Штамм бактерий serratia marcescens m-10 - продуцент внеклеточной неспецифической эндонуклеазы, обладающей выраженным противовирусным действием


 


Владельцы патента RU 2604183:

Общество с ограниченной ответственностью "Северный стиль" (RU)

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен штамм бактерий Serratia marcescens, являющийся продуцентом неспецифической бактериальной эндонуклеазы. Штамм депонирован в ВКМ под номером VKM В-2931D. Эндонуклеазная активность штамма к 36 ч культивирования на мясо-пептонном бульоне составляет 28720 ед./ мл культуральной жидкости. 1 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к области биотехнологии и касается штамма Serratia marcescens М-10, являющегося продуцентом невнеклеточной неспецифической эндонуклеазы. Фермент эндонуклеаза бактериальная может быть использован как основное действующее вещество препаратов для лечения и профилактики вирусных инфекционных заболеваний животных, в частности телят и птицы, и насекомых (пчелы).

Цель изобретения - увеличение содержания эндонуклеазы (ед. акт.) в 1 мл культуральной среды. Увеличение эндонуклеазной активности достигается получением штамма Serratia marcescens М-10 из музейного штамма Serratia marcescens (Bacterium prodiglosum) В-10 M-2 (ВКПМ В-1992) под действием нитрозометилмочевины с последующим отбором наиболее высокоактивных вариантов.

Известен штамм Serratia marcescens (Bacterium prodiglosum) B-10 M-2 (ВКПМ B-1992), синтезирующий неспецифическую энлонуклеазу в количестве до 15000 ед. фермента на 1 мл культуральной жидкости при выращивании на пептонной среде (МПБ или среда Лурия). Штамм получен из штамма Bacterium prodiglosum В-10 М-1 под действием мутагена - нитрозометилмочевины (Институт цитологии и генетики СО АН СССР, авторы - З.И. Панфилова, Р.И. Салганик; SU 928794 А1).

Недостатком данного штамма является низкая активность (15000 ед. акт.) и соответственно выход фермента эндонуклеазы бактериальной. В настоящее время бактериальная эндонуклеаза применяется в основном для лечения вирусных заболеваний пчел. Неспецифическая бактериальная эндонуклеаза может быть также использована для лечения вирусных инфекционных заболеваний птиц и молодняка крупного рогатого скота.

Увеличение эндонуклеазной активности достигается получением штамма Serratia marcescens М-10 из музейного штамма Serratia marcescens (Bacterium prodiglosum) В-10 M-2 (ВКПМ В-1992) под действием нитрозометилмочевины. Для этого штамм Serratia marcescens В-10 М-2 выращивали на среде L (Лурия) следующего состава, г:

дрожжевой экстракт - 5,0;

пептон - 15,0;

NaCl - 5,0;

вода дистиллированная - до 1 л.

Культуру выращивали в течение 18 часов при 30°С до оптической плотности 0,7. Оптическую плотность измеряли на фотоэлектроколориметре ФЭК-М (светофильтр №3). Затем культуру охлаждали в течение 1 ч до 15°С, клетки отделяли центрифугированием в течение 20 мин, скорость вращения ротора 5000 об/мин. В клеточную массу добавляли свежей среды L (0,5 л) и 0,2% нитрозометилмочевины, инкубировали при встряхивании на качалке в течение 15 мин при 30°С. Суспензию, обработанную мутагеном, высевали на индикаторную среду и инкубировали в течение 24 ч при 30°С. Индикаторная среда имела следующий состав, г:

рибонуклеиновая кислота (РНК) - 0,6;

толуидиновый голубой - 0,1;

агар питательный - 38;

вода дистиллированная до - 1 л.

Краситель толуидиновый голубой окрашивал среду в голубой цвет. После инкубирования культуры в результате гидролиза РНК при выделении эндонуклеазы вокруг колоний появлялись ореолы розового цвета. Диаметр ореолов служил качественным показателем ферментной активности. Отбирали клоны, у которых проявились ореолы наибольших размеров по сравнению исходным штаммом, диаметр не менее 18-20 мм.

В результате отбора был отобран штамм-мутант Serratia marcescens М-10, характеризующийся следующими морфологическими и культуральными признаками.

Морфологические признаки. Клетки - подвижные, прямые, палочковидные, размером 0,5-0,8 × 1,0-3,0 мкм, грамотрицательные.

