Вирусвакцина против инфекционной бурсальной болезни птиц
Владельцы патента RU 2272649:
Федеральное государственное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ ВНИИЗЖ) (RU)
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Вирусвакцина содержит вирусный материал из аттенуированного штамма, депонированного в коллекции ФГУ ВГНКИ под регистрационным номером "К-58 №122-ДЕП", и стабилизатор в соотношении, мас.%: 85-95; 5-15 соответственно. Штамм репродуцируется в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с титром инфекционной активности 5,5-7,0 Ig ЭИД50/0,2 см3. В качестве стабилизатора используют (отдельно или в комбинации) обезжиренное молоко, лактозу, желатозу, сахарозу и др. Вирусвакцина представляет собой сухую однородную массу розово-коричневого цвета в виде цилиндрической таблетки, растворимой в воде. Цыплят вакцинируют с 10-14-суточного возраста в дозе 100-1000 ЭИД50/мл методом выпаивания. Иммунитет у птиц наступает через 14-21 день после второй вакцинации и сохраняется в течение всего восприимчивого периода. 4 з.п. ф-лы, 4 табл.
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при разработке и изготовлении средств специфической профилактики инфекционной бурсальной болезни (ИББ) птиц.
ИББ птиц (инфекционный бурсит, болезнь Гамборо) - широко распространенная высококонтагиозная вирусная болезнь цыплят, преимущественно в возрасте 15-80 суток, характеризующаяся поражением фабрициевой сумки, почек, внутримышечными геморрагиями и диареей. ИББ поражает, в основном, β-лимфоциты фабрициевой сумки, вызывая атрофию ее лимфоидных фолликулов.
ИББ протекает остро, с характерной клиникой заболевания, и субклинически. Субклиническая форма имеет широкое распространение.
При острой форме болезни на первый план выступают клинические и патологоанатомические признаки, свойственные вторичным инфекциям, что создает затруднение при постановке диагноза. Поэтому проведение лабораторных исследований имеет решающее значение при постановке диагноза заболевания.
ИББ птиц зарегистрирована во всех странах мира. В последние годы ИББ получила широкое распространение в большинстве крупных птицеводческих хозяйств России. Применение отечественных и импортных биопрепаратов в очагах инфекции не обеспечило ожидаемого эффекта. Это объясняется тем, что их применению не предшествовало изучение антигенных свойств циркулирующих изолятов вируса, не определялись специфические антитела у птицы до и после вакцинации, а также уровень пассивного материнского иммунитета у цыплят. Не учитывались известная особенность возбудителя ИББ - его антигенная изменчивость в пределах одного серотипа, происходящая в различные временные промежутки и на разных территориях и зависящая от видового и породного состава птичьего поголовья, его иммунного статуса, и множество других факторов.
В связи с этим выбор вакцинного штамма вируса ИББ птиц должен проводиться с учетом антигенной структуры эпизоотического изолята и для приготовления вакцинных препаратов необходимо использовать производственные штаммы, обладающие наибольшей степенью гомологии в области антигенной детерминанты с эпизоотическими изолятами вируса ИББ.
Экономический ущерб от ИББ, обусловленный гибелью до 20-70% поголовья цыплят при остром течении заболевания, значительной выбраковкой птицы, снижением продуктивности, а также в результате возникновения вторичных инфекций, очень велик.
В настоящее время общепризнано, что единственно правильным и надежным направлением в борьбе с инфекцией является вакцинопрофилактика. Для специфической профилактики ИББ используют живые и инактивированные вакцины из гомологичных штаммов возбудителя инфекции, репродуцированного в различных чувствительных биологических системах.
К преимуществам живых вакцин против ИББ птиц следует отнести их низкую себестоимость, высокие эксплуатационные свойства, способность формировать высокий уровень напряженности иммунитета на более длительный срок (1).
Известна вирусвакцина против ИББ птиц, содержащая вирусный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма "Винтерфильд-2512", полученный в чувствительной биологической системе, и стабилизатор в эффективном соотношении (2, 3, 4).
Известна вирусвакцина против ИББ птиц, содержащая вирусный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма, полученный в чувствительной биологической системе, и стабилизатор в эффективном соотношении (5).
