Средство, стимулирующее эритроидный и гранулоцитарный ростки кроветворения при цитостатических миелодепрессиях

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, и используется для коррекции нарушений, возникающих в системе крови при введении цитостатических препаратов. Применение 40% спиртовой настойки надземной части лабазника вязолистного в качестве средства, стимулирующего эритроидный и гранулоцитарный ростки кроветворения при цитостатических миелодепрессиях. Средство способствует эффективной стимуляции эритроидного и гранулоцитарного ростков кроветворения при цитостатических миелодепрессиях. 3 табл.

 

Изобретение относится к медицине, конкретно к гематологии, и может быть использовано как гемостимулирующее средство для фармакологической коррекции нарушений, возникающих в системе крови при введении цитостатических препаратов.

Миелодепрессия является одним из основных патологических синдромов, возникающих в условиях назначения цитостатиков и ограничивающих в значительной мере продолжительность химиотерапии [1]. В настоящее время с целью коррекции состояний гемопоэза, развивающихся в процессе терапии цитостатиками, применяются средства природного и синтетического происхождения [2, 3, 4, 5]. Однако перечисленные препараты являются недостаточно эффективными стимуляторами кроветворения или обладают нежелательными побочными эффектами.

Наиболее близким по природе происхождения и положительному эффекту (прототип) является средство, стимулирующее эритроидный и гранулоцитарный ростки кроветворения при цитостатических миелодепрессиях - шлемник байкальский [6].

Фармакопейные препараты, стимулирующие эритроидный и гранулоцитарный ростки кроветворения при цитостатических миелодепрессиях, до настоящего времени неизвестны.

Расширение арсенала средств, стимулирующих эритроидный и гранулоцитарный ростки кроветворения при цитостатических миелодепрессиях, снижающих токсическое действие цитостатиков на кроветворение за счет стимуляции гранулоцито- и эритропоэза, является актуальной задачей.

Поставленная задача достигается тем, что в качестве средства, стимулирующего эритроидный и гранулоцитарный ростки кроветворения при цитостатических миелодепрессиях, используют спиртовую вытяжку (настойку) из высушенной измельченной надземной части лабазника вязолистного (Filipendula ulmaria L. Max.) при следующем соотношении компонентов, мас.%: надземная часть лабазника вязолистного - 10, спирт этиловый 40%-й - 90.

Спиртовая вытяжка (настойка) из высушенной измельченной надземной части лабазника вязолистного при следующем соотношении компонентов, мас.%: надземная часть лабазника вязолистного - 10, спирт этиловый 40%-й - 90 для приема внутрь известна в качестве противовоспалительного [7] и противоязвенного средства [8]. В научной медицине известно наружное применение горячего отвара цветков лабазника вязолистного в качестве противовоспалительного средства [9].

В проанализированной научно-медицинской и патентной литературе не известно применение спиртовой вытяжки (настойки) из высушенной измельченной надземной части лабазника вязолистного в качестве средства, стимулирующего эритроидный и гранулоцитарный ростки кроветворения при цитостатических миелодепрессиях.

Впервые показано, что спиртовая вытяжка (настойка) из высушенной измельченной надземной части лабазника вязолистного оказывает гемостимулирующее действие, а именно стимулирует эритроидный и гранулоцитарный ростки кроветворения при цитостатических миелодепрессиях.

Экспериментально установлена возможность использования спиртовой вытяжки (настойки) из высушенной измельченной надземной части лабазника вязолистного в качестве средства, стимулирующего эритроидный и гранулоцитарный ростки кроветворения при цитостатических миелодепрессиях, в медицине. Таким образом, предлагаемое решение соответствует критериям изобретения “новизна”, “изобретательский уровень”, “промышленно применимо".

