Способ диагностики острого лейкоза

 

Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии. Способ позволяет упростить и удешевить исследование и проводить его при больших скрининговых исследованиях при диагностике острого лейкоза. Проводят исследование крови, при этом от крови отделяют сыворотку, высушивают ее, размельчают и готовят суспензию в вазелиновом масле, затем выполняют ИК-спектроскопический анализ полученного образца в области 1200-1000 см^-1, определяют высоту пиков полос поглощения с максимумами 1165 и 1070 см^-1, после чего вычисляют значение величины R - отношения высоты пика с максимумом при 1165 см^-1 к высоте пика с максимумом при 1070 см^-1, при значении R=0,25 и меньше диагностируют острый лейкоз.

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике, и может быть использовано при диагностике острого лейкоза.

В настоящее время диагностика острого лейкоза основывается на применении стандартных дорогостоящих методов исследования, а именно цитохимических, иммунофенотипических, цитогенетических, молекулярно-биологических. Указанные методы позволяют выявлять патологию и многочисленные варианты ее проявления, однако все они трудоемки и требуют дорогостоящего дополнительного оборудования.

Наиболее близким и выбранным авторами в качестве прототипа является способ диагностики острого лейкоза, в котором проводят исследование крови, а именно определяют наличие и концентрацию растворимых в сыворотке больных дифференцировочных антигенов экспрессируемых бластными клетками, свидетельствующих о наличии лейкемического процесса в организме [1].

Однако известный способ предполагает использование дорогостоящего оборудования и импортных реактивов, что не всегда возможно в российских клиниках. Кроме того, для его применения необходим специально обученный персонал. Данные обстоятельства затрудняют применение метода в рутинной практике и для широких скрининговых исследований.

Задачей предлагаемого изобретения являлась разработка способа диагностики острого лейкоза, исключающего указанные недостатки.

Поставленная задача достигается способом диагностики острого лейкоза, включающим исследование крови, в котором в соответствии с предлагаемым решением от крови отделяют сыворотку, высушивают ее, размельчают и готовят суспензию в вазелиновом масле, затем выполняют ИК-спектроскопический анализ полученного образца в области 1200-1000 см^-1, определяют высоту пиков полос поглощения с максимумами 1165 и 1070 см ^-1, после чего вычисляют значение величины R - отношение высоты пика с максимумом при 1165 см^-1 к высоте пика с максимумом при 1070 см^-1, при значении R=0,25 и меньше диагностируют острый лейкоз.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

У пациента берут кровь, отделяют сыворотку. Затем сыворотку высушивают и размельчают. Готовят суспензию в вазелиновом масле и выполняют ИК-спектроскопический анализ полученного образца в области 1200-1000 см^-1. При выполнении спектроскопического анализа определяют высоту пиков полос поглощения с максимумами 1165 и 1070 см^-1, затем вычисляют значение величины R, которая является отношением высоты пика с максимумом при 1165 см^-1 к высоте пика с максимумом при 1070 см^-1, при значении R=0,25 и меньше диагностируют острый лейкоз.

Предлагаемый способ применялся в диагностике острого лейкоза у 20 больных на базе гематологического отделения Нижегородской областной клинической больницы им. Семашко.

Примеры применения описанного способа.

Пример 1. Больная Кобякова Т.П., 41 год, находилась на лечении в гематологическом отделении областной больницы им Н.А. Семашко (ОКБ) с 9.09.98 по 8.10.98, история болезни 9821121. При поступлении предъявляла жалобы на слабость, головные боли, похудание на 5 кг за 1,5 мес, плохой аппетит, болезненное набухание десен. Считала себя больной с июля 1998 года, впервые стали беспокоить припухлость и боли в деснах, лечилась у стоматолога. В связи с выявленными изменениями в анализе крови была направлена к гематологу. При объективном обследовании: состояние ближе к удовлетворительному, пониженного питания, кожные покровы и слизистые бледные, пальпировались подчелюстные лимфатические узлы диаметром до 0,8 см и паховый лимфоузел справа диаметром до 2,5 см. В анализе крови выявлено: гемоглобин 68 г/л, эритроцитов - 2,2х10¹²/л, тромбоцитов 90,0х10⁹/л, лейкоциты 110,0х10⁹/л, в лейкоцитарной формуле бластных клеток 24%. При пункционном исследовании лимфатического узла в цитологическом препарате выявлено бластных клеток с морфологией миеломонобластов - 8,2% и моноцитов - 64,2%. Анализ костно-мозгового пунктата выявил наличие 10,2% миелобластов и 63,2% моноцитарных клеток с омоложенной структурой. Цитохимические реакции выявили положительные миелоидные маркеры в бластных клетках, высокую активность неспецифической эстеразы, подавляемую фторидом натрия. На основании вышеуказанных стандартных критериев был установлен диагноз: острый лейкоз, миеломонобластный вариант.

