Способ получения ассоциированной коклюшной, дифтерийной и столбнячной вакцины
Владельцы патента RU 2306948:
Государственное учреждение Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова Российской академии медицинских наук (RU)
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для получения ассоциированной коклюшной, дифтерийной и столбнячной вакцины (АКДС). Сущность изобретения: способ включает смешивание коклюшного компонента, дифтерийного и столбнячного анатоксинов, сорбцию смеси на гидроксиде алюминия, дозирование смеси в емкость, лиофилизацию смеси и герметическое запаивание емкости. При этом, в качестве коклюшного компонента используют бесклеточный коклюшный анатоксин в концентрации 40-50 мкг/мл, смесь из бесклеточного коклюшного анатоксина, дифтерийного и столбнячного анатоксинов сорбируют на гидроксиде алюминия, вводят в смесь полиоксидоний в качестве иммуномодулятора в количестве 0,5-0,52 мкг/мл, выдерживают смесь в течение 18-20 часов при 4-10°С, добавляют сахарозу до конечной концентрации 10% и выдерживают смесь в течение 1 часа при 4-10°С. Преимущество изобретения заключается в снижении реактогенности. 1 табл.
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для получения ассоциированной коклюшной, дифтерийной, столбнячной вакцины (АКДС).
Известен способ получения АКДС путем смешивания 30 Lf дифтерийного и 10 ЕС столбнячного анатоксинов, сорбции смеси на гидроксиде алюминия, последующего добавления в смесь суспензии убитых коклюшных микробов, в конечной концентрации - 20 млрд микробных клеток, перемешивание смеси в течение 30 минут, дозирование смеси в емкость, лиофилизацию смеси и герметическое запаивание емкости (Руководство по вакцинно-сывороточному делу. - М.: Медицина, 1978 г., с.165-169).
Проблема получения высокоэффективной и слаботоксичной ассоциированной АКДС-вакцины для профилактики коклюшной, дифтерийной и столбнячной инфекций остается актуальной до последнего времени из-за реактогенности АКДС-вакцины не только из-за корпускулярного коклюшного компонента, но из-за присутствия в ней гидроксида алюминия, который может вызывать уплотнения, воспаление, покраснение, опухлость в месте введения препарата.
Снижение реактогенности АКДС-вакцины является одним из важных условий совершенствования этого препарата.
Технический результат заявленного способа заключается в получении высокоактивного и низкотоксичного препарата АКДС-вакцины.
Для достижения указанного технического результата в способе получения ассоциированной коклюшной, дифтерийной и столбнячной вакцины путем смешивания коклюшного компонента, дифтерийного и столбнячного анатоксинов, сорбции смеси на гидроксиде алюминия, дозирование смеси в емкость, лиофилизацию смеси и герметическое запаивание емкости, согласно изобретению в качестве коклюшного компонента используют бесклеточный коклюшный анатоксин в концентрации 40-50 мкг/мл, смесь из бесклеточного коклюшного анатоксина, дифтерийного и столбнячного анатоксинов сорбируют на гидроксиде алюминия, вводят в смесь полиоксидоний в качестве иммуномодулятора в количестве 0,5-0,52 мкг/мл с последующим выдерживанием смеси в течение 18-20 часов при 4-10°С, затем добавляют сахарозу в количестве 5 г в мл до конечной концентрации 10% и выдерживают смесь в течение 1 часа при 4-10°С.
Сущность изобретения поясняется на следующих примерах.
Пример 1. Для приготовления 1 ампулы АКДС-вакцины, содержащей по 2 дозы для человека на 1 мл, смешивают 40 мкг белка бесклеточного коклюшного анатоксина, 30 Lf дифтерийного анатоксина, 10 ЕС столбнячного анатоксина, 0,132 мг гидроксида алюминия аммиачного. Смесь встряхивают в течение 1 часа при 4-10°С, добавляют 0,5 мкг полиоксидония и оставляют на 18-20 часов при 4-10°С. Затем добавляют 5 г сахарозы до конечной концентрации 10%, смесь осторожно перемешивают, выдерживают 1 час при 4-10°С, разливают в ампулы по 0,5 мл и лиофилизируют. После лиофилизации ампулы запаивают под вакуумом и хранят при 4-10°С. При использовании в 1 ампулу добавляют 1,0 мл апирогенной стерильной дистиллированной воды. Доза, вводимая человеку - 0,5 мл.
