Способ скринингового обследования женщин для прогноза течения и исхода беременности

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, акушерству и гинекологии. Способ обеспечивает высокую точность прогноза за счет определения параметров, с помощью которых можно проводить мониторинг гестационного процесса и давать прогноз исхода наступившей или предстоящей беременности. Проводят иммуноферментный анализ для определения иммунореактивности аутоантител (а-АТ) к основному белку миелина, белкам S100, АСВР14/18, МР65 в течение 20-30 дней двух- или трехкратно и дополнительно определяют соотношение иммунореактивности сывороточных аутоантител у обследуемой женщины (f) методом дисперсионного анализа как отклонения дисперсии аргументов массива тестируемых значений от дисперсии аргументов эталонного массива и сывороточный уровень хорионического гонадотропина (β-ХГЧ) (вне беременности дополнительно определяют сывороточный уровень дегидроэпиандростерона ДГЭА), а прогноз осуществляют по степени отклонений полученных значений от исходного уровня и эталонных значений при условии: чем более выражены отклонения иммунореактивности сывороточных аутоантител, чем ниже значения f и повышения или снижения сывороточного уровня β-ХГЧ (повышения ДГЭА), тем более неблагоприятные течение и исход беременности прогнозируют у женщин фертильного возраста. 1 з.п.ф-лы, 4 табл.

Область техники: медицина, иммунология, акушерство и гинекология УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ В настоящее время уже не вызывает сомнений участие иммунной и эндокринной систем организма в регуляции процессов гестации и эмбрионального развития. Данная регуляция осуществляется посредством гормональных и, по-видимому, недостаточно изученных реакций иммунной системы, тесно сопряженных с процессами гестации и закладки органов и тканей эмбриона и плода (Абрамов В. В. , Взаимодействие нервной и иммунной систем. Новосибирск: Наука, 1988). Вызванные различными причинами нарушения эндокринной регуляции и продукции антител различной направленности сопряжены с патологическим течением гестационного процесса и эмбриогенеза.

Ценным диагностическим методом исследования в практике акушера-гинеколога является определение количественного содержания гормонов-регуляторов репродуктивной функции. Из белковых гормонов наиболее важным является хорионический гонадотропин человека (β-субъединица ХГЧ). Биологическое действие ХГЧ связано с поддержанием стероидогенеза в желтом теле яичника, стимуляцией непрерывной продукцией прогестерона, который, в свою очередь, определяет степень развития децидуальной оболочки. Сегодня ХГЧ рассматривается как основной иммунодепрессант в предотвращении иммуноконфликта и отторжения плода.

Определение β-субъединицы ХГЧ (β-ХГЧ) в крови имеет большое диагностическое значение. Изменение содержания β-ХГЧ в крови беременных (повышение или снижение) позволяет диагностировать следующие патологические состояния: пузырный занос, хорионэпителиома, замершая беременность, внематочная беременность, угроза самопроизвольного аборта и т.д. (Сидорова И.С., Макаров И. О. Фетоплацентарная недостаточность, М.: Знание, 2000 г.).

Неблагоприятное течение беременности (угроза прерывания, неразвивающаяся беременность) может быть обусловлено увеличением концентрации андрогенов в крови. Поэтому уровень ДГЭА (дегидроэпиандростерона) в крови, являющегося одним из наиболее важных андрогенов, синтезируемых корой надпочечников из 17-гидроксипрогестерона, - важный диагностический показатель гиперандрогении. Его определение при подготовке к беременности и на ранних ее сроках позволяет вовремя выявить группу риска по перинатальной патологии и назначить патогенетически обоснованную терапию.

Большое значение для физиологического течения гестационного процесса имеет иммунная система. Известно, что в норме иммунная система продуцирует антитела не только к чужеродным, но и практически ко всем антигенам собственного организма, т.е. аутоантитела (а-АТ). Причем эти аутоантитела участвуют практически во всех процессах, происходящих в организме. В условиях нормы сывороточное содержание аутоантител поддерживается в определенных границах. А патологическое повышение или снижение их уровней может вести к различным патологическим состояниям. Изменения продукции а-АТ различной специфичности могут быть следствием влияния как различных внешних, так и внутренних факторов (экологические факторы, стрессы, инфекции, эндокринно-метаболические нарушения). Причем эти изменения могут касаться и тех а-АТ, поддержание физиологических концентраций которых критически важно для физиологического течения беременности и нормального эмбриогенеза. В литературе имеется ряд данных, свидетельствующих о различных нарушениях эмбрионального развития при различных изменениях в содержании материнских аутоантител (Takeuchi S. - Is production of blocking antibodies in successful human pregnancy an epiphenomenon. Amer. J. Reprod. Immunol., 1990, 24, 4, 108-119).

