Способ определения антиагрегантного потенциала сосудистой стенки у лабораторного животного

 

Использование: в медицине, а именно в экспериментальной кардиологии, и может применяться для установления наличия поражения сосудистой стенки по изменению ее антиагрегантного потенциала. Сущность изобретения: проводят двукратное определение количества тромбоцитарных агрегатов в венозной крови, взятой у животного до и через 1 мин после окончания введения динатриевой соли аденозиндифосфорной кислоты в разведении 1 - 10^-6 М в количестве 5,7 мл на 1 кг массы животного, при этом при уменьшении количества тромбоцитарных агрегатов более чем на 12% антиагрегатный потенциал сосудистой стенки считают высоким. Определение антиагрегантного потенциала сосудистой стенки заявленным способом дает возможность разработать новые подходы в клиническом аспекте для анализа механизма возникновения сосудистых патологий. 2 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной кардиологии, и может быть использовано для установления наличия поражения сосудистой стенки по изменению ее антиагрегантного потенциала.

До настоящего времени отсутствуют прямые способы определения антиагрегантного потенциала сосудистой стенки на живом животном. Непрямые способы его оценки, например определение агрегации тромбицитов, содержания тромбоксана В и простогландина ПГF в плазме [1,2], позволяют лишь косвенно судить об антиагрегантной активности стенки сосуда. Применение существующего способа оценки антиагрегантного потенциала сосуда по степени подавления агрегации тромбоцитов в присутствии полоски сосуда [3] ограничено необходимостью умерщвления животного.

Нами предложен способ прямого определения антиагрегантного потенциала сосудистой стенки у лабораторного животного, свободный от указанных недостатков.

Целью изобретения является повышение точности исследования.

Поставленная цель достигается путем двукратного определения количества циркулирующих тромбоцитарных агрегатов в венозной крови, взятой до и через 1 мин после внутривенного введения динатриевой соли аденозиндифосфорной кислоты (АДФ).

Способ осуществляется следующим образом.

У кролика утром до кормления из краевой вены уха производят забор крови в количестве 2 мл, которые немедленно разделяют на две равные части в 2 пластиковые пробирки, содержащие по 1 мл раствора, приготовленного следующим способом: для 1-й пробирки - 0,39335 г ЕДТА в 100 мл солевого фосфатного буфера; для 2-й пробирки раствор готовится аналогично, но с добавлением 1 мл формалина. Затем через ту же иглу, через которую проводился забор крови, животному внутривенно струйно в течение 1-й мин вводится раствор динатриевой соли АДФ концентрации 1·10^-6 М в дозе 5,7 кл/кг массы животного. Через 1 мин после окончания инфузии АДФ производятся повторный забор крови, аналогичный описанному. После инкубации в течение 20 мин при комнатной температуре проборки с кровью центрифугируют в течение 10 мин при 100 об/мин. Затем в надосадочной жидкости каждой пробирки подсчитывают количество тромбоцитов и определяют количество циркулирующих тромбицитарных агрегатов способом, описанным в [4].

При уменьшении после инфузии АДФ количества тромбоцитарных агрегатов более чем на 12% делают вывод о высоком антиагрегантном потенциале сосудистой стенки, при увеличении их количества более чем на 12% - о снижении антиагрегантных свойств сосудистой стенки.

Метод апробировался на интактных кроликах и кроликах, содержавшихся в течение 2-х месяцев на гиперхолестериновой диете (0,3 г холестерина на 1 кг массы животного в сутки).

Исследования проводились следующим образом.

Группу контрольных животных в количестве 12 особей объединили с таким же количеством животных, содержавшихся на гиперхолестериновой диете. Затем было отобрано "слепым" методом 17 животных, у которых исследование антиагрегантного потенциала сосудистой стенки проводилось заявленным способом и способом-прототипом. В качестве прототипа было выбрано однократное определение количества циркулирующих тромбоцитарных агрегатов. Результаты верифицировались непосредственным определением антиагрегантного потенциала сосудистой стенки, взятой у того же животного после его забоя, по величине подавления АДФ - индуцированной агрегации тромбоцитов в присутствии сосудистой полоски [5].

