Средство, обладающее ноотропным воздействием на организм

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой средство, обладающее ноотропным воздействием на организм на основе циклических дипептидов, содержащее последовательность пролин-аланин. Изобретение обеспечивает расширение арсенала средств, обладающих ноотропной активностью, 1 з.п. ф-лы, 2 пр., 2 табл.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к препаратам пептидного происхождения, обладающих ноотропным действием, а именно к циклическим пептидам (дикетопиперазинам) общей формулы:

, где X-аланин(Ala) или глютамин(Gln), а Pro-пролин.

Термин "ноотропы" (от греческих слов "ноос" - мышление и "тропос" - стремление) был принят в 1972 г., спустя два года после появления на мировом рынке препарата пирацетам (ноотрорпил), разработанного бельгийской фирмой UCB. В настоящее время под препаратами, обладающими ноотропным действием, понимают вещества, оказывающие специфическое влияние на высшие интегративные функции мозга, улучшающие память, облегчающие процесс обучения, стимулирующие интеллектуальную деятельность, повышающие устойчивость мозга к повреждающим факторам, улучшающие когнитивные (познавательные) функции как у здоровых людей, так и, в особенности, нарушенные при различных заболеваниях (Андреев Б.В. Ноотропные средства // Мир Медицины. - №8. - 1998. - С.25-28).

Ноотропные препараты являются весьма динамично развивающейся группой лекарственных средств и в России, и за рубежом. Это, в частности, связано с тем, что продолжительность жизни в развитых странах постоянно увеличивается, причем наиболее быстро растет часть общей популяции, которая состоит из людей старше 65 лет. Следовательно, можно ожидать, что частота заболеваний, ассоциирующихся с возрастом, таких как деменция и других, значительно возрастет, и ноотропные препараты будут все более и более востребованы.

Разработкой новых ноотропных препаратов в настоящее время занимается около 60 ведущих фармацевтических компаний в различных странах. (Варпаховская И. Состояние производства и разработок ноотропных препаратов за рубежом и в России // Ремедиум. - №7. - 1997. - С.3-8). По оценке ежегодника Pharmaprojects, в 1995 г. на различных стадиях исследований, клинического изучения и внедрения на рынок находилось 132 ноотропных препарата, из них 79 на этапе доклинического исследования, 34 - на различных стадиях клинического изучения и 19 - на стадии регистрации и внедрения на рынок. В России зарегистрировано около 15 лекарственных средств, отнесенных к группе ноотропов.

Такой интерес к этой группе препаратов объясняется, в частности, тем, что в отличие от психостимуляторов мобилизующего типа, ноотропы не вызывают психомоторного возбуждения, истощения функциональных возможностей организма, привыкания и пристрастия.

Согласно современным представлениям к ноотропным препаратам относятся (Воронина Т.А., Середенин С.Б. Ноотропные препараты, достижения и новые проблемы // Экспериментальная и клиническая фармакология. - №4. - 1998. - С.3-9; РЛС-Энциклопедия лекарств / Гл. ред. Крылов Ю.Ф. / М.: "РЛС-2001". - 2000. - 1504 с.; Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России: Справочник. - М.: АстраФармСервис, 2000. - 1408 с.): пирацетам, его гомологи и аналоги (анирацетам, оксирацетам, прамирсцетам, нефирацетам и др.); производные диметиламиноэтанола: деанола ацеглюмат, меклофеноксат, центрофеноксин; препараты нейроаминокислот: гамма-аминомасляная кислота (ГАМК), производные гамма-аминомасляной кислоты (фенибут, никотиноил-гамма-аминомасляная кислота (пикамилон), гопантеновая кислота (пантогам), глицин, глутаминовая кислота; производные пиридоксина: пиритинол (пиридитол, энербол, энцефабол); холиномиметик центрального действия: холина альфосцерат; препараты Ginkgo biloba: билобил, мемоплант, ревайтл гинкго, танакан и др.

