Способ получения коллагена из биологического материала

Изобретение относится к медицине и биохимии, в частности к препаративным методам получения коллагена. Способ заключается в получении коллагена из биологического материала путем его механического измельчения, обработки раствором щелочи, промывания водой, растворения в уксусной кислоте с последующим выделением целевого продукта, отличается тем, что биологический материал разрезают на кусочки от 0,5 до 1 см², обработку проводят 10-20% раствором щелочи в течение 1 часа, а после растворения в уксусной кислоте коллаген приливают при постоянном помешивании в ацетон. Изобретение обеспечивает сокращение времени получения коллагена и экономию реактивов.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к способам получения коллагена из биологического материала (дермы, деминерализованного костного матрикса).

В качестве прототипа выбран способ получения коллагена путем измельчения биологического материала, обработки насыщеннным раствором сульфата натрия, содержащим 10% раствор едкого натра, с временем экспозиции от 3 до 5 суток, нейтрализации щелочи водным раствором борной кислоты, промывания проточной водой, растворения обработанного материала в одномолярной уксусной кислоте и очищения диализом против дистиллированной воды в течение 3 суток (см. Хилькин A.M., Шехтер А.Б., Истранов Л.П., Леменев В.Л. Коллаген и его применение в медицине, 1976. - М.: Медицина. - С.47-50).

Недостатком известного способа является длительный период времени, требующийся для выделения готового продукта. Кроме того, для получения коллагена необходимы дорогостоящие реактивы.

Задача предлагаемого изобретения - сокращение времени получения коллагена и экономия реактивов.

Поставленная задача решается за счет того, что в способе, включающем механическое измельчение биологического материала, предварительную обработку, растворение в уксусной кислоте и осаждение, обработку производят 10-20% раствором щелочи, а осаждение осуществляют в ацетоне, приливая раствор коллагена в осаждающий реагент.

Способ осуществляют следующим образом. Биологический материал с высоким содержанием коллагена (нативная дерма, деминерализованный костный матрикс и т.д.) разрезают на кусочки размером от 0,5 до 1 см² и обрабатывают раствором щелочи (NaOH КОН) с концентрацией в пределах от 10 до 20% в течение одного часа, что приводит к разрушению клеточного компонента биологического материала, экстракции из него внутриклеточных и экстрацеллюлярных неколлагеновых белков и разрыхлению коллагеновых волокон, что способствует быстрому растворению коллагена в кислоте. Затем обработанные щелочью фрагменты коллагенсодержащего материала тщательно промывают проточной водой и растворяют в 20% растворе уксусной кислоты, взятой в минимальном количестве, необходимом для растворения исходного материала. Выделение коллагена из кислотного раствора производят осаждением его ацетоном, приливая раствор в ацетон при постоянном интенсивном перемешивании. Осажденный коллаген собирается на мешалке, а уксусная кислота и остатки липидов уходят в жидкую фазу. Сгусток коллагена снимают с мешалки, разрезают на небольшие кусочки и высушивают при комнатной температуре до воздушно-сухого состояния или лиофилизируют.

Предлагаемый метод получения коллагена позволяет экономить реактивы, значительно сократить время приготовления и увеличить выход готового продукта. Использование в качестве биологического материала деминерализованного костного матрикса, представляющего собой коллагеновую основу костной ткани, лишенную клеточного компонента и большей части неколлагеновых белков, позволяет расширить источники сырья для получения готового продукта.

Способ получения коллагена из биологического материала путем его механического измельчения, обработки раствором щелочи, промывания водой, растворения в уксусной кислоте с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что биологический материал разрезают на кусочки от 0,5 до 1 см², обработку проводят 10-20%-ным раствором щелочи в течение 1 ч, а после растворения в уксусной кислоте коллаген приливают при постоянном помешивании в ацетон.