Способ изготовления живой сухой вакцины против рожи свиней из штамма вр-2

 

Использование: биотехнология: промышленное производство живой сухой вакцины против рожи свиней из штампа ВР-2. Сущность изобретения: готовят питательную среду, содержащую перевар Хоттингера, печеночный экстракт, пептон, сухой дрожжевой экстракт натрий хлористый, однозамещенный фосфорyокислый калий, двузамещенный фосфорнокислый натрий, глюкозу, нормальную сыворотку крупного рогатого скота, L-аргинин, твин-80 и дистиллированную воду. Приготовленную среду подвергают холодной фильтрации через фильтр пластины, вносят посевной материал штамма ВР-2 и осуществляют глубинное культивирование. По окончании культивирования добавляют защитную среду, содержащую, об.%: желатин 4, пептон 15, сахарозу 20 и фосфатно-буферный раствор остальное. Модификация питательной среды и ее обработка холодной фильтрацией позволяет получить необходимую концентрацию микроорганизмов без проведения операции концентрирования культуральной жидкости. Защитная среда позволяет сохранить жизнеспособность клеток штамма ВР-2 в течение 12 мес. 2 з. п. ф-лы, 3 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при промышленном производстве живой сухой вакцины против рожи свиней из штамма ВР-2. Известен способ изготовления живой сухой вакцины против рожи свиней из штамма ВР-2(I).

Однако существующий способ изготовления обладает рядом недостатков: глубинное культивирование проводится на дорогостоящей, сложной в изготовлении питательной среде; стерилизация питательной среды осуществляется термическим способом (паром), что снижает ее ростовые свойства за счет денатурации белков, аминокислот и т. д. повышенной температурой; концентрирование осуществляется методом центрифугирования, что приводит в частичному механическому повреждению культуры микроорганизмов, а следовательно, к снижению выживаемости, возможности контакта обслуживающего персонала с возбудителями рожи и контаминации культуры посторонней микрофлорой; гомогенизация и фильтрации бакмассы после концентрирования также приводит к снижению качества продукта, возможности контаминации посторонней микрофлорой и контакта обслуживающего персонала с возбудителем.

Целью изобретения является повышение производительности, снижение себестоимости, повышение качества вакцины, исключение возможности контакта обслуживающего персонала с возбудителем и контаминации посторонней микрофлорой.

Цель достигается изменением технологии изготовления живой сухой вакцины против рожи свиней из штамма ВР-2, а именно: для культивирования используется питательная среда, которая имеет существенное отличие о ранее используемой, что видно из табл. 1.

В предлагаемом способе по сравнению с существующим стерилизацию питательной среды осуществляют холодным способом через фильтрующие пластины СФ.

Для повышения качества и сроков хранения сухой вакцины после лиофилизации предложена новая рецептура среды высушивания, состав которой по сравнению с существующей приведен в табл. 2.

Для исключения возможности механического повреждения культуры контаминацией посторонней микрофлорой и контакта обслуживающего персонала с возбудителем исключены операции концентрирования (центрифугированием), гомогенизации и фильтрации. Использование предлагаемой питательной среды и метода ее холодной фильтрации позволяет получит необходимую концентрацию микроорганизмов для изготовления вакцины без проведения вышеперечисленных операций.

Обобщенные сравнительные данные существующего и предлагаемого способов изготовления живой сухой вакцины против рожи свиней из штамма ВР-2 приведены в табл. 3.

Технологический процесс предлагаемого способа осуществляется следующим образом.

Сухую культуру штамма ВР-2 засевают в 0,1 л флаконы с мясопептонным бульоном (МПБ) и культивируют в течение 24 ч при температуре 36-37^oC. Затем эту культуру пересевают 0,2 л флаконы с полужидким МПА и культивируют 24-36 ч при тех же условиях. Культурой с полужидкого агара засевают 16 л емкости с предлагаемой питательной средой и культивируют в течение 22-24 ч в термостате.

Приготовленную питательную среду фильтруют через фильтр-пластины СФ под давлением в предварительно простерилизованноый биореактор. Затем реактор с питательной средой засевается культурой штамма ВР-2 из 16 л емкости. В течение 20-22 ч производится культивирование в биореакторе при следующих значениях основных параметров: температуре 35,5±0,5^oC, рН 6,9-7,2 ед. рН, перемешивание 100-150 об/мин.

По окончании культивирования добавляется среда высушивания в объеме 1:4.

Далее производится фасовка и лиофилизация вакцины. Затем осуществляются укупорка, этикетировка и упаковка препарата.

На всех стадиях способа изготовления вакцины осуществляется биологический контроль на стерильность и специфичность культуры. Реализуемый биопрепарат также проверяется на иммуногенность, безвредность и на выживаемость.

Преимуществом предлагаемого способа является повышение производительности, снижение себестоимости, повышение качества и сроков хранения сухой вакцины, исключение контаминации культуры посторонней микрофлорой и контакта обслуживающего персонала с возбудителем рожи.

Формула изобретения

1. Способ изготовления живой сухой вакцины против рожи свиней из штамма ВР-2, включающий приготовление питательной среды, содержащей перевар Хоттингера, печеночный экстракт, пептон, сухой дрожжевой экстракт, натрий хлористый, однозамещенный фосфорнокислый калий, двузамещенный фосфорнокислый натрий, твин-80 и дистиллированную воду, внесение посевного материала с последующим глубинным культивированием, добавлением защитной среды из желатина, пептона, сахарозы и фосфатно-буферного раствора и лиофилизацией, отличающийся тем, что в питательную среду дополнительно вносят глюкозу, нормальную сыворотку крупного рогатого скота и L-аргинин, перед культивированием среду подвергают холодной фильтрации через фильтр-пластины.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для глубинного культивирования используют питательную среду состава, об.

Перевар Хоттингера 25 30 Печеночный экстракт 5 Пептон 0,5 Сухой дрожжевой экстракт 0,5 Натрий хлористый (NaCl) 0,2
Однозамещенный фосфорнокислый калий (KH₂PO₄) 0,3
Двузамещенный фосфорнокислый натрий (Na₂HPO₄) 1,8
Глюкоза 0,2
Нормальная сыворотка крупного рогатого скота 2
L-аргинин 0,05
Твин-80 0,05
Дистиллированная вода До 100
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что из защитных сред используют среду состава, об.

Желатин 4
Пептон 15
Сахароза 20
Фосфатно-буферный раствор Остальноеж

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2