Способ биопсии тканей печени у новорожденных телят
Владельцы патента RU 2310191:
ФГОУ ВПО "Белгородская государственная сельскохозяйственная академия" (RU)
Изобретение относится к ветеринарной медицине. Способ включает взятие пробы при помощи устройства для пункционной биопсии. Устройство для пункционной биопсии представляет собой полую иглу с внутренним диаметром 2 мм и длиной 10 см, рабочий конец которой выполнен в виде пиловидного трезубца с длиной зубцов 2 мм, а угол распила между зубцами составляет 45°С. При этом игла снабжена стилетом, который длиннее ее на 5 мм. Способ позволяет легко контролировать глубину проникновения иглы в паренхиму печени, исключает риск травмирования почек, легочной плевры и легких. 3 табл., 4 ил.
Предлагаемое изобретение относится к ветеринарной медицине и может быть использовано в нормальной и патологической гистологии, клинической диагностике.
Существуют различные способы биопсии [RU 2119304 C1, 6 А61В 17/34, 27.09.1998; RU 2173091 C1, 7 А61В 10/00, А61В 5/0408, 10.09.2001; RU 2199952 C2, 7 А61В 8/00, 10.03.2003; RU 2230494 C2, А61В 10/00, 20.06.2004], но ни один из них не может быть использован для биопсии печени новорожденного молодняка крупного рогатого скота.
Наиболее близким к заявляемому является способ, используемый для биопсии печени крупного рогатого скота (взрослых животных) [Бырка В.И. О биопсии печени у коров / В.И.Бырка // Ветеринария. - 1969. - №3. - С.69-71]. Однако он не может быть использован для пункционной биопсии печени у новорожденного молодняка, так как не позволяет полностью обезопасить процесс отбора пунктата. Сущность его в том, что при имеющейся длине иглы (21 см) и выступающей части стилета (1 см) сложно контролировать глубину погружения, что представляет серьезную опасность для здоровья теленка в виде неоправданно излишней травматизации как самой печени, так и близлежащих тканей и органов. Предлагаемый нами способ имеет ряд конструктивных отличий, позволяющих минимизировать риск развития осложнений и сделать возможным биопсию печени новорожденного молодняка крупного рогатого скота.
Задача предлагаемого изобретения - решение проблемы пункционной биопсии печени новорожденных телят для прижизненного взятия материала для проведения гистологического исследования, позволяющего проводить раннюю диагностику заболеваний печени, изучать особенности развития печени и ее структуры, исследовать онтогенетические основы патологии печени у крупного рогатого скота, снижение травматизации, уменьшение травматических последствий при проведении пункции, упрощение процесса пункции ткани при сохранении структуры биопсийного материала.
Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что при проведении биопсии теленка фиксируют в стоячем положении. В месте проведения прокола (последнее межреберье справа, на 2 см ниже позвоночного столба) выстригают шерсть и кожу обрабатывают 5% спиртовым раствором йода. Затем в месте введения иглы кожу смещают в сторону и проводят прокол. Кожу и брюшину прокалывают иглой со вставленным стилетом, по достижении капсулы печени стилет извлекают и иглу погружают в паренхиму на глубину 2-3 см, при этом иглу направляют в сторону противоположного локтевого сустава. После погружения иглой выполняют вращение вокруг собственной оси. Для того чтобы кусочек ткани не выпал из просвета иглы при ее извлечении, пальцем закрывают канюлю и иглу извлекают (фиг.1. Игла для пункционной биопсии: 1 - трубка иглы; 2 - пиловидный трезубец; 3 - утолщение канюли; 4 - канюля; 5 - прорезь запирающего устройства; 6 - стилет). Игла имеет следующие характеристики: длина - 10 см, внутренний диаметр - 2 мм, заканчивается пиловидным трезубцем, длина зубцов - 2 мм, угол распила между ними 45° и оснащена прилегающим стилетом, выступающим на 5 мм, что позволяет легко контролировать глубину проникновения иглы в паренхиму печени, получать пунктат до 50-70 мг массой, чего вполне достаточно для проведения гистологических исследований. Учитывая ее размеры, исключается риск травмирования почек, легочной плевры и легких. Ввиду того, что кожа новорожденного значительно тоньше и эластичнее, чем у взрослого животного, отпадает необходимость в использовании направляющей иглы, это позволяет обеспечить дополнительное снижение травмирующего эффекта. Полученный столбик ткани выталкивают из иглы в фиксирующую жидкость (20% раствор формальдегида). Место прокола кожи вновь обрабатывают спиртовым раствором йода.
