Лекарственное средство, обладающее противовоспалительным и стимулирующим регенеративные процессы в слизистых оболочках действием

 

Изобретение относится к медицине. Предлагаемое лекарственное средство изготовлено на основе экологически чистого рассола хлоридмагниевого минерала бишофит, состоит, г: рассол хлоридмагниевого минерала (1,27 ± 0,01 г/см³) 100; бишофит, стандартизированный по удельной плотности стастилин 0,01; ментол 0,005; тимол 0,005; стабилизатор 0,0002 - 0,005, и оказывает противовоспалительное действие и ускоряет заживление инфицированных и неинфицированных язвенных дефектов слизистых (полости рта). Целью изобретения является расширение арсенала лекарственных средств, применяемых в стоматологической практике, в частности проявляющие противовоспалительное, антимикробное, раназаживляющее действия и стимулирующие фагоцитоз. Сущностью изобретения является создание отечественного препарата типа болгарского средства "Полиминерол" - "Поликатан" на основе отечественного и экологически чистого хлоридмагниевого минерала бишофит, превосходящего по силе действия зарубежный аналог. 12 табл.

Изобретение относится к медицине.

Предлагаемое вещество "Поликатан" относится к новым лекарственным средствам, состоит из следующих компонентов (композиция I), г: Рассол хлоридмагниевого минерала бишофит, стан- дартизированный по удельной плотности (1,27 ± 0,01 г/см³) 100 Сластилин 0,01 Ментол 0,005 Тимол 0,005 Стабилизатор 0,0002-0,005 оказывает противовоспалительное действие и стимулирует заживление инфицированных и неинфицированных дефектов слизистых.

Предполагаемый лекарственный препарат может быть рекомендован для использования в медицинской практике в качестве средства для лечения воспалительно-дистрофических заболеваний, инфицированных и неинфицированных дефектов слизистых полости рта и других органов.

Аналогом предлагаемого вещества является болгарский препарат "Полиминерол", действующим началом которого является хлоридмагниевая соль маточника Поморийского озера и который содержит, г: Поморийская "луга" (Маточник Поморийского озера) с удельной 100 плотностью 1,268 г/см³ Сахарин 0,1 Спирт 0,05 Ментол 0,005 Тимол 0,005 Данный препарат оказывает недоcтаточное противовоcпалительное дейcтвие и не проявляет антимикробное влияние по отношению к уcловно-патогенной микрофлоре полоcти рта.

Химический состав рассола Волгоградского бишофита и маточника Поморийского озера приведен в табл.12. При сопоставлении их составов следует отметить их общие особенности: высокое содержание хлоридмагниевых солей (бишофита) и значительные примеси микроэлементов; и отличия: большая минерализация рассола бишофита, значительное содержание хлористого натрия в Поморийской "луге". Следует подчеркнуть, что рассол бишофита для приготовления поликатана стандартизируется по удельной плотности разведенным до 1,26-1,28 г/см³, что соответствует аналогичному показателю маточника Поморийского озера. Антисептическое вещество тимол и ароматизирующая отдушка-ментол добавлены в одинаковых дозах для лучшей сохранности и улучшения органолептических свойств поликатана и полиминерола. В поликатане в качестве подслащивающего вещества использован современный препарат сластилин, а в полиминероле сахарин. В поликатан добавлен стабилизатор раствор твин-80 (0,0002 г) или желатоза (0,005 г).

Существенным недостатком препарата "полиминерол" является то, что его готовят на основе добываемого с поверхности маточника Поморийского озера. Незащищенная акватория соляного озера загрязняется атмосферными и промышленными осадками и не является экологически чистым. В отличии от маточника Поморийского озера предлагаемое действующее начало-рассол Волгоградского бишофита добывается с глубины 1761 м и готовится на экологически чистой подземной воде.

Третьим отличительным качеством лекарственной основы препарата "Поликатан" рассола хлоридмагниевого минерала бишофит является дешевизна и наличие значительных запасов на территории России (Волгоградская область).

Целью изобретения является создание лекарственного средства "Поликатан" на основе хлоридмагниевого минерала "Бишофит" для лечения воспалительно-дистрофических заболеваний, инфицированных и неинфицированных дефектов слизистых полости рта и других органов, расширение арсенала фармакологических средств воздействия на патологические изменения слизистой различных органов.

Поставленная цель достигается композицией I, которая оказывает противовоспалительное действие и стимулирует заживление инфицированных и неинфицированных язв слизистой полости рта более эффективно, чем препарат сравнения "Полиминерол". В состав поликатана (композиция I) сластилин и ментол введены в качестве корректора органолептических свойств лексредства, ментол и твин-80 для стабилизации раствора.

Противовоспалительное действие поликатана в сравнении с полиминеролом ("Фармахим", Болгария) изучалось в опытах на 224 белых нелинейных крысах обоего пола и на 110 белых беспородных мышах обоего пола. Противовоспалительное действие поликатана оценивали по его влиянию на экссудативную фазу воспаления, вызванного интрапланарным введением 0,1 мл таких флогогенных агентов как формалин (2% -ный раствор), каррагенин (2%-ный раствор), гистамин (0,5% -ный раствор), серотонин (0,01%-ный раствор). Для регистрации величины отека лапки измеряли объем ртути, вытесненной при погружении пораженной конечности. Величину отека лапки вычисляли по формуле: D × 100-100 где D флогестический эффект;
O объем лапы до введения флогогенного агента;
I объем лапы после введения флогогенного агента.

При формалиновом и каррагениновом отеках повторное измерение объема лапы проводили через 4 ч, при гистаминовом и серотониновом через 1 ч после введения флогогенных агентов.

Повязку с растворами полиминерола фиксировали к лапе животного лейкопластырем.

Кроме того, на мышах было исследовано действие полиминерола на воспалительный процесс при ожоге. Для этого нижнюю часть тела до реберной дуги погружали на 60 с в воду, нагретую до 54^оС. Затем в течение 120 ч наблюдали выживаемость животных. Изучаемые растворы (0,5%-ные) вводили подкожно в дозе 0,02 мл/кг однократно перед ожогом. Статистическую обработку данных выполняли с применением ± критерия Стьюдента.

Экспериментальная терапия термического ожога слизистой полости рта проводилась в опытах на 40 кроликах породы "Шиншила" массой 2,0 ± 0,5 кг. Термическое повреждение слизистой проводили на наркотизированных (эфирный наркоз) кроликах нанесением в течение 20 с раскаленного до красна штопфера (диаметром 3 мм) в области переходной складки у верхних резцов слева и справа. Через 24 ч после нанесения дефектов необходимых для развития процесса воспаления вследствие проникновения микрофлоры в рану, животных лечили поликатаном (орошение в разведении 1:5 1-я группа, в разведении 1:20 2-я группа) и полиминеролом (орошение в разведении 1:5 3-я группа). В контрольной группе животных орошение проводили дистиллированной водой. Об эффекте препаратов судили по времени (в сутках) клинического заживления язвенного дефекта.

Влияние на фагоцитарную активность полинуклеаров крови изучалось на белых нелинейных мышах массой 18-20 г. Поликатан в виде 2; 5 и 10%-ного раствора вводили подкожно (5 мл/кг ежедневно) в течение 6 дней.

Перед началом введения препаратов у животных были изучены фоновые (исходные) показатели фагоцитарной активности нейтрофилов. Для изучения фагоцитарной активности нейтрофилов кровь забирали от 3 животных на 3, 6-е сут. после начала лечения и на 3-и сут после окончания лечения в пробирку с гепарином (25 ЕД/мл).

Фагоцитарную активность нейтрофилов оценивали по фагоцитарному индексу (ФИ), определяемому общепринятым методом с небольшими изменениями и по показателю НСТ-теста: способности нейтрофилов восстанавливать нитросиний тетразолит до диформазана.

Для определения фагоцитарного индекса из полученной крови мышей выделяли клетки белой крови. К 0,3 мл гепаринизированной крови добавляли 0,6 мл 2%-ного раствора желатина, инкубировали 20 мин при 37^оС, отделяли надосадочный слой, содержащий лейкоциты и лимфоциты и отмывали их однократно путем центрифугирования в 1,5-2,0 мл среды 199 при 1500 об/мин в течение 10 мин. Осадок клеток ресуспендировали в 0,3 мл среды 199. Затем 0,2 мл клеточной взвеси переносили в силиконизированную пробирку, вносили 0,1 мл 1,5 млрд взвеси клеток St aureus убитых нагреванием. Смесь инкубировали при периодическом встряхивании в течение 30 мин при 37^оС. После этого готовили мазки, фиксировали 15 мин в метаноле, окрашивали по Романовскому-Гимзе. Подсчитывали количество нейтрофилов из 100 клеток, фагоцитировавших клетки стафилококка, тем самым определяли ФИ.

Для определения показателя НСТ-теста 0,05 мл гепаринизированной крови вносили в коническую селиконизированную пробирку, содержащую 0,025 мл фосфатно-солевого буфера рН 7,3, после чего вносили 0,025 мл 0,2%-ного раствора нитросинего тетразолия. Пробирки инкубировали при 37^оС 30 мин, дважды осторожно встряхивая. Реакцию останавливали, помещая пробирки в ледяную баню, готовили мазки, фиксировали в течение 10 мин метанолом и окрашивали 15 мин 0,1% -ным раствором нейтрального красного. Определяли процент нейтрофилов, содержащих в цитоплазме гранулы диформазана.

Статистическую обработку материала проводили в соответствии с известными рекомендациями.

Противомикробное действие изучалось в опытах in vitro. Препарат изучен в составе жидких и плотных питательных сред в концентрации от 50% до 0,01% Опыты поставлены на референтных штаммах патогенной микрофлоры (St.aureus, Str. mutans, Cendida Aldicans). В качестве питательной среды применяли агар и бульон Хоттингера рН 7,4 для стафилококков и стрептококков, агар и бульон Сабуро рН=6,8 для Candida albicans. В работе использовались 48-часовые суспензии (соответственно выращенных при 37 и 28^оС) агаровых культур микроорганизмов в концентрации 10⁷, 10⁵ и 10³ м.т./мл (по стандарту мутности ГКИ для бактерий и с использованием камеры Горяева для подсчета дрожжевых клеток Candida albicans). При изучении бактерицидных свойств препарата в плотных и жидких питательных средах конечная концентрация микроорганизмов составляла 106 м. т. /мл среды, которая в соответствии с указаниями об унификации микробиологических (биологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений являлась эпидемиологически значимой величиной для мокроты стоматологических больных. Более низкие концентрации микроорганизмов (10⁴ и 10² м.т./мл среды) использовались для оценки бактериостатического действия поликатана. Об эффективности препарата судили по росту колоний: очень скудный рост рост единичных колоний (до 10); скудный рост от 10 до 25 колоний; умеренный рост более 50 колоний; обильный рост сплошной рост колоний, не поддающийся подсчету.

Острая токсичность изучалась в острых опытах на белых нелинейных мышах массой 18-20 г и белых нелинейных крысах массой 120-150 г. Изучаемые вещества вводились внутрижелудочно с помощью специальных зондов. Гибель животных отмечалась в течение двух недель. Расчет величины острой токсичности проводили на ПЭВМ "Электроника-85" по зависимости доза-эффект.

Результаты иccледования.

Противовоспалительное действие.

В результате проведенного исследования установлено, что поликатан оказывает выраженное угнетающее действие на эксудативную фазу воспалительного процесса. Так из данных, приведенных в табл.1, следует, что поликатан в 20% -ной концентрации в 2,9 раза большей степени подается формалиновый отек лапки крыс, чем препарат сравнения полиминерол. Активность поликатана в концентрации 5% по отношению к полиминеролу возросла в 3,5 раза. Более выраженное антифлогистическое влияние оказывал поликатан при воспалительной реакции, вызванной каррагенином (табл. 2). Изучаемое новое вещество уменьшало отек лапки крыс практически в 2 раза. При этом поликатан в 20%-ной концентрации, превосходя полиминерол в 1,53 раза, а в 5%-ной концентрации 2,93 раза.