Пример 2. Для приготовления 1 ампулы АКДС-вакцины, содержащей 2 дозы для человека на 1 мл, смешивают 50 мкг белка бесклеточного коклюшного анатоксина, 30 Lf дифтерийного анатоксина, 10 ЕС столбнячного анатоксина, 0,132 мг гидроксида алюминия аммиачного. Смесь встряхивают в течение 1 часа при 4-10°С, добавляют 0,52 мкг полиоксидония и оставляют на 18-20 часов при 4-10°С. Затем добавляют 5 г сахарозы до конечной концентрации 10%, смесь осторожно перемешивают, выдерживают 1 час при 4-10°С, разливают в ампулы по 0,5 мл и лиофилизируют. После лиофилизации ампулы запаивают под вакуумом и хранят при 4-10°С. При использовании в 1 ампулу добавляют 1,0 мл апирогенной стерильной дистиллированной воды. Доза, вводимая человеку - 0,5 мл.
Как известно, гидроксид алюминия, входящий в состав АКДС-вакцины, необходим для проявления протективных свойств белковых антигенов, входящих в их состав: бесклеточного коклюшного анатоксина, дифтерийного и столбнячного анатоксинов, но поскольку он обладает реактогенностью, уменьшение его в вакцине снижает реактогенность препарата. Однако при этом происходит снижение протективных свойств компонентов, входящих в состав вакцины (табл.1).
| Таблица 1 Протективная активность компонентов, входящих в АКДС-вакцину с полиоксидонием и без него | |||||
| Препарат | Кол-во гидроксида алюминия в мг/мл | Кол-во полиоксидония в мкг/мл | Кол-во *МЗЕ в мл коклюшного компонента | Кол-во **МИЕ в мл дифтерийного компонента | Кол-во **МИЕ в мл столбнячного компонента |
| АКДС сер.5 | 0,53 | - | 8,8 | 163,7 | 416,9 |
| АКДС сер.1 | 0,265 | - | 11,1 | 43,8 | 221,1 |
| АКДС сер.2 | 0,265 | 0,5-0,52 | 8,1 | 66,4 | 282,2 |
| АКДС сер.3 | 0,132 | 0,5-0,52 | 8,4 | 72,3 | 350,3 |
| АКДС сер.4 | 0,066 | 0,5-0,52 | 11,1 | 57,8 | 201,1 |
| Требования ВОЗ к изученным препаратам (не менее) | 8,0 | 60,0 | 120,0 | ||
| *МЗЕ - международные защитные единицы. **МИЕ - международные иммунизирующие единицы. |
Применение иммуномодулятора полиоксидония в дозе 0,5-0,52 мкг/мл дало возможность снизить содержание гидроксида алюминия до 0,132 мг/мл. При этом все компоненты АКДС-вакцины сохраняли высокие протективные свойства и отвечали требованиям ВОЗ.
Препараты АКДС-вакцины, полученные заявляемым способом, были менее токсичными по сравнению с таковыми, полученными известным способом. Так в реакции чувствительности к гистамину гибель мышей составляла 30%, в то время, как в последних она достигала 62,26%.
Полученные данные свидетельствовали о высоких протективных свойствах и сниженной токсичности АКДС-вакцины, полученной по заявляемому способу и содержащей в 8 раз меньше гидроксида алюминия, в сравнении с препаратами, полученными известным способом.
Преимущество изобретения в том, что разработан способ получения высокоактивного и низкотоксичного препарата АКДС-вакцины.
Способ получения ассоциированной коклюшной, дифтерийной и столбнячной вакцины путем смешивания коклюшного компонента, дифтерийного и столбнячного анатоксинов, сорбции смеси на гидроксиде алюминия, дозирования смеси в емкость, лиофилизации смеси и герметического запаивания емкости, отличающийся тем, что в качестве коклюшного компонента используют бесклеточный коклюшный анатоксин в концентрации 40-50 мкг/мл, смесь из бесклеточного коклюшного анатоксина, дифтерийного и столбнячного анатоксинов сорбируют на гидроксиде алюминия, вводят в смесь полиоксидоний в качестве иммуномодулятора в количестве 0,5-0,52 мкг/мл с последующим выдерживанием смеси в течение 18-20 ч при 4-10°С, затем добавляют сахарозу в количестве 5 г в мл до конечной концентрации 10% и выдерживают смесь в течение 1 ч при 4-10°С.
