Сфингозинкиназа (варианты), нуклеиновая кислота, ее кодирующая (варианты), и их применение

Изобретение относится к биотехнологии и касается варианта сфингозинкиназы, обладающего сниженной способностью к фосфорилированию сфингозина до сфингозин-1-фосфата. Такой вариант содержит одну или несколько модификаций в области, ограниченной аминокислотами 16-153 сфингозинкиназы дикого типа. Изобретение также предусматривает молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность, кодирующую эту сфингозинкиназу. Сфингозинкиназа согласно настоящему изобретению может быть использована для лечения или профилактики заболеваний у млекопитающих, которые характеризуются ненормальной, нежелательной или иной ненадлежащей активностью клеток. Изобретение позволяет получить новую сфингозинкиназу со сниженной каталитической активностью, пригодную для лечебного или профилактического применения. 7 н. и 17 з.п. ф-лы, 15 ил., 4 табл.

 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

1. Вариант сфингозинкиназы млекопитающего, содержащий одну или несколько мутаций в области, ограниченной аминокислотами 16-153 сфингозинкиназы дикого типа, причем этот вариант проявляет потерю или снижение каталитической активности по отношению к сфингозинкиназе дикого типа, либо функциональный фрагмент указанного варианта сфингозинкиназы.

2. Вариант сфингозинкиназы по п.1, в котором сфингозинкиназа является сфингозинкиназой человека.

3. Вариант сфингозинкиназы по п.1 или 2, в котором мутация включает замену, вставку и/или делецию одной или нескольких аминокислот.

4. Вариант сфингозинкиназы по п.3, в котором указанная область ограничена аминокислотами 70-90.

5. Вариант сфингозинкиназы по п.4, в котором указанная область ограничена аминокислотами 79-84.

6. Вариант сфингозинкиназы по п.5, в котором мутация представляет собой замену аминокислоты глицина в положении 82 на аспарагиновую кислоту.

7. Вариант сфингозинкиназы по любому из пп.3-5, в котором указанный вариант проявляет потерю каталитической активности.

8. Вариант сфингозинкиназы по п.3, в котором указанный вариант содержит одну или несколько замен аминокислот, выбранных из следующего списка:

(i) G82D или G82A

(ii) G26D или G26A

(iii) S79D или S79А

(iv) G80D или G80A

(v) K103А или K103R

(vi) С111D или G111А

(vii) G113D

(viii) K27A

(ix) K29A

9. Вариант сфингозинкиназы млекопитающего, содержащий мутацию в области, ограниченной аминокислотными остатками 70-110 сфингозинкиназы дикого типа, причем этот вариант проявляет потерю или снижение каталитической активности по отношению к сфингозинкиназе дикого типа, либо функциональный фрагмент указанного варианта сфингозинкиназы.

10. Вариант сфингозинкиназы по п.9, в котором сфингозинкиназа является сфингозинкиназой человека.

11. Вариант сфингозинкиназы по п.9 или 10, в котором мутация включает замену, вставку и/или делецию одной или нескольких аминокислот.

12. Вариант сфингозинкиназы по п.11, в котором указанная область ограничена аминокислотами 70-90.

13. Вариант сфингозинкиназы по п.11, в котором указанная область ограничена аминокислотами 79-84.

14. Вариант сфингозинкиназы по п.13, в котором мутация представляет собой замену аминокислоты глицина в положении 82 на аспарагиновую кислоту.

15. Вариант сфингозинкиназы по любому из пп.11-13, в котором указанный вариант проявляет потерю каталитической активности.

16. Вариант сфингозинкиназы по п.11, в котором указанный вариант содержит одну из замен аминокислот, выбранных из G82D или G82A.

17. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, выбранная из следующего списка:

(i) выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность нуклеотидов, которая кодирует либо комплементарна последовательности, кодирующей вариант сфингозинкиназы млекопитающего или функциональный фрагмент этого варианта, где вариант содержит одну или несколько мутаций в области, ограниченной аминокислотами 16-153 сфингозинкиназы дикого типа, причем этот вариант проявляет потерю или снижение каталитической активности по отношению к сфингозинкиназе дикого типа;