Известна вирусвакцина против ИББ птиц, содержащая вирусный материал из гомологичного возбудителю инфекции авирулентного штамма "ВНИВИП", полученный в культуре клеток фибробластов эмбрионов кур (ФЭК) с инфекционной активностью 5,5-6,0 Ig ТЦД50/см3, и стабилизатор в равном соотношении (6).
Известна вирусвакцина против ИББ птиц, содержащая вирусный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма "КБК" (ГКВ №2292), полученный в перевиваемой культуре клеток почки серо-зеленой мартышки ВГМ-70 с инфекционной активностью 7,5-8,0 Ig ТЦД50/см3, и стабилизатор в эффективном соотношении (7).
Известна вирусвакцина против ИББ птиц, содержащая вирусный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма "Винтерфилд" 84-ДЕП", полученный в культуре клеток ФЭК с инфекционной активностью 5,0-6,0 Ig ЭИД50/0,2 см 3 и стабилизатор в эффективном соотношении (8).
Известна вирусвакцина против ИББ птиц, содержащая вирусный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма "Био-92 №115-ДЕП", полученный в культуре клеток фибробластов эмбрионов перепелов или в культуре клеток ФЭК с инфекционной активностью 7,75-8,25 Ig ТЦД50/см3, и стабилизатор в эффективном соотношении (9).
Известна вирусвакцина против ИББ птиц, содержащая вирусный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма "КБК", полученный в 10-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью 5,5-6,5 Ig ТЦД50/см3, и стабилизатор в эффективном соотношении (10).
Общим недостатком известных вирусвакцин против ИББ птиц является их низкая антигенная и иммуногенная активность.
Наиболее близкой предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вирусвакцина против ИББ птиц, содержащая вирусный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма "БГ" №102-ДЕП", полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью 5,25-6,0 Ig ЭИД50/0,2 см3, и стабилизатор в эффективном соотношении (11).
По своей антигенной и иммуногенной активности вирусвакцина из штамма "БГ" №102-ДЕП" превосходит все известные аналогичные биопрепараты, применяемые на территории Российской Федерации и стран СНГ (12).
Однако вирусвакцина-прототип имеет недостаток, состоящий в том, что она индуцирует редукцию бурсы и незначительную иммунодепрессию.
В задачу создания настоящего изобретения входило получить безвредную вирусвакцину против ИББ птиц, обладающую высокой антигенной и иммуногенной активностью.
Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в повышении антигенной и иммуногенной активности и безвредности вирусвакцины против ИББ птиц.
Указанный технический результат достигнут созданием вирусвакцины против ИББ птиц, охарактеризованной следующей совокупностью признаков:
1. Вирусвакцина против ИББ птиц.
2. Вирусный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма, полученный в чувствительной биологической системе, в эффективном количестве.
3. Вирусный материал из штамма "К-58 №122-ДЕП" вируса ИББ птиц.
4. Вирусный материал из штамма "К-58 №122-ДЕП", полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,5 Ig ЭИД50/0,2 см3.
5. Вирусный материал из штамма "К-58 №122-ДЕП", полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,5 Ig ЭИД50/0,2 см 3, в количестве 85,0-95,0 мас.%.
6. Стабилизатор.
7. Стабилизатор в количестве 5,0-15,0 мас.%.
В качестве стабилизатора можно использовать (отдельно или в комбинации) обезжиренное молоко, лактозу, желатозу, сахарозу и др.
8. Вирусный материал из штамма "К-58 №122-ДЕП", полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,5 Ig ЭИД50/0,2 см3, и стабилизатор в соотношении, мас.%:
| Вирусный материал | 85,0-95,0 |
| Стабилизатор | 5,0-15,0 |
Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые испрашивается правовая охрана:
1. Вирусвакцина против ИББ птиц.
2. Вирусный материал из штамма "К-58 №122-ДЕП", полученный в чувствительной биологической системе.
3. Вирусный материал из штамма "К-58 №122-ДЕП", полученный в чувствительной биологической системе, в эффективном количестве.
4. Стабилизатор.
5. Стабилизатор в эффективном количестве.
6. Вирусный материал из штамма "К-58 №122-ДЕП", полученный в чувствительной биологической системе, и стабилизатор в эффективном соотношении.
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования:
1. Вирусный материал из штамма "К-58 №122-ДЕП", полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,5 Ig ЭИД50/0,2 см 3.
