Способ диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом

 

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням. На 5-7 сутки заболевания исследуют слезную жидкость. При наличии в исследуемой слезной жидкости специфических к хантавирусу антител диагностируют геморрагическую лихорадку с почечным синдромом. Исследование проводят непрямым методом иммунофлюоресценции. Способ прост, исключает травматичность и постпункционные осложнения, позволяет сократить сроки диагностики.

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням.

Известны способы специфической диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС), которые базируются на выявлении антител к хантавирусу в сыворотке крови больных людей с использованием различных серологических методов - непрямого метода флуоресцирующих антител (НМФА), иммуноферментного анализа (ИФМ) и др.

Прототипом является способ диагностики ГЛПС с помощью диагностикума ГЛПС для непрямого метода иммунофлуоресцирующих антител (НМФА), который представляет собой равномерное нанесение на предметное стекло по 0,005 мл высушенных, инактивированных и фиксированных ацетоном суспензии клеток VERO - Е6, содержащие антигены первого (Хантаан), второго (Пуумала), и третьего (Сеул) серотипов ГЛПС. Культуральный поливалентный антиген вируса ГЛПС, содержащийся в диагностикуме, обладает способностью специфически связываться с антителами к этому вирусу в сыворотках крови больных людей. ("Применение культурального антигена для серодиагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом с помощью флуоресцирующих антител." Методические рекомендации. Ткаченко Е.А и др. Москва, 1984 г.).

Однако выше описанный способ имеет существенные недостатки: требует осуществления взятия крови из вены, способ травматичен, не исключает постпункционных осложнений, возможен перенос различной вирусной и госпитальной инфекций, сложности при взятия крови у детей. Для отделения сыворотки крови необходимо центрифугирование и утилизация в специальных условиях остатков крови, требуется большое количество разовых шприцов.

Цель изобретения - упрощение метода и сокращение срока диагностики ГЛПС, исключение травматичности и постпункционных осложнений.

Способ осуществляется следующем образом. После хранения диагностикума при низкой температуре антигенные препараты просушивают, промывают в течение 2 мин дистиллированной водой, высушивают при комнатной температуре и наносят на них взятую на 5 - 7 сутки слезную жидкость у больных с подозрением на ГЛПС. Препараты помещают во влажную камеру и инкубируют при 37 ^o C в течение 30 мин или при 6 ^o C в течение 18 ч. После окончания инкубации препараты трехкратно по 3 мин выдерживают в физрастворе, промывают дистиллированной водой и высушивают при комнатной температуре в течение 15 мин. Затем на препараты наносят люминесцирующую сыворотку против глобулинов человека. Препараты инкубируют во влажной камере при 37 ^oC в течение 30 мин, трехкратно по 3 мин выдерживают в физрастворе, промывают дистиллированной водой и высушивают при комнатной температуре. Препараты исследуют при помощи люминесцентного микроскопа. При наличии специфических антител к вирусу ГЛПС в слезной жидкости диагностируют ГЛПС.

Характер свечения при исследовании слезной жидкости аналогичен таковому при индикации антител в сыворотке крови при ГЛПС в реакции НМФА.

Пример 1 Больной Ш. Госпитализирован в 4 инфекционную больницу на 4 день болезни с подозрением на ГЛПС.

Жалобы при поступление: общая слабость, повышение температуры до 38 ^oC, головные боли, сухость во рту, ноющие боли в поясничной области, жаловался на снижение зрения.

Объективные данные: температура 37,7 ^oC, число дыхания 18 в минуту, А/Д - 120/80 мм рт. ст. Пульс 77 ударов в минуту. Язык сухой, кожные покровы сухие - единичная геморрагическая сыпь в подмышечных областях. Живот мягкий, слабо болезненный без ясной локализации. Симптом Пастернацкого положительный.

Эпидемиологический анамнез: три недели назад выезжал на сельхозработы, работали около двух недель в полевых условиях. Наличие грызунов заметил, значения не придал, хотя со слов больного, прямого контакта не было.

Осмотр окулиста на 5 день болезни. Vis. 1,0/1,0, больной отмечает легкий туман перед глазами. Гиперемия и утолщение конъюнктивы, отек бульбарной конъюнктивы, инъецирование сосудов. Чувствительность роговицы снижена. ОКИ -29 (общий конъюнктивальный индекс).