(ii) выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность нуклеотидов, которая кодирует либо комплементарна последовательности, кодирующей вариант сфингозинкиназы человека или функциональный фрагмент этого варианта, где вариант содержит одну или несколько мутаций в области, ограниченной аминокислотами 16-153 сфингозинкиназы дикого типа, причем этот вариант проявляет потерю или снижение каталитической активности по отношению к сфингозинкиназе дикого типа;

(iii) выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность нуклеотидов, которая кодирует либо комплементарна последовательности, кодирующей вариант сфингозинкиназы человека или функциональный фрагмент этого варианта, где вариант содержит аминокислотную последовательность, содержащую замену, вставку и/или делецию одной или нескольких аминокислот в области, ограниченной аминокислотами 16-153 сфингозинкиназы дикого типа, причем этот вариант проявляет потерю или снижение каталитической активности по отношению к сфингозинкиназе дикого типа;

(iv) выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность нуклеотидов, которая кодирует либо комплементарна последовательности, кодирующей вариант сфингозинкиназы человека или функциональный фрагмент этого варианта, где вариант содержит аминокислотную последовательность, содержащую замену, вставку и/или делецию одной или нескольких аминокислот в области, ограниченной аминокислотами 70-90 сфингозинкиназы дикого типа, причем этот вариант проявляет потерю или снижение каталитической активности по отношению к сфингозинкиназе дикого типа;

(v) выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность нуклеотидов, которая кодирует либо комплементарна последовательности, кодирующей вариант сфингозинкиназы человека или функциональный фрагмент этого варианта, где вариант содержит аминокислотную последовательность, содержащую замену, вставку и/или делецию одной или нескольких аминокислот в области, ограниченной аминокислотами 79-84 сфингозинкиназы дикого типа, причем этот вариант проявляет потерю или снижение каталитической активности по отношению к сфингозинкиназе дикого типа;

(vi) выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность нуклеотидов, которая кодирует либо комплементарна последовательности, кодирующей вариант сфингозинкиназы млекопитающего или функциональный фрагмент этого варианта, где вариант содержит одну или несколько замен аминокислот, выбранных из следующего списка:

(a) G82D или G82A

(b) G26D или G26A

(c) S79D или S79A

(d) G80D или G80A

(e) K103А или K103R

(f) G111D или G111A

(g) G113D

(h) K27A

(i) K29A

(vii) выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность нуклеотидов, которая кодирует либо комплементарна последовательности, кодирующей вариант сфингозинкиназы млекопитающего или функциональный фрагмент этого варианта, где вариант содержит мутацию в области, ограниченной аминокислотами 70-110 сфингозинкиназы дикого типа, причем этот вариант проявляет потерю или снижение каталитической активности по отношению к сфингозинкиназе дикого типа.

18. Способ модулирования функциональной активности клеток у млекопитающих, который включает введение млекопитающему эффективного количества варианта сфингозинкиназы по любому из пп.1-17 в течение времени и в условиях, достаточных для ингибирования, снижения или иной понижающей регуляции по меньшей мере одной функциональной активности сфингозинкиназы дикого типа.

19. Способ по п.18, в котором модулирование активности представляет собой понижающую регуляцию (down-regulation) базальной активности сфингозинкиназы дикого типа и/или предотвращение активации сфингозинкиназы дикого типа.

20. Способ лечения или профилактики заболевания у млекопитающих, которое характеризуется ненормальной, нежелательной или иной ненадлежащей активностью клеток, причем способ включает введение млекопитающему эффективного количества варианта сфингозинкиназы по любому из пп.1-17 в течение времени и в условиях, достаточных для ингибирования, снижения или иной понижающей регуляции по меньшей мере одной функциональной активности сфингозинкиназы дикого типа, при этом указанная понижающая регуляция ведет к модуляции функциональной активности клеток.

21. Способ по п.20, в котором модуляция активности представляет собой понижающую регуляцию (down-regulation) базальной активности сфингозинкиназы дикого типа и/или предотвращение активации сфингозинкиназы дикого типа.

22. Активный ингредиент медикамента для модуляции функциональной активности клеток, где указанный активный ингредиент представляет собой вариант сфингозинкиназы по любому из пп.1-17.

23. Вариант сфингозинкиназы по любому из пп.1-17 для применения для модуляции функциональной активности клеток.

24. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания, которое характеризуется ненормальной, нежелательной или иной ненадлежащей активностью клеток, включающая эффективное количество варианта сфингозинкиназы по любому из пп.1-17 вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями и/или разбавителями.