2. Вирусный материал из штамма "К-58 №122-ДЕП", полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,5 Ig ЭИД50/0,2 см 3, в количестве 85,0-95,0 мас.%.
3. Стабилизатор в количестве 5,0-15,0 мас.%.
4. Вирусный материал из штамма "К-58 №122-ДЕП", полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,5 Ig ЭИД50/0,2 см3, и стабилизатор в соотношении, мас.%:
| Вирусный материал | 85,0-95,0 |
| Стабилизатор | 5,0-15,0 |
Признаками изобретения, характеризующими предлагаемую вакцину и совпадающими с признаками прототипа, в том числе родовое понятие, отражающее назначение, являются:
1. Вирусвакцина против ИББ птиц.
2. Вирусный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма, полученный в чувствительной биологической системе.
3. Стабилизатор.
По сравнению с вирусвакциной-прототипом существенным отличительным признаком предлагаемой вирусвакцины является то, что она содержит эффективное количество вирусного материала из штамма "К-58 №122-ДЕП" вируса ИББ птиц.
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования:
1. Вирусный материал из штамма "К-58 №122-ДЕП", полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,5 Ig ЭИД50/0,2 см 3.
2. Вирусный материал из штамма "К-58 №122-ДЕП", полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,5 Ig ЭИД50/0,2 см 3, в количестве 85,0-95,0 мас.%.
3. Стабилизатор в количестве 5,0-15,0 мас.%.
4. Вирусный материал из штамма "К-58 №122-ДЕП", полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,5 Ig ЭИД50/0,2 см 3, и стабилизатор в соотношении, мас.%:
| Вирусный материал | 85,0-95,0 |
| Стабилизатор | 5,0-15,0 |
По сравнению с вирусвакциной-прототипом вирусвакцина против ИББ птиц на основе штамма "К-58 №122-ДЕП" обладает более высокой антигенной и иммуногенной активностью, не вызывает иммуносупрессии, т.е. является безвредной, и способна преодолевать материнские антитела против ИББ.
Достижение технического результата от использования предлагаемой вирусвакцины объясняется тем, что в ее состав введен вирусный материал из нового аттенуированного вакцинного штамма "К-58 №122-ДЕП", гомологичного возбудителю инфекции.
Исходный вирус (авторское наименование изолята "К-58") для получения штамма "К-58 №122-ДЕП" выделен из фабрициевых сумок больных бройлеров на птицефабрике "Васильевская" Пензенской области в 1994 году. Вакцинный штамм "К-58 №122-ДЕП" получен путем многократных последовательных пассажей исходного изолята на 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур и SPF-цыплятах.
Штамм "К-58" депонирован во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Федерального государственного учреждения "Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГУ ВГНКИ) МСХ РФ 1 июня 2004 года под регистрационным номером - штамм "К-58 №122-ДЕП" вируса ИББ птиц.
По сравнению со штаммом "БГ" №102-ДЕП" штамм "К-58 №122-ДЕП" не вызывает иммуносупрессии и обладает более высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации. Экспериментально подтверждена возможность его использования для приготовления вирус-вакцины против ИББ птиц.
Штамм "К-58 №122-ДЕП" вируса ИББ птиц характеризуется следующими признаками и свойствами.
Морфологические свойства
Штамм "К-58 №122-ДЕП" вируса ИББ птиц относится к семейству Birnaviridae, роду Avibimavirus, серотипу I и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ИББ: форма вириона икосаэдрическая, размер вириона 58-60 нм. Капсид Т13, оболочка отсутствует.