При исследовании сыворотки крови предлагаемым способом, при котором у больной брали кровь, отделяли сыворотку, высушивали ее и готовили суспензию в вазелиновом масле, затем проводили ИК-спектрометрию полученного образца в области 1200-1000 см^-1 определяли высоту пиков полос поглощения с максимумами 1165 и 1070 см^-1, после чего вычисляли значение величины R - отношение высоты пика с максимумом при 1165 см^-1 к высоте пика с максимумом при 1070 см^-1, было получено значение R=0,120, диагностирован острый лейкоз.

Пример 2. Больная Кудряшова Н.Н., 49 лет, находилась на лечении в гематологическом отделении (ОКБ) с 3.11.98 по 15.12.98, история болезни 9826055. При поступлении предъявляла жалобы на слабость, головокружение, субфебрильную лихорадку, боли в костях, в деснах, тошноту. При объективном обследовании: состояние тяжелое, лихорадка до 38,0^oС, кожа и слизистые бледные, пальпировались увеличенные до 2,0 см подчелюстные, шейные, аксиллярные лимфатические узлы, край селезенки. В анализе крови выявлено: гемоглобин 68 г/л, тромбоцитов 85,0х10⁹/л, лейкоциты 200,0х10⁹/л, в лейкоцитарной формуле бластных клеток 90%. При пункционном исследовании косного мозга выявлено: миелокариоцитов - 20,0х10⁹/л, при подсчете миелограммы 68,2% составляли бластные клетки. Цитохимические реакции выявили отрицательные миелоидные маркеры в бластных клетках, слабо гранулярную PAS реакцию на гликоген и высокую активность кислой фосфатазы. На основании вышеуказанных стандартных критериев был установлен диагноз: острый лейкоз, лимфобластный Т-клеточный вариант.

При исследовании сыворотки крови предлагаемым способом R=0,243 диагностирован острый лейкоз.

Пример 3. Больная Павлова Е.П., 23 лет, находилась на лечении в гематологическом отделении ОКБ с 21.08.98 по 30.09.98, история болезни 9819607. При поступлении предъявляла жалобы на слабость, фебрильную лихорадку. Нездорова с апреля 1998 года. Первоначально появилась слабость, потом лихорадка с явлениями некротической ангины. В июне 1998 года лечилась в ЦРБ без эффекта. 15.7.98-17.8.98 лечилась в гематологическом отделении ОКБ, было проведено полное клинико-гематологическое обследование и на основании стандартных критериев установлен диагноз острого лейкоза миеломонобластного варианта. После этого больная получила первый курс химиотерапии по программе 7+3 (цитозар+рубомицин). При сохраняющихся явлениях тяжелой миелодепрессии был сделан 4-х дневных перерыв в пребывании в стационаре. При объективном обследовании в данную госпитализацию: состояние тяжелое, лихорадка до 38,0^oС, кожа и слизистые бледные, язвенно-некротические изменения слизистой полости рта, гематомы на коже нижних конечностей, печень у края реберной дуги. В анализе крови выявлено: гемоглобин 48 г/л, эритроцитов - 1,6х10¹²/л, тромбоциты - единичные в препарате, лейкоциты 1,8х10⁹/л, в лейкоцитарной формуле бластных клеток 10%. На основании вышеуказанных стандартных критериев был установлен диагноз: острый лейкоз, миеломонобластный вариант, 1 атака, состояние после курса химиотерапии индукции ремиссии.

При исследовании сыворотки крови представляемым способом R=0,132, диагноз острый лейкоз подтвержден.

Пример 4. Больной Гавлин М.Л., 73 лет, находился на лечении в гематологическом отделении ОКБ с 21.09.98 по 28.10.98, история болезни 9822093. При поступлении предъявлял жалобы на слабость, головные боли, кашель с трудно отделяемой мокротой, непостоянную субфебрильную лихорадку, непостоянные боли в области сердца, преимущественно при нагрузке. Диагноз острого миелоидного лейкоза был установлен в апреле 1998 года в гематологическом отделении ОКБ на основании стандартных критериев. Больному был проведен курс химиотерапии по программе 7+3 (цитозар, рубомицин) в редуцированных дозах с учетом возраста больного и сопутствующей патологии (Хронический бронхит, Ишемическая болезнь сердца, II КФК), ремиссии заболевания получить не удалось. В последующем была начата паллиативная терапия циторабином 100 мг 1 раз в неделю под кожу и тиогуонином 80 мг 4 раза в неделю. Получил 9 курсов. В настоящую госпитализацию при объективном обследовании: состояние средней тяжести, кожа и слизистые бледные, печень +1,5 см. В анализе крови выявлено: гемоглобин 76 г/л, тромбоцитов 40,0х10⁹/л, лейкоциты 13,6х10⁹/л, в лейкоцитарной формуле миелобластов 72%. На основании стандартных критериев был установлен диагноз: острый лейкоз, миелоидный вариант, 1 атака, развернутая стадия, состояние на фоне паллиативной химиотерапии.