Антифосфолипидные антитела могут нарушать обмен мембранных фосфолипидов и повреждать сосуды плаценты во время гестации (Серова О.Ф. Прегравидарная подготовка женщин с невынашиванием беременности (патогенетическое обоснование, критерии эффективности). Дисс. докт. мед. наук., М., 2000). Существует даже такое понятие как "антифосфолипидный синдром", означающий повышение уровней антифосфолипидных антител у женщин, страдающих различными осложнениями беременности.

По данным Полетаева А. Б. и Селифановой О.П. повышение уровней материнских аутоантител к белку ткани мозга S100 приводит к различной патологии со стороны нервной системы у плода (Poletaev А.В., Selifanova О.Р., Transfer of elevated anti-S100 autoimmunity from mother to their offsprings in rats. Life Sci.,1994, V.54, 18, 1377-1381).

Что касается генетически обусловленных пороков развития, то частота их встречаемости не превышает 3-6% от всех врожденных пороков. Остальные 94-97% врожденной патологии обусловлены различными изменениями в организме матери.

В настоящее время отсутствует комплексный подход к прогнозированию и мониторингу течения беременности, включающий определение гормонов и иммунологических показателей, отражающих течение беременности и состояние плода. В то же время есть основания полагать, что интегральный анализ этих показателей в динамике позволит на качественно новом уровне решать данные задачи. Все это послужило основанием для создания набора диагностических тест-систем для определения антител класса IgG к ОБМ, белкам S100, АСВР-14/18 и МР-65 с определением коэффициента f, а также β-ХГЧ (у беременных) и ДГЭА (при подготовке к беременности) с последующим интегральным анализом полученных данных в динамике и относительно эталонных значений.

Аналогом заявленного изобретения является способ скринингового обследования женщин детородного возраста для прогноза развития эмбриона/плода и рождения здорового либо аномального ребенка с помощью тест-системы ELI-P (Патент РФ 2107913, МПК-7 G 01 N, 27 марта 1998 г.). В основе данного метода лежит определение сывороточного уровня а-АТ к ОБМ, белкам S100, АСВР-14/18 и МР-65. По наибольшей степени отклонения одного или нескольких определяемых показателей судят о прогнозе развития эмбриона/плода и рождения здорового либо аномального ребенка в соответствии с приведенной таблицей прогноза.

В то же время рассмотренный способ обладает рядом существенных недостатков: - отсутствует дифференцированный подход к прогнозу развития эмбриона/плода в зависимости от характера изменений содержания исследуемых а-АТ (гипо- или гиперреактивность); - невозможно достоверное прогнозирование течения беременности в зависимости от определяемых показателей; - невозможно прогнозирование развития эмбриона/плода и течения беременности в зависимости от соотношения определяемых показателей; - не учитывается динамика изменений определяемых показателей; - способ недостаточно точен.

В отличие от известного способа скринингового обследования предлагаемый нами способ, заключающийся в определении в динамике в течение 20-30 дней двух- или трехкратно комплекса показателей: антител к ОБМ, белкам S100, АСВР14/18, МР65, последующее определение параметра f, характеризующего соотношение уровней определяемых аутоантител (выраженность дисперсии в уровнях определяемых антител относительно дисперсии их средних показателей в популяции), а также хорионического гонадотропина (во время гестации) и дополнительно ДГЭА (в случае отсутствия беременности), позволяет: - существенно повысить точность прогнозирования развития эмбриона/плода; - оценить течение беременности в динамике и дать дифференцированный прогноз развития возможных осложнений;
- оптимизировать прегравидарную подготовку и оценить эффективность проводимой терапии;
- снизить процент рождения детей с пороками развития;
- выполнение исследования безопасно для женщины и будущего ребенка.

Целью заявляемого способа является возможность прогнозирования с достаточно высокой степенью точности развития эмбриона и плода, течения гестационного процесса, оптимизации прегравидарной подготовки и оценки эффективности проводимой терапии.

