Консервирующий раствор "б-2" для трансплантатов

 

Изобретение предназначено для медицины. Технический результат : повышение эффективности фармакологической защиты трансплантата. Согласно изобретению предлагается использовать для консервации почек раствор следующего состава, г/л ± 5% : хлорид натрия 0,7, сукцинат натрия 0,5, калий фосфорнокислый однозамещенный 1,04, калий фосфорнокислый двухзамещенный 3,7, натрия гидрокарбонат 0,8, аспарагинат магния 0,1, димексид 5,0, калия ацетат 0,2, тиотриазолин 5,0, глюкоза 20,0, гепарин 0,025, вода дистиллированная до 1 л, pH 7,25-7,3. 2табл.

Изобретение относится к медицине, в частности к средствам, используемым для консервации и защиты трансплантантов, и может быть использовано в клинике и научных исследованиях.

Актуальным вопросом современной трансплантологии является сохранение донорского органа на всех этапах его получения /изъятие, консервация, транспортировка, трансплантация/.

Изолированный орган, лишенный естественной среды обитания, становится объектом повреждающего воздействия таких сопутствующих факторов трансплантологии, как ишемия и активация свободно-радикального окисления /СРО/.

Известен раствор для защиты трансплантанта, представляющий собой смесь цитропротектора, мукополисахарида высокомолекулярных спиртов, поверхностно-активного вещества в среде ионов и дистиллированную воду /заявка на патент РФ N 93039012/14 кл. A 01 N 1/02 Б.И. N 8, 96 г., стр. 5.

Такой раствор усиливает тромборезистентные и каналообразующие свойства динамических межклеточных контактов и поверхности трансплантанта, но не предотвращает активацию свободно-радикальных процессов и развитие энергодефицита в клетке.

Известен по заявке на патент РФ N 93006565/14 кл. A 01 N 1/00, Б.И. N 25, 95 г., стр. 3 препарат для консервации биологических тканей, сохраняющий и улучшающий ткани для пересадки, в котором для усиления термопротекторных свойств и увеличения продолжительности их сохранения в постимплантационном периоде используются в композиции: хлорид натрия, щелочь, мукополисахарид, непроникающий цитопротектор, проникающий цитопротектор.

Недостатком такого препарата является снижение мембранного потенциала за счет образующейся гипокалиамии и энергодефицита, что ограничивает применение добавляемых в раствор цитопротекторов.

Известна по патенту РФ 2019965, кл. A 01 N 1/02 Б.И. N 18, 94 г., стр. 18 композиция для консервации и хранения органа, предназначенного для имплантации пациенту содержащая, г/л: Гидроксиэтил крахмал - 50 Лактобиновую кислоту - 36 Ион фосфата - 2,5 Ион сульфата - 0,5 Ион магния - 0,12 Пентагидрат рафинозы - 18 Аденозин - 1,5 Аллопуринол - 0,14 Глютатион - 1
Вода для инъекций - Остальное до 1 литра
Недостатком такой композиции является образующийся при гипотермических условиях консервации осадок нерастворимых солей фосфорнокислого магния, вызывающий эмболивацию сосудов и нарушение адекватного кровотока в консервированных органах в посттрансплантационном периоде.

Известен по патенту РФ 2025973 кл. A 01 N 1/03 Б.И. N 1, 95 г., стр. 107 раствор для консервации живых органов, содержащий, г/л:
Хлорид натрия - 100 - 117
Глюконат калия - 12 - 17
Глюконат кальция - 1,2 - 2,0
Сульфат магния - 8 - 32
Тригидроксиметиламинометан - 2 - 3
Местный анестетик - 0,33 - 1,66
Производное фенатиазина - 0,01 - 0,04
Производное нурина - 1 - 2
Полиглюкин - Остальное до 1 л
Недостатком такого раствора является отсутствие в растворе важнейших субстратов углеводно-энергетического обмена и антиоксидантов, не выполняется энергетический, антиоксидантный и пластический дефицит в клетке.