Культуральные признаки. При посеве на мясо-пептонном агаре (МПА) через 48 ч роста при 30°С культура образует округлые, гладкие, выпуклые колонии светло-коричневого цвета, диаметром 1,5-1,7 мм. Оптимальный режим роста: pH 6,5-7,5; температура 28-30°С.

Физиолого-биохимические свойства. Штамм является ауксотрофом. Из глюкозы, сахарозы, мальтозы и маннита образует кислоту. На лактозе кислоту не образует. Крахмал гидролизирует слабо, клетчатку не разлагает. Молоко свертывает, желатин разжижает. Нитраты восстанавливает до нитритов.

При выращивании на мясо-пептонном бульоне (МПБ) штамм Serratia marcescens М-10 к 24 ч роста образует 25000-30000 ед. фермента на 1 мл культуральной жидкости, тогда как штамм Serratia marcescens (Bacterium prodiglosum) В-10 M-2 к 24 ч роста образует 15000 ед. фермента.

Пример. Штамм Serratia marcescens М-10 и штамм Serratia marcescens В-10 М-2 выращивали на МПА в течение 24 ч. Затем отбирали типичные колонии, суспендировали клетки в среде L до плотности 1×109 кл/мл и инокулировали в количестве 1×107 кл/мл в 250 мл среды L. Инкубирование проводили при 30°С в колбах Эрленмейера объемом 750 мл со встряхиванием на лабораторном шейкере Stuart SSL1, скорость 180 об/мин. Через каждые 2 часа из культуральной среды отбирали пробы по 5 мл для качественного и количественного определения эндонуклеазной активности.

Качественная оценка эндонуклеазной активности проводилась на индикаторной среде с красителем толуидиновый голубой. Количественное определение внеклеточной эндонуклеазы проводилось по появлению кислородорастворимого осадка под действием культуральной жидкости на РНК, с последующей адсорбцией при 260 нм. Измерение проводили на спектрофотометре СФ-16 (кювета L=1 дм3).

Данные по количеству и времени накопления внеклеточной эндонуклеазы штаммами Serratia marcescens М-10 и Serratia marcescens В-10 М-2 приведены в таблице.

Штамм бактерий Serratia marcescens М-10 - продуцент неспецифической бактериальной эндонуклеазы, депонированный во Всероссийской коллекции микроорганизмов под № VKM B-2931D.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии и может применяться в коммунальном (водоподготовка и водоотведение) и сельском хозяйстве, горнодобывающей промышленности, медицине, биотехнологическом производстве.

Изобретение относится к области биохимии, генной инженерии и биотехнологии, в частности к штамму Escherichia coli BL21(DE3)GoldpETCYPopti. Настоящий штамм является продуцентом рекомбинантного циклофилина А человека.
Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к пчеловодству, и может быть использовано для борьбы с большой восковой молью. Биоинсектицид для борьбы с большой восковой молью содержит штамм Bacillus thuringiensis ВНИИСХМ RCAM 00045 и наполнитель например NaCl, в заданном соотношении компонентов.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу детоксикации белого фосфора в загрязненной почве. Обеззараживание выполняют путем обработки загрязненной белым фосфором почвы штаммом Trichoderma asperellum ВКПМ F-1087.
Изобретение относится к промышленной микробиологии. Штамм бактерий Desulfovibrio sp.

Изобретение относится к биотехнологии, прикладной микробиологии и может быть использовано для применения в качестве продуцента душистых соединений. Штамм микроводоросли Chlorella vulgaris Beyerinck SMP-1802153, обладающий способностью синтезировать смесь душистых веществ, аналогичную резиноиду дубового мха, депонирован в коллекции микроводорослей ИФР РАН (IPPAS) под регистрационным номером Chlorella vulgaris Beyerinck IPPAS C-2019.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для рекомбинантного получения CTR1. Получают плазмидную ДНК pNdCTR1, кодирующую гибридный полипептид GST-NdCTR1, состоящий из N-концевого полипептидного фрагмента глутатион-S-трансферазы (GST), соединенного через сайт гидролиза тромбином с полипептидным фрагментом N-концевого домена высокоаффинного импортера меди человека CTR1 (NdCTR1).
Изобретение относится к биотехнологии. Предложен штамм Enterococcus durans кос 37 б №19, обладающий высокой антагонистической способностью по отношению к условно-патогенной и патогенной микрофлоре.