Поставленные цели достигаются путем реализации существенных признаков предлагаемого способа, а именно: проведение иммуноферментного анализа для определения в динамике в течение 20-30 дней двух- или трехкратно уровней а-АТ к белкам - компонентам тест-системы ELI-P со сравнением интенсивности реакции в лунках, содержащих тестируемые образцы сыворотки с лунками, содержащими образцы референс-сыворотки, с последующем определением соотношения между уровнями (выраженность дисперсии в уровнях определяемых антител относительно дисперсии их средних показателей в популяции) данных а-АТ; проведение иммуноферментного анализа для определения сывороточного уровня β-ХГЧ (у беременных) и дополнительно ДГЭА (в случае отсутствия беременности) с последующим интегральным анализом всех полученных данных.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Иммуноферментное определение β-ХГЧ проводили у беременных во время 1 или 2 триместра и дополнительно определение ДГЭА проводили в случае отсутствия беременности по общепринятым методикам, например, с помощью наборов производства ЗАО "Алкор Био".

Определение уровней а-АТ к ОБМ, белкам S100, АСВР14/18, МР65 с последующим определением соотношения между уровнями а-АТ к данным белкам, характеризуемым параметром f, проводили следующим образом.

I. Получение белков - компонентов тест-системы ELI-P.

1. Для получения ОБМ можно использовать методы, описанные в литературе (например, Deibler et al. - J. Neurochem., 1986, V.47, 4, 1219-1225) или применять коммерческие препараты данного белка производства различных фирм (например, CALBIOCHEM, SIGMA).

2. Для получения белка S100 можно использовать приводимые в литературе различные методы очистки (например, Полетаев А.Б. - Докт. дисс., Москва, 1988) или применять коммерческие препараты данного белка производства различных фирм (например, CALBIOCHEM, SIGMA).

3. За основу схемы получения АСВР14/18 взята схема, предложенная А.Б. Полетаевым с соавт. (Патент РФ 2107913, 27 марта 1998 г.). В нее внесено изменение, позволяющее повысить выход данного белка на 9%. Данное изменение заключается, в первую очередь, в том, что во время ионообменной хроматографии на ДЕАЕ-сефарозе отбирали фракцию, элюирующуюся в более широком диапазоне концентраций NaCl.

Из свежего или свежезамороженного мозга крупного рогатого скота получают фракцию клеточных ядер (например, следующим способом: мозг гомогенизируют в 0,15 М NaCl с 0,01 М трис-НСl рН 7,5; центрифугируют 5 мин при 1000 g; полученный осадок ресуспендируют в 0,32 М сахарозе; повторно центрифугируют 5 мин при 1000 g; процедуры ресуспендирования/центрифугирования повторяют 5-7 раз).

Полученные ядра гомогенизируют в 0,2 М NaCl, центрифугируют и отбрасывют экстракт, содержащий белки нуклеоплазмы и слабосвязанные белки хроматина. Отмытый осадок гомогенизируют в 0,01 М трис-НСl буфера рН 8, с 2М NaCl, 2M мочевины и 0,1% тритона Х-100. Центрифугируют, собирают супернатант, диализуют его против того же буфера без NaCl и наносят его на колонку ДЕАЕ-сефарозы, уравновешенную тем же буфером. Проводят ступенчатую элюцию белков, используя градиенты NaCI на том же буфере. Отбирают фракцию, элюируемую в диапазоне 0,2-0,8 М NaCl. После диализа против того же буфера без NaCl, белки наносят на колонку анионообменника и проводят элюцию в линейном градиенте 0,1 М - 1,0 М KSCN с УФ-детекцией на 280 нм. Собирают последний пик. Полученный материал используется в работе.

4. За основу схемы получения МР65 взята схема, предложенная А.Б. Полетаевым с соавт. (Патент РФ 2107913, 27 марта 1998 г.). В нее внесено изменение, позволяющее повысить выход данного белка на 7%. На последнем этапе очистки при хроматографии на Mono-Q элюцию проводили в градиенте с более высокой концентрацией KSCN.

Из свежего мозга крупного рогатого скота любым методом выделяют фракцию клеточных мембран (например, мозг гомогенизируют в 0,15 М NaCl с 0,01 М трис-НСl рН 7,5; центрифугируют 5 мин при 1000 g; полученный осадок отбрасывают. К супертатанту добавляют сахарозу до 0,32 М; повторно центрифугируют 10 мин при 3000 g; осадок отбрасывают; к супернатанту добавляют равный объем 0,32 М сахарозы. Процедуру повторяют 2-3 раза. Затем супернатант разбавляют 2-кратно водой и центрифугируют 60 мин при 20000 g. Собирают осадок клеточных мембран).

