Иммуногенная композиция

Изобретение относится к области медицины и касается иммуногенной композиции. Сущность изобретения включает иммуногенную композицию, содержащую антигены вирусов гриппа А и В, сорбированные на бактериальных культурах Bifidobacterium bifidum, которые иммобилизованы на приемлемом сорбенте. Преимущество изобретения заключается в повышении иммуногенности. 1 з.п. ф-лы, 5 табл., 2 ил.

 

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии, в частности к биотехнологии и вакцинопрофилактике, и может быть использовано при изготовлении противовирусных вакцин и предупреждения вирусных заболеваний человека и животных.

В настоящее время проблема вакцинации человека и животных против вирусов, способных проникать в организмы реципиентов через желудочно-кишечный тракт, остается актуальной. К таким вирусам относятся вирусы гриппа, полиомелита, гепатита, а также ротовирусы, коронавирусы и другие.

При создании противовирусных вакцин в последние годы значительно возрос интерес к идее использования адъювантов бактериальной и не бактериальной природы. Длительное время при вакцинации людей использовали лишь такие адъюванты, как гидроокись и фосфат алюминия (Edelman R. Vaccine adjuvants. Rev. Infect. Dis. 1980, 2, 370-383). Однако для большинства антигенов эти вещества оказались слабыми имуностимуляторами. Серьезным недостатком производных алюминия явилась их неспособность активировать продуцирующие интерлейкин-2 и γ-интерферон Т-клетки-хелперы.

Одним из перспективных направлений поиска адъювантов, эффективных при стимуляции как антительного, так и клеточно-опосредованного иммунного ответа, является изучение бактериальных адъювантов. Среди них известен полный и неполный адъювант Фрейнда, который является хорошим индуктором клеточного (cell-mediated) и гуморального иммунитета, однако его токсические свойства не дают возможности использовать его в коммерческих вакцинных препаратах (Gupta R.K., Relyveld E.H., Lindblad E.B., Bizzini В., Ben-Efraim S., Gupta C.K. /Adjuvant - a balance between toxicity and adjuvanticity. Vaccine, 1993, 11, 293-306).

Вариантом адъюванта Фрейнда является адъювант Detox, который состоит из монофосфорил липида A (of monophossphoryl lipid A) (MPL) и белков клеточной стенки бактерий (purified mycobacterial cell-wall skeleton) (CWS). Несмотря на выраженные потенцирующие свойства на клеточный и гуморальный ответ, Detox не рекомендован для вакцинации, так как вызывает побочные реакции (Schultz N., Oratz R., Chen D., Zeieniuch A., Jacquatte Т., Abeles G., Bystryn J.-C. Effect of Detox as an adjuvant for melonoma vaccine. Vaccine. 1995, 13, №5, 503-508).

В последние годы идентифицированы бактериальные адъюванты - субъединичный холерный токсин В (cholera toxin В subunit (CTB), столбнячный токсоид (Bergquist С., Lagerdard Т., Holmgren J. Antibody responses in serum and lung tointranasal immunization with Haemophilus influenzae type В polysaccharide conjugatedto cholera toxin В subunit and tetanus toxoid. APMIS, 1998, Aug., 106, №8, p.800-806; Freytag L.C., Clement J.D. Bacterial toxins as micosal adjuvants. Curr. Top.Microbiol. Immunol. 1999, 236, р.215-236), молочнокислые бактерии (Pouwels P.H., Leer R.J., Shaw M., Hejne den Bak-Glashouwer M.J. Lactic acid bacteria as antigen delivery vehicles for oral immunization purposes. Int. J. Food Microbiol. 1998, May 26, 41, №2, р. 155-167), рекомбинантный энтеротоксин Escherichia coli (Verweij W.R., de Haan L., Holtrop M., Agsteribbi E., Brands R. Mucosal immunoadjuvant activity of recombinant Escherichia coli heat-labile enterotoxin and its В subunit: intaction of systemic Ig G and secretory Ig A responses in mice by intranasal immunization with influenza virus surface antigen. Vaccine. 1998, Dec., 16, №20, p.2069-2076), компоненты бактериальной стенки (bacterial cell wall components) (Bessler W.G., Huber M., Baier M. Bacterial cell wall components as immunomodulators-II. The bacterial cell wall extract OM-85 BV as unspecific activator, immunogen and adjuvant in mice. Int. J. Immunopharmacol. 1997, Sep.-Oct, 19, №19-20, h. 551-558), фибронектин, связывающий белок 1 (fibronectin-binding protein 1) Streptococcus pyogenes (Medina E., Talay S.R., Chhatwal G.S., Guzman C.A. Fibronectin-binding protein 1 of Streptococcus pyogenes is a promising adjuvant for antigens delivered by mycosal route. Eur. J. Immunol. 1998 Mar., 28, №3, p.1069-1077) и другие адъюванты, которые способны индуцировать антительные ответы на поверхности слизистых оболочек, что особенно важно для такой инфекции, как грипп.

