Способ получения сыворотки против яда змеи гадюки "антигадюка"

 

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано в производстве противозмеиной сыворотки. Способ включает двукратное грундирование лошадей нативным ядом гадюки в присутствии алюмокалиевых квасцов, подготовительный этап иммунизации с постепенным увеличением дозы инъекции в присутствии алюмокалиевых квасцов до достижения иммунного ответа 5-10 АЕ, двукратную иммунизацию в присутствии фосфатного сорбента в соотношении 2:1-3:1, кровопускание при достижении иммунного ответа 15-20 АЕ, отдых, забор крови и приготовление сыворотки. Способ позволяет получить высокоэффективную сыворотку против яда гадюки обыкновенной, при этом значительно снизить гибель лошадей-продуцентов, увеличить сроки их эксплуатации.

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано в производстве противозмеиной сыворотки.

Известна противозмеиная сыворотка "Антигюрза", разработанная Ташкентским НИИ вакцин и сывороток, получаемая путем иммунизации животных ядом гюрзы, выделением сыворотки крови и ее ферментативного гидролиза.

/МРТУ-42 N 356-70. Противозмеиная сыворотка "Антигюрза"/.

Однако эта сыворотка не купирует всех компонентов яда гадюки обыкновенной, широко распространенной на территории РФ, так как состав ее антител неидентичен антигенному составу яда гадюки.

При укусе гадюки возникают серьезные осложнения: тромбофлебиты, лимфостазы, лимфодениты, геморрагический отек тканей, геморрагические эксудативные пузыри.

Кроме того, происходят дистрофические изменения в печени, почках, сердце.

Причины этих осложнений обусловлены химическим составом яда гадюки обыкновенной, отличающимся от яда гюрзы повышенным содержанием протеаз, гистамина, гиалуронидазы.

Токсические полипептиды змеиных ядов наносят удар прежде всего по интегрирующей системе организма - иммунной. Они легко проходят гистогематические барьеры в организме и входят в контакт с органами ретикуло-эндотелиальной системы, вмешиваясь в систему регуляции организма.

/Орлов Б. Н. , Романов Е.Б., Тез. докладов 5-го Всесоюзн. симпозиума по целенаправленному изысканию физиологически активных веществ. Рига, 1983, с. 60-61; Орлов Б.Н., Вальцева И.А. "Яды змей" (токсикологические, биохимические и патофизиологические аспекты), Ташкент: Медицина, 1977/.

Наиболее близким по существу и назначению является способ получения высокоактивной сыворотки против яда змеи гюрзы. /Джавакова Р.Л. "Получение высокоактивной сыворотки против яда змеи гюрзы", автореферат дис. на соискание уч. ст. канд. биол. наук, М., 1978, с. 13/.

Способ включает следующую схему иммунизации.

Подготовительный этап, при котором лошадям-продуцентам вводят дробно суспензию нативного яда гюрзы в смеси с фосфатом кальция 1:1 в дозах 5, 8, 14, 20 мл (объем яда соответствует количеству вводимых мг) с промежутками между инъекциями 5 дней, затем отдых 14-16 дней, после чего 3 инъекции в дозах 10, 15, 20 мл. Через 5 дней у продуцентов берут 3 раза кровь с промежутками в 1 день по 5-7 л. Затем - отдых 16 дней.

Этап гипериммунизации состоит из 3-х инъекций через 5 дней в дозах, эквивалентных 5, 10, 15 мг яда, также в присутствии фосфатного сорбента 1:1.

Затем получают сыворотку, проводят ее ферментативный гидролиз.

Однако использование такой схемы при иммунизации ядом гадюки привело к тяжелым последствиям у лошадей в виде обширных отеков, их гибели на подготовительном этапе и не дало нужного иммунного ответа.

Это обусловлено специфическими свойствами яда гадюки и большим количеством вводимого фосфатного сорбента, используемого в качестве неспецифического раздражителя.

Целью изобретения является получение активной сыворотки против яда гадюки обыкновенной, широко распространенной на территории России, снижение случаев тяжелых осложнений и гибели лошадей-продуцентов.

Поставленная цель достигается тем, что способ получения сыворотки против яда гадюки включает двукратное грундирование лошадей нативным ядом гадюки в присутствии алюмокалиевых квасцов, подготовительный этап с постепенным увеличением дозы инъекции в присутствии алюмокалиевых квасцов до достижения иммунного ответа 5-10 АЕ, двухкратную иммунизацию в присутствии фосфатного сорбента в соотношении 2: 1 - 3:1, кровопускание при достижении иммунного ответа 15-20 АЕ, отдых, забор крови и приготовление сыворотки.

По отношению к прототипу заявленный способ имеет следующие отличительные признаки.

Проведение перед подготовительным этапом двукратного грундирования, что подготавливает иммунную систему животных - продуцентов к генерации антител и снижает возникновение осложнений и предупреждает гибель животных.

Использование на этапах грундирования и подготовительном в качестве неспецифического раздражителя алюмокалиевых квасцов снижает возникновение осложнений у животных.

Проведение подготовительного этапа до достижения определенного значения иммунного ответа обеспечивает вероятность получения готового продукта с высокой активностью.

Снижение содержания фосфатного сорбента на этапе гипериммунизации снижает возможность тяжелых осложнений у животных.

Контроль иммунного ответа на этапе кровопускания обеспечивает производственную надежность достижения высокой активности готового продукта.

Возможность практического осуществления заявляемого способа иллюстрируется примером его конкретного выполнения с использованием полной совокупности заявляемых признаков.

Пример. Лошадей, подготовленных к иммунизации, двукратно грундируют смесью 0.5-1,0 мг нативного яда гадюки с 1% алюмокалиевых квасцов с промежутком 2 недели. Через 2-3 недели начинают подготовительный этап введением инъекций из смеси нативного яда гадюки и 1% алюмокалиевых квасцов с промежутками 7 дней при количестве яда в мг, соответственно, 0.5, 1, 3, 5, 8, 14, 20, 25, 35, 30, 50, 70. При достижении иммунного ответа 5-10 АЕ инъекции прекращают, кровопускают лошадей и через 14-16 дней начинают этап гипериммунизации, который включает двукратную инъекцию яда с 0.1% суспензией фосфата кальция в соотношении 2:1 - 3:1, дозами 90 и 100 мг, с промежутком 7 дней. При достижении активности антител 15-20 АЕ через 5 дней после иммунизации лошадей кровопускают 2-3 раза с промежутками 1 день по 5-7 л.

Затем отдых 14-21 день с последующей гипериммунизацией и забором крови.

Таким образом, использование заявляемого способа позволит организовать получение высокоактивных сывороток против яда гадюки обыкновенной, широко распространенной на территории РФ, при этом значительно снизить гибель лошадей-продуцентов, увеличить сроки их эксплуатации.

Формула изобретения

Способ получения сыворотки против яда змеи гадюки, включающий многоступенчатую иммунизацию лошадей нативным ядом змеи в присутствии неспецифического раздражителя, состоящую из подготовительного этапа с постепенным увеличением дозы инъекции, гипериммунизации в присутствии фосфатного сорбента, кровопускание, отдых, забор крови и приготовление сыворотки, отличающийся тем, что перед подготовительным этапом проводят двукратное грундирование лошадей в присутствии алюмокалиевых квасцов, подготовительный этап проводят также в присутствии алюмокалиевых квасцов до достижения иммунного ответа 5 - 10 АЕ, гипериммунизацию проводят двукратно при соотношении яда и сорбента, равном 2:1-3:1, кровопускание осуществляют по достижении иммунного ответа 15 - 20 АЕ.