Способ подтверждения аутентичности вареных колбасных изделий



Способ подтверждения аутентичности вареных колбасных изделий
Способ подтверждения аутентичности вареных колбасных изделий
G01N2550/00 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2678090:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр пищевых систем им. В.М. Горбатова" РАН (RU)

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для контроля аутентичности и качества вареных колбасных изделий. Для этого проводят двумерный электрофорез в полиакриламидном геле исследуемого изделия и эталонного образца с последующим сравнением маркерных белков в полученных электрофореграммах, которые идентифицируют масс-спектрометрически после извлечения из полиакриламидного геля. В качестве маркерных белков выбирают Тропомиозин альфа 1 (свинина), Тропомиозин альфа 1 (говядина), Миозиновую легкую цепь (говядина), Белок, подобный легкой цепи миозина 3 (свинина), фосфорилируемые легкие цепи миозина MKC1f (свинина), фосфорилируемые легкие цепи миозина MYL1 (говядина), Мышечную енолазу (свинина), Мышечную енолазу (говядина), М-цепь креатинфосфокиназы (свинина), М-цепь креатинфосфокиназы (говядина), Фруктозобисфосфат альдолазу А (свинина) Гомолог говядины, Фруктозобисфосфат альдолазу А (говядина), Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназу (свинина), Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназу (говядина), Миоглобин (свинина), Миоглобин (говядина). Изобретение обеспечивает высокую достоверность определения аутентичности вареных колбасных изделий. 2 ил.

 

Заявляемое техническое решение относится к области контроля качества вареных колбасных изделий по их протеомному профилю. Техническое решение может использоваться в пищевой и перерабатывающей промышленности, а также в системе технического контроля в научных, производственных, учебных и сертификационных лабораториях.

Известен способ идентификации белков в протеомных исследованиях с помощью технологии масс-спектрометрии MALDI TOF MS (Claydon, A.J., Grundy Н.Н., Charlton A.J., Romero M.R. Identification of novel peptides for horse meat speciation in highly processed foodstuffs // Food Add. Cont. Part A - Chem. Anal. Contr. Expos. Risk Assessm. 2015, 32(10): 1718-1729). Способ основан на идентификации белков и пептидов при получении одномерных электрофореграмм

Недостатком способа является подавление большинства анализируемых белков с потерей функциональной активности в следствии применения денатурирующих агентов, таких как додецил сульфат натрия или мочевины, которые используются при фракционировании белков методом одномерного электорофореза. В результате чего снижается достоверность аутентичности вареных колбасных изделий.

Известен метод двумерного электрофореза по О'Фарреллу для изучения белков скелетных мышц свиней и коров (Saisekhar Y., Reddy P.M. Use of Troponin for Species Identification of Cattle and Buffalo Meats // J. Food Sci. Technol., 1995, vol. 32, no. 1, pp. 68-70). Метод основан на получении общего профиля всех белков. Однако данными методами невозможно идентифицировать аутентичность белкового продукта по общему пулу белков происхождения.

Известен метод целенаправленного изучения белков теплового шока в мышцах свиней и коров методом двумерного электрофореза. Метод основан на определении постоянной и индуцибельной изоформе Hsp70 в скелетных мышцах свиней, (Van Laack R.L., Faustman С., Sebranek J.G.. Pork quality and the expression of stress protein Hsp70 in swine // J. Anim. Sci. 1993. Vol. 71. P. 2958-2964). Недостатком указанного способа является невозможность полной аутентичной идентификации по одному маркерному белку сложного белкового объекта, подвергнутого тепловой обработке.

Известен метод определения протеома длиннейшей мышцы спины свиней (m. longissimus lumborum) (Terlouw С.Pig Longissimus lumborum proteome: Part II: Relationships between protein content and meat quality // Meat Sci. 2008. Vol. 80(4). P. 982-996), суммарно включавший 220 белковых фракций. Метод основан на получении общего профиля всех белков и позволяет устанавливать существование тендерных различий в белковых профилях и давать оценку изменения белкового состава, оказывающего влияние на качество мяса. Однако данный метод не позволяет осуществлять однозначную идентификацию гомогенной смеси субстратов на основе животного сырья, подвергнутой тепловой обработке.

Известны также методы видовой идентификации мяса и мясной продукции методами жидкостной хроматографии, масс-спектроскопии, ИФА, ПЦР, в том числе, идентификация тканеспецифичных белков соединительной ткани комплексным методом, объединяющим пептидный фингерпринт и жидкостную хроматографию. Эти методы устанавливают ряд видоспецифичных белков, сохраняющихся в конечных мясных продуктах (пептиды HSP27, H-FABP, АТФ-синтаза, субъединица 1-цитохромного bc-комплекса), что дает возможность использования указанных белков в качестве потенциальных биомаркеров. Недостатком данных способов является перекрестная совпадающая идентификация разных филогенетических видов сырья, по достаточно узкому набору выявленных биомаркеров, что делает невозможным однозначную видоспецифическую идентификацию.

Е. REED с соавторами (США) в качестве маркера иммунного статуса предлагают сравнительный анализ фрагмента 5 килодальтон (kDa) комплемента С4 анафилотоксина (С4А) опытного и контрольного образцов животных тканей, при этом в качестве маркерных также предлагаются Аполипопротеин А1 и/или терминальный фрагмент альфа-1-анти-химотрипсина С (AACT) (United States Patent Application №2017 0030928 A1). Недостатком предлагаемого решения представляется ограниченность возможностей измерения - способ пригоден только для исследований нативных тканей-биоптатов.

Наиболее близким по совокупности существенных признаков к заявляемому способу техническим решением, принимаемым за прототип является способ идентификации меченых белков (Пат. US 20050233399 А1). В данном способе используются аффинно-меченые реакционно-способные реагенты, которые позволяют селективно выделять пептидные фрагменты или продукты реакции с данным белком (например, продуктами ферментативной реакции) из сложных смесей). При этом методе фрагмент белка одного или нескольких скелетных меченых белков или аффинно-меченых фрагментов белка секвенируют с помощью тандемной масс-спектрометрии для идентификации белка или фрагмента белка. Недостатками прототипа являются получение ложного результата вследствие перекрестного наложения белков, высокая стоимость и трудоемкость метода.

Задачей, на решение которой направлено заявляемое техническое решение, является способ подтверждения аутентичности вареных колбасных изделий, обеспечивающий высокую достоверность аутентификации, применимость для выявления фальсификации вареных колбасных изделий, снижение трудоемкости и стоимости исследований.

Решение данной задачи, с достижением указанного технического результата обеспечивается тем, что из полиакриламидного геля извлекаются маркерные белки, с последующей масс-спектрометрической идентификацией, на: Тропомиозин альфа 1 (свинина), Тропомиозин альфа 1 (говядина), Миозиновая легкая цепь (говядина), Белок подобный легкой цепи миозина 3 (свинина), фосфорилируемые легкие цепи миозина MLC1f (свинина), фосфорилируемые легкие цепи миозина MYL1 (говядина), Мышечная енолаза (свинина), Мышечная енолаза (говядина), М-цепь креатинфосфокиназы (свинина), М-цепь креатинфосфокиназы (говядина), Фруктозобисфосфат альдолаза А (свинина) Гомолог говядины, Фруктозобисфосфат альдолаза А (говядина), Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназа (свинина), Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназа (говядина), Миоглобин (свинина), Миоглобин (говядина); полученная двумерная электрофореграмма геля сравнивается с двумерной электрофореграммой геля эталонного образца.

Выбор маркерных белков Тропомиозин альфа 1 (свинина), Тