Способ получения вещества, обладающего гиполипидемической, антиоксидантной и гепатозащитной активностью, из пчелиного меда

 

Использование: изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности, и касается способа получения вещества, обладающего гиполипидемической, антиоксидантной и гепатозащитной активностью, из пчелиного меда. Сущность способа заключается в кристаллизации меда по льду с последующим инкубированием в течение 3 - 30 дней при температуре от4 до 30^oC и осветлении. Получено биоактивное вещество, обладающее сильно выраженной антиоксидантной, гиполипидемической и гепатозащитной активностью. 5 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при получении из меда медицинских и сельскохозяйственных препаратов, предназначенных для профилактики и лечения заболеваний различной этиологии.

Известно получение биостимулятора путем выделения антигена из бактериальных клеток или продуктов их жизнедеятельности, содержащих структуры, относящиеся к группе сахаров (патенты по заявкам Франции N 2399845, публ. 13.06.79, кл. A 61 K 39; ЕПВ N045718, публ.02.10.82, кл. A 61 K 9/06).

Эти способы нетехнологичны, поскольку требуют высокой степени очистки выделяемых активных компонентов и их последующего связывания с фармацевтическим носителем. При этом снижается биологическая активность целевого продукта.

Известен также способ получения биостимулирующего средства путем растворения меда в воде до гипертонической концентрации (Лечебные свойства меда и пчелиного яда. М. "Дедгиз", 1956, с. 135-136; Кузьмина К.А. Лечение5 пчелиным медом и ядом. Изд-во Саратовского ун-та, 1983). Для повышения биологической активности раствор меда получают с помощью фракционирования и кристаллизации во льду (заявка N 5002353 от 23.08.91), далее возможна обработка продукта гамма-облучением (заявка N 5064879 от 16.07.92).

Однако целевой продукт, полученный данными способами, обладает низкой гиполипидемической, антиоксидантной и гепатозащитной активностью.

Целью изобретения является повышение биологической активности целевого продукта.

Указанная цель достигается тем, что раствор меда, фракционированный кристаллизацией во льду, инкубируют в течение 3 30 дней при температуре от 4 до 30^oC, а затем осветляют фильтрованием или центрифугированием. В варианте способа, включающем γ облучение, поглощенную дозу целесообразно установить не менее 10 кГр (пример 4).

Нами установлено, в процессе инкубирования уменьшается вязкость раствора меда, что имеет следствием снижение потерь при фильтровании. Нами обнаружено также, что фильтрат (центрифугат) разжиженного раствора проявляет более высокую биологическую активность (табл. 1).

Пример 1. Растворитель дистиллированную воду замораживают до образования льда при температуре 20^oC. На поверхность льда наносят слой хранившегося ранее при комнатной температуре некристаллизованного цветочного пчелиного меда в весовом соотношении 4:1 соответственно и выдерживают в течение 20 суток при -20^oC. За этот срок происходит растворение меда во льду, вызванное тепломассопередачей, с последующей его кристаллизацией.

Кристаллизованный раствор меда делят на порции, которые инкубируют при 20^oC в течение сроков, указанных в табл. 2. По окончании инкубирования производят осветление целевого продукта фильтрованием через ватно-марлевый фильтр.

Биологическую активность препаратов испытывают на белых мышах по 9 12 особей в группе. Их выводят перорально по 1 капле на особь в течение 10 дней. Затем мышам внутрибрюшинно вводят по 80 мг/кг гексенала снотворного средства, нейтрализация которого происходит только в печени. О биологической активности целевого продукта судят по длительности гексеналового сна мышей по сравнению с длительностью гексеналового сна мышей следующих контрольных групп.

Контроль 1. Мышей защищают биологически активным раствором меда данной партии, не подвергавшимся инкубированию и осветлению (прототип).

Контроль 2. 0гексенал вводят мышам, не защищенным каким-либо лекарственным средством.

Результаты испытания приведены в табл.2.

Как видно из табл. препараты, полученные предлагаемым способом, статистически значимо (p0,05) снижают длительность гексаналового сна.

Пример 2. Раствор меда получают, как в примере 1. При этом стадию инкубирования проводят в течение 14 дней при значении температур, указанных в табл. 3, а по окончании инкубирования раствор меда осветляют центрифугированием на лабораторной центрифуге в течение 20 мин при 2000 об/мин.

Биологическую (гиполипидемическую) активность препаратов испытывают на крысах-самцах массой 240 260 г (8 10 особей в группе). Крысы получают гиперхолестериновую диету (ГХД): 2,5% холестерина,12% 6-метилтиоурацила и 30 смеси жиров (прогретое подсолнечное масло и свиной жир в соотношении 1:1). Испытуемый препарат вводят интраназально в разведении 1:10 по 1 капле в течение 24 дней. О гиполипидемической активности целевого продукта судят по содержанию XC в сыворотке крови и печени (табл.3).

Контроль 1. Крыс защищают биологически активным раствором меда данной партии, не подвергавшимся инкубированию и осветлению (прототип).

Контроль 2. ГХД без защиты каким-либо препаратом.

Как видно из таблицы, целевой продукт существенно снижает содержание холестерина в печени и сыворотке крови (p 0,05).

Пример 3. Раствор меда получают, как в примере 1, при следующих значениях режимных параметров стадии инкубирования: длительность 15 дней, температура 22^oC. Выход целевого продукта составляет 95% (в пробе без стадии инкубирования выход составляет 82%).

Биологическую активность целевого продукта испытывают как в примере 2. В данном примере судят об антиоксидантной активности целевого продукта по содержанию гидроперекисей липидов в плазме крови. Результаты приведены в табл. 4.

Как видно из табл. целевой продукт существенно (p0,05) снижает содержание гидроперекисей липидов в плазме крови.

Пример 4. Раствор меда получают, как в примере 3. Порции полученного препарата подвергают g облучению (поглощенная доза от 0,1 до 100 кГр).

Испытания биологической активности целевых продуктов проводят на белых мышах (по 9 12 особей в группе. Их вводят в разведении 1:100 интраназально по 50 мкл в течение 10 дней, затем проводят однократную затравку мышей четыреххлориcтым углеродом (CCl₄) внутрибрюшинно по 0,2 мл 25% ного масляного раствора CCl₄.

Действие препаратов оценивают по выживаемости мышей в течение 4 суток.

Контроль 1. Мышей защищают необлученным препаратом той же серии.

Контроль 2. Мышей защищают препаратом, полученным без инкубирования и облученным поглощенной дозой 10 кГр (прототип).

Контроль 3. Мышей защищают неинкубированным и необлученным препаратом.

Контроль 4. CCl₄ вводят незащищенным мышам.

Результаты приведены в табл.5.

Как видно из табл. наиболее эффективен препарат, облученный дозой 25 кГр. Он обеспечивает защиту 89% животных против 55% в прототипе. 100% Незащищенных животных падает на первые сутки.

Приведенные примеры свидетельствуют о достигнутом повышении биологической активности и выхода целевого продукта.

Формула изобретения

Способ получения вещества, обладающего гиполипидемической, антиоксидантной и гепатозащитной активностью, из пчелиного меда, включающий нанесение на поверхность льда некристаллизованного цветочного меда с последующим выдерживанием на холоде до завершения растворения меда во льду и его кристаллизации, далее кристаллизованный раствор меда инкубируют в течение 3 30 дней при 4 30^oC соответственно, а затем осветляют с помощью фильтрования или центрифугирования.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2