Полученные мембраны гомогенизируют в 0,01 М трис-НСl буфера рН 7, с 0,2 М NaCl. Центрифугируют, собирают осадок, отмывют его 0,01 М трис-НСl буфера рН 7,5. Гомогенизируют осадок в 0,01 М трис-НСl буфере рН 7,5 с 0,1% тритона Х-100 и 2 М мочевиной. Центрифугируют 60 мин при 20000 g. Супернатант наносят на колонку анионообменника, уравновешенную тем же буфером. Проводят ступенчатую элюцию белков, используя градиенты NaCl на том же буфере. Отбирают фракцию, элюируемую в диапазоне 0,1 - 0,3 М NaCl. После диализа против 0,01% тритона Х-100 с 1 М мочевиной на трис-НСl буфере рН 7,5 белки наносят на колонку Mono-Q и проводят элюцию в линейном градиенте 0,01-0,6 М KSCN с 0.01% тритона Х-100 с УФ-детекцией на 280 нм. Собирают последний пик. Полученный материал используется в работе.

II. Проведение иммуноферментного анализа.

1. Для сорбции на стандартные 96-луночные плоскодонные планшеты для иммуноферментного анализа готовят растворы каждого из белков-антигенов на карбонатном буфере. Приготовленные растворы вносят в отдельные лунки планшета. Накрытые крышками планшеты инкубируют ночь при +2 - 4^oС.

2. Удаляют (стряхиванием) из лунок растворы белков и заливают в них блокирующий буфера (например, 0,5% раствор желатина на 0,15 М NaCl). Инкубируют 1 час при 37^oС.

3. Отмывают планшеты отмывочным буфером (0,15 М NaCl с 0,05% твин-20).

4. Внесение тестируемых сывороток:
а) готовят разведения сывороток 1:200 на отмывочном буфере;
б) вносят разведенные сыворотки в лунки;
в) планшеты инкубируют ночь при +2 - 4^oС.

5. Отмывают планшеты отмывочным буфером.

6. Проявление реакции:
а) исходный раствор конъюгата пероксидазы хрена (или иного фермента) с антителами к иммуноглобулинам IgG человека разводят в необходимое число раз (в зависимости от его активности) отмывочным буфером;
б) раствор конъюгата вносят во все лунки планшета;
в) планшеты инкубируют 60-90 мин при 37^oС, либо 12-16 ч при +2 -4^oС. Коньюгат удаляют, а планшеты отмывают отмывочным буфером;
г) сразу после этого в лунки вносят раствор субстрата (например 0,01-0,05% о-фенилендиамина с 0,001-0,01% перекиси водорода на 0,01-0,05 М цитрат-фосфатном буфере рН 4,5-5 в случае применения пероксидазных конъюгатов). Инкубируют планшеты в темноте 15-20 мин при комнатной температуре.

9. По достижении оптимального уровня окрашивания (через 10-20 мин инкубации в темноте) реакцию останавливают добавлением 0,2-0,4 М серной кислоты.

10. Регистрация результатов реакции: Интенсивность окрашивания оценивают с помощью ИФА-ридера любой модели.

11. Обработка полученных данных.

а) Из нескольких (обычно трех) дублирующих друг друга значений результатов реакции эталонной и тестируемых сывороток выбирают среднее (в случае если из 3 дублей один сильно отличается от двух других, т.е. является заведомо артефактом, его значение не принимают в расчет);
б) По полученным значениям оптической плотности содержимого лунок рассчитывают относительную интенсивность реакции тестировавшихся сывороток с основным белком миелина, белками S100, АСВР14/18, МР65 по отношению к эталону (в процентах).

12. При интерпретации полученных данных нами определены иные границы иммунореактивности определяемых антител для некоторых из перечисленных ниже классификационных групп по сравнению с известными (патент РФ 2107913 от 27 марта 1998 г. ), что позволило не только повысить точность проводимого прогноза, но и дифференцировать возможные патологии.

В случае если интенсивность реакции исследуемой сыворотки с любым из четырех белков-антигенов не выходит за пределы от -15% до +40% по отношению к реакции референс-сыворотки (эталона), данную сыворотку относят к классификационной группе К1 (норма).

