Способ получения свободного от белка биологически активного препарата высокополимерной рнк из сухих пекарских дрожжей saccharomyces cerevisiae


 


Владельцы патента RU 2510854:

Общество с ограниченной ответственностью "ВИТАЛАНГ" (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения свободного от белка биологически активного препарата высокополимерной РНК из сухих пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Способ включает суспендирование дрожжей в течение 3 мин в водном растворе олеиновой кислоты, с концентрацией олеиновой кислоты 15 г/л, оттитрованном 2,5 М NaOH, при температуре суспензии не ниже 98°C. Кипятят суспензию в течение 40 мин при 98-100°C при периодическом перемешивании. Через 10, 20 и 30 мин после суспендирования последней порции дрожжей в кипящую суспензию добавляют 2,5 М NaOH. Добавляют по окончании экстракции в суспензию кипяченую воду, перемешивают, отстаивают суспензию при комнатной температуре в течение 22 ч. Разливают слитый с помощью сифона супернатант в виалы с последующим замораживанием и лиофилизацией. Предложенное изобретение позволяет упростить получение препарата высокополимерной РНК из сухих пекарских дрожжей. 1 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины и может быть использовано для лечения кожных заболеваний вирусной этиологии и ОРВИ, в том числе гриппа.

Наиболее близким к предлагаемому является раствор высокополимерной РНК, полученный из дрожжей путем суспендирования их в водном 1-2%-ном растворе олеиновой кислоты, оттитрованной щелочью до pH 7-8, суспензию выдерживают при 98-102°C в течение 40-60 мин, отстаивают экстракт в течение 20-24 ч при комнатной температуре, к слитой с помощью сифона надосадочной жидкости добавляют NaCl до концентрации 2-3 M, суспензию выдерживают 20-96 ч при комнатной температуре, центрифугируют (2500-3500 g, 5-15 мин, без охлаждения), осадок-шрот промывают 2-мя порциями 2-3 М раствора NaCl и 5-ю порциями 92-96%-ного этанола путем последовательного его ресуспендирования при комнатной температуре и центрифугирования (2500-3500 g, 5-15 мин, без охлаждения), из промытого шрота высокополимерную РНК экстрагируют дистиллированной водой [1].

Данным способом может быть получен раствор биологически активной высокополимерной РНК. Однако этот способ многостадиен и трудоемок.

Предлагаемый способ получения дрожжевого экстракта, не уступающего по лечебным свойствам прототипу, прост и полностью безотходен.

Цель достигается тем, что сухие дрожжи суспендируют порциями в течение 3-5 мин в водном 1-2%-ном растворе олеиновой кислоты, оттитрованной щелочью до pH 7-8, суспензию выдерживают при 98-100°C в течение 40-45 мин, отстаивают экстракт в течение 20-24 ч при комнатной температуре и супернатант, содержащий в качестве основных компонентов, кроме воды, - высокополимерную РНК, низкополимерную РНК и олеат натрия, используют в лечебных целях. Выпавший же в осадок денатурированный белок может быть использован для приготовления белковых коктейлей для спортсменов.

Пример осуществления предлагаемого способа

300 г свежих сухих пекарских дрожжей (Saccharomyces cerevisiae, Новосибирский дрожжевой завод, ГОСТ 28483-90) суспендировали порциями (первые порции по щепотке) в течение 3 мин в 3 л кипящей воды, содержащей 45 г олеиновой кислоты, оттитрованной 20 мл 2,5 М NaOH таким образом, чтобы температура суспензии не опускалась ниже 98°C. Суспензию кипятили 40 мин при 98-100°C, периодически перемешивая. Через 10, 20 и 30 мин после суспендирования последней порции дрожжей в кипящую суспензию добавляли по 10 мл 2,5 М NaOH. По окончании экстракции суспензию доводили кипяченой водой до 4,5 л, перемешивали, переносили в высокий узкий стеклянный сосуд и отстаивали при комнатной температуре в течение 22 ч. Отстоявшийся супернатант (~2,9 л) сливали с помощью сифона в стеклянную емкость, после чего добавляли его в мазь или разливали в виалы по 2-4 мл, замораживали и лиофилизовали. Киселеобразный дрожжевой шлам, собирающийся на дне сосуда и содержащий до 70% денатурированного белка, сушили при 58-62°C обычным способом.