Ноотропным действием обладают также ряд препаратов с широким спектром эффектов (Воронина Т.А., Середенин С.Б. Ноотропные препараты, достижения и новые проблемы // Экспериментальная и клиническая фармакология. - №4. - 1998. - С.3-9): препараты, усиливающие мозговое кровообращение, микроциркуляцию и метаболизм: винпоцетин, винкамин, винконат, ницерголин, циннаризин, флунаризин, нимодипин, ксантиновые производные пентоксифиллина, карнитин, фосфатидилсерин, натрия оксибат; витамины и их производные: пиридоксин, пантотеновая кислота, фолиевая кислота, витамин Е; промежуточные продукты метаболизма клетки: оротовая и янтарная кислоты; энергодающие субстраты: рибоксин, АТФ, РНК, глюкозо-1- и глюкозо-6-фосфат; комбинированные препараты: инстенон.

Вышеперечисленные перечисленные препараты обладают положительным влиянием на память (ноотропным действием) и у них отсутствуют ярко выраженные эффекты традиционных психотропных и кардиотропных препаратов. Для ноотропов также свойственна низкая токсичность и отсутствие выраженных побочных эффектов даже в субтоксических дозах (за исключением некоторых холинергических препаратов).

В настоящее время большой интерес вызывают ноотропные препараты на основе пептидов, такие как кортексин, церебролизин, дельтаран, селанк, ноопепт (РЛС-Энциклопедия лекарств / Гл. ред. Крылов Ю.Ф. / М.: "РЛС-2001". - 2000. - 1504 с.; Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России: Справочник. - М.: АстраФармСервис, 2000. - 1408 с.).

В частности, показано (RU 2394836, 2010), что пептид общей формулы: Ac-X-Met-Pro-Arg-Gly-NH2, где X-Met - L-Met или DL-Met перспективен для создания лекарственных препаратов с нейротропной активностью. Известны цистинсодержащие пептиды, являющиеся фрагментами C-концевой последовательности вазопрессина, стимулирующие обучаемость лабораторных животных в дозах, в 100-1000 раз превышающих дозы вазопрессина в аналогичных тестах, но лишенные его гормональных эффектов (3. Burbach J.P.H., Leboille J.L.M. // J. Biol. Chem. - 1983. - V.258, N 3. - P.1487-1489; Valter M.P., De Wied D., Van Ree J.M. // Neuropeptides. - 1997. - V.31, N 5. - P.489-494). Показано (Голубович В.П., Мартинович В.П., Усенко А.Б и др. //. Химико-фармацевтический журнал, 1888. №6. - С.675-679; Мартинович В.П., Слободчикова Л.К., Голубович В.П., Ахрем А.А., Титов С.А., Воскресенская О.Г. // Химико-фармацевтический журнал - 1989. №9. - С.1054-1057), что тетрапептид Cys-Pro-Arg-Gly-NH2 является активным стимулятором памяти и обучаемости, эффективные дозы которого сопоставимы с дозами вазопрессина.

Недостатками данных препаратов является недостаточно высокая активность при воздействии на высшие интегративные функции мозга.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому эффекту является циклический пролил-глицин, используемый в качестве нейропротективного агента для лечения поражений нервной системы, включая инсульты, травмы мозга, болень Альгеймера, болезнь Паркинсона и иные поражения нервной системы человека (US 2007/0244039, 2007).

Недостатком препарата является его недостаточно высокая ноотропная активность, в частности, относительно невысокое стимулирующее воздействие на процессы обучения.

Задачей, решаемой авторами, являлось создание новых средств на основе пептидов, обладающих более высокой ноотропной активностью.

Для решения поставленной задачи были синтезированы и исследованы различные циклические пептиды, содержащие пролин. Сопоставление их свойств проводилось как с ближайшим аналогом - цикло (Pro-Gly), так и с наиболее широко используемым ноотропным препаратом Ноопепт® (таблетки 10 мг, ЗАО «Мастерклон», г. Москва).

Технический результат был достигнут созданием новых циклических пептидов общей формулы где Х-аланин или глютамин, а Pro-пролин.