Значительное антифлогистическое действие поликатана было выявлено на моделях отека, вызванных такими медиаторами воспаления как гистамин и серотонин. При гистаминовом отеке (табл.3) препарат поликатан в концентрациях 5% и 20% ограничивал увеличение объема лапки крыс более чем в 2,8 раза и в 2,4 раза соответственно. Новое вещество на данной модели отека незначительно превосходило полиминерол в концентрации 5% в 1,15 раза, а в концентрации 20% в 1,21 раза. При серотониновом отеке (табл.4) поликатан в виде 5%-ного раствора ограничивал эксудативную фазу воспаления в 2,45 раза, а в виде 20% -ного раствора в 2,7 раза. Поликатан в данных концентрациях превосходил полиминерол в 1,23 и 2,19 раз.

При изучении действия поликатана и полиминерола на асептическое воспаление в опытах на мышах (табл.5) установлено их позитивное действие. Новое вещество оказывало статистически значимое влияние на выживаемость мышей при ожоге нижней части тела и было активнее полиминерола.

Таким образом, новый препарат оказывает значительное противовоспалительное действие, превосходя по активности препарат сравнения.

Экспериментальная терапия ожога слизистой полости рта.

Через 24 ч после нанесения травмы дефект слизистой оболочки окружен воспалительным валиком, возвышающимся над поверхностью неповрежденной ярко гиперемированной слизистой. Дно дефекта покрыто белым фибринозным налетом, кровоточит. В группе нелеченых животных до 9 сут наблюдали нарастание отечности и нагноения с сохранением серого налета с некротизированными подслизистыми слоями. На 15-17-е сутки наблюдали снижение отечности и гиперемии прилегающих тканей. Фибринозный налет сохранялся. К 20-23-м суткам на месте поврежденной ткани образовывался белый узелок, наполненный серозной жидкостью. Фибринозного налета и отечности не наблюдали. Сохранялась незначительная гиперемия прилегающих тканей.

На 25-27-е сутки начиналось заживление ран, которое полностью заканчивалось к 35-37-е суткам.

В опытных группах животных через сутки после начала аппликаций препаратов клиническая картина резко отличалась от контрольной. На 5-е сутки после нанесения термического поражения в опытных группах животных воспалительные явления в ране выражены в меньшей степени, чем у животных контрольной группы. Фибринозный налет был незначительным, воспалительный валик, отечность и кровоточивость отсутствовали. На 7-9-е сутки у животных наблюдали очищение ран, значительно уменьшилась их глубина и размеры. Воспалительная реакция практически отсутствовала.

Эпителизация ран у животных, подвергавшихся лечению, наступала в различные сроки: в 1 группе на 10-20-е сутки, в 2-й на 21-30-е сутки, в 3-й (препарат сравнения) 24-35-е сутки, в контрольной 4-й группе на 29-37-е сутки.

Результаты эксперимента статиcтичес-ки обработаны и представлены в табл. 6.

На основании клинических наблюдений за течением экспериментального воспалительного процесса и его эпителизации можно сделать следующие выводы:
в процессе лечения экспериментального термического ожога слизистой оболочки полости рта кролика выявлена высокая терапевтическая активность поликатана, проявившаяся в снижении степени тяжести заболевания по сравнению с нелеченой раной;
эпителизация ран в опытной группе под влиянием поликатана в 1,75 раза выше, чем у животных, получавших полиминерол.

Действие на фагоцитарную активность нейтрофилов.

Полученные результаты представлены в табл.7 и 8.

Анализ полученных результатов показывает, что оба показателя фагоцитарной активности нейтрофилов крови (ФИ и НСТ) свидетельствуют о выраженной активации фагоцитоза. Все три испытанных препарата обладают таким свойством. При этом прослеживается зависимость степени активации от концентрации вводимого препарата (доза-эффект). Так, на 3-й день лечения 2%-ными концентрациями препаратов значимого увеличения активности фагоцитов не наступило, в то время как в этот же срок достоверно повысилась активность клеток после введения 5 и 10%-ных концентраций (р < 0,01).