Антигенные свойства
По своим антигенным свойствам штамм "К-58 №122 - ДЕП" относится к сероварианту I. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности. При вакцинации вирус индуцирует образование специфических антител, выявляемых РДП в разведении 1:4-1:64, в ИФА-1:400-1:10000 и более, при гипериммунизации в РДП до 1:4096 и выше, в ИФА>1:10000. Для определения генотаксономической гомологии вакцинного штамма "К-58 №122-ДЕП" и полевых изолятов вируса ИББ сравнили вариабельные области VP2 полевых изолятов (37 образцов, выделенных в 1993-1996 гг. на территории РФ и странах СНГ) и вакцинных штаммов (7 образцов коммерческих живых вакцин). Для этого в ПЦР амплифицировали, используя специфические олигонуклеотидные праймеры и термостабильную Taq-ДНК-полимеразу, вариабельную область гена VP2, кодирующую основной конформационный эпитоп. Методом прямого секвенирования определяли нуклеотидную последовательность этого наиболее важного в проявлении антигенных свойств участка генома полевых изолятов и вакцинного штамма ИББ. Установлено, что большинство полевых изолятов вируса ИББ, выделенных на птицефабриках России, антигенно отличаются от импортных вакцинных штаммов фирм "Рон-Мерье" (Франция), "Интервет" (Голландия), "Солвей-Дюфар" (США), "Сафит" (Израиль) на 5-8% и имеют структуру, близкую к вакцинному штамму "К-58 №122-ДЕП".
Биотехнологические характеристики
Штамм "К-58 №122 - ДЕП" предназначен для изготовления живой и инактивированной вакцин и диагностических биопрепаратов. Штамм "К-58 №122-ДЕП" репродуцируется в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур при температуре 37,7°С и влажности 55-64%. В течение 72-96 часов инкубирования вирус накапливается до 5,5-7,0 Ig ЭИД50/0,2 см 3.
Хемо- и генотаксономическая характеристика
Штамм "К-58 №122-ДЕП" является РНК-содержащим вирусом с мол. массой РНК 2,16×106 Da. Нуклеиновая кислота является 2-нитевой, 2-сегментной (А и В). Вирус имеет белковую оболочку, образованную 5 видами белков (VP1, VP2, VP3, VP4 и VP5):
VP1 - РНК-зависимая РНК-полимераза;
VP2, VP3 - структурные белки;
VP4 - протеаза;
VP5 - не идентифицирован.
Липиды отсутствуют.
Штамм "К-58 №122 - ДЕП" проявляет генетическую стабильность. Основная масса мутаций сосредоточена в области РНК, кодирующей VP2. Мутации, ведущие к замене аминокислот, определяют антигенную вариабельность VP2.
Штамм "К-58 №122-ДЕП" проявляет высокую степень гомологии (98%) по сравнению с многочисленной группой изолятов (30), выделенных на территории РФ в 1993-1996 г.г.
Физические свойства
Масса вириона составляет 55,0×106 Da. Коэффициент седиментации 460S в градиенте сахарозы. Плавучая плотность 1,33-1,34 г/см3 в градиенте CsCl.
Устойчивость к внешним факторам
Штамм "К-58 №122 - ДЕП" устойчив к растворителям (эфиру, хлороформу) и детергентам, чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, γ-облучению и высыханию.
Дополнительные признаки и свойства
Иммуногенная активность - 100%.
Реактогенность - отсутствует.
Патогенность - отсутствует.
Вирулентность - отсутствует.
Онкогенность - отсутствует.
Контагиозность - отсутствует.
Штамм "К-58 №122-ДЕП" является стабильным и не вызывает иммуносупрессии.
По безопасности и иммуногенности штамм "К-58 №122-ДЕП" полностью отвечает требованиям О.I.E. (МЭБ).
Комиссионные испытания подтвердили полное соответствие штамма "К-58 №122-ДЕП" предъявляемым требованиям и явились основанием для его депонирования во Всероссийской государственной коллекции микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, ФГУ "Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГУ ВГНКИ) МСХ РФ 1 июня 2004 года под регистрационным номером - штамм "К-58 №122-ДЕП" вируса ИББ птиц.
На основании приведенных сведений можно утверждать, что штамм "К-58 №122-ДЕП" вируса ИББ птиц по антигенному и иммуногенному спектрам является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным вариантом вируса ИББ птиц.
Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации, и выявление источников, содержащих сведения об аналогах предлагаемого изобретения, позволил установить, что заявитель не обнаружил источник, характеризующийся признаками, тождественными (идентичными) всем существенным признакам заявленного изобретения. Определение из перечня выявленных аналогов прототипа как наиболее близкого по совокупности существенных признаков аналога позволило установить совокупность существенных по отношению к усматриваемому заявителем техническому результату отличительных признаков предлагаемой вирусвакцины, изложенных в независимом пункте формулы изобретения.
Следовательно, заявляемое изобретение соответствует условию патентоспособности "новизна".