Соединения получают по стандартной технологии пептидного синтеза на твердой фазе или в растворе (например, J.M. Steward and J.D. Young, "Solid Phase Peptide Synthesis", W.H. Freeman Co., San Francisco, 1969)

Сущность изобретения иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Синтез пептидов

В работе в качестве исходного сырья были использованы: оксим-полимер (IRIS, С=0.9 мМ/г), трет-бутилоксикарбонильные производные аминокислот (Boc-Aa-OH), 1-гидроксибензотриазол (HOBt), диметиламинопиридин (DMAP), диизопропилкарбодиимид (DIC), диизопропилэтиламин (DIPEA), трифторуксусная кислота (TFA), хлористый метилен (CH2Cl2), диметилформамид (DMF), уксусная кислота (AcOH).

Синтез пептидов cyclo(Pro-Gln) (DKP-5); cyclo(Pro-Ala) (DKP-9); cyclo(Pro-D-Ala) (DKP-10); cyclo(Pro-Gly) (DKP-40) проходил в несколько последовательных стадий в условиях традиционного пептидного синтеза..

Присоединение первого аминокислотного остатка. 1 мМ оксим-полимера помещают в реактор для твердофазного синтеза пептидов, добавляют 40 мл DMF и перемешивают в течение 1 часа. 5 мМ Вос-Аа-ОН (Boc-Gln-OH, Boc-Ala-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-Gly-OH) и 5 мМ HOBt растворяют в 10 мл DMF и после охлаждения до 4°С добавляют 5 мМ DIC. Полученный раствор выдерживают при 4°С 15 минут, затем при комнатной температуре 25 минут, переносят в реактор с полимером и добавляют 1 мМ DM АР в 1 мл DMF. Реакционную смесь перемешивают в течение 20 часов при комнатной температуре, отфильтровывают и полимер промывают 40 мл DMF 3 раза и 40 мл CH2Cl2 2 раза.

Деблокирование проводят, внося в реакционный сосуд 30 мл 25% раствора TFA в CH2Cl2 2 раза на 2 и 30 минут. Полимер отфильтровывают и промывают 40 мл CH2Cl2 3 раза и 40 мл DMF 3 раза.

Присоединение второго аминокислотного остатка. 5 мМ Boc-Aa-OH (Boc-Pro-OH, Boc-(N-Me-Ala-OH) и 5 мМ HOBt растворяют в 10 мл DMF и после охлаждения до 4°C добавляют 5 мМ DIC. Полученный раствор выдерживают при 4°C 15 минут, затем при комнатной температуре 25 минут, переносят в реактор с аминоацилполимером и добавляют 6 мМ DIPEA в 1 мл DMF. Реакционную смесь перемешивают в течение 30 минут при комнатной температуре, отфильтровывают и полимер промывают 40 мл DMF 3 раза и 40 мл CH2Cl2 2 раза.

Деблокирование проводят, внося в реакционный сосуд 30 мл 25% раствора TFA в CH2Cl2 2 раза на 2 и 30 минут. Полимер отфильтровывают и промывают 40 мл CH2Cl2 3 раза и 40 мл DMF 3 раза.

Циклизация. В реакционный сосуд с дипептидил-полимером вносят 10 мл DMF, 6 мМ DIPEA и перемешивают в течение 30 минут. Затем добавляют 10 мМ AcOH и перемешивают реакционную смесь в течение 2 суток. Полимер отфильтровывают, собирая фильтрат, и промывают 20 мл DMF 2 раза. Объединенные фильтраты упаривают досуха. Остаток растворяют в 20 мл 0,1% водного раствора TFA, замораживают и лиофилизируют.

