Способ агглютинационного иммунологического анализа

 

Способ может быть использован в медицине, а именно в иммунологии. Используют гидрозоли из группы: оксиды, фосфаты, гидроксиды, соли карбоновых кислот металлов, на поверхности которых засорбированы биоспецифические лиганды. Поверхность емкостей для осуществления реакции покрывают антифрикционными материалами. Способ обеспечивает сокращение времени постановки анализа.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины, может быть использовано в диагностике различных инфекционных и соматических патологий. При этих заболеваниях в организме больного возникают антитела, комплиментарные антигенам, лежащим в основе патогенеза заболевания.

Эти антитела антигены могут обнаруживаться в периферической крови и других биологических жидкостях, однако до настоящего времени не созданы диагностические препараты, отличающиеся стабильностью иммунохимических свойств и позволяющие осуществлять данную реакцию бесприборно. Отсутствуют надежные и простые методы для скрининговых исследований больных и населения, относящихся к группам риска, что важно для коррекции терапии и определения прогноза заболевания.

Цель изобретения - разработка экспресс-метода для определения наличия и вида антител и антигенов - маркеров различных нозологий, увеличение чувствительности анализа, уменьшение процента ложнопозитивных реакций, расширение сырьевой базы данного способа.

Аналогом данного метода является способ определения различных антигенов либо антител путем мечения одного из компонентов: антигенов либо комплементарных им антител, именуемых в дальнейшем биолигандами, различными метками - радиологическими, ферментными, флюоресцентными, эритроцитарными [1].

Аналогом данного метода является способ определения антител против вируса клещевого энцефалита в сыворотке крови с помощью реакции непрямой агглютинации [2].

Аналогом данного метода является также способ определения антирезусных антител при аутоиммунной гемолитической анемии [3] с помощью реакции гемагглютинации.

Прототипом данного технического решения является способ постановки агглютинационного иммунологического анализа, описанный в [4]. Данный способ постановки агглютинационного иммунологического анализа, включающий постановку реакции агглютинации на основе гидрозольного дисперсного препарата с сорбированными на его поверхности биоспецифическими лигандами путем соединения последнего с биологическими жидкостями в емкостях для проведения указанного анализа, имеет ряд недостатков.

Недостатками прототипа можно считать: 1. недостаточную чувствительность агглютинационного иммунологического анализа; 2. длительное время постановки реакции гидрозольной агглютинации; 3. наличие ложноположительных (ложнопозитивных) результатов анализа.

Указанные недостатки преодолеваются, если поверхность емкости для осуществления указанного агглютинационного иммунологического анализа покрывают антифрикционными материалами [5]. К таковым относятся: графит, нитрит бора, дихалькогениды переходных металлов, фторполимеры, фторированные органические масла.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения.

Пример 1.

Осуществляют анализ в круглодонных планшетах по прототипу и по заявленному способу. В первом случае используют в качестве модификатора сополимер с содержанием фтора до 23%; биолиганда - противокоревой иммуноглобулин; гидрозоля - оксид железа (III). В качестве модификаторов используют: графит, дисульфид молибдена, солидол, фторированный графит, кремнийорганическую жидкость.

В результате - время постановки реакции с прототипом составило 20 мин, с заявляемыми объектами во всех случаях - 5 мин; уровень чувствительности был всюду одинаковым, уровень себестоимости в заявляемых случаях был всюду на порядок ниже.

Пример 2.

Используют анализ аналогично примера 1; в качестве фторполимера используют препарат с содержанием фтора 40%, в качестве биолиганда - генно-инженерные антигены ВИЧ, в качестве основы гидрозоля - фосфат цинка. Из заявляемых объектов использовали: графит, дисульфид молибдена, нитрид бора, солидол, загущенную кремнийорганическую жидкость.

В результате - время постановки реакции с прототипом составило 15 мин, с заявленными объектами во всех случаях - /3 - 5/ мин.

Пример 3.

Осуществляют анализ аналогично примеров 1 - 2, в качестве основы гидрозолей используют гидроокись меди, в качестве основы гидрозолей используют гидроокись меди, в качестве биолиганда - антитела к поверхностному антигену рака молочной железы. Остальные объекты аналогичны примеру 2.

В результате - время постановки реакции с прототипом составило 20 мин, с заявляемыми объектами - 5 мин во всех случаях при одинаковой чувствительности и снижении себестоимости анализа на порядок.

Пример 4.

Осуществляют анализ аналогично примера 1, с той лишь разницей, что в качестве биолиганда используют туберкулезный антиген, в качестве гидрозоля - оксалат никеля. Время постановки реакции по прототипу составило 15 мин, по заявляемому способу - 4 мин во всех случаях; при этом имели место одинаковая чувствительность и снижение себестоимости анализа в случае заявляемого решения.

Во всех случаях обработки поверхности емкостей для постановки агглютинационного иммунологического анализа - скошенных лунок планшетов либо стекол - антифрикционными материалами [5]: фторполимерами, фторированными органическими маслами, дисульфидом молибдена, нитридом бора - наблюдали полезные эффекты. Во-первых, уменьшался процент ложноположительных результатов, во-вторых, увеличивалась чувствительность реакции. Наконец, в-третьих, достигается снижение времени выполнения единичного анализа.

Указанные полезные эффекты ведут к повышению эффективности единичного анализа, снижению его себестоимости за счет повышения производительности труда, расширению сырьевой базы для осуществления указанных анализов.

Использованная литература 1. Ройт А. Основы иммунологии. - М.: Мир, 1991. - С. 91 - 93.

2. Никитин В.М. Справочник методов иммунологии. - Кишинев, 1982. - 304 с.

3. Никитин В.М. Справочник методов иммунологии. - Кишинев, 1982. - 304 с.

4. Мешандин А. Г. Физико-химические аспекты сорбционных процессов при синтезе твердофазных биолигандов. - М., 1994. - С. 31 - 34.

5. Химическая энциклопедия. - Т. 1. - М., 1998. - С. 184 - 185.

Формула изобретения

Способ постановки агглютинационного иммунологического анализа, включающий постановку реакции агглютинации на основе гидрозольного дисперсного препарата с сорбированными на его поверхности биоспецифическими лигандами путем соединения последнего с биологическими жидкостями в емкостях для проведения указанного анализа, отличающийся тем, что поверхность емкостей для осуществления данного анализа покрывают антифрикционным материалом.