Для проверки соответствия предлагаемой вакцины условию патентоспособности "изобретательский уровень" проведен дополнительный поиск известных решений для выявления признаков, включенных в отличительную часть независимого пункта формулы изобретения. Результаты поиска показали, что предлагаемая вакцина не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, изложенного в соответствующем разделе описания (не выявлены решения, имеющие признаки, совпадающие с отличительными признаками предлагаемого изобретения), а также не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками предлагаемого изобретения преобразований для достижения технического результата.
Следовательно, предлагаемая вакцина соответствует условию патентоспособности "изобретательский уровень".
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его исполнения, которые не ограничивают объем изобретения.
Пример 1
Матровую расплодку вируса из штамма "К-58 №122-ДЕП" в эмбрионах SPF-кур получают следующим образом. На границе подскорлупной оболочки и хориоаллантоисной оболочки (ХАО) делают насечку, не повреждая ХАО, и затем с помощью шприца вводят вируссодержащий материал в количестве 0,2 см3 на ХАО. Отверстие в скорлупе заклеивают лейкопластырем. Инфицированные эмбрионы инкубируют при температуре 37,7°С в течение 48-120 часов. Павшие эмбрионы разделывают, замораживают при температуре минус 40°С. Вируссодержащий материал размораживают, измельчают, экстрагируют при температуре 4°С в течение 45 минут, дважды промораживают - оттаивают, добавляют фосфатный буфер рН 7,5, центрифугируют в течение 20 минут при 3000 об/мин. Полученную вируссодержащую жидкость используют в качестве матровой расплодки.
Пример 2
На первом этапе готовят матровый материал из штамма "К-58 №122 - ДЕП" вируса ИББ птиц так, как описано в примере 1. Полученную вируссодержащую жидкость используют для массового заражения 9-11-суточных эмбрионов SPF-кур. Вирусный материал в количестве 0,2 см3 вводят на ХАО и инкубируют при температуре 37,7°С в течение 48-120 часов. Павшие эмбрионы разделывают, замораживают при температуре минус 40°С и полученное сырье используют для изготовления вакцины. Вируссодержащий материал размораживают, измельчают на коллоидной мельнице, экстрагируют в течение 45 минут при температуре 4°С, дважды промораживают - оттаивают, добавляют фосфатный буфер рН 7,5 и центрифугируют в течение 20 минут при 3000 об/мин. Вируссодержащую надосадочную жидкость осторожно сливают в стерильных условиях, а затем добавляют стабилизатор, в качестве которого можно использовать (отдельно или в комбинации) обезжиренное молоко, лактозу, желатозу, сахарозу и др., расфасовывают во флаконы, промораживают при температуре минус 60-80°С и подвергают лиофилизации. Лиофилизованный материал закупоривают под вакуумом и подвергают исследованию на иммуногенность (на 14-суточных SPF- цыплятах) и на безвредность (на 30-суточных SPF-цыплятах).
Полученная вакцина представляет собой сухую однородную массу розово-коричневого цвета в виде цилиндрической таблетки, растворимой в воде. При растворении в воде до исходного объема она превращается в стойкую однородную суспензию розово-коричневого цвета.
Вакцину применяют в хозяйствах, где регистрируют клинические и патологоанатомические признаки проявления ИББ. Цыплят вакцинируют с 10-14-суточного возраста с интервалом 10-14 суток в дозе 100-1000 ЭИД50/см3 методом выпаивания.
Иммунитет у птиц наступает через 14-21 сутки после второй прививки и сохраняется в течение всего восприимчивого к ИББ периода.
Полученная вакцина при титровании на 9-11-суточных SPF-цыплятах имеет титр 5,5-7,0 Ig ЭИД50/0,2 см 3.
Полученная вакцина имеет оптимальный компонентный состав, мас.%:
| Вирусный материал | 85,0-95,0 |
| Стабилизатор | 5,0-15,0 |
Содержание вирусного материала в диапазоне 85,0-95,0
мас.% представляет собой эффективное количество антигена в предлагаемой вакцине.