Полученная субстанция подвергается очистке с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на колонке Waters Prep Nova-Pak HR С-18, 6µ, 60Å, 19×300 mm в градиенте ацетонитрила 5-75% за 30 минут. Детекция при 220 нм. Фракцию, соответствующую пику основного продукта, после лиофильной сушки подвергали аминокислотному, масс-спектральному и ВЭЖХ анализам:

- условия ВЭЖХ анализа: аналитический хроматограф Gilson, Франция, колонка Purospher STARRP-18e, 5µm, 100Å, 4,6×150 mm; градиент (1-25)% ацетонитрила в 0,1% TFA за 20 минут;

- условия аминослотного анализа: аминокислотный анализатор LKB Alpha Plus 4151, Швеция; гидролиз: 4M метансульфокислота, содержащая 0.2% триптамина, 110°C, 22 часа;

- условия масс-спектрального анализа: массспектрометр Voyager-DE BioSpectrometry Workstation, Per Sepetive Biosystems, США.

Все синтезированные пептиды имели аминокислотный состав и молекулярную массу, соответствующие теоретическим значениям. Чистота соединений по данным аналитической ОФ-ВЭЖХ составляла не менее 98%.

Характеристики полученных препаратов приведены в таблице 1.

Таблица 1
Пептид ВЭЖХ Мол. масса Аминокислотный состав Выход, %
градиент чистота теор. экспер.
DKP-5 1-25 >98% 225.25 226.12 Gln 1.00; Pro 0.96 50
DKP-9 1-25 >98% 168.19 169.00 Pro 0.98; Ala 1.00 90
DKP-10 1-25 >98% 168.19 169.00 Pro 0.98; Ala 1.00 77
DKP-40 (прототип) 1-25 >98% 154.16 155.00 Pro 0.98; Gly 1.00 25

Пример 2. Оценка биологической активности пептидов

Базисной моделью для оценки влияния веществ на формирование и воспроизведение памятного следа в норме и в условиях его экспериментального нарушения является методика условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ) [Буреш Я. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. - М.: Высш. шк., 1991. - 399 с.]. Метод основан на торможении врожденной деятельности или приобретенных навыков, приводящим к отрицательным последствиям для организма. В условиях пассивного избегания животное обучается избегать вредные факторы путем подавления определенных форм поведения, в данном исследовании - избегать предпочитаемого темного пространства.

Эксперименты проводили на беспородных белых крысах-самцах массой 180-200 г. Каждая экспериментальная и контрольная группа включала по 10 животных. Перед выработкой УРПИ экспериментальным животным на протяжении 10 дней вводили исследуемые препараты в дозах: от 0.01 мг/кг до 1 мг/кг в/б в объеме 0.2 мл на 100 г массы животного. Контрольным животным вводили в/б 0.9% раствор хлорида натрия в аналогичном объеме.

Препарат сравнения - «Ноопепт» вводили в/ж в виде водной взвеси также на протяжении 10 дней в дозе 5 мг/кг (адаптированная для грызунов максимальная терапевтическая доза для человека в расчете на активный компонент).

На 11 день у крыс проводили выработку УРПИ в установке, запускающим стимулом которой было нахождение животного в ярко освещенном пространстве. Крысу помещали в светлый отсек двухсекционной камеры. После перехода крысы в темный отсек сразу же наносили неустранимое болевое воздействие 5 последовательными стимулами переменного тока (1 мА, длительностью 1 секунда каждый с интервалом 2 секунды).

При тестировании (повторном помещении в освещенный отсек через 24 часа с целью определения сохранения УРПИ) наблюдение за животным велось в течение 180 секунд, регистрировалось время латентного периода перехода крысы в темную часть камеры, время пребывания в светлом и темном отсеках и число животных, не зашедших в темный отсек (число обученных животных).

Результаты эффекта исследуемых препаратов по влиянию на УРПИ представлены в таблице 2.