Известен раствор Рингера Локка, содержащий, г/л:
Хлорид натрия - 9,0
Гидрокарбонат натрия - 0,2
Кальция хлорид - 0,2
Калия хлорид - 0,2
Глюкоза - 1,0
Вода - Остальное до 1 л
Недостатком такого раствора является то, что при его использовании уже через 6 часов наблюдаются диструктивные изменения консервируемого трансплантата.

Наиболее близким к предлагаемому способу является бесперфузионное применение раствора Коллинза для консервации почек, который под названием базис-раствора используется в центрах по трансплантации почек в Европе и США /G. M. Collins, R.D.Green N.A. Halasz Importance of anion content and osmolarity in flush solution for 48 to 72 nr nypothermic Hidriey Stonage) (cryobiology - 1972 - vol. 16 - N 3, P. 217- 220).

Состав раствора Коллинза /весовой на 1000,0 мл/:
KH₂PO₄ - 2,05 г
KCL - 1,15 г
MgSO₄7H₂O - 50% р-р 14,4 мл
Прокаин 10% р-р - 10,0 мл
K₂HPO₄ - 9,7 г
NaHCO₃ - 0,84 г
Глюкоза 50% р-р - 50,0 мл
Гепарин - 0,01 г
Вода - Остальное до 1 л
pH - 7,05 - 7,15
Данный раствор принимаем за прототип. Однако применение данного раствора для консервирования почек имеет ряд недостатков.

1. Отсутствие в его составе субстратов, метаболитов и других регуляторов, включающихся в метаболизм и поддерживающих энергопродукцию в клетках.

2. Отсутствие в его составе мембраностабилизаторов, именно антиоксидитов инициального типа действия, которые не только ингибируют свободные формы кислорода, но и предотвращают пути их образования, тем самым сохраняя структуру клеточных мембран.

3. Невозможность применения раствора Коллинза в гипотермических условиях /0 - 2^oC/, за счет выпадения в осадок при данном режиме солей фосфорнокислого магния.

Задача изобретения: повышение эффективности фармакологической защиты трансплантантов путем применения консервирующего раствора, содержащего в своем составе антиоксидант "тиотриазолин".

Для обеспечения задачи, согласно изобретению, предлагается использовать для консервации почек раствор следующего состава: на 1000,0 мл ± 5%:
Хлорид натрия - 0,7 г
Сукцинат натрия - 0,5 г
Калий фосфорнокислый однозамещенный /KH₂PO₄/ - 1,04 г
Калий фосфорнокислый двузамещенный /K₂HPO₄/ - 3,7 г
Натрия гидрокарбонат NaHCO₃ - 0,8 г
Аспарагинат магния - 0,1 г
Димексид - 5,0 г
Калия ацетат /KCH₃COO/ - 0,2 г
Тиотриазолин - 5,0 г
Глюкоза - 20,0 г
Гепарин - 0,025 г
Вода дистилированная - До 1000,0 мл
pH - 7,25 - 7,30
Результаты исследования патентной и медицинской информации подтверждают новизну предлагаемого состава раствора.

Следовательно, по новизне предлагаемый раствор соответствует критерию изобретения.

Сопоставление результатов апробации известных и заявляемого растворов подтвердили преимущество последнего. Следовательно, и по эффективности заявляемый раствор соответствует критерию изобретения.

Выше приведено оптимальное количество в граммах каждого компонента на 100000 мл в пределах допуска отклонений, не влияющих на его свойства.

Тиотриазолин, как синтетический гепатопротекторный, кардиопротекторный препарат, обладающий противоишемической, мембраностабилизирующей, антиоксидантной и иммуномодулирующей активностью, зарегистрирован 31.05.94 г. Минздравом Украины, приказ N 85, регистрационный N 94/85/1.

Сущность изобретения поясняется ниже приведенным описанием консервирующего раствора, содержащего антиоксидант "тиотриазолин".