Пример 3
Проведены испытания антигенной активности вирусвакцины против ИББ птиц, изготовленной так, как описано в примере 2, и содержащей, мас.%:
| Вирусный материал из штамма | |
| "К-58 №122-ДЕП", полученный | |
| в 10-суточных эмбрионах SPF-кур | |
| с инфекционной активностью 7,0 Ig ЭИД50/0,2 см3 | 85,0 |
| Стабилизатор | 15,0 |
Определение антигенной активности полученной вирусвакцины провели на 30 цыплятах, которым орально ввели по одной иммунизирующей дозе препарата. Через 21 день после однократной вакцинации от цыплят отбирали пробы крови, получали сыворотки с последующим их исследованием на наличие антител против ИББ методом ИФА. Средний уровень антител после однократной иммунизации цыплят полученной вирусвакциной составил 1:4210, что более чем в 2 раза превысило минимальный положительный показатель, предусмотренный во Временном наставлении по применению диагностикума для ИББ птиц.
Пример 4
Проведены испытания иммуногенной активности вирусвакцины против ИББ птиц, изготовленной так, как описано в примере 2, и содержащей, мас.%:
| Вирусный материал из штамма | |
| "К-58 №122-ДЕП", полученный | |
| в 10-суточных эмбрионах SPF-кур | |
| с инфекционной активностью 7,0 Ig ЭИД50/0,2 см3 | 85,0 |
| Стабилизатор | 15,0 |
Определение иммуногенной активности вирусвакцины проводили на цыплятах. Для этого предварительно готовили 10-кратные разведения вакцины и каждым разведением иммунизировали по 10 цыплят путем выпаивания. Иммуногенную активность лиофилизованной вакцины оценивали по результатам контрольного заражения цыплят в опытной и контрольной группах через 14 суток после введения вакцины. Опыты проводили трехкратно. Результаты исследований приведены в таблице 1.
Данные таблицы 1 свидетельствуют о том, что разведенная в 1000 раз вакцина обеспечивает 100% защиту цыплят, а выпаивание вакцины с водой является эффективным способом массовой вакцинации птиц.
Пример 5
Проведены испытания иммуногенной активности вирусвакцины против ИББ птиц, изготовленной так, как описано в примере 2, и содержащей, мас.%:
| Вирусный материал из штамма | |
| "К-58 №122-ДЕП", полученный | |
| в 10-суточных эмбрионах SPF-кур | |
| с инфекционной активностью 6,0 Ig ЭИД50/0,2 см3 | 90,0 |
| Стабилизатор | 10,0 |
Определение иммуногенной активности вирусвакцины проводили на цыплятах. Для этого предварительно готовили 10-кратные разведения вакцины и каждым разведением иммунизировали по 10 цыплят путем выпаивания. Иммуногенную активность лиофилизованной вакцины оценивали по результатам контрольного заражения цыплят в опытной и контрольной группах через 14 суток после введения вакцины. Опыты проводили трехкратно. Результаты исследований приведены в таблице 2.
Данные таблицы 2 свидетельствуют о том, что разведенная в 1000 раз вакцина обеспечивает 100% защиту цыплят, а выпаивание вакцины с водой является эффективным способом массовой вакцинации птиц.
Пример 6
Проведены испытания иммуногенной активности вирусвакцины против ИББ птиц, изготовленной так, как описано в примере 2, и содержащей, мас.%:
| Вирусный материал из штамма | |
| "К-58 №122-ДЕП" вируса ИББ птиц, | |
| полученный в 10-суточных эмбрионах SPF-кур | |
| с инфекционной активностью 5,5 Ig ЭИД50/0,2 см3 | 95,0 |
| Стабилизатор | 5,0 |
Определение иммуногенной активности вирусвакцины проводили на цыплятах. Для этого предварительно готовили 10-кратные разведения вакцины и каждым разведением иммунизировали по 10 цыплят путем выпаивания. Иммуногенную активность лиофилизованной вакцины оценивали по результатам контрольного заражения цыплят в опытной и контрольной группах через 14 суток после введения вакцины. Опыты проводили трехкратно. Результаты исследований приведены в таблице 3.
Данные таблицы 3 свидетельствуют о том, что разведенная в 1000 раз вакцина обеспечивает 100% защиту цыплят, а выпаивание вакцины с водой является эффективным способом массовой вакцинации птиц.