Группа изобретений относится к штаммам микроорганизмов Lactobacillus plantarum MCC1 DSM 23881 и Lactobacillus gasseri MCC2 DSM 23882 и их применению в качестве антиоксидантных протеолитических ингредиентов для приготовления пищевого продукта или пищевой добавки.

Предложены варианты бактерий Escherichia coli, являющихся продуцентами янтарной кислоты. Бактерия Escherichia coli модифицирована таким образом, что гены асkА, pta, рохВ, ldhA, adhE, ptsG в ней инактивированы, экспрессия генов galP и glk усилена, и бактерия обладающий активностью пируват карбоксилазы.

Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой способ сайт-специфического гидролиза С5-метилированной последовательности ДНК. Готовят реакционную смесь, содержащую буферный раствор и образец С5-метилированной ДНК, добавляют к смеси диметилсульфоксид до конечной концентрации 15-25%, а затем MD-эндонуклеазу, смесь инкубируют в течение часа при 30-37°C с последующим анализом результата гидролиза ДНК методом гель-электрофореза, при этом в качестве MD-эндонуклеазы используют GlaI с концентрацией 4-8 е.а./мкл или PcsI с концентрацией 1-2 е.а./мкл.

Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой штамм Plantibacter flavus 3Kz, депонированный в ВКПМ под регистрационным номером В-12248, являющийся продуцентом метилзависимой сайт-специфической эндонуклеазы PfsI, которая узнает и расщепляет обе цепи последовательности ДНК , перед центральным нуклеотидом N, с образованием однонуклеотидных 5′-выступающих концов, при наличии в данной последовательности не менее семи С5-метилированых цитозинов.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к ферментному биокатализатору в виде наноразмерных частиц, представляющих собой нековалентные полиэлектролитные комплексы, образованные полигистидинсодержащим полипептидом с активностью органофосфатгидролазы и блок-сополимером полиэтиленгликоля с полиглутаминовой кислотой.

Настоящее изобретение относится к фосфодиэстеразе 4D7 (PDE4D7) для применения в качестве маркера для агрессивного гормон-чувствительного рака предстательной железы, где экспрессия маркера повышена при сравнении экспрессии в ткани агрессивного гормон-чувствительного рака предстательной железы с экспрессией в нормальной ткани или ткани доброкачественной опухоли предстательной железы, и к применению PDE4D7 в качестве диагностического маркера для агрессивного гормон-чувствительного рака предстательной железы.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения (3aS,7aR)-гексагидроизобензофуран-1(3Н)-она.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой молекулу ДНК, которая кодирует полипептид, обладающий фосфолипазной активностью, по существу без липазной активности, причем последовательность молекулы ДНК предпочтительно происходит из Aspergillus и более предпочтительно из Aspergillus fumigatus.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой новую фитазу с повышенной термостабильностью. Изобретение касается также применения фитазы в корме для животных для снижения содержания фосфата в навозе, а также в кормовых добавках и кормах для животных.

Изобретение относится к области молекулярной биологии, биохимии и генной инженерии. Предложены нуклеиновая кислота, характеризующаяся нуклеотидной последовательностью, кодирующей белок, который состоит из аминокислотной последовательности с делецией, заменой или добавлением одной или более аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 7 и обладает активностью фосфатазы фосфатидной кислоты, соответствующий белок, рекомбинантный вектор, клетка для экспрессии белка и способ получения композиции жирной кислоты.
Изобретение относится к биотехнологии. Предложен ферментный биокатализатор в виде наноразмерных частиц для детоксификации фосфорорганических соединений in vivo.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в пищевой промышленности. Из Mortierella alpina получен новый ген, который кодирует фосфатазу фосфатидной кислоты (ЕС 3.1.3.4), определена открытая рамка считывания и выведена аминокислотная последовательность фермента, названного MaPAP1.

Изобретение относится к применению пробиотического препарата для облегчения симптомов синдрома раздраженного кишечника. Препарат содержит штамм Bifidobacterium bifidum MIMBb75, депонированный под регистрационным номером DSM 24514, и по меньшей мере один проглатываемый носитель.
Наверх