Для приготовления раствора по изобретению в чистую емкость заливают 0,7 - 0,8 л дистилированной воды и загружают в пределах плюсового допуска:
- 21 г глюкозы,
- 5,2 г тиотриазолина,
- 5,2 г димексида,
- 0,73 г хлорида натрия,
- 0,52 г сукцината натрия,
- 1,1 г калия фосфорнокислого однозамещенного,
- 3,9 г калия фосфорнокислого двузамещенного,
- 0,84 г натрия гидрокарбоната,
- 0,105 г аспарагината магния,
- 0,21 г калия ацетата,
- 0,025 г гепарина.

Смесь тщательно перемешивают до полного растворения всех компонентов, доливают воду до 1 литра, фильтруют полученный раствор, разливают в бутылки по 200 - 500 мл, стерилизуют при температуре 120^oC в течение 12 мин. и укупоривают.

Фармакологический эффект раствора обусловлен сбалансированным катионно-анионным составом, снижающим энергозатраты органа на внешнюю работу /специфическая работа, на которую затрачивается около 60 - 70% всей клеточной энергии/ и на поддержание трансмембранных ионных градиентов, а также содержанием в его составе субстратов, включающихся в метаболизм и поддерживающих энергопродукцию в клетках. Защитный эффект раствора обеспечивается особенностью препарата "тиотриазолин", его способностью усиливать компенсаторную активацию анаэробного гликолиза, снижать степень угнетения окислительных процессов в цикле Кребса с сохранением внутриклеточного фонда АТФ, активизировать антиоксидантную систему ферментов и снижать процессы перекисного окисления липидов.

Препарат улучшает реологические свойства крови за счет активации фибринолитической системы. Раствор апробирован на кафедре детской хирургии ЗГМУ в клинике с положительным результатом. Проведены три серии исследований по консервации трупной детской почки тремя различными консервирующими растворами: раствором Рингера-Локка, раствором Коллинза, предлагаемым раствором /р-р "Б-2"/.

Условия консервации были унифицированы и состояли в заборке обеих трупных почек у детей, умерших не от почечной патологии, через 2-4 часа после смерти. Возраст доноров был 1-2 месяца, забор производили в условиях секционной в режиме исключения внешнего бактериального обсеменения, с удалением участка брюшной аорты и нижней полой вены с целью сохранения почечных сосудов.

После этого производили канюлизацию почечных артерий и вен и промывали консервирующими растворами с помощью роликового насоса НПР-301 при температуре раствора плюс 5^oC и окружающего воздуха плюс 18^oC со скоростью 5 мл/мин. После этого погружали почки в 1 л того же раствора. Экспозиция составляла от 6 до 48 часов при T = 4^oC. Исследования проведены на 7 консервациях для каждого раствора.

Применение раствора "Б-2" для консервации приводило к торможению активности свободно-радикального окисления на все сроки наблюдения, а к 48 часам экспозиции отмечалось снижение уровня диеновых конъюгатов на 61 - 70%, малонового диальдегида на 60%, параллельно отмечалось повышение уровня АТФ на 27 - 30%, АДФ-20-25% и снижение АМФ на 30 - 36% в тканях почек по сравнению к серии с раствором Коллинза на те же сроки наблюдения, что отражено в таблице 1.

В таблице 2 произведена динамика гистоморфологических изменений почечной ткани.

В описаниях и таблицах приведены результаты апробирования предлагаемого раствора при консервации донорских почек, что не исключает эффективность его использования для консервации других трансплантантов.

Формула изобретения

Консервирующий раствор для трансплантатов, содержащий калий фосфорнокислый одно- и двухзамещенный, натрия гидрокарбонат, глюкозу, гепарин и растворитель, отличающийся тем, что дополнительно содержит тиотриазолин, хлорид и сукцинат натрия, аспарагинат магния, димексид, калия ацетат при следующем соотношении компонентов, г/л - 5%:
Хлорид натрия - 0,7
Сукцинат натрия - 0,5
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 1,04
Калий фосфорнокислый двухзамещенный - 3,7
Натрия гидрокарбонат - 0,8
Аспарагинат магния - 0,1
Димексид - 5,0
Калия ацетат - 0,2
Тиотриазолин - 5,0
Глюкоза - 20,0
Гепарин - 0,025
Растворитель - вода дистиллированная - Остальное до 1 л

РИСУНКИ

Рисунок 1