Натриевая соль 6-нитро-3н-хиназолон-4-ил-3-уксусной кислоты, проявляющая антиоксидантную и противоишемическую активности

 

Изобретение относится к новому соединению - натриевой соли 6-нитро-3Н-хиназолон-4-ил-3-уксусной кислоты формулы (I), которая проявляет антиоксидантную и противоишемическую активности и может найти применение в медицине. 4 табл.

Изобретение относится к новым биологически активным соединениям и может быть использовано в медицине.

Известны структурные аналоги: производные (3,4-дигидрохиназолил-3-он-4)-карбоновые кислоты, проявляющие антиоксидантную активность (Украiна, Фармацевтический журнал, - 1995. - N 1. - С. 80-82), формулы n = 0, 1; R = OH, OALk, NHR₂; R₁ = H, CH₃, C₂H₅; R₂ = Alk, Het.

Недостатком известного аналога является отсутствие противоишемической активности.

Известен структурный аналог (прототип): натриевая соль (3,4-дигидрохиназолил-3-он-4) -α- пропионовой кислоты формулы проявляющая антиоксидантную активность (Украiна, Веснiк фармацii. - 1995. - N 3-4. - С. 29-34).

Недостатком этого аналога также является отсутствие противоишемической активности.

В основу изобретения поставлена задача создания новых биологически активных веществ в ряду производных 4(3H)-хиназолона, обладающих не характерным для этого ряда антиоксидантным и противоишемическим действием на мозговую ткань.

Решение этой задачи обеспечивает натриевая соль 6-нитро-3H-хиназолон-4-ил-3-уксусной кислоты формулы проявляющая антиоксидантную и противоишемическую активность.

Натриевая соль 6-нитро-3H-хиназолон-4-ил-3-уксусной кислоты в отличие от известных аналогов содержит в положении 6 (шесть) хиназолонового ядра нитрогруппу и является водорастворимой солью, что приводит к улучшению фармако-технологических свойств и более выраженному антиоксидантному и противоишемическому действию.

В отличие от других широкоизвестных биологических аналогов (α-токоферола ацетат, дибунол, пирацетам) соединение по изобретению оказывает антиоксидантное действие на всех этапах развития ишемии, повышая активность ферментов антиоксидантной защиты, уровень эндогенного α-токоферола и снижая уровень накопления продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) с одновременным уменьшением расхода макроэргических фосфатов и углеводов.

Получают заявленное соединение взаимодействием 6-нитро-3H-хиназолон-4-ил-3-уксусной кислоты с натрия гидроксидом в среде этанола.

Пример: 2,49 г (0,01 моль) 6-нитро-3H-хиназолон-4-ил-3-уксусной кислоты растворяют в 20 мл этанола при нагревании, к полученному раствору прибавляют 0,4 г (0,01 моль) натрия гидроксида и реакционную смесь кипятят 10-15 минут, последние 3 минуты с активированным углем.

Уголь отфильтровывают, раствор охлаждают, образовавшийся осадок отфильтровывают и сушат. Получают целевой продукт с выходом 89%. Желтое кристаллическое вещество с T.разложения > 300^oC (из спирта), растворимо в воде, спирте, диоксане, ДМФА.

Найдено, %: N 15,78 Вычислено, %: N 15,49. C₁₀H₆N₃O₅Na.

В ИК-спектрах синтезированного соединения наблюдаются характеристические полосы поглощения карбонильных групп в области 1720-1600 см^-1, а также валентные колебания нитрогруппы в области 1500 см^-1 (асим.) и 1450 см^-1 (сим. ).

Индивидуальность соединения подтверждена методом тонкослойной хроматографии на пластинках "Silufol" в системах растворителей: бензол-уксусная кислота-вода (2: 8:1), бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:5). Значение F_f · 100 равно 76 и 80 единицам соответственно.

Острая токсичность соединения при внутрибрюшинном введении мышам равна 860 мг/кг.