Пример конкретного выполнения. Теленок черно-пестрой породы, принадлежит учхозу БелГСХА «Центральное», дата рождения 28.04.2000, стационарный номер 40, масса тела при рождении 26 кг, содержится в типовой индивидуальной клетке. На момент проведения процедуры (03.05.2000) - возраст 5 суток, клинический статус: температура - 38,6°С, пульс - 140 ударов в минуту, дыхание - 36 дыхательных движений в минуту, общее состояние удовлетворительное, шерстный покров, кожа и видимые слизистые оболочки без изменений или нарушений, сердечно-сосудистая и дыхательная системы в пределах общепринятых норм, тоны сердца ясные, отчетливые, сердечный толчок локализован, дыхание без посторонних шумов, ровное. Перкусионные границы печени не изменены, безболезненны. Результаты общего клинического анализа крови: СОЭ (скорость оседания эритроцитов) - 0,5 мм/час, эритроциты - 5,92 млн/мл, гемоглобин - 122 г/л, СГЭ (среднее содержание гемоглобина в эритроцитах) - 20,6 пг (пикограммов), ЦП (цветовой показатель) - 1,28, лейкоциты - 8,64 тыс/мл, клеточный коэффициент - 685, лейктоцитарная формула (%): Б (базофилы) - 0, Э (эозинофилы) - 0, Ю (юные нейтрофилы) - 0, П (палочкоядерные нейтрофилы) - 7, С (сегментоядерные нейтрофилы) - 37, Лим (лимфоциты) - 52, Мон (моноциты) - 4. Противопоказаний для проведения пункционной биопсии не выявлено. Способ осуществляют следующим образом. При проведении биопсии теленка фиксируют в стоячем положении. В месте проведения прокола (последнее межреберье справа, на 2 см ниже позвоночного столба) выстригают шерсть и кожу обрабатывают 5% спиртовым раствором йода. Затем в месте введения иглы кожу смещают в сторону и проводят прокол. Кожу и брюшину прокалываются иглой со вставленным стилетом, по достижении капсулы печени стилет извлекают и иглу погружают в паренхиму на глубину 2-3 см, при этом иглу направляют в сторону противоположного локтевого сустава. После погружения иглой выполняют вращение вокруг собственной оси. Для того чтобы кусочек ткани не выпал из просвета иглы при ее извлечении, пальцем закрывают канюлю и иглу извлекают. Полученный столбик ткани выталкивают из иглы в емкость с фиксирующей жидкостью (20% раствор формальдегида). Место прокола кожи вновь обрабатывают спиртовым раствором йода. При дальнейшем наблюдении за теленком отрицательных последствий вмешательства как клиническими, так и лабораторными методами исследований не выявлено.
Пример. Способ использовали на 47 новорожденных телятах черно-пестрой породы с целью прижизненной диагностики морфологических изменений в печени. При проведении биопсии телят фиксировали в стоячем положении возле индивидуальных клеток. В месте проведения прокола (последнее межреберье справа, на 2 см ниже позвоночного столба) выстригали шерсть и кожу обрабатывали 5% спиртовым раствором йода. Затем в месте введения иглы кожу смещали в сторону и проводили прокол. Кожу и брюшину прокалывали иглой со вставленным стилетом, по достижении капсулы печени стилет извлекали и иглу погружали в паренхиму на глубину 2-3 см, при этом иглу направляли в сторону противоположного локтевого сустава. После погружения иглой выполняли вращение вокруг собственной оси. Для того чтобы кусочек ткани не выпал из просвета иглы при ее извлечении, пальцем закрывали канюлю и иглу извлекали. Полученный столбик ткани выталкивали из иглы в фиксирующую жидкость (20% раствор формальдегида). Место прокола кожи вновь обрабатывали спиртовым раствором йода. После пункции каких-либо осложнений не выявили, пятидневная выживаемость составила 100% (данный показатель используют при оценке большинства малоинвазивных методов исследования, и он с большой долей объективности характеризует безопасность того или иного исследования).
Исследованием гистопрепаратов установили, что у животных, имевших симптомокомплекс гипотрофии и биохимические изменения, характерные для функционально неполноценной печени (смотрите таблицы 1-3), отмечались также изменения архитектоники тканей печени. В основном эти изменения сводились к недосформированности печеночных балок, резкому снижению (или исчезновению) количества двуядерных гепатоцитов и наличию полей деструктивно измененных клеток с явлениями кариолизиса и макрофагальной реакции. Также отмечены: ядерный полиморфизм, наличие гиперхромных ядер в гепатоцитах и клетках Купфера, очаги микро- и макронекроза паренхимы печени (фиг.2. Очаг некроза. Печень теленка. Окраска гематоксилин и эозин. Объектив 40, окуляр 7). У одного из телят обнаружены изменения, характерные для начальной стадии цирротического перерождения органа (фиг.3. Обширный некроз в паренхиме, явления гиалинизации некротических масс, лимфоидная инфильтрация очага, цитолиз и кариолизис в гепатоцитах, явления кариопикноза. Печень теленка. Окраска гематоксилин и эозин. Объектив 40, окуляр 7). Гистологическая картина печени клинически здоровых телят была следующей: балочное строение выражено относительно хорошо, синусоиды умеренно расширенны, гепатоциты полигональной формы, часто встречаются двуядерные клетки (фиг.4. Печень теленка. Окраска гематоксилин и эозин. Объектив 20, окуляр 7). Испытания способа выявили следующие преимущества: он прост в техническом отношении и в использовании, атравматичен, возможно его повторное применение у данного животного, взятие материала при его помощи для гистологического исследования никак не сказывается на его результатах при различных функциональных состояниях органа.