Офтальмоскопически: среды глаз прозрачные, диск зрительного нерва гиперемирован, границы стушеваны, изменение соотношения диаметра артерий и вен.

При постановке серологической реакции НМФА в первой пробе сыворотки крови не находим антитела к вирусу ГЛПС, а во второй пробе, взятой через семь суток, обнаруживаем нарастание титра антител до 1:1024, что подтверждало лабораторно этиологию заболевания.

Одновременно диагностику заболевания проводили предлагаемым нами способом, который заключался в следующем: параллельно с взятием первой пробы сыворотки крови на серо-реакцию НМФА осуществляли забор слезной жидкости, которую исследовали с помощью вышеуказанного диагностикума. В образцах первой пробы слезной жидкости специфические антитела к вирусу ГЛПС отсутствовали, а второй пробе слезной жидкости, взятой через семь суток, мы обнаружили специфические к вирусу ГЛПС антитела.

Заключительный клинический диагноз: ГЛПС, тяжелая форма.

Пример 2 Больная К. поступила в 4 инфекционную больницу с жалобами на высокую температуру, слабость, головную боль. При объективном обследовании - температура тела 39 ^oC, число дыхания 20 в минуту. Пульс - 81 ударов в минуту. А/Д - 135/90 мм рт. ст. Язык влажный, умеренная обложенность. Кожные покровы сухие, гиперемированы, легкая инъецированность сосудов бульбарной конъюнктивы, живот мягкий, болезненный в области эпигастрии. Симптом Пастернацкого отрицательный.

Эпидемиологический анамнез: около 1 месяца назад совершила туристический поход в лесные районы, где приходилось ночевать в лесных охотничьих домиках. На следы лесных мышей внимания не обращала.

Госпитализирована на 2 день с момента заболевания с предварительным диагнозом: ГЛПС.

Взяты первые пробы сыворотки крови и слезной жидкости на реакцию НМФА.

Осмотр окулистом больной на 4 день болезни: острота зрения 0,5/0,5 ранее, со слов больной Vis. 1.0 Биомикроскопически: конъюнктива гиперемирована, отек, резкая инъецированность сосудов бульбарной конъюнктивы. ОКИ - (общий конъюнктивальный индекс) - 31. Чувствительность роговицы снижена. Передняя камера нормальной глубины, реакция радужки на свет живая, преломляющие среды прозрачные Офтальмоскопически: диск зрительного нерва гиперемирован, стушеванность границ, отечность сетчатки, артерии несколько сужены, вены утолщены. Единичные петехии в парамакулярной области.

В первых пробах сыворотки крови и слезной жидкости реакция НМФА отрицательная, а через 6 дней, во второй пробе сыворотки крови титр антител 1:256, и в слезной жидкости обнаружили специфические к вирусу ГЛПС антитела.

Результат серологической реакции НМФА подтвердил диагноз: ГЛПС, тяжелая форма.

Всего нами проведено исследования слезной жидкости у больных ГЛПС в 22 случаях, параллельно исследовали сыворотку крови для контроля. Во всех случаях нарастание титра антител в парных сыворотках крови больных ГЛПС превышал в 4 и более раз, одновременно в слезных жидкостях выявляли специфические к вирусу ГЛПС антитела.

Таким образом факт присутствия антител к хантавирусу ГЛПС в слезной жидкости свидетельствует о заболевании ГЛПС и делает диагностику ГЛПС в раннем периоде болезни по определению антител в слезной жидкости точной и надежной. Преимуществом впервые предлагаемого нами метода выявления антител в слезной жидкости являются атравматичность, исключается возможный перенос вирусной и госпитальной инфекций, отпадает необходимость получения проб крови и ее утилизация.

Предлагаемый нами метод позволяет исключить двухкратную серореакцию НМФА с сыворотками крови в день поступления и через 7- 9 суток, достаточно одной постановки реакции НМФА со слезной жидкостью, взятой не ранее 5-7 суток с начала заболевания.

Формула изобретения

Способ диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом, включающий выявление специфических к хантавирусу антител в биологической жидкости, отличающийся тем, что на 5 - 7 сутки с начала заболевания проводят исследование слезной жидкости пациента с антигенным диагностикумом непрямым методом иммунофлюоресценции и при наличии специфических к хантавирусу антител в слезной жидкости пациента диагностируют геморрагическую лихорадку с почечным синдромом.