Пример 7
В лабораторных экспериментах и в условиях птицехозяйств Российской Федерации проведена сравнительная оценка иммуногенной активности отечественных и импортных живых вакцин против ИББ и показано, что вирусвакцина сухая против ИББ из штамма "БГ" №102-ДЕП является более эффективным препаратом по сравнению с другими отечественными и импортными препаратами. Поэтому оценку иммуногенной активности вирусвакцины против ИББ птиц из штамма "К-58 №122-ДЕП" провели в сравнении с вирусвакциной-прототипом.
Результаты сравнительной оценки иммуногенной активности испытуемых препаратов представлены в таблице 4.
Данные таблицы 4 свидетельствуют о том, что вирусвакцина из штамма "К58 №122-ДЕП" является более эффективной, так как она в 1,5 раза выше индуцирует титр антител у привитой птицы по сравнению с вирусвакциной из штамма "БГ" №102-ДЕП".
Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемого изобретения следующей совокупности условий:
- вирусвакцина из штамма "К-58 №122-ДЕП" вируса ИББ птиц, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;
- для предлагаемого изобретения в том виде, как оно охарактеризовано в независимом пункте изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью описанных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;
- вирусвакцина из штамма "К-58 №122-ДЕП" вируса ИББ, полученная в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает по сравнению с вирусвакциной-прототипом более высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью, не вызывает иммуносупрессии и расширяет арсенал вирусвакцин против ИББ птиц, обеспечивающих эффективную защиту поголовья птиц от возбудителя ИББ на территории Российской Федерации.
Следовательно, предлагаемое изобретение соответствует условию патентоспособности "промышленная применимость".
Источники информации
1. Сюрин В.Н. и соавт. Вирусные болезни животных. - М., ВНИТИБП, 1998, 65-84.
2. Winterfild R.W. Immunity response to the infectious bursal agent //Avian Dis., 1969, 13, 548-557.
3. Winterfild R.W. et al. Immune response and pathogenecity of different strains of infectious bursal disease virus applied as vaccines //Avian Dis., 1978, 22, 4, 721-731.
4. Winterfild R.W. et al. Characteristics of apparent derivates of the 2512 strain of infectious Bursal Disease virus when used as vaccines //Avian Dis., 1981, 25, 4, 900-910.
5. Пат. США №5064646, 424-89, 12.11.91 г.
6. Авт. свид. СССР №1824443, С 12 N 7/00, А 61 К 39/12, 30.06.93 г.
7. Пат. РФ №2054038, С 12 N 7/00, 10.02.96 г.
8. Пат. РФ №2127604; А 61 К 39/12, С 12 N 7/00; 20.03.99 г.
9. Пат. РФ №2191825; С 12 N 7/00, А 61 К 39/12; 27.10.02 г.
10. Пат. РФ №2205021; А 61 К 39/12, С 12 N 7/00; 27.05.03 г.
11. Пат. РФ №2127602; А 61 К 39/12, С 12 N 7/00; 20.03.99 г. (прототип).
12. Скутарь И.Г. и соавт. Профилактика инфекционных болезней птиц в условиях республики Молдова //Ветеринария, 1997, 2, 12-13.
| Таблица 1 Иммуногенная активность вирусвакцины против ИББ птиц из штамма "К-58 №122-ДЕП" | |||||
| №№ п/п | Разведение вакцины | Вакцинировано | Результаты контрольного заражения | ||
| заражено | заболело | % сохранения | |||
| Первый опыт | |||||
| 1 | 10-1 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 2 | 10-2 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 3 | 10-3 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 4 | 10-4 | 10 | 10 | 1 | 90 |
| 5 | Контроль | 10 | 10 | 10 | 0 |
| Второй опыт | |||||
| 1 | 10-1 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 2 | 10-2 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 3 | 10-3 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 4 | 10-4 | 10 | 10 | 1 | 90 |
| 5 | Контроль | 10 | 10 | 10 | 0 |
| Третий опыт | |||||
| 1 | 10-1 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 2 | 10-2 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 3 | 10-3 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 4 | 10-4 | 10 | 10 | 1 | 90 |
| 5 | Контроль | 10 | 10 | 10 | 0 |
