Способ получения гемоцианина

 

Изобретение относится к экспериментальной медицине, иммунохимии и биотехнологии получения антител, к низкомолекулярным гаптенам. Гемоцианины получают из гемолимфы промысловых видов крабов, которую непосредственно подвергают центрифугированию, а очистку проводят ультрафильтрационным способом с помощью мембран, пропускающих глобулярные белки с молекулярной массой 300 кДа и ниже, сконцентрированную гемолимфу отмывают дистиллированной водой и целевой продукт лиофильно высушивают. Преимущество способа простота, чистота технологического процесса, длительный срок хранения целевого продукта.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, иммунохимии и биотехнологии получения антител, к низкомолекулярным гаптенам.

Известен способ получения гемоцианина, согласно которому из сердца виноградной улитки Helix pomatis с помощью иглы в стерильных условиях отбирают лимфу, инкубируют ее 3 ч при комнатной температуре и центрифугируют при 10000 об/мин. Полученный супернатант разводят вдвое с помощью 0,4 М ацетатного буфера рН 5,3, после чего гемоцианин осаждают, добавляя равный объем насыщенного раствора сульфата аммония. Препарат хранят в виде суспензии в растворе сульфата аммония с добавлением толуола при 4^оС.

Данный способ получения гемоцианина является сравнительно сложным.

Целью изобретения является упрощение и чистота технологического процесса получения гемоцианина с длительным сроком хранения целевого продукта.

Для этого гемоцианины получают из гемолимфы промысловых видов крабов, которую непосредственно после сбора подвергают центрифугированию, а очистку осуществляют ультрафильтрационным способом с помощью мембран, пропускающих глобулярные белки с мол. массой 300 кДа и ниже, а сконцентрированную гемолимфу отмывают дистиллированной водой, затем полученный целевой продукт лиофильно высушивают.

Изобретение поясняется следующим конкретным примером его осуществления.

П р и м е р. 1 л гемолимфы промысловых видов крабов, собранную из живых животных инъекционной пункцией, центрифугируют до полного удаления клеточного материала и очищают ультрафильтрационным способом на установках, пропускающих через мембранную поверхность глобулярные белки с мол. массой 300 кДа и ниже.

Сконцентрированную гемолимфу отмывают на этих установках от посторонних примесей дистиллированной водой и целевой продукт лиофильно высушивают. Выход гемоцианинов в сухом виде 0,5-0,7 г.

Предлагаемый способ используют современные мембранные технологии для получения гемоцианинов.

Формула изобретения

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕМОЦИАНИНА из гемолимфы путем центрифугирования с последующей очисткой целевого продукта, отличающийся тем, что используют гемолимфу промысловых видов крабов, которую непосредственно подвергают центрифугированию, а очистку проводят ультрафильтрационным способом с помощью мембран, пропускающих глобулярные белки с мол. м. 300 КДа и ниже, а сконцентрированный гемоцианин отмывают.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что сконцентрированный гемоцианин отмывают дистиллированной водой.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что сконцентрированный и отмытый целевой продукт лиофильно высушивают.