Способ получения l-аминокислот с использованием бактерии, принадлежащей к роду escherichia
Владельцы патента RU 2312893:
Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU)
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к микроорганизму и способу получения L-аминокислоты. Выращивают бактерию продуцент L-аминокислоты, принадлежащую к роду Escherichia и модифицированную таким образом, что активность N-ацетилглюкозоаминопермеазы в указанной бактерии повышена, и выделяют L-аминокислоты из культуральной жидкости. Изобретение позволяет повысить эффективность способа получения L-аминокислот. 2 н. и 25 з.п. ф-лы, 2 ил., 5 табл.
Текст описания приведен в факсимильном виде.
1. Бактерия-продуцент L-аминокислоты, принадлежащая к роду Escherichia, модифицированная таким образом, что активность N-ацетилглюкозоаминопермеазы в указанной бактерии повышена.
2. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что активность N-ацетилглюкозоаминопермеазы повышена за счет усиления экспрессии гена, кодирующего N-ацетилглюкозоаминопермеазу.
3. Бактерия по п.2, отличающаяся тем, что указанная активность N-ацетилглюкозоаминопермеазы повышена за счет модификации последовательности, контролирующей экспрессию гена, кодирующего N-ацетилглюкозоаминопермеазу или за счет увеличения количества копий гена, кодирующего N-ацетилглюкозоаминопермеазу.
4. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанная бактерия дополнительно модифицирована таким образом, что активность глюкокиназы в данной бактерии повышена.
5. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанная бактерия дополнительно модифицирована таким образом, что активность ксилозоизомеразы в данной бактерии повышена.
6. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанный ген кодирует N-ацетилглюкозоаминопермеазу, выбранную из группы, состоящей из:
(A) белка, включающего аминокислотную последовательность, приведенную в Списке последовательностей под номером SEQ ID NO:2; и
(B) вариант белка с аминокислотной последовательностью, представленной в Списке последовательностей под номером SEQ ID NO:2, который обладает активностью N-ацетилглюкозоаминопермеазы.
7. Бактерия по п.2, отличающаяся тем, что указанный ген, кодирующий N-ацетилглюкозоаминопермеазу, включает в себя ДНК, выбранную из группы, состоящей из:
(a) ДНК, которая включает в себя нуклеотидную последовательность с 1 по 1947 нуклеотид, представленную в Списке последовательностей под номером SEQ ID NO:1; и
(b) ДНК, которая гибридизуется с нуклеотидной последовательностью с 1 по 1947 нуклеотид, представленной в Списке последовательностей под номером SEQ ID NO:1, или с зондом, который может быть синтезирован на основе указанной нуклеотидной последовательности, в жестких условиях и кодирует белок, обладающий активностью N-ацетилглюкозоаминопермеазы.
8. Бактерия по п.7, отличающаяся тем, что указанные жесткие условия включают в себя отмывку при 60°С и концентрации солей 1×SSC и 0,1% SDS в течение 15 мин.
9. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанной бактерией является бактерия- продуцент L-треонина.
10. Бактерия по п.9, отличающаяся тем, что указанная бактерия дополнительно модифицирована таким образом, что такая бактерия обладает усиленной экспрессией гена, выбранного из группы, состоящей из:
мутантного гена thrA, кодирующего аспартокиназа-гомосериндегидрогеназу I, устойчивую к ингибированию треонином по типу обратной связи;
гена thrB, кодирующего гомосеринкиназу;
гена thrC, кодирующего треонинсинтазу;
гена rhtA, предположительно кодирующего трансмембранный белок;
гена asd, кодирующего аспартат-β-семиальдегиддегидрогеназу;
гена aspC, кодирующего аспартатаминотрансферазу (аспартаттрансаминазу); или их комбинации.
11. Бактерия по п.10, отличающаяся тем, что указанная бактерия дополнительно модифицирована таким образом, что такая бактерия обладает усиленной экспрессией указанного мутантного гена thrA, указанного гена thrB, указанного гена thrC и указанного гена rhtA.
12. Бактерия по п.10, отличающаяся тем, что указанная бактерия дополнительно модифицирована таким образом, что ген crr, кодирующий регулятор катаболитной репрессии в такой бактерии, инактивирован.
13. Бактерия по п.12, отличающаяся тем, что указанная бактерия далее модифицирована таким образом, что такая бактерия обладает усиленной экспрессией указанного мутантного гена thrA, указанного гена thrB, указанного гена thrC и указанного гена rhtA.
14. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанной бактерией является бактерия- продуцент L-лизина.
15. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанной бактерией является бактерия- продуцент L-гистидина.
16. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанной бактерией является бактерия- продуцент L-фенилаланина.
17. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанной бактерией является бактерия- продуцент L-аргинина.
18. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанной бактерией является бактерия- продуцент L-триптофана.
19. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанной бактерией является бактерия- продуцент L-глутаминовой кислоты.
20. Способ получения L-аминокислоты, включающий в себя выращивание бактерии по п.1 в питательной среде, вызывающее накопление указанной L-аминокислоты в культуральной жидкости и выделение указанной L-аминокислоты из культуральной жидкости.
21. Способ по п.20, отличающийся тем, что указанной L-аминокислотой является L-треонин.
22. Способ по п.20, отличающийся тем, что указанной L-аминокислотой является L-лизин.
23. Способ по п.20, отличающийся тем, что указанной L-аминокислотой является L-гистидин.
24. Способ по п.20, отличающийся тем, что указанной L-аминокислотой является -L-фенилаланин.
25. Способ по п.20, отличающийся тем, что указанной L-аминокислотой является L-аргинин.
26. Способ по п.20, отличающийся тем, что указанной L-аминокислотой является L-триптофан.
27. Способ по п.20, отличающийся тем, что указанной L-аминокислотой является L-глутаминовая кислота.