Таблица 2
Влияние природы сравниваемых препаратов на выработку УРПИ крыс
Экспериментальные группы Показатели
Латентный период реакции перехода, с Время пребывания в светлой камере, с Время пребывания в темной камере, с Число обученных животных (% ко всей группе)
Контроль, физиологический раствор 80±5 79±5 24.5±2.5 5 (50)
DKP-5 0.01 мг/кг 138±9* 118±7* 5.0±0.5* 10 (100)
0.1 мг/кг 140±12* 120±11* 4.5±0.5* 10 (100)
1 мг/кг 142±11* 123±14* 4.5±0.5* 10 (100)
DKP-9 0.01 мг/кг 122±6* 103±5* 7.0±0.5* 8 (80)
0.1 мг/кг 129±8* 107±5* 6.5±0.5* 9 (90)
1 мг/кг 132±9* 113±4* 7.0±0.5* 9 (90)
DKP-10 0.01 мг/кг 135±9* 114±8* 6.5±0.5* 9 (90)
0.1 мг/кг 138±10* 117±6* 7.0±0.5* 9 (90)
1 мг/кг 140±11* 120±4* 6.5±0.5* 10 (100)
DKP-40 (прототип) 0.01 мг/кг 110±8* 88±4 9.0±0.5* 7 (70)
0.1 мг/кг 115±7* 96±5 7.5±0.5* 7 (70)
1 мг/кг 120±9* 100±3* 8.5±0.5* 8 (80)
Ноопепт 115±10* 95±5 7.5±0.5* 7 (70)
* - достоверные отличия от контрольных животных при p<0.05

Рассматривая данные, представленные в таблице, можно отметить, что препараты улучшают мнестические функции ЦНС животных, причем для каждого препарата его положительный эффект не зависит от дозы в рассматриваемом диапазоне доз.

По эффективности препараты можно расположить в следующем ряду по убыванию активности: DKP-5 > DKP-9 = DKP-10 > DKP-40 - Ноопепт®, т.е. заявляемые пептиды по показателям УРПИ превосходили препараты сравнения.

1. Средство, обладающее ноотропным воздействием на организм на основе циклических дипептидов, содержащее последовательность пролин-аланин.

2. Средство по п.1, представляющее собой циклический дипептид, содержащее последовательность пролин-D-аланин.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к новым соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям, обладающим способностью связываться с амилоидными пептидами и/или амилоидами.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и неонатологии, и может быть использовано для профилактики развития перинатального поражения ЦНС гипоксически-ишемического генеза у детей из группы риска.
Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, физиологии труда, и может быть использовано для оптимизации интеллектуальной деятельности обучающихся. Для этого на обучающихся воздействуют электромагнитным излучением крайне высокой частоты с модуляциями частотного диапазона от 43 ГГц до 44 ГГц.

Описываются новые соединения общей формулы [I]: или их фармакологически приемлемые соли, где R1 - С1-6 алкил; R2 - С1-6 алкокси; m и n означают 1; W означает N; кольцо А представляет собой фрагменты формулы , или , которые могут быть замещены; X1 - одинарная связь, С1-6 алкиленовая группа или -C(O)NR3-, где R3 водород, С1-6 алкил или фенил; и кольцо B - фрагменты формулы [5]-[11]: , , которые могут быть замещены, и фармацевтическая композиция, их содержащая.

Изобретение относится к соединениям, обладающим повышенной эффективностью в модуляции активности НМДА-рецептора. Такие соединения предназначены для применения в лечении заболеваний и расстройств, таких как расстройств обучения, когнитивных активностей, а также для устранения и/или снижения невропатической боли.

Изобретение относится к производным 2-Амино-5,5-дифтор-5,6-дигидро-4Н-[1,3]оксазин-4-ил)-фенил]-амида формулы I, обладающим ингибиторной активностью в отношении ВАСЕ1 и/или ВАСЕ2, фармацевтическим композициям на их основе и к их применению в качестве терапевтически активных веществ.

Изобретение относится к новым соединениям формулы (1), которые обладают сродством к µ-опиоидному рецептору и к ORL1-рецептору, к лекарственному средству, содержащему эти соединения, и к их применению для получения лекарственного средства для лечения боли и других заболеваний.