Результаты исследования представлены в табл. 1.

Как видно из табл. 1, заявляемый способ дает более высокий процент совпадений (82%) по сравнению со способом-прототипом (64%), и, следовательно, более точно отражает состояние антиагрегантного потенциала сосудистой стенки.

Для того, чтобы доказать, что заявленный способ является достоверно более точным, определение антиагрегантного потенциала стенки сосуда заявленным способом и способом-прототипом с последующей их верификацией описанным методом проводилось раздельно на двух группах кроликов с последующей статистической обработкой результатов. Для исследования были взяты 33 интактных кролика и 29 кроликов, содержавшихся в течение 2-х месяцев на гиперхолестериновой диете.

Результаты исследования приведены в табл. 2.

По данным, представленным в табл. 2, можно сделать следующие выводы.

1. Содержание тромбоцитарных агрегатов достоверно изменяется после инфузии АДФ в обеих группах животных.

2. Изменения количества тромбицитарных агрегатов после инфузии АДФ противоположны по направленности и достоверно различны в группе интактных животных и у кроликов с гиперхолестеринемией, в то время как при однократном определении тромбицитарных агрегатов (способ-прототип) различия между их количеством в этих группах недостоверны.

3. Выводы об антиагрегантном потенциале сосуда, сделанные с помощью заявляемого способа, дают более высокий процент совпадений (79%) с данными, полученными верификационным способом, чем те, что сделаны с помощью способа-прототипа (64%), и, следовательно, более точно отражает исследуемое состояние.

Пример. Кролик-самец породы "шиншилла", масса 3,5 кг. Из краевой вены уха взято по 11 мл крови в 2 пробирках. Затем в эту же вену введено 20 мл 10^-6 М раствора АДФ струйно в течение 1-й мин. Через 1 мин после окончания введения повторно взято 2 мл крови аналогично исходному забору. 20 мин. кровь инкубировалась при комнатной температуре, затем в течение 10 мин центрифугировалась при 1000 об/мин. В надосадочной жидкости каждой пробирки определялось количество тромбоцитов. Затем вычислялось количество тромбоцитарных агрегатов в крови, взятой до и после инфузии АДФ, путем определения соотношения количества тромбицитов во второй пробирке каждой пары к количеству тромбицитов в первой пробирке. В данном случае получены следующие цифры: 0,68 в исходе и 1,0 после инфузии АДФ. Это значит, что после инфузии АДФ количество тромбицитов, циркулирующих в составе тромбоцитарных агрегатов, уменьшилось на 32%, и, следовательно, антиагрегантный потенциал сосудистой стенки высокий. Тот же результат был получен и верификационным методом.

Т. о., определение антиагрегантного потенциала сосудистой стенки у лабораторного животного заявленным способом дает возможность разработать новые подходы в клиническом аспекте к анализу механизма возникновения сосудистых патологий.

Литература.

1. Соколов Е.И., Балуда М.В., Новикова И.В. и Хованская Т.П. Кардиология, 1986 г., N 9, с 59-63.

2. Адамчик А. С, Копытенко И.И. и Крамутский В.В. Советская медицина, 1991 г., N 5, с. 52-53.

3. Maclnture D.E., Peason J.D., Gordon J.L. Nature. 1978. Vol. 271, p. 137.

4. J. Fuch, I.Weinberger, Z. Rotenberg et alt. Am. J. Cardiol.1987.-Vol. 60, p.534-537/ 5. Балуда В.П., Балуда М.В., Деянов И.И. и Козельская О.В. Патологическая физиология и экспериментальная терапия, 1987 г., N 4, с. 51-54.

Формула изобретения

Способ определения антиагрегантного потенциала сосудистой стенки у лабораторного животного, включающий исследование венозной крови, отличающийся тем, что проводят двукратное определение количества тромбоцитарных агрегатов в венозной крови, взятой у животного до и через 1 мин после окончания введения динатриевой соли аденозиндифосфорной кислоты в разведении 1·10^-6 М в количестве 5,7 мл на 1 кг массы животного, при этом при уменьшении количества тромбоцитарных агрегатов более чем на 12% антиагрегантный потенциал сосудистой стенки считают высоким.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2