В случае если интенсивность реакции исследуемой сыворотки с любым из четырех белков-антигенов выходит за пределы группы К1, но составляет не менее -25% и не более +65% по отношению к реакции сыворотки-эталона, данную сыворотку относят к классификационной группе К2 (слабые отклонения).

В случае если интенсивность реакции исследуемой сыворотки с любым из четырех белков-антигенов выходит за пределы групп К1 и К2, но составляет не менее -45% и не более +100% по отношению к реакции сыворотки-эталона, данную сыворотку относят к классификационной группе К3 (умеренные отклонения).

В случае если интенсивность реакции исследуемой сыворотки с любым из четырех белков-антигенов выходит за пределы групп К1, К2 и К3, но составляет не менее -65% и не более +150% по отношению к реакции сыворотки-эталона, данную сыворотку относят к классификационной группе К4 (значительные отклонения).

В случае если интенсивность реакции исследуемой сыворотки с любым из четырех белков-антигенов выходит за пределы групп К1, К2, К3 и К4, но составляет не менее -75% и не более +200% по отношению к реакции сыворотки-эталона, данную сыворотку относят к классификационной группе К5 (резкие отклонения).

В случае если интенсивность реакции исследуемой сыворотки с любым из четырех белков-антигенов выходит за пределы групп К1, К2, К3, К4 и К5, данную сыворотку относят к классификационной группе К6 (очень резкие, эксквизитные отклонения).

Далее проводили определение параметра f, который характеризует соотношение между уровнями а-АТ к различным определяемым белкам.

При анализе 12000 результатов ЭЛИ-П-Теста был сделан вывод о нормальном распределении уровней а-АТ для всех 4 используемых антигенов. Для анализа степени различия в изменениях уровней а-АТ к разным антигенам - компонентам указанной тест-системы были применены методы дисперсионного анализа. При этом дисперсия значений аргументов массива, представляющего собой уровни а-АТ по каждому из 4 антигенов для каждого конкретного пациента, сравнивалась с дисперсией эмпирически найденных аргументов массива, представляющих собой средние значения уровней а-АТ к каждому из 4 белков. Средними значениями в генеральной совокупности из 12000 результатов являлись следующие: для а-АТ к ОБМ - 10% (относительно эталона), для S100 - 13%, для АСВР14/18 - 9%, для МР65 - 9%.

При анализе исходили из того, что дисперсии аргументов массива тестируемых значений и эталонного массива (10; 13; 9; 9) различаются несущественно. Значение данной вероятности обозначено как параметр f для каждого набора тестируемых значений (уровень а-АТ к ОБМ; уровень а-АТ к S100; уровень а-АТ к АСВР14/18; уровень а-АТ к МР65). Таким образом, параметр f характеризует степень отклонения дисперсии аргументов массива тестируемых значений от дисперсии аргументов эталонного массива. Поскольку величина параметра f находится в пределах от 0 до 1, то чем более отличается его значение от 1 (единицы), тем более выражено в этом случае различие в уровнях определяемых а-АТ.

При сопоставлении различных значений параметра f с результатами клинического обследования пациенток было выявлено, что снижение параметра f ниже определенного значения, установленного для каждой классификационной группы, свидетельствует об эндокринно-метаболических нарушениях. Так, для группы К1 f= 0,38; для К2 f=0,24; для К3 f=0,17; для К4 f=0,09; для К5 f=0,06; для К6 f=0,01 (р<0,01).

а) гормонов щитовидной железы (Т3, Т4, ТТГ) в 50-55% случаев;
б) пролактина в 25-28% случаев;
в) кортикостероидов, минералкортикоидов в 18-20% случаев;
г) ЛГ, ФСГ, эстрадиола, прогестерона в 12-15% случаев;
д) инсулина, глюкагона в 2-5% случаев.

Уровень β-ХГЧ становится детектируемым в материнской сыворотке крови довольно быстро: уже на 8-9 день после зачатия. В течение 1 триместра беременности концентрация β-ХГЧ очень быстро повышается, удваиваясь каждые 2-3 дня. Концентрация β-ХГЧ достигает максимума на 8-10 неделе беременности, после чего снижается и в течение 2 половины беременности остается более или менее стабильной.

Общеизвестны уровни содержания β-ХГЧ на разных сроках беременности. Отклонения концентрации β-ХГЧ как в сторону повышения, так и в сторону снижения свидетельствуют о патологическом течении беременности. Определение данного показателя в комплексе с а-АТ к ОБМ, белкам S100, АСВР14/18, МР65 и коэффициентом f позволяет более точно проводить диагностику течения беременности и прогнозировать ее исход.

