Штамм бактерий streptococcus lactis, используемый при промышленном производстве пробиотика для молодняка жвачных животных

 

Использование: микробиологическая промышленность, пробиотик для молодняка жвачных животных. Сущность изобретения: предложен штамм бактерий Streptococus lactis 3186 к12 ВКПМ В-4989, используемый при промышленном производстве пробиотика для молодняка жвачных животных. Культура выделена из доминирующей микрофлоры здорового теленка способом получения накопительной культуры на средах MRS, Леонович, Перековой при 28 - 30^oС из 10 разведения путем высева на чашки Петри в двуслойный агар. Культура выделена из моноколоний и идентифицирована по определителю Bergey. Штамм осуществляет гомоферментативное молочнокислое брожение, сбраживает декстрины.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при промышленном производстве побиотика для молодняка жвачных животных.

Известны штаммы Streptococcus lactis subsp.dlacetylactis ВКПМ B-4998 (авторское свидетельство SU 1721085 A1), используемый в заквасках для производства творога, и Streptococcus lactis ВКПМ В-4591 (авторское свидетельство SU 1687616 A1) - продуцент низина.

От известного штамма Strptococcus lactis subsp.dlacetylactis ВКПМ B-4998 (авторское свидетельство SU 1721085 A1), предлагаемый отличается высокими технологическими свойствами (упрощенными питательными средами, высокой концентрацией активного начала в культуральной среде), специфическим антагонизмом к ряду патогенов (синегнойной палочке, золотистому стафилококку, дизентерийной палочке Флекснера).

Целью изобретения является штамм, используемый для борьбы с дисбактериозами сельскохозяйственных животных, обладающий высокими технологическими свойствами, специфическим антогонизмом к ряду патогенов (синегнойной палочке, золотистому стафилококку, дизентерийной палочке Флекснера).

Штамм выделен из доминирующей микрофлоры желудочно-кишечного тракта здорового теленка методом культивирования на селективных средах. Штамм Streptococcus lactis 3186 k 12 депонирован, коллекционный номер В-4989, коллекция ВНИИгенетика.

Морфологические и культуральные свойства.

Клетки имеют форму кокков диаметром 0,8 - 0,9 мкм или образуют дипло- и стрептококки в зависимости от возраста культуры, спор не образуют.

При выращивании штамма на агаризованной среде MRS (дрожжевой экстракт 0,5%; мясной экстракт 1,0%; пептон 1,0%; глюкоза 2%; лимоннокислый аммоний 0,2%; уксуснокислый натрий 0,5%; твин-80 0,1%; K₂HPO₄ 0,2%; MgSO₄ - 7H₂O 0,2%; MnSO₄ - 4H₂O 0,005%; агар 2%), а также на среде, содержащей ферментолизат кукурузной муки (2% по PB), ферментолизат БВК (40 - 60 мг% по аминному азоту), агар 2% по pH 6,6 - 6,8, t = 30 + 1^oC в течение 24 - 36 ч образуют мелкие колонии, блестящие, серовато-белого цвета с ровными краями. В жидких средах того же состава растут в виде равномерной мути или слабого мелкодисперсного осадка. Клетки неподвижны.

Физиолого-биохимические свойства штамма.

Факультативный анаэроб, окраска по Грамму положительная, катализо- и псевдокаталазонегативный, не имеет цитохромсодержащих дыхательных систем, нитраты в нитриты не восстанавливает, желатин не разжижает, молоко сворачивает с образованием равномерного сгустка. Восстанавливает молоко с лакмусом и метиленовой синью, 2,3,5-трифенилтетразолий хлорид. Не образует газ из глюкозы, индол, слизь в среде с 6,5% NaCl, 4% таурохолата Na. Гомоферментативен. Сбраживает маниозу, галактозу, раффинозу, глюкозу, лактозу, салицин, арабинозу, фруктозу, не сбраживает сорбозу рамнозу, ксилозу, глицерин, дульцит, инозит, сорбит, маннитирулир. Гидролизует декстрины.

Для нормального роста штамма необходимы субстраты со сложными органическими формами азота (гидролизаты белков, смеси аминокислот), а также витаминами и факторами роста.