Антиоксидантную и противоишемическую активность синтезированного соединения исследовали на модели острого нарушения мозгового кровообращения на белых крысах-самцах линии Вистар массой 180-220 г. Исследуемые животные были разбиты на 7 экспериментальных групп по 6 животных в каждой группе. Одностороннюю перевязку общей сонной артерии проводили под этаминал-натриевым наркозом (этаминал-натрий вводился в дозе 40 мг/кг) путем выделения сосуда и наложения на него лигатуры. Исследуемое вещество вводили в дозе 1/100 ЛД₅₀, дибунол и пирацетам - в дозах 50 мг/кг и 100 мг/кг соответственно внутрибрюшинно, а α-токоферол - в дозе 50 мг/кг подкожно 1 раз в сутки в течение 4 дней параллельно формированию ишемии. Через 2 часа после последнего введения исследуемого вещества животные выводились из эксперимента путем декапитации.

В тканях мозга определяли содержание конечных и начальных продуктов ПОЛ, активность ферментов антиоксидантной защиты, уровень эндогенного α- токоферола, интенсивность углеводного и энергетического обмена.

Использовались следующие методы исследования: определение уровня диеновых конъюгатов (ДК) методом прямой спектрофотометрии гептановой вытяжки (В.С.Коган и др. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов. - М.; Медицина, 1986); определение малонового диальдегида (МДА) по тесту с тиобарбитуровой кислотой (Л.И.Андреева и др. Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с тиобарбитуровой кислотой //Лаб. дело. - 1988. - N 11. С. 41-43); определение супероксиддисмутазы (СОД) (Чевари С. и др. Роль супероксиддисмутазы в окислительных процессах клетки и метод ее определения //Лаб. дело. - 1985. - N 11. С. 678 - 681); определение активности глутатионпероксидазы (ГПР) (Гаврилова А.Р. и др. Определение активности глутатионпероксидазы эритроцитов при насыщающих концентрациях субстрата //Лаб. дело. - 1986. - N 12. С. 721 - 723); определение каталазы (Королюк М. А. и др. Метод определения активности каталазы //Лаб. дело. - 1988. - N 1. С. 16 - 19); определение содержания субстратов углеводного обмена (Методы биохимических исследований /Под ред. Прохоровой М.И. - Л.: Из-во ЛГУ, 1982. - 278 с.); определение содержания макроэргических фосфатов хроматографически (Захарова Н. Б., Рубин В.И. Тонкослойная хроматография нуклеотидов на пластинках "Силуфол" //Лаб. дело. - 1980. - N 12. - С. 735 - 738); определение α-токоферола спектрофотометрически (Способ определения α-токоферола в биологическом материале /Беленичев И.Ф. и др. //Тез. докл. IV научного съезда специалистов по клинической лаб. диагностике респуб. Беларусь, Гродно. - 1992. - С. 182.).

Результаты экспериментов, приведенные в таблицах 1, 2, 3, 4, показывают, что в условиях односторонней перевязки общей сонной артерии происходит угнетение активности ферментов антиоксидантной защиты в тканях головного мозга, накопление в ней содержания продуктов ПОЛ, нарушение анаэробных и аэробных путей образования энергии, снижение содержания адениловых нуклеотидов, т. е. наблюдалось уменьшение утилизации кислорода энергопродуцирующими системами и ускорение процессов свободно-радикального окисления (СРО).

Введение заявляемого соединения на фоне ишемии головного мозга приводило к активации антиоксидантных систем защиты, что проявилось в увеличении активности СОД в 2,7 раза, каталазы в 1,7 раза, ГПР в 0,66 раза, что выгодно отличает изучаемое соединение от антиоксидантов "прямого" действия - дибунола и α- токоферола ацетата (таблица 1). Под влиянием соединения существенно снижалось содержание продуктов ПОЛ на 45-54% (таблица 2).

Как показывают результаты исследований, соединение активирует как анаэробные, так и аэробные пути образования энергии (повышая уровень пирувата и малата на 58,3, 50,0% соответственно, таблица 3), при этом наблюдалась тенденция к повышению уровня адениловых нуклеотидов (АТФ и АМФ на 40,0, 54,5% соответственно, таблица 4).

Ингибируя процессы ПОЛ и нормализуя отдельные звенья углеводного обмена, синтезированное соединение оказывает выраженный антиоксидантный и протекторный эффекты на клетки мозга, превышая действие таких антиоксидантов, как α- токоферола ацетат и дибунол, приближаясь по силе действия к пирацетаму - противоишемическому препарату.

Формула изобретения

Натриевая соль 6-нитро-3Н-хиназолон-4-ил-3-уксусной кислоты формулы
проявляющая антиоксидантную и противоишемическую активности.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4