| Таблица 2 Иммуногенная активность вирусвакцины против ИББ птиц из штамма "К-58 №122-ДЕП" | |||||
| №№ п/п | Разведение вакцины | Вакцинировано | Результаты контрольного заражения | ||
| заражено | заболело | % сохранения | |||
| Первый опыт | |||||
| 1 | 10-1 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 2 | 10-2 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 3 | 10-3 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 4 | 10-4 | 10 | 10 | 1 | 90 |
| 5 | Контроль | 10 | 10 | 10 | 0 |
| Второй опыт | |||||
| 1 | 10-1 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 2 | 10-2 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 3 | 10-3 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 4 | 10-4 | 10 | 10 | 1 | 90 |
| 5 | Контроль | 10 | 10 | 10 | 0 |
| Третий опыт | |||||
| 1 | 10-1 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 2 | 10-2 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 3 | 10-3 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 4 | 10-4 | 10 | 10 | 1 | 90 |
| 5 | Контроль | 10 | 10 | 10 | 0 |
| Таблица 3 Иммуногенная активность вирусвакцины против ИББ птиц из штамма "К-58 №122-ДЕП" | |||||
| №№ п/п | Разведение вакцины | Вакцинировано | Результаты контрольного заражения | ||
| заражено | заболело | % сохранения | |||
| Первый опыт | |||||
| 1 | 10-1 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 2 | 10-2 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 3 | 10-3 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 4 | 10-4 | 10 | 10 | 1 | 90 |
| 5 | Контроль | 10 | 10 | 10 | 0 |
| Второй опыт | |||||
| 1 | 10-1 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 2 | 10-2 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 3 | 10-3 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 4 | 10-4 | 10 | 10 | 1 | 90 |
| 5 | Контроль | 10 | 10 | 10 | 0 |
| Третий опыт | |||||
| 1 | 10-1 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 2 | 10-2 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 3 | 10-3 | 10 | 10 | 0 | 100 |
| 4 | 10-4 | 10 | 10 | 1 | 90 |
| 5 | Контроль | 10 | 10 | 10 | 0 |
| Таблица 4 Сравнительная оценка иммуногенной активности вирусвакцин против ИББ птиц | |||||
| №№ п/п | Наименование штаммов | ||||
| "БГ" №102-ДЕП" | "К-58 №122-ДЕП" | ||||
| Титр антител | Средн. титр | Титр антител | Средн. титр | ||
| 1 | 1:7177 | 1:8872 | |||
| 2 | 1:2641 | 1:7928 | |||
| 3 | 1:5448 | 1:5528 | |||
| 4 | 1:3444 | 1:5779 | |||
| 5 | 1:3819 | 1:4067 | 1:8289 | 1:6529 | |
| 6 | 1:2188 | 1:8133 | |||
| 7 | 1:2218 | 1:2847 | |||
| 8 | 1:4396 | 1:7641 | |||
| 9 | 1:1538 | 1:3338 | |||
| 10 | 1:7808 | 1:6941 |
1. Вирусвакцина против инфекционной бурсальной болезни (ИББ) птиц, содержащая вирусный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма, полученный в чувствительной биологической системе, и стабилизатор, отличающаяся тем, что в качестве вирусного материала она содержит вирусный материал из штамма "К-58 №122-ДЕП" вируса ИББ птиц (Bursitis infectiosa gallinae), семейства Bumaviridae, рода Avibimavirus, серотипа 1, коллекция ФГУ ВГНКИ "К-58 №122-ДЕП", в эффективном количестве.
2. Вирусвакцина по п.1, отличающаяся тем, что она содержит вирусный материал из штамма "К-58 №122-ДЕП" вируса ИББ птиц, полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,5 Ig ЭИД50/0,2 см3.
3. Вирусвакцина по п.2, отличающаяся тем, что она содержит вирусный материал из штамма "К-58 №122-ДЕП" вируса ИББ птиц, полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,5 Ig ЭИД50/0,2 см3, в количестве 85,0-95,0 мас.%.
4. Вирусвакцина по п.1, отличающаяся тем, что она содержит стабилизатор в количестве 5,0-15,0 мас.%.
5. Вирусвакцина по п.1, отличающаяся тем, что она содержит вирусный материал из штамма "К-58 №122-ДЕП" вируса ИББ птиц, полученный в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с инфекционной активностью, по меньшей мере, 5,5 Ig ЭИД50/0,2 см3, и стабилизатор в соотношении, мас.%:
| Вирусный материал | 85,0-95,0 |
| Стабилизатор | 5,0-15,0 |