Выделены новые бактериальные адъюванты из среды культивирования бактерий, получившие название ингибитора нейраминидазы вируса гриппа - нейраминин, согласно одному из своих свойств (Lowry O.H., Rosebrough N.Y., Fair A.L., Raudallrj. Protein measurement with the Folin reagent. J. Biol. Chem., 1957, 193, p.265-275). Предположение о возможности продукции подобного вещества бактериями связаны с работой (Lin W., Kunio О., Ко A. Isolation, purification and chemical properties of neuraminidase inhibitors, 289, Arg. Biol. Chem., 1975, 39, №5, р. 923-930), которая показала, что один из штаммов Streptomyces spp. выделяет в культуральную среду вещество, ингибирующее нейраминидазную активность вирусов гриппа и парамиксовирусов. Действие бактериальных адъювантов объясняют появлением вирус-бактериальных комплексов, обладающих свойствами мимикрии вирусных пептидов.

При взаимодействии живых бактерий и различных вирионов известно фаголизирующее действие бактериофагов, которые, по современным представлениям, не имеют способности взаимодействовать с эукриотической клеткой. Также известно, что многие патогенные для человека и животных вирусы, находясь в естественной среде обитания, способны взаимодействовать с представителями оппортунистической и некоторыми представителями нормальной микрофлоры этого же биотопа. Такое взаимодействие имеет патогенетический смысл и приводит к активации вирусных инфекций за счет активной сорбции вирионов на клеточной поверхности бактерий и значительному увеличению локальной инфицирующей дозы возбудителя. Однако причины такого симбиоза практически мало известны, также мало известны механизмы взаимодействия вирусобактериальных комплексов с организмом человека или животных.

В настоящее время существует ряд вакцинных препаратов, в состав которых входят вещества, полученные из клеток, или структурные компоненты клеток прокариот. Но эти микроорганизмы, которые используют для включения в вакцины, чаще всего относятся к патогенной или оппортунистической группе, что повышает их опасность при изготовлении и использовании противовирусных вакцин или используются индигенные бактерии (например, бифидобактерии), клетки которых разрушены и полученные клеточные компоненты присутствуют в препарате в виде адъюванта. При этом эффект увеличения локальной дозы с помощью живой или убитой бактериальной клетки, используемой как носитель, способный преодолевать толщу слизистого геля и перенести сорбированые на нем вирионы или вирусный антиген к поверхности эукариотической клетки, не используется.

Известны: набор для интраназального введения, содержащий противогриппозную вакцину, состоящую из поверхностных белков вируса гриппа и адъюванта бактериального происхождения (реферат к заявке РФ №2001115701), адъювант, состоящий из термолабильного энтеротоксина, характерного для Е. Coli (патент РФ №2211050).

Кроме того, известны адъювантные свойства бактерий, относящихся к нормальной микрофлоре - штамм Lactobacillus salivarus (реферат к заявке РФ №2001119057). Кроме того, иммунный ответ может быть индуцирован при введении донору векторной конструкции, состоящей из нуклеиновых кислот, адсорбированных на микрочастицах органических биополимеров (реферат к заявке РФ №2003112234).

Известна противовирусная вакцина, в состав которой в качестве адъюванта входит пептидогликан бактериального происхождения (реферат к патенту РФ №2074192).

Наиболее близкой к заявленному изобретению является противовирусная вакцина перорального применения, содержащая вакцинные штаммы вирусов, фармакологически приемлемый носитель и адьювант (патент РФ №2249463).

Недостатками этих технических решений является применение в составе вакцин фрагментов патогенных или условно-патогенных микроорганизмов, что является опасным при использовании таких вакцин и отсутствие эффективной иммуногенной композиции, позволяющей существенно увеличить инфекционность, а следовательно, иммунный ответ.