Изобретение относится к области иммунологии и медицины. Представлено антитело для восстановления центральной нервной системы, содержащее антиген-связывающий участок, который специфично связывается с полипептидом Nogo А человека или NiG человека (SEQ ID NO: 2 и 3, соответственно, приведенные в описании), где указанный антиген-связывающий участок содержит: CDR-H1-6А3 (SEQ ID NO:8), CDR-H2-6А3 (SEQ ID NO:9) и CDR-H3-6А3 (SEQ ID NO:10); и CDR-L1-6А3 (SEQ ID NO:11), CDR-L2-6А3 (SEQ ID NO:12) и CDR-L3-6А3 (SEQ ID NO:13).

Изобретение относится к улучшенному способу получения мезилата 1-амино-1,3,3,5,5-пентаметилциклогексана. Указанное соединение может быть использовано при заболеваниях и состояниях, таких как шум в ушах, невропатической боли и при лечении болезни Альцгеймера.

Изобретение относится к соединению формулы (I) или к его фармацевтически приемлемой соли, где А означает -CHR7-, где R7 означает водород, C1-6 алкил, необязательно замещенный заместителем, выбранным из -ОН, -OR8, где R8 означает C1-6 алкил, -NH2, -COOH и -CONH2, C6 арил-C1 алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями, выбранными из -ОН, -ОР(=O)(ОН)2, -ОР(=O)(ONa)2 и C1-6 алкила, 5-9-членный гетероарил-C1 алкил, C6 циклоалкил-C1 алкил, С6 арил или C6 циклоалкил; G означает -NR6- или -О-, где R6 независимо выбирают из C1-6 алкила и С2-6 алкенила; R1 означает -Ra-R10; где Ra означает C1-6 алкилен и R10 означает нафтил или 9-10-членный бициклический конденсированный гетероарил, необязательно замещенный заместителем, выбранным из -NH2 и галогена; R2 означает -W21-W22-Rb-R20, где W21 означает -(СО)-; W22 означает -О- или -NH-; Rb означает связь или C1-6 алкилен, необязательно замещенный C1-6 алкилом; и R20 означает C1-6 алкил, С6-10 арил, необязательно замещенный галогеном, 5-6-членный гетероарил или C6 циклоалкил; и R3 означает C1-6 алкил; где "гетероарил" означает моноциклический или бициклический ароматический радикал, где 1-3 атома кольца являются гетероатомами, выбранными из азота, кислорода и серы, а оставшиеся атомы кольца являются атомами углерода; и "бициклический конденсированный" означает кольцо, которое связано с другим кольцом с образованием бициклической структуры, когда атомы, общие для обоих колец, непосредственно связаны друг с другом.
Изобретение относится к области медицины. Для лечения нозокомиального синусита в отделениях реанимации и интенсивной терапии проводят очищение носовой полости и промывание верхнечелюстной пазухи по обычной методике иглой Куликовского.

Пептиды // 2496789
Заявленное изобретение относится к циклическому олигопептиду с конформационными ограничениями, образующему два стабильных и специфичных эпитопа, каждый из которых способен взаимодействовать с лигандом-мишенью, фармацевтической композиции, содержащей такой олигопептид и способу получения олигопептида.
Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения респираторных болезней молодняка сельскохозяйственных животных. .

Изобретение относится к соединению и его фармацевтически приемлемой соли, предназначенному для использования в качестве противогрибкового средства, в частности терапевтического средства против глубокого микоза.

Изобретение относится к новому полипептидному соединению, обладающему противогрибковой активностью. .

Изобретение относится к RGD-содержащим циклическим пептидомиметикам; конъюгатам указанных пептидомиметиков и функциональной группы, выбранной из флуоресцентных зондов, фотосенсибилизаторов, хелатирующих агентов или цитотоксических агентов; и фармацевтическим композициям, содержащим эти конъюгаты. Конъюгаты по изобретению пригодны как для диагностических целей, так и для лечения различных заболеваний, нарушений и состояний. 4 н. и 22 з.п. ф-лы, 9 ил., 10 табл., 13 пр.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой средство, обладающее ноотропным воздействием на организм на основе циклических дипептидов, содержащее последовательность пролин-аланин. Изобретение обеспечивает расширение арсенала средств, обладающих ноотропной активностью, 1 з.п. ф-лы, 2 пр., 2 табл.

Наверх