Использование предлагаемого способа позволяет получать образцы ткани, достаточные для проведения морфологической оценки состояния органа. Отсутствие зарегистрированных осложнений (пятидневная выживаемость пациентов составила 100%) существенно сокращает круг противопоказаний для проведения процедуры. Таким образом, предлагаемый способ биопсии существенно расширяет возможности ранней диагностики морфофункциональных изменений печени новорожденных, а следовательно, облегчает работу клиницистов по выявлению молодняка с заболеваниями печени и решению вопроса о целесообразности дальнейшего использования животного, а также может быть использован в проведении научных исследований по онтогенетическим основам патологии печени у крупного рогатого скота, исключает риск травмирования почек, легочной плевры и легких.
| Таблица 1 | ||
| Биохимические показатели крови новорожденных телят (2-4 суток) | ||
| Показатель | Гипотрофики | Нормотрофики |
| Общий белок, г/л | 49,7±1,1 | 61,4±1,3 |
| Альбумины, г/л | 31,0±0,8 | 26,3±0,9 |
| Альфа глобулины, г/л | 5,9±0,8 | 9,5±0,95 |
| Бета глобулины, г/л | 6,9±1,3 | 7,4±0,6 |
| Гамма глобулины, г/л | 5,5±0,8 | 18,5±1,3 |
| Альбумины: глобулины | 1,98±0,2 | 0,79±0,05 |
| Проба Вельтмана, мл 0,5% раствора CaCl2 | 0,75±0,03 | 0,56±0,03 |
| АлАт (аланиновая трансаминаза), мкмоль/мл/час | 0,26±0,21 | 0,12±0,08 |
| АсАт (аспарагиновая трансаминаза), мкмоль/мл/час | 0,36±0,1 | 0,50±0,09 |
| Таблица 2 | ||
| Биохимические показатели крови новорожденных телят (6-8 суток) | ||
| Показатель | Гипотрофики | Нормотрофики |
| Общий белок, г/л | 52,2±±1,7 | 61,4±1,0 |
| Альбумины, г/л | 34,5±0,6 | 30,8±1,2 |
| Альфа глобулины, г/л | 6,3±0,9 | 9,5±0,6 |
| Бета глобулины, г/л | 4,9±1,1 | 6,1±0,7 |
| Гамма глобулины, г/л | 6,7±1,5 | 15,5±1,2 |
| Альбумины: глобулины | 2,16±0,22 | 1,05±0,07 |
| Проба Вельтмана, мл 0,5% раствора CaCl2 | 0,66±0,05 | 0,5±0,03 |
| АлАт (аланиновая трансаминаза), мкмоль/мл/час | 0,23±0,15 | 0,1±0,04 |
| АсАт (аспарагиновая трансаминаза), мкмоль/мл/час | 0,26±0,12 | 0,3±0,11 |
| Таблица 3 | ||
| Биохимические показатели крови новорожденных телят (10-12 суток) | ||
| Показатель | Гипотрофики | Нормотрофики |
| Общий белок, г/л | 52,2±1,2 | 61,0±1,5 |
| Альбумины, г/л | 35,3±1,1 | 32,9±1,3 |
| Альфа глобулины, г/л | 7,2±0,5 | 10,4±2,1 |
| Бета глобулины, г/л | 3,9±0,8 | 3,9±0,6 |
| Гамма глобулины, г/л | 5,6±0,8 | 14,2±1,6 |
| Альбумины: глобулины | 2,26±0,22 | 1,24±0,12 |
| Глобулиновый индекс | 2,39±0,35 | 1,34±0,34 |
| Проба Вельтмана, мл 0,5% раствора CaCl2 | 0,56±0,03 | 0,45±0,03 |
| АлАт (аланиновая трансаминаза), мкмоль/мл/час | 0,06±0,03 | 0,1±0,07 |
| АсАт (аспарагиновая трансаминаза), мкмоль/мл/час | 0,23±0,09 | 0,36±0,1 |
Способ биопсии тканей печени у новорожденных телят, включающий взятие пробы при помощи устройства для пункционной биопсии, отличающийся тем, что устройство для пункционной биопсии представляет собой полую иглу с внутренним диаметром 2 мм и длиной 10 см, рабочий конец которой выполнен в виде пиловидного трезубца с длиной зубцов 2 мм, а угол распила между зубцами составляет 45°С, при этом игла снабжена стилетом, который длиннее ее на 5 мм.