Предлагаемое средство, стимулирующее эритроидный и гранулоцитарный ростки кроветворения при цитостатических миелодепрессиях, получают следующим образом: собранную в июле надземную часть лабазника вязолистного высушивают, измельчают до 3 мм. Взвешенное количество измельченной сухой надземной части лабазника вязолистного помещают в стеклянный, фарфоровый или эмалированный сосуд и заливают 40%-ным спиртом этиловым (при следующем соотношении компонентов: надземная часть лабазника вязолистного - 10%, спирт этиловый 40%-й - 90%), настаивают в темном прохладном месте в течение 10 дней. Затем спиртовую вытяжку (настойку) из высушенной измельченной надземной части лабазника вязолистного процеживают, растительный остаток хорошо отжимают, 40%-ным этиловым спиртом доводят извлечение до первоначального объема, отстаивают в прохладном месте в течение 3-х суток и затем фильтруют через обеззоленный фильтр. Хранят спиртовую вытяжку (настойку) из высушенной измельченной надземной части лабазника вязолистного в темном прохладном месте.

Конкретный пример получения средства. Собранную в июле надземную часть лабазника вязолистного высушивают, измельчают до 3 мм, 10 г измельченного сухого сырья заливают 90 миллилитрами 40%-ного этилового спирта и настаивают в темном месте в течение 10 дней. Затем спиртовую вытяжку (настойку) из высушенной измельченной надземной части лабазника вязолистного процеживают, растительный остаток хорошо отжимают, 40%-ным этиловым спиртом доводят извлечение до первоначального объема (90 мл), отстаивают в прохладном месте в течение 3-х суток, затем фильтруют через обеззоленный фильтр. Хранят спиртовую вытяжку (настойку) из надземной части лабазника вязолистного в темном прохладном месте.

Для доказательства нового свойства (стимуляция эритроидного и гранулоцитарного ростков кроветворения при цитостатических миелодепрессиях) спиртовой вытяжки (настойки) из высушенной и измельченной надземной части лабазника вязолистного было проведено исследование на модели цитостатической миелодепрессии. Эксперимент проведен на мышах линии СВА массой 18-20 г, в каждой группе было по 6 животных. Опытной группе спиртовую вытяжку (настойку) надземной части лабазника вязолистного при следующем соотношении компонентов, мас.%: надземная часть лабазника вязолистного - 10, спирт этиловый 40%-й - 90 в дозе 5 мл/кг начинали вводить внутрижелудочно через зонд за 5 дней до инъекции циклофосфана и продолжали вводить после назначения цитостатика ежедневно однократно вплоть до окончания эксперимента (табл.1, 2). В группе животных, взятых в качестве сравнения и получавших препарат сравнения (прототип), экстракт шлемника байкальского в дозе 1 мл/кг также начинали вводить внутрижелудочно через зонд за 5 дней до инъекции циклофосфана и продолжали вводить после назначения цитостатика ежедневно однократно вплоть до окончания эксперимента (табл.3, 4). Контрольная группа животных в эквивалентном режиме получала дистилированную воду. Циклофосфан вводили однократно внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (МПД) - 125 мг/кг. Животных забивали на 2, 4, 5, 6, 7, 8, 11-е сутки после введения цитостатика методом разрушения позвоночника в шейном отделе. Определяли общее количество миелокариоцитов в костном мозге бедра и общее количество лейкоцитов в периферической крови. На мазках костного мозга и периферической крови подсчитывали миело- и гемограмму [10].

