Способ получения ферментных препаратов каталазы
Ввваоеезнаю йа-.еитмт)-тех оскс)л
О П И" С - Õ"Í И Е
ИЗОБРЕТЕНИЯ
237ОЗО
Союз Советских
Социалистических
Республик
Зявilñif÷îñ от явт. Свl!;Ie!eëbñтв 1 лЪ! (л. Ga, 14
Заявлено 12Л |.! 967 (№ 1163328/28-13) с присоединением заявк!! М
Комитет по делам изобретений и открытиИ прн Совете Министров
СССР
ЧПК С 121;
Пр оритст
Опубликовано 12.11.1969. Бюллетень ¹ 8
Дата оиуб)ликов яьп!л описапил 25Л 1.1969
ДК 663.11:576.8.093.1 (088.8) Авторы изобретенил
Э. С. Адаменко, В. А. Витковская и Т. П. 1(а,пивайко
Заявитель Украинский научно-исследовательский институт спиртовой и ликероводочной промышленности
СПОСОБ П О Л У Ч Е |.1 И Я Ф Е Р Ч Е 1|Т И Ъ | Х П Р Е П А Р А Т О В |(А Т А Л А 3 Ъ1 и ГЛ|О1(ОЗОО1(СИДАЗЪ|
Известен способ получения фермситиык npeiI3P2T0f3 1" 2ТЯЛЯЗЫ !f ГЛЮКОЗОО!.СИДЯЗЫ ИЗ К1 ЛЬтуральной жидкости илесневого гриба Påïicijjjf.Im vif3jc Pjcjopj. el Hijaj, лв Is!Iomегоcsi продуцеитом эти.; ферментов, путем адсорбц. » iia
K30;I!file катя:1 язы из кчльт p2;Ib:IÎII ккидкости, отделения Ядсорбе11та с ката )азои цсfITpff))cj)ifроваиисч, выделения каталязы эл!Оцис)! и
Ося?кденисм спирто)1, ядсорбции также 1!3 30ЛИ !Е 1 ЛIОКОЗООКСИДЯЗЫ ИЗ ОСТЯБИIСГОСЛ ИСНТ1)11! ругата с последующим выделен,ie)I се !)дии)! из известнык способов, например э IIOlllfeli u осаждением ацетоном.
Для одновременного полу ICII!I51 наряду с фЕРМЕНТЯМИ КЯТЯЛ33011 ii Г )IO!<03001 ÑÈ.IЯЗОИ глюконовой к;1слоты, накапливающейся в
КУЛЬТУРЯ?ЛЬНОИ ЖИДКОСТИ В П))ОЦСССЕ 1Л ЛЬТИВИрования продуцента этик ферментов в виде сс кальциевой соли, а также уменьшения производственнык потерь центрифугат, получен!If III после отделения глюкозооксидазы с адсорбснтом, обрабатывают известковым молоком для нейтрал!!Зац) и глюконовой кислоты с образован!!еъ1 при этом ее кальциевой соли. Избыток известкового молока отделяют от осадка, а последний промывак)т водой. Г1олученний фильтрат вместе с промывными водами упаривают под вакуумом с последующич выделением из него глюконата кальция одним из известных способов, например, кристаллизацией, Способ получения фсрментиык препаратов кaòà",aaû и гл!о!.озоок.идязы зяклю iacTc» и
cледующсм.
