ново" (Дания) и "Эли Лилли" (США) образуется опалесценция.

Проведенный анализ показал, что препараты актрапид "Ново" (Дания) и илетин 1 "Эли-Лилли" (США) обладают пониженной стабильностью к воздействию экстремальных температурных режимов по сравнению с предлагаемыми препаратами.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДНОГО РАСТВОРА ИНСУЛИНА, содержащего 40 ЕД/мл, растворением субстанции кристаллического инсулина в дистиллированной воде, подкисленной соляной кислотой, добавлением гидроокиси натрия, глицерина, консерванта, стерилизующей фильтрацией, отличающийся тем, что препарат готовят посредством смешивания раствора 1, содержащего 4,1 - 5,1 мг инсулина в 1 мл 0,05 н. растворе уксусной кислоты, с раствором 2, содержащим 4,8 - 6,8 мг нипагина в 0,1 н. растворе гидроокиси натрия, со скоростью перемешивания 50 - 60 об/мин, к полученному раствору добавляют 14 - 17 мг глицерина и стерильной дистиллированной водой доводят концентрацию инсулина до 40 ЕД/мл, проводят стерилизацизирующую фильтрацию, выдержку препарата при 1 - 5^oС в течение 14 - 30 дней и далее процесс ведут известным способом.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2