Проведенное исследование достоверно показало, что однократное введение мышам циклофосфана (цитостатика из группы алкилирующих соединений, производных хлорэтиламинов [1]) приводило к развитию значительной гипоплазии костного мозга (табл.1). При этом максимальная миелодепрессия наблюдалась на 2-е сутки эксперимента. Анализ миелограмм показал, что в указанный период имело место глубокое подавление как гранулоцитопоэза, так и эритропоэза. В последующие сроки (4-8, 11-е сутки) у контрольных мышей, получавших один циклофосфан, отмечалось восстановление клеточности гранулоцитарного ростка гемопоэза до исходного уровня и выше (зрелые нейтрофильные лейкоциты на 6-8-е сутки и незрелые нейтрофильные гранулоциты на 4-7 сутки). Однако общее количество миелокариоцитов к концу эксперимента (11-е сутки) оказалось достоверно ниже, чем в интактной и опытной группах мышей. Число эритроидных клеток в костном мозге мышей, которым вводили один циклофосфан, оставалось существенно сниженным по сравнению с исходным на протяжении всего периода наблюдений (табл.1). Спиртовая вытяжка (настойка) из высушенной и измельченной надземной части лабазника вязолистного при следующем соотношении компонентов, мас.%: надземная часть лабазника вязолистного - 10, спирт этиловый 40%-й - 90 вызывала значительную стимуляцию процессов костномозгового кроветворения, подавленных циклофосфаном (табл.1). Так, общее содержание клеток костного мозга после назначения спиртовой вытяжки (настойки) надземной части лабазника вязолистного на 4-11-е сутки эксперимента было достоверно выше, чем у мышей, получавших один циклофосфан. Абсолютное содержание незрелых форм нейтрофильных гранулоцитов в костном мозге у животных, получавших спиртовую вытяжку (настойку) надземной части лабазника вязолистного, на 5, 6, 7, 11-е сутки наблюдения достоверно превышало аналогичные значения у животных, которым вводили один циклофосфан. На 4-6, 8-е сутки эксперимента значительно увеличивается в костном мозге у мышей опытной группы (введение циклофосфана на фоне назначения спиртовой вытяжки - настойки - надземной части лабазника вязолистного) число лимфоидных клеток (табл.1). Усиление процессов постцитостатической регенерации гранулоцитопоэза в костном мозге, обусловленное введением спиртовой вытяжки (настойки) надземной части лабазника вязолистного, сопровождалось увеличением (по сравнению с контрольной группой) общего количества лейкоцитов (5, 7, 11-е сутки), абсолютного числа сегментоядерных (5-7, 11-е сутки) и палочкоядерных (5, 6, 8-е сутки) нейтрофильных гранулоцитов и в периферической крови (табл.2). Общее количество клеток костного мозга у мышей, получавших препарат сравнения (прототип) было достоверно больше по сравнению с контролем, только на 5, 11-е сутки эксперимента (табл.3). Достоверное увеличение по сравнению с контролем числа незрелых и зрелых нейтрофильных гранулоцитов в костном мозге мышей, получавших препарат сравнения (прототип), было отмечено на только 8 и 11-е сутки эксперимента соответственно (табл.3). Повышение относительно контрольных животных общего числа лейкоцитов в периферической крови у животных в группе сравнения было зафиксировано на 11-е сутки, а количество палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов - на 8 и 5, 11-е сутки наблюдения соответственно (табл.4). Однако увеличение клеточности в костном мозге и периферической крови в группе мышей, получавших препарат сравнения (прототип), существенно не отличалось или было ниже от такового в опытной группе (табл.1, 2, 3, 4).

Со стороны эритропоэза отмечалось достоверное возрастание по сравнению с контролем в костном мозге мышей, получавших спиртовую вытяжку (настойку) надземной части лабазника вязолистного (табл.1). Кроме того, число эритрокариоцитов у мышей контрольной группы к концу эксперимента (11-е сутки) оказалось значительно ниже, чем в интактной и опытной группах. Количество эритроидных клеток в костном мозге у животных после назначения спиртовой вытяжки (настойки) надземной части лабазника вязолистного было достоверно выше контрольного уровня (один циклофосфан) на 4-6, 11-е сутки исследования (табл.1). Количество эритроидных клеток в костном мозге у животных после назначения препарата сравнения (прототипа) было достоверно выше контрольного уровня (один циклофосфан) на 4 и 11-е сутки исследования, достоверно не отличаясь от такового в опытной группе (табл.1, 3).

Таким образом, представленные данные убедительно свидетельствуют о наличии у спиртовой вытяжки (настойки) из высушенных измельченных надземной части лабазника вязолистного при следующем соотношении компонентов, мас.%: надземная часть лабазника вязолистного - 10, спирт этиловый 40%-й - 90 способности стимулировать процессы костномозгового гранулоцитопоэза и эритроцитопоэза при цитостатической гипоплазии костного мозга по эффективности, не уступая или превосходя препарат сравнения (прототип).

