Патент ссср 213256

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ боюа Соаатакив

Соцлалиотичаокиз

Реопублии

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 10Х.1963(№ 835442/31-16) Кл, 301т, 2i04 с присоединением заявки №

Приоритет

МПК А 61k

УДК 615.361.37(088.8) Комитет по делом изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

Опубликовано 12.1-11.1968. Бюллетень ¹ 1,0

Датл опубликования описания 7Х.1968

Авторы изобретения С. Б. Катковский, С. И. Шварц, И. Г, Саркисова, Э. С. Шубинская, Г. В. Самсонов, Л. В. Дмитренко, А. Б. Замиховский, С. С. Тугунов, F.. Б. 1ростянская и А. С. Тевлина

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КРИСТАЛЛИЧЕСКОГО ИНСУЛИНА

Известны способы получения кристаллического инсулина путем сорбции из экстрактов инсулинсодержащего сырья на ионообменных смолах. Указанные способы имеют сложную технологию и не обеспечивают удовлетворительной активности инсулина.

С целью упрощения технологического процесса и повышения активности целевого продукта, первичный кислый экстракт .поджелудочных желез пропускают через сульфокатионит, например, типа СДВ-3 «Т» в водородной форме, после сорбции смолу промывают органическим растворителем и буферным раствором (рН порядка 6,0 — 6,5) и элюируют щелочным раствором, например, 0,25н. раствором аммиака, содержащим 10 — 20% ацетона. Из элюата при рН около 4,5 или 6,1 — 6,5 отделяют примеси, после чего осаждают цинк-инсулин, отделяют его от маточного раствора и кристаллизуют.

В качестве исходного сырья используют спирто-водный или любой другой (например, водный) экстракт поджелудочных желез, прошедший стадию обезбелочивания и доведенный до рН 2,5 — 3,5. Подготовленный таким образом экстракт пропускают через колонку, заполненную сульфокатионитом, из расчета

0,5 л экстракта на 1 г смолы. После отмывки смолы от остатков экстракта спиртом инсулин десорбируют охлажденным 0,25 н. раствором аммиака или другим буферным раствором аналогичной ионной силы. Для увеличения избирательности к элюирующему раствору добавляют 15 — 20о/о ацетона. Полученный элюат, составляющий 0,01 — 0,02о/о от объема пропущенного экстракта, подкисляют до рН

2,5 — 2,6, фильтруют, подщелачивают до помутнения (рН 4,5 или 6,1 — 6,5) и вновь фильтруют. Из фильтрата известным способом т0 осаждают цинк-инсулин, который отделяют центрифугированием и перекристаллизовывают. Полученный кристаллический инсулин удовлетворяет существующим требованиям.

В качестве сульфокатионита используют смолы с большим коэффициентом набухания, например СБС-3, СДВ-3 и т. п. Наилучшие результаты получают при использовании сульфокатионитов, полученных сополимеризацией стирола с дивинилбензолом в присутствии телогена (СДВ-3 «T»).

Пример. 10,5 л обезбелоченного сернокислого спиртового экстракта инсулина с рН 3,2 пропускают через колонку (d=3,7 мм) со скоростью 90 мм(час на 1 см2. Колонка содержит 25 г смолы СДВ-3 «Т» с коэффициентом набухания 5,5 и размером зерен 0,1 — 0,25 мм в водородной форме. Смолу предварительно промывают 300 мл 65 -ro спирта. По окончании сорбции смолу промывают 150 мл 96 -гл

30 спирта и 300 мл ацетата аммония (рН 6,5}, 213256

1 едактор А, Байнова Техрсд Л. Я. Бриккер Корректоры: Л. В. Наделяева и 3. И, Тарасова

Заказ 1012/20 Тираж 530 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Центр, пр. Серова, д. 4

Типография, пр. Сапунова, 2 а затем пропускают 0,25 н. раствор аммиака, содержащий 20>/в ацетона. Объем фракций элюата с рН 7,2 — 9,0 равен 150 мл, После подкисления до pEI 2,6 и фильтрования раствор подщелачивают до рН 4,5 и вновь фильтруют. После добавления к раствору 4,2 мл 10>/>ного раствора ацетата цинка и установления рН 6,0 осаждается цинк-инсулин. Через

20 час осадок отделяют центрифугированием и кристаллизуют из 0,26 мл цитратного буферного раствора с ацетоном (15 /о) при рН

5,8 — 6,3. Получают 370 мг кристаллического инсулина с активностью 24 ед/мг.

Предмет изобретения

Способ получения кристаллического инсулина путем его сорбции из экстрактов инсулинсодержащего сырья на ионообменных смолах, отличающийся тем, что, с .целью упрощения технологии и повышения активности целевого продукта, первичный кислый экстракт поджелудочных желез пропускают через сульфокатионит, например, типа СДВ-3 «Т» в водородной форме, после сорбции смолу промывают

10 органическим растворителем и буферным раствором (рН примерно 6,0 — 6 5), элюируют щелочным раствором, например 0,25 н. раствором аммиака, содержащим 10 — 20

4,5 или 6,1 — 6,5, осаждают цинк-инсулин, отделяют от маточника и кристаллизуют.