Ьна la le. 110лучают зассвну10 культуру. Дl?l этого плес !cab!if грио PCI)icijjif! I!T ч!!31с 1)i 42 чг с, кi льтивируlOT на питат - льн О!! cðñac, со feржяц1сй 0,5- — 0.7"„к к; j)) 3::IOI 0 эксf рякта из л лик веществ, 2",, са.,ярозы и 0,2 „. КХОз. Полученную таким образом культуру засевают в ферме!!тационную среду Bij31 (плотность засева 4 — 8"„). Процесс фсрмснтации осущсствллют llplf дифференцированном яэрировяиии среды и температуре 26 — 30-С в течение 72 — 97 час. ПО ОкончЯнии II)el))fell тяпllil кульl) j), l,!ül! Iл ?кидко Tb содерж)п по 80 — 100 сд,с!ьi гл окозооксидазы и кятялязы, 2,5 — 3.0"„фруктозы, 1,8 — 2,3",о глюконовой кислоты, рибофлявии, 20 аминокислоты и пр. 8 кчльтч!?2льнуlo жидкость ИИОс51T 0,0 „кяолина и сорбируют каталазу при псрсмешивании в течение 15.1lwil. Сорбент с адсорбироваиным ферментом о!деллют цеитрифугирова25 иис ч. j(отделенному каолину с адсо!)бированной ка!2 1330iI;1002!>35IIOT 0,2 11 фосфятиый буфер ;1О jil I 7 .!1 Oc), 1цсcTI,151!OT э 110lllll0 катя 133I I, l lогlчч< пнуlo с)leeü .cи г1)иф5 !Зlру!От Д 151 01 Дс30 лен1151 ОГ3Дкя, 2 ffa элloятя ОсaждяlОт катал lзу ! зоп ропилоьыч с ииртом. 237080 Предмет изобретения Составитель Т. Полянская Техред Л. Я. Левина Корректор Г. И. Плешакова Реда кто р С. Сюткн на Заказ 1299, 4 Тираж 480 Подписное ЦН11ИП1; Комитета по делам изобретений и откргягий при Совете Министров СССР Москва, Центр, пр. Серова, д. 4 Типография, пр. Сапунова, 2 Центрифугат, полученный после сорбции каталазы, подкисляют до рН 3,4, вносят в него 2в о каолина и сорбируют глюкозооксидазу в стандартных условиях. Каолин с адсорбированной ггиокозооксидазой отделяют от жидкости центрифугированием. Полученный при этом центрифугат, содержащий 22% глюконовой кислоты, 2,6,. и фруктозы, 10,02% аминокислоты, используется для выделения t.ëþêîíàòà кальция. Глюкозооксидазу элюируют с сорбента 0,2 М фосфатным буфером (рН смеси 6,3), из элюата отделяют каолин центрифугированием, а глюкозооксидазу осаждают на холоду этиловым спиртом. Центрифугат (pH 3,4 — 3,6), полученный после выделения ферментов, обрабатывают известковым молоком для нейтрализации глюконовой кислоты, при этом образуется кальциевая соль глюконовой кислоты. Целесообразно на l л фугата вносить 0,3 л известкового молока до рН 6 8 — 7 О. Избыток мела отфильтровывают, осадок на фильтре промывают водой температуры 70— 80 С до тех пор, пока в промывных водах не будут содержаться ионы кальция. Фильтрат и промь вные воды смешивают и упаривают под вакуумом при температуре 60 — 62 С до содержания 55 — 60% сухих веществ. Затем из упаренной жидкости выделяют глюконат кальция одним из известных способов, например кристаллизацией. Способ получения ферментных препаратов каталазы и глюкозооксидазы из культураль5 ной жидкости плесневого гриба Peiiicil)imam йа1е РЫор!. et В11а1, являющегося продуцентом этих ферментов, путем адсорбции íà каолиие каTàëàçû из культуральной жидкости, отделения адсорбента с каталазой цеитрифуги1р рованием, выделения каталазы элюцией и осаждением спиртом, адсорбции также на каолине глюкозооксидазы из оставшегося центрифугата с последующим выделением ее одним из известных способов, например элюцией и осаждением ацетоном, итличающийсч. тем, что, с целью одновременного получения наряду с каталазой и глюкозооксидазой глюконовой кислоты, накапливающейся в культуральной жидкости в процессе культивирования продуцен га этих ферментов в виде ее кальциевой соли, а также уменьшения производственных потерь, центрифугат, полученный после отделения глюкозооксидазы с адсорбентом, обрабатывают известковым молоком для нейтрализации глюконовой кислоты с образованием при этом ее кальциевой соли; избыток известкового гиолока отделяют от осадка, последний промывают водой, полученный фильтрат вместе с промывными водами упаривают под ваЗо куумом с последующим выделением из него глюконата кальция одним из известных способов, например кристаллизацией.