Задачей настоящего изобретения является создание эффективной иммуногенной композиции, имеющий естественный способ введения и содержащей в качестве бактериальных адъюванта и носителя микроорганизмы - представители нормальной микрофлоры кишечника человека, а именно бифидобактерии, которые для усиления иммуногенного эффекта дополнительно сорбированны на приемлемом сорбенте.

Технический результат изобретения достигается за счет того, что сконструированная иммуногенная композиция, предназначенная для перорального применения, содержит антигены вирусов гриппа, в качестве носителя и адьюванта вирусных антигенов содержит живые бактериальные клетки микроорганизмов, относящиеся к роду Bifidobacterium, - бифидобактерии.

Кроме этого, в композиции вакцинные штаммы вирусов сорбированы на клеточной поверхности бифидобактерий.

Кроме этого, в композиции живые бактериальные клетки бифидобактерий иммобилизованы на активированном угле или другом приемлемом сорбенте.

Техническим эффектом изобретения является то, что в составе иммуногенной композиции в значительной степени облегчается доставка антигенов вирусов или вирионов к месту аппликации на апикальную мембрану энтероцитов и происходит концентрация их в высокой дозе на локальном участке слизистой оболочки, это усиливает инфекционность и, соответственно, иммунный ответ.

Получаемый эффект объясняется тем, что иммуногенная композиция имеет высокую адгезивную способность к веществу слизистой оболочки кишечника, что позволяет внедрить антигены вирусов или вирионы в слизистый гель и создать гарантированную для внедрения в локальных участках эпителиального пласта дозу вирусных антигенов.

Кроме функции носителя, бифидобактерии проявляют свойства адъюванта, усиливающего иммунный эффект, который при использовании иммуногенной композиции в составе вакцин достигается внедрением меньшей массы вирусного антигена. Это позволяет увеличить доступность и удешевить препарат.

Бифидобактерии способны сорбировать на своей поверхности вирусные антигены в достаточной для проведения иммунизации дозе, а применение иммуногенной композиции при иммунизации в составе вакцины позволяет получить увеличение титров противовирусных антител не менее чем в четыре раза выше исходных.

Перорально внедренные в организмы человека или животных тропные к слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта вирусы (гриппа, ротовирусы, коронавирусы, полиомелита, гепатита и другие), при использовании бифидобактериалных клеток в качестве носителя обладают большей по сравнению с аналогами способностью к адгезии на слизистой оболочке кишечника и большей способностью к проникновению в клетки кишечного эпителия и взаимодействию с иммунокомпетентными клетками. В результате этого достигается большая доступность для взаимодействия вирусных антигенов или живых вирионов с апикальной мембраной эпителиального пласта. Кроме того, за счет адъювантных свойств компонентов клеточной стенки бифидобактерий повышается общая иммуногенность вакцины. Этот эффект усиливает предварительная иммобилизация бифидобактерий на приемлемом сорбенте, в частности на активированном угле.

На фигуре 1 показаны вирионы ротовирусов (1), сорбированные на стенке бифидобактерий (2).

На фигуре 2 показаны вирусы гриппа (3), атакующие слизистую кишечника (4).

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Доказательство сорбции антигенов вирусов гриппа на трех системах

- Bifidobacterium bifidum,

- Bifidobacterium longum,

- Bifidobacterium bifidum, сорбированные на сорбенте.

В опытах «ин витро» определяли оптимальный состав иммуногенной композиции и способность бифидофлоры сорбировать на своей поверхности вирионы или антигены вирусов гриппа.

Использовали антигены вирусов гриппа, которые представляли коммерческую убитую вакцину, полученную из перечисленных штаммов вирусов гриппа: A New Calidonia /H1N1/; A Panama /H3N2/; В Hong Kong; В Sichuan. Штаммы были получены из Центра контроля за инфекционной заболеваемостью, Атланта, (CDC USA) в 2003 г. Для изучения биологическоий способности бифидофлоры использовали антигены из живых вирусов, полученные предварительным культивированием в аллантоисной жидкости эмбрионов кур: А Шаулко/53/.

Из бифидофлоры использовали 48-суточные бактериальные культуры бифидобактерий:

1. Bifidobacterium bifidum

2. Bifidobacterium longum. Культуры штаммов бифидобактерий получали путем посева лиофильно высушенных образцов. После 48-часового инкубирования при 38°С культуры осаждали и отмывали от среды культивирования трехкратным центрифугированием в забуференном физиологическом растворе при 2000 об/мин. Контрольную идентификацию культур проводили по морфологическим, культуральным и биохимическим признакам.