Показатели ФИ при лечении 10%-ными растворами полиминерола и предлагаемым препаратом практически не различаются между собой (р < 0,05). При лечении основой препарата бишофитом в таких же концентрациях регистрируются аналогичные показатели ФИ, это свидетельствует в пользу того, что активация фагоцитоза обусловлена в первую очередь присутствием солевых компонентов.

После прекращения лечения на 3-й день еще отчетливо проявляется более высокая, в сравнении с контролем, активность фагоцитов.

Показатели НСТ-теста адекватно отражают активность фагоцитов, как и показатели ФИ; при этом показатели НСТ-теста с большей чувствительностью регистрируют происходящие изменения в активности фагоцитов, что проявляется в достоверном увеличении фагоцитарной активности нейтрофилов уже в первые дни лечения низкими концентрациями препаратов. Наиболее показательны изменения НСТ-теста при лечении 10%-ными концентрациями препаратов.

Противомикробное действие основного компонента препарата поликатан рассола бишофита изучалось в опытах in vitro (табл.9, 10). Установлено, что в 50% -ной концентрации рассол бишофита полностью подавляет рост изучаемого штамма стафилококка, стрептококка и кандид, в 20-30%-ной концентрации умеренно тормозит рост стафилококка и в 5-30%-ной концентрации кандид как в жидкой, так и в твердой питательной среде. В этом плане изученное вещество отличается от препарата сравнения полиминерол, который в концентрациях 5-50% не оказывал противомикробного эффекта ни in vitro, ни in vivo.

Острая токсичность поликатана и основного сырья для его получения рассола бишофит определялась при их введении крысам и мышам внутрижелудочно. Данный путь введения был выбран, исходя из тех соображений, что больной человек после поласкания слизистой полости рта по ошибке может проглотить препарат. Установлено, что поликатан 5%-ной концентрации практически не вызывает гибели мышей и крыс (табл.11). Препарат полиминерол в подобной концентрации по данным, приведенным в отчете Болгарской фирмы "Фармахим", вызывал гибель животных в дозе 6-7 мл/кг. В проведенных опытах поликатан вызывал гибель животных только в 20%-ной концентрации, при этом величина острой токсичности колебалась от 11 до 28 мл/кг, что свидетельствует о низкой токсичности препарата поликатан.

Препарат поликатан по силе противовоспалительного действия существенно превосходит болгарский препарат полиминерол, ускоряет заживление (в 1,75 раза по отношение к полиминеролу) ожоговой инфицированной язвы слизистой полости рта, в равной степени с полиминеролом стимулирует фагоцитарную активность нейтрофилов и в отличии от импортного лекарства в терапевтической концентрации оказывает противомикробное влияние. По величине острой двухнедельной токсичности (ЛД₅₀) поликатан значительно менее токсичен, чем полиминерол.

Учитывая выраженное противовоспалительное действие, стимулирующее действие на заживление ожоговой инфицированной язвы слизистой полости рта, особенности механизма действия (сочетание противовоспалительного влияния со стимуляцией фагоцитоза и противомикробным действием) и низкую токсичность препарата поликатан целесообразно его рекомендовать для лечения различных воспалительных заболеваний и язв различной этиологии слизистой оболочки полости рта и других органов.

Формула изобретения

ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫМ И СТИМУЛИРУЮЩИМ РЕГЕНЕРАТИВНЫЕ ПРОЦЕССЫ В СЛИЗИСТЫХ ОБОЛОЧКАХ ДЕЙСТВИЕМ, содержащее хлормагниевую соль, ментол, тимол, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит сластилин, стабилизатор, а в качестве хлормагниевой соли - рассол хлоридмагниевого минерала бишофит, стандартизованный по удельной плотности (1,27 - 0,01) г/см, при следующем соотношении компонентов, г:
Рассол хлормагниевого минерала бишофит - 100
Сластилин - 0,01
Ментол - 0,005
Тимол - 0,005
Стабилизатор - 0,0002 - 0,005

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5