Оптимальная температура роста 32^oC, растет при 10^oC и 40^oC, выживает после 30 минутного прогревания при 6З^oC. Оптимальное значение pH среды 6,5 - 6,8.

В составе препарата Руменолакт (ТУ 9384-001-13162129-93) штамм прошел тестирование на патогенность и антигенность в соответствии с требованиями к ветеринарным препаратам и допущен к применению в составе указанного пробиотика (биологически активной кормовой добавки) для борьбы с дисбактериозами молодняка жвачных животным.

Генетические особенности штамма. Штамм не подвергался воздействию, мутагенных факторов. Устойчив к ряду антибиотиков: полимиксину, канамицину, стрептомицину, неомицину, безилпенициллину.

Штамм выделен из доминирующей микрофлоры здорового теленка способом получения накопительной культуры на средах MRS, Леонович, Перековой при температуре 28 - 30^oC из 10 разведения путем высева на чашки Петри в двуслойный агар. Культура выделялась из моноколоний и индифицировалась по определителю Bergey.

Штамм хранят на агаризованной среде в холодильнике при температуре 8 - 10^oC в течение 1 - 2 месяцев или в виде лиофильно высушенной культуры в ампулах в течение 12 месяце.

Биотехнологическая характеристика.

Способ условия и состав среды для размножения.

Штамм выращивают при температуре 30 - 32^oC в течение 24 часов на агаризованной среде следующего состава: ферментолизат дрожжей БВК - 2,0% по аминному азоту ферментолизат кукурузной муки - 2,0% по РВ кукурузный экстракт - 0,3% агар-агар - 2% вода водопроводная - до 100% pH - 6,5 - 6,8 Стерилизация среды при температуре 118 - 122^oC в течение 30 минут.

Условия и состав среды для ферментации. Выращивание ведут при 30 - 32^oC в течение 10 - 12 часов на среде следующего состава; ферментолизат дрожжей БВК - 2,0% по аминному азоту ферментолизат кукурузной муки - 2,0% по РВ
кукурузный экстракт - 0,3%
вода водопроводная - до 100%
pH - 6,5 - 6,8
Стерилизация среды при 118 - 122^oC в течение 30 минут. Посевная доза 0,5 - 1%.

По окончании процесса ферментации культуральную жидкость сепарируют при комнатной температуре. Пасту высушивают на распылительной сушилке (t_входа = 120^oC, t_выхода = 54 - 58^oC).

Активность штамма и способ ее определения.

На среде для ферментации накопление молочной кислоты составляет 11 - 15 г/л. Содержание молочной кислоты определяется расчетом по количеству израсходованного титранта. Титр жизнеспособных клеток по методу Пастера-Коха составляет 1 - 2 млрд. кл/мл.

Штамм осуществляет гомоферментативное молочнокислое брожение, сбраживает декстрины.

Штамм Streptococcus lactis 3186 k 12 рекомендуется для применения в ассоциативной композиции со штаммами Lactobacillus case, Lactobacillus acidophilus в качестве компонента, обладающего специфическим антогонизмом к ряду патогенов (синегнойной палочке, золотистому стафилококку, дизентерийной палочке Флекснера), способствующего усилению пищеварительных процессов в организме животных и усвоению питательных веществ корма и синтезу в желудочно-кишечном тракте витаминов группы "В" и молочной кислоты.

Пример. Полученную, как описано в биотехнологической характеристике, сухую биомассу бактерий штамма Streptococcus lactis 3186 k 12 смешивают с сухой биомассой штаммов бактерий Lactobacillus acidophilus var.coccoideus M-86 (ВКПМ В-4992), Lactobacillus case MБ (ВКПМ В-4486), полученной аналогично, в пропорции 1:1:1 по количеству жизнеспособных клеток. Полученный таким образом препарат (Руменолакт) используют в качестве биологически активной кормовой добавки (пробиотика) для молодняка жвачных животных.

Формула изобретения

Штамм бактерий Streptococcus lactis 3186 к12 ВКПМ N В-4989, используемый при промышленном производстве пробиотика для молодняка жвачных животных.