При исследовании сыворотки крови предлагаемым способом R=0,120 диагноз - острый лейкоз подтвержден.

Пример 5. Больной Захаров П.В., 17 лет, находился на лечении в гематологическом отделении ОКБ с 21.10.98 по 2.01.99, история болезни 9824953. При поступлении предъявлял жалобы на резкую слабость, фебрильную лихорадку, боли в костях, носовые кровотечения, одышку. Считал себя больным с ноября 1997 года, когда при плохом самочувствии впервые было обнаружено в анализе крови снижение всех форменных элементов. Получал лечение витаминами группы В, преднизолоном без эффекта. В январе 1998 года в Гематологическом Научном Центре РАМН установлен диагноз апластической анемии и проведен курс лечения антилимфоцитарным глобулином. В последующем принимал циклоспорин А. Последние 2 недели перед обращением в гематологическое отделение ОКБ циклоспорин А не получал. При объективном обследовании: состояние тяжелое, лиходарка до 38^oС, кожные покровы и слизистые бледные, петехиальная сыпь и синяки на теле. В анализе крови: гемоглобин 49 г/л, эритроцитов - 1,5х10¹²/л, тромбоцитов - единичные, лейкоциты 1,8х10⁹/л, в лейкоцитарной формуле эозинофилов - 1, лимфоцитов - 99%. Анализ костно-мозгового пунктата выявил снижение миелокариоцитов до 7,0х10⁹/л, в клеточном составе: миелобластов 0,8%, лимфоцитов 91%, эритрокариоцитов - 1,0%. Таким образом, на основании стандартных критериев был установлен рецидив аплазии кроветворения.

При исследовании сыворотки крови предлагаемым способом R=0,360, что подтвердило отсутствие онкологического заболевания крови типа острого лейкоза.

Пример 6. Больная Тебекина И. А., 43 лет, находилась на лечении в гематологическом отделении ОКБ с 22.10.98 по 11.11.98, история болезни 9825109. При поступлении предъявляла жалобы на головные боли, головокружение, одышку, субфебрильную лихорадку, слабость. Анемией страдала с 1974 года. Первоначально анемия носила железодефицитный характер, лечилась препаратами железа с эффектом. Последние 2 года препараты железа перестали оказывать эффект повышения гемоглобина. При исследовании костно-мозгового кроветворения были выявлены признаки дисплазии эритрокариоцитов с наличием кольцевидных сидеробластов. Был установлен диагноз миелодиспластического синдрома: рефракторной анемии с кольцевидными сидеробластами. В последующем лечилась трансфузиями эритроцитной массы в сочетании с десфералем. При поступлении: состояние средней тяжести, к вечеру лихорадка до 37,5^oС, кожа и слизистые бледные. В анализе крови выявлено: гемоглобин 69 г/л, эритроцитов 2,4х10¹²/л, тромбоцитов 365,0х10⁹/л, лейкоцитов 5,4х10⁹/л, лейкоцитарная формула без патологии. Содержание сывороточного железа 36 мкмоль/л. На основании вышеуказанных стандартных критериев был подтвержден ранее установленный диагноз. Проведено 6 трансфузий эритромассы с десфералем с эффектом повышения гемоглобина до 91 г/л.

При исследовании сыворотки крови предлагаемым способом R=0,650, данный показатель подтвердил отсутствие острого лейкоза.

Приведенные примеры показывают, что предлагаемый способ диагностики острого лейкоза объективно отражает состояние больного в момент развернутой стадии заболевания, что подтверждается результатами общепринятых клинических исследований. Предлагаемый способ не требует дорогостоящего оборудования и реактивов, может быть применен в больницах, не оснащенных специальными лабораториями. Не требует специально обученного персонала и может быть использован в случаях, затруднительных для использования стандартных методов исследования, а так же при больших скрининговых исследованиях.

Литература 1. Potential use of serum CD44 as an indicator of tumor progression in acute leukemia. Yokota A. , Ishii G., Sugaya Y., Nishimura M., Satio Y., Harigaya K.// Hematol Oncol 1999 Dec; 17(4): 161-8.

Формула изобретения

Способ диагностики острого лейкоза, включающий исследование крови, отличающийся тем, что от крови отделяют сыворотку, высушивают ее, размельчают и готовят суспензию в вазелиновом масле, затем выполняют ИК-спектроскопический анализ полученного образца в области 1200-1000 см^-1, определяют высоту пиков полос поглощения с максимумами 1165 и 1070 см^-1, после чего вычисляют значение величины R - отношения высоты пика с максимумом при 1165 см^-1 к высоте пика с максимумом при 1070 см^-1, при значении R= 0,25 и меньше диагностируют острый лейкоз.