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Проценко Л.Д., Булкина З.П. Химия и фармакология синтетических противоопухолевых препаратов. Киев, 1985.

2. Гольдберг Е.Д. и др. Средство, избирательно стимулирующее грануломоноцитопоэз при гипоплазии костномозгового кроветворения, вызванного цитостатиком (Д-глюкуроновая кислота). Патент на изобретение №2020936 от 25.01.95.

3. Гольдберг Е.Д. и др. Гемостимулятор (байкалинат-лизин и пропиленгликоль). Патент на изобретение №2094045 от 24.07. 96.

4. Гольдберг Е.Д. и др. Лекарственное средство, стимулирующее эритроидный и гранулоцитарный ростки кроветворения при цитостатических миелодепрессиях. Патент на изобретение №2083201 от 10.07.97.

5. Гольдберг Е.Д. и др. Лекарственное средство, стимулирующее эритроидный росток кроветворения при цитостатических миелодепрессиях. Патент на изобретение №2061475 от 10.07.96.

6. Дыгай А.М. и др. Средство, стимулирующее гемопоэз при гипопластическом состоянии кроветворения, вызванного цитостатиком. Патент на изобретение №2052992 от 27.01.96.

7. Горбачева А.В. и др. Противовоспалительное средство. Заявка на изобретение №2002112856.

8. Горбачева А.В., Аксиненко С.Г., Зеленская К.Л., Нестерова А.В., Нашинский В.Г. Противоязвенные и улучшающие моторику кишечника свойства настойки из лабазника вязолистного. //Сибирский журнал гастроэнтерологии и гепатологии. - 2001. - №12, 13. - С.66-67.

9. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Т.1, 2. - М., 2000.

10. Гольдберг Е.Д., Дыгай А.М., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. Томск, 1992.

ТАБЛ.1
Сроки исследования (сутки)	Общее количество миелокариоцитов	Незрелые нейтрофильные гранулоциты	Зрелые нейтрофильные гранулоциты	Лимфоидные клетки	Эритроидные клетки
До воздействия	12,03±0,87	0,68±0,13	5,16±0,50	5,14±0,59	0,88±0,22
2
4
5
6
7
8
11
Примечание: 1. В числителе представлены данные контрольной группы (один циклофосфан), в знаменателе - значения опытной группы (циклофосфан на фоне введения настойки лабазника вязолистного). 2. * - различия достоверны по сравнению контролем; ** - различия достоверны по сравнению с интактными животными.

ТАБЛ.2
Сроки исследования, (сутки)	Общее количество лейкоцитов	Палочко-ядерные нейтрофильные гранулоциты	Сегменто-ядерные нейтрофильные гранулоциты	Лимфоциты	Моноциты
До воздействия	9,58±0,43	0,14±0,02	1,78±0,47	7,08±0,59	0,37±0,13
4
5
6
7
8
11
Примечание: 1. В числителе представлены данные контрольной группы (один циклофосфан), в знаменателе - значения опытной группы (циклофосфан на фоне введения настойки лабазника вязолистного). 2. * - различия достоверны по сравнению контролем; ** - различия достоверны по сравнению с интактными животными.

ТАБЛ.3
Сроки исследования (сутки)	Общее количество миелокариоцитов	Незрелые нейтрофильные гранулоциты	Зрелые нейтрофильные гранулоциты	Лимфоидные клетки	Эритроидные клетки
До воздействия	12,03±0,87	0,68±0,13	5,16±0,50	5,14±0,59	0,88±0,22
2
4
5
6
7
8
11
Примечание: 1. В числителе представлены данные контрольной группы (один циклофосфан), в знаменателе - значения опытной группы (циклофосфан на фоне введения настойки лабазника вязолистного). 2. * - различия достоверны по сравнению контролем; ** - различия достоверны по сравнению с интактными животными.

Применение 40% спиртовой настойки надземной части лабазника вязолистного в качестве средства, стимулирующего эритроидный и гранулоцитарный ростки кроветворения при цитостатических миелодепрессиях, при этом соотношение сырья к спирту составляет 1:9.