3. Также использовали биомассу препарата «Бифидумбактерина форте», содержащую живые бифидобактерии, сорбированные на активированном угле.

Антигены вирусов гриппа использовали в виде коммерческих образцов, а вирионы получали путем заражения эмбрионов кур в аллантоисную полость с дальнейшим культивированием, фильтрацией и центрифугированием в специальных условиях до получения необходимых титров.

Постановку реакции гемагглютинации с опытными и контрольными образцами антигенов проводили по стандартной методике объемным методом с постановочным объемом 100 микролитров в микроплашках. В качестве контрольной системы использовали 1% взвесь эритроцитов кур. Всего было поставлено 24 исследования в пяти повторностях. Вируссодержащую жидкость каждого образца антигена раститровывали двукратными разведениями до титра 1:512. Контролем служили образцы антигенов, в которые не вносили бифидофлору. Опытные образцы исследовали после взаимодействия антигенов с бифидофлорой и с комплексом, состоящим из сорбированных на активированном угле бифидобактерий.

Изучение уровня сорбции вирусов на клеточной стенке бактерий проводили в центрифужных пробирках, в которых предварительно отмывали по два см³ суспензий (10¹⁰ МК/мл) культур бифидобактерий, а также в центрифужных пробирках, куда была внесены навески биомассы из препарата «Бифидумбактерин форте» по 50 мг.Общий объем жидкости в каждой из пробирок после отмывания культур и растворения биомассы составлял 1,5 мл.

Далее опытные образцы готовили путем внесения в каждую из пробирок по 1 мл вируссодержащей жидкости соответствующих антигенов. Взаимодействие осуществляли медленным перемешиванием содержимого пробирок при температуре 4°С в течение 30 минут.

Контрольные образцы готовили путем внесения в 1 мл вируссодержащей жидкости 1,5 мл физиологического раствора. РН всех образцов был одинаков и составлял 6,8.

После окончания экспозиции все образцы, в том числе и контрольные, центрифугировали при 2000 об/мин. В опытных образцах культивированная бифидофлора и сорбированная бифидофлора осаждалась, увлекая сорбированные вирусные частицы. Надосадок использовали в определениях титров вирусов в реакции гемагглютинации (РГА). Учет результатов реакции проводили через 30 минут и через 24 часа, при этом показателем взаимодействия являлось падение титра вирусов в надосадке, где бифидофлора отсутствовала.

Результаты исследований в виде среднего значения из пяти повторностей титров гемагглютининов (ГА) представлены в таблице 1. Предварительный учет РГА проводили через 1 час после постановки. Контрольный учет РГА, проведенный через 24 часа, коррективов в результаты не внес.

Анализ полученных результатов изучения активности сорбции показал следующее.

Четырехкратное снижение титров в опыте по сравнению с контролем является доказательством сорбции убитых и живых вирусов гриппа на клеточной стенке живых бифидобактерий.

Уровень сорбции зависит от используемого в опыте штамма вирусов гриппа и вида бактериальной культуры, т.е. существуют вариации во взаимодействии, зависящие от композиции использованных ингредиентов. Так, Bifldobacterium longum по сравнению с остальными бактериальными реагентами более активен в отношении живых антигенов «А» и убитых антигенов «В». Bifldobacterium bifidum оказался более активен в отношении адсорбции живых антигенов «А» и убитых антигенов «А» с формулой H3N2. Сорбированные бифидобактерий выборочно показали высокую активность в отношении антигена «А» Шаулко и «В» Гон Конг. Активность всех бактериальных реагентов в отношении антигена «А» Новая Каледония была несколько ниже. Активность сорбированных бифидобактерий в реакции с двумя из шести антигенов не уступала другим бактериальным реагентам.

Представленный пример показал, что бифидофлора имеет свойство сорбировать на поверхности клеток вирусные антигены и живые вирионы гриппа. Это доказывается увеличением показателя кратности снижения антител более чем в четыре раза. Бифидофлора, сорбированная на активированном угле, не уступала в сорбционной активности свободным клеткам бифидобактерий.

Пример 2.

Определение иммуногенности заявленной иммуногенной композиции в опытах на животных.