Полученный предлагаемым способом дрожжевой экстракт, содержащий высокополимерную РНК (предполагаемое рыночное название - Виталанг-2и), обладает такими же биологическими и лечебными свойствами, как и полученный по способу - прототипу [1]. Как видно из приведенной ниже таблицы его спектральные характеристики практически не отличаются от таковых для очищенной высокополимерной РНК. По крайней мере белка, способного вызвать аллергию, в препарате Виталанг-2и нет (см. соотношения D280/D260).

Источник информации

1. Патент РФ №2392329.

Спектральные характеристики экстракта высокополимерной (ВП) дрожжевой РНК, полученного нами с помощью олеиновой кислоты, и очищенной по способу-прототипу [1] высокополимерной РНК
Препарат ВП РНК Спектральные отношения
D230/D260 D250/D260 D280/D260
Экстракт 0,60 0,91 0,53
Очищенный препарат 0,45 0,92 0,56

Способ получения свободного от белка биологически активного препарата высокополимерной РНК из сухих пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae, включающий суспендирование дрожжей в течение 3 мин в водном растворе олеиновой кислоты, с концентрацией олеиновой кислоты 15 г/л, оттитрованном 2,5 М NaOH, при температуре суспензии не ниже 98°C, кипячение суспензии в течение 40 мин при 98-100°C при периодическом перемешивании, добавление через 10, 20 и 30 мин после суспендирования последней порции дрожжей в кипящую суспензию 2,5 М NaOH, добавление по окончании экстракции в суспензию кипяченой воды, перемешивание, отстаивание суспензии при комнатной температуре в течение 22 ч, розлив слитого с помощью сифона супернатанта в виалы с последующим замораживанием и лиофилизацией.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу и диагностическому набору для диагностики коклюша и определения авирулентных мутантов возбудителя коклюша.
Изобретение относится к области биохимии. .

Изобретение относится к области генной инженерии и может быть использовано в биотехнологии для получения представляющих практический интерес белков, являющихся продуктами молчащих генов или генов с низким уровнем экспрессии.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу анализа частоты взаимодействия нуклеотидной последовательности-мишени с одной или несколькими представляющими интерес нуклеотидными последовательностями.

Изобретение относится к области биотехнологии, молекулярной биологии. .

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу гомогенной детекции со сниженным разбросом данных по меньшей мере одного продукта одноцепочечной амплификации.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и биохимии и может быть использовано в молекулярной диагностике, связанной с выявлением РНК-мишеней. .

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу и диагностическому набору для диагностики коклюша и определения авирулентных мутантов возбудителя коклюша.
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению интерфероногенных противовирусных препаратов на основе дрожжевой РНК, и может быть использовано в медицине.

Изобретение относится к биохимии и представляет собой способ ослабления экспрессии мРНК TNFR1 у субъекта. .
Изобретение относится к области биохимии. .
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к выделению физиологически активных соединений. .

Изобретение относится к способу получения солей 5'-трифосфатов природных и модифицированных дезокси- и рибоолигонуклеотидов, заключающемуся в том, что исходный реагент - защищенный природный или модифицированный олигонуклеотид, дезокси- или риборяда, в виде 0,1-0,05 М раствора, монофосфорилируют в пиридине 2-3-кратным избытком хлорокиси фосфора в течение 10-15 минут, далее полученное активированное производное олигонуклеотида обрабатывают 10-15-кратным избытком раствора бис-трибутиламмонийной соли пирофосфата в ацетонитриле и 20-кратным избытком третичного амина и выдерживают реакционную смесь в течение 15-30 минут с последующим разложением промежуточного триметафосфатного производного олигонуклеотида триэтиламмонийбикарбонатным буфером, очисткой целевого продукта с помощью обращенно-фазовой хроматографии (ОФХ), удалением защитных групп с функциональных групп олигонуклеотида и повторной очисткой целевого продукта с помощью ОФХ.

Изобретение относится к способу получения солей 5'-трифосфатов дезоксирибо- и рибоолигонуклеотидов общей формулы, указанной в описании. .
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения дрожжевого экстракта, содержащего биологически активную высокополимерную РНК. Способ получения дрожжевого экстракта, содержащего биологически активную высокополимерную РНК из сухих пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae, включающий суспендирование дрожжей в водном растворе олеата натрия, кипячение суспензии при периодическом перемешивании, центрифугирование охлажденного до комнатной температуры лизата, доведение объема дрожжевого экстракта до стандарта дистиллированной водой с последующим выделением из него высокополимерной РНК, добавлением его в мазь или разливом в виалы по 2-4 мл с дальнейшим замораживанием и лиофилизацией при определенных условиях. Вышеописанный способ позволяет увеличить выход высокополимерной РНК. 1 пр., 1 табл.
Наверх