Определяемый в сыворотке крови ДГЭА является андрогеном, синтезируемым надпочечниками. Содержание ДГЭА в крови имеет циркадный ритм с наиболее высокой концентрацией гормона в утренние часы. Зависимость уровня ДГЭА от фазы менструального цикла практически отсутствует. Повышение содержания ДГЭА в крови является причиной неблагоприятного течения беременности (угроза прерывания, неразвивающаяся беременность), бесплодия. Определение ДГЭА в комплексе с а-АТ к ОБМ, белкам S100, АСВР14/18, МР65 и параметром f при отсутствии беременности позволяет более точно определить степень риска осложнений предстоящей беременности и прогнозировать ее исход.

Эмпирические данные, полученные при анализе течения беременности и результатов родов 7975 женщин, обследовавшихся с помощью указанной технологии, позволили выявить закономерности, представленные в таблицах 1-4.

Вне беременности β-ХГЧ в крови отсутствует.

В представленных таблицах после классификационной группы женщины, например К3, в скобках указана направленность уровней исследуемых а-АТ (которая определила классификационную группу): (-) - снижение; (+) - повышение
В случае если исходные показатели а-АТ значительно изменяются в течение 20-30 дней и женщина переходит из любой группы риска с гипореактивностью (-) в любую группу риска с гиперреактивностью (+) или наоборот, то процент прогноза осложненного течения беременности или неблагоприятного исхода беременности возрастает в среднем в 1,5 раза по сравнению с первоначальным значением, но не превышает 95%.

Кроме того, при анализе характера патологии новорожденных, наблюдаемой при изменении уровней каждого из 4 а-АТ, определяемых с помощью ЭЛИ-П-Теста, при условии нормальной иммунореактивности 3 других видов а-АТ (что наблюдалось при снижении коэффициента f ниже установленных границ нормы), был установлен ряд закономерностей.

Показано, что изменение уровня а-АТ к ОБМ в крови матери может приводить у новорожденных к нарушениям иннервации различных органов и систем, нарушениям гемопоэза, порокам клапанного аппарата сердца. Реже наблюдаются изменения со стороны ЦНС. Так, у новорожденных могут наблюдаться врожденные иммунодефициты, нарушения свертывающей системы крови, анемии, лимфопении.

Изменения уровня а-АТ к S100 могут вести к различной патологии со стороны ЦНС, часто проявляющейся к 1-2 годам жизни. У детей могут наблюдаться задержки психомоторного развития, аутизм, различная неврологическая симптоматика.

Изменения уровня а-АТ к АСВР14/18 и МР65 могут вести к бесплодию, остановкам развития эмбриона и плода, различным изменениям со стороны внутренних органов новорожденных (врожденные пороки сердца, гипоплазии внутренних органов, гидронефроз почек и др.). При изменениях уровней а-АТ к МР65 могут наблюдаться различные анатомические уродства.

Выявленные закономерности статистически достоверны (р<0,05).

-ХГЧ (у беременных) или ДГЭА (при подготовке к беременности); а-АТ к белкам - компонентам тест-системы ELI-P с последующем определением соотношения уровней аутоантител (f) позволяет на качественно новом уровне определить прогноз течения беременности, ее исход, а также возможные отклонения в состоянии здоровья новорожденных.

В целом риск неблагоприятного течения беременности и исходов родов повышался с увеличением классификационной группы (от К1 до К6). Однако внутри каждой группы часто наблюдались достоверные различия в прогнозе в зависимости от снижения или повышения уровней аутоантител и содержания определяемого гормона. Так, например, в группе К1 при значениях параметра f, близких к эталонному, и неизмененном содержании β-ХГЧ, остановок развития беременности не наблюдалось. В то же время при группе К1, но сниженных значениях параметра f и β-ХГЧ у 10% женщин отмечалась остановка развития.

Гипореактивность а-АТ к ОБМ, S100, АСВР14/18 и МР65 достоверно чаще, чем гиперреактивность ведет к внутриутробному инфицированию плода на поздних сроках беременности. Гипореактивность эффективно корригируется с помощью иммуномодулирующих средств в 81% случаев. Гиперреактивность данных а-АТ поддается корригирующей терапии значительно хуже (р<0,01) и, как видно из таблиц прогноза, достоверно чаще приводит к рождению детей с пороками развития.

ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ СПОСОБА
Пример 1.

Обследуемая О. А. 24 года. Беременность 8 недель. Наследственность не отягощена.

Классификационная группа по тесту ELI-P - К1;
Коэффициент f - снижен
Содержание β-ХГЧ - снижено.

Исход беременности: неразвивающаяся беременность на сроке 5 недель.

Пример 2.

Обследуемая О. А. , 20 лет. Беременность 5 недель. Наследственность не отягощена.

Классификационная группа по тесту ELI-P - К3 (-);
Коэффициент f - в норме;
Содержание β-ХГЧ - в норме.

Результаты родов: Срочные роды, здоровый мальчик рост 52 см, вес 3450 г, балльность по шкале Апгар - 8-9.

Пример 3.

Обследуемая А. А., 32 года. Беременность 10-11 недель. Наследственность не отягощена.

Классификационная группа по тесту ELI-P - К5(-);
Коэффициент f - снижен;
Содержание β-ХГЧ - повышено.

Течение беременности и ее исход. Беременность протекала на фоне угрозы выкидыша, нефропатии 2 степени, маловодья, фетоплацентарной недостаточности. Беременность завершилась рождением ребенка с задержкой внутриутробного развития II степени, с признаками внутриутробного инфицирования.

Пример 4.

Обследуемая О. С., 26 лет. Беременность 7-8 недель. Наследственность не отягощена.

Классификационная группа по тесту ELI-P - К6 (+);
Коэффициент f - в норме;
Содержание β-ХГЧ - повышено.

При проведении ультразвукового исследования на сроке 20-21 недель беременности выявлены грубые пороки развития. Проведено искусственное прерывание беременности.

Пример 5.

Обследуемая Л. М. , 29 лет. Планирует беременность. Наследственность не отягощена.

Классификационная группа по тесту ELI-P - К2 (-);
Коэффициент f - в норме; β-ХГЧ - отсутствует.

Содержание ДГЭА - повышено.

Наступила беременность; на сроке 15-16 недель наступила остановка развития беременности.

Наблюдения показали, что гипореактивность а-АТ к ОБМ, S100, АСВР14/18 и МР65 эффективно корригируется с помощью иммуномодулирующих средств в 81% случаев. Гиперреактивность данных а-АТ поддается корригирующей терапии значительно хуже (р<0,01) и, как видно из таблиц прогноза, достоверно чаще приводит к рождению детей с пороками развития.

ТЕХНИКО-ЭКОНОМИЧЕСКАЯ И СОЦИАЛЬНАЯ ЗНАЧИМОСТЬ
Применение описанного комплексного подхода к прогнозированию течения беременности и ее исхода может значительно снизить процент женщин с осложненным течением беременности за счет своевременного выявления групп риска и проведения адекватных лечебно-профилактических мероприятий, а также снизить процент рождения детей с пороками развития. Выполнение исследования производится на основе иммуноферментного анализа сыворотки крови и безопасно для женщины и будущего ребенка.

Формула изобретения

1. Способ скринингового обследования женщин фертильного возраста для прогноза течения и исхода беременности, включающий получение сыворотки крови и проведение твердофазного иммуноферментного анализа иммунореактивности аутоантител в сыворотке крови обследуемой женщины к основному белку миелина (ОБМ), белку S100, анионному прочносвязанному белку хроматина (АСВР14/18), мембранному белку (МР65) и осуществление прогноза по степени выраженности отклонений в содержании исследуемых аутоантител, отличающийся тем, что определяют иммунореактивность аутоантител к ОБМ, белку S100, АСВР14/18 и МР65 в течение 20-30 дней двух или трехкратно и дополнительно определяют соотношение иммунореактивности сывороточных аутоантител у обследуемой женщины (f) методом дисперсионного анализа как отклонения дисперсии аргументов массива тестируемых значений от дисперсии аргументов эталонного массива и сывороточный уровень хорионического гонадотропина (β-ХГЧ), а прогноз осуществляют по степени отклонений полученных значений от исходного уровня и эталонных значений при условии, чем более выражены отклонения иммунореактивности сывороточных аутоантител, чем ниже значения f и наличия повышения или снижения уровня β-ХГЧ, тем более неблагоприятные течение и исход беременности прогнозируют у женщин фертильного возраста.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в случае отсутствия беременности дополнительно определяют сывороточный уровень дегидроэпиандростерона (ДГЭА).

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11