Определение иммуногенности заявленной иммуногенной композиции проводили на примере вирусных антигенов гриппа и сорбированной на сорбенте культуре В. bifidum.

Сорбированные бифидобактерии получены из биомассы препарата-пробиотика «Бифидумбактерин форте».

Использовались различные антигены вирусов гриппа:

1. A New Caledonia /H1N1/ 20/99 control AgA, 1:160;

2. A Panama /H3N2/2007/ 99 Recver-17,1:160;

3. В Hong Kong/330/01 control AgB 1:128;

4. В Sichuan/3 79/99 control AgB 1:64;

5. Вакцина «Инфлувак» (influvac 2003/2004, Голландия) - антигриппозная субъединичная вакцина, в состав которой входят гемагглютинины вирусов A/Moscov/10/99 (H1N1 - 15 мкг, A/New Caledonia/20/99(HlNl) - 15 мкг, B/Hong Kong/330/2001 - 15 мкг. В 0,5 мл вакцины содержалось 45 мкг гемагглютинина.

Дополнительно проводили исследование реактогенности заявляемого препарата на мышах по принятой методике. Для этого препарат растворяли в стерильном изотоническом 0.9% растворе хлористого натрия и вводили внутрибрюшинно мышам в диапазоне доз от 100 мг до 2000 мг/кг. Наблюдение за животными осуществляли в течение 7 суток. Поведение мышей не изменялось, гибели мышей не наблюдалось.

Исследование эффективности вакцинации проводили на кролях породы Шиншила. В опыт было взято 2 группы животных (по четыре особи в каждой), одна контрольная и одна опытная.

1-ая группа (контрольная) - внутримышечная иммунизация проводилась гриппозной вакциной Инфлувак в дозе 5 мкг, количество - 0,1 мл. 1-я группа была взята для сравнительной характеристики эффекта иммуногенности.

2-ая группа (опытная) - введение перорально с помощью зонда суспензии биомассы сорбированных на активированном угле бифидобактерии в количестве 2,5 мл, предварительно смешанной с различными вирусными антигенами.

Исследования уровня антител к вирусам гриппа типа А и В в сыворотках крови опытных и контрольных кролей проводили в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), для этого применяли диагностикумы вирусов гриппа A New Caledonia /H1 N1/20/99, A Panama /H3N2/2007/99, В Hong Kong/330/01, В Sichuan/379/99, входящих в состав вакцины «Инфлувак». Уровни титров антигемагглютининов в сыворотках кролей показывали иммунногенность заявляемого комплекса.

Перед постановкой РТГА сыворотки прогревали при 56°С в течение 30 мин и обрабатывали RDE (рецептороразрушающий энзим). К 3 объемам RDE добавляли 1 объем сыворотки и инкубировали при 37°С в течение 12-15 часов. Затем прогревали при 56°С в течение 30 мин для инактивации RDE. После этого добавляли 0,6 мл физиологического раствора, чтобы конечное разведение соответствовало 1:10. Были использованы наборы реагентов для определения антител и антигенов вирусов гриппа из WHO Influenza Center at the Center for Disease Control, USA.

Результаты изучения иммуногенности заявляемой вакцины на уровень антигемагглютининов к вирусам, входящим в состав использованой противогриппозной вакцины «Инфлувак», представлены в таблицах 2-5.

Анализируя полученные результаты исследований, следует отметить, что в контрольных группах гриппозная вакцина Инфлувак в дозе 5 мкг на одно введение стимулирует образование специфических антигемагглютининов к вирусам гриппа типа А (ИЗ и H1) в невысоких титрах 1:80 и 1:160 соответственно, начиная со второй недели после вакцинации. Продолжительность иммунитета при однократном введении оставалась на уровне 1:80 - 1:160 в течение 7 недель. К 10-й неделе после вакцинации антигемагглютинины к НЗ и Н2 не определялись. Динамика синтеза антигемагглютининов к вирусам гриппа типа В несколько отличалась от вышеописанной динамики синтеза антигемагглютининов к вирусам гриппа типа А. Наблюдалось более позднее, к концу 3-й недели, повышение титров антигемагглютининов к вирусам гриппа В Hong Kong/330/01 и В Sichuan/3 79/99, составляя 320 и 640 соответственно. Эти показатели сохранялись в течение 3-х недель, к 10-й неделе после вакцинации антигемагглютинины к вирусам гриппа типа В не определялись.

В опытных группах образование специфических антител несколько отличалось в зависимости от типа антигена вируса гриппа. Влияние бифидобактерий на синтез антигемагглютининов к антигену гриппа A New Caledonia /H1 N1/20/99 было идентичным. В низких титрах 1:20 антигемагглютинины к H1N1 определялись уже в первые сутки, к пятым суткам эти титры повышались до 1:160 и затем постепенно увеличивались до 1:320-1:640. К 10-й неделе антигемагглютинины не определялись.

Синтез антигемагглютининов к A Panama /H3N2/2007/99 при введении вакцины показывает статистически достоверное усиление синтеза антигемагглютининов к H3N2, т.е. бифидобактерии дали медленно нарастающий, но высокий конечный результат на 41 сутки наблюдения с высокой разницей титров по сравнению с контролем.

Для вирусов типа В отмечено образование антител к антигенам вируса гриппа до 3-й недели, стимуляция синтеза антигемагглютининов отмечалась на 3-7-й неделе до титров 1:640-1:1280 и прекращение синтеза к 10-й неделе.

Таким образом, изобретение позволяет получить новую форму иммуногенной композиции, состоящей из сорбированных на бифидобактериях вирусных антигенов, при этом бифидобактерий предварительно сорбированы на активированном угле. Эффект усиления иммуногенности заявляемой композиции получен при пероральном введении подопытным животным.

Применение иммуногенной композиции показало удовлетворительную эффективность нарастания титров антител у подопытных животных, превышающую в ряде случаев результаты, полученные в контрольной группе. Сравнивая эффект иммуногенности, полученный от вакцинации в проведенной в контрольной и опытной группах, следует учесть, что в контрольной группе вакцина вводилась внутримышечно, когда эффект, по понятным причинам, всегда ускорен. В опытной группе вакцинировали перорально. Тем не менее, эффективность от вакцинации иммуногенной композицией не уступала, а в некоторых случаях превышала эффект вакцинации в контроле. Разница в нарастании титров и их выравнивание до идентичности в обеих опытных группах составила не более 11 дней, что можно считать нормой в отставании эффекта пероральных вакцин. Сохранение титров и длительность циркуляции антител у животных опытной группы превышало показатели контрольной группы. На основании приведенных примеров можно полагать, что использование иммуногенной композиции в составе противогриппозных вакцин может быть целесообразным.

Таблицы 2,3,4,5. Определение эффекта иммуногенности в опытах на животных (кроли) иммуногенной композиции в сравнении с убитой противогриппозной вакциной.

Таблица 2 Уровень антигемагглютининов к A New Caledonia /H1 N1/20/99
Введение	Уровень антигемагглютининов в динамике наблюдения (сут)
1	3	5	11	20	41	75
Вакцина Инфлувак	0	о	0	20	80	80	0
Заявленная композиция	20	20	160	320	320	160	0
Таблица 3 Уровень антигемагглютининов к A Panama /H3N2/2007/99
Введение	Уровень антигемагглютининов в динамике наблюдения (сут)
1	3	5	11	20	41	75
Вакцина Инфлувак	0	0	0	160	160	160	0
Заявленная композиция	80	40	80	320	320	1280	0
Таблица 4 Уровень антигемагглютининов к В Hong Kong/3 30/01
Введение	Уровень антигемагглютининов в динамике наблюдения (сут)
1	3	5	11	20	41	75
Вакцина Инфлувак	0	0	0	0	320	160	0
Заявленная композиция	0	20	40	40	320	320	0

Таблица 5 Уровень антигемагглютининов к В Sichuan/3 79/99.
Введение	Уровень антигемагглютининов в динамике наблюдения (сут)
1	3	5	11	20	41	75
Вакцина Инфлувак	0	0	0	0	160	80	0
Заявленная композиция	20	20	160	160	40	640	0
Примечание: Эффект иммуногенности определяется повышением титра антител у животных.

1. Иммуногенная композиция на основе антигенов вирусов гриппа, отличающаяся тем, что она содержит антигены вирусов гриппа А и В, сорбированые на бактериальных клетках культуры Bifidobacterium bifidum, которые иммобилизованы на приемлемом сорбенте.

2. Иммуногенная композиция по п.1, отличающаяся тем, что в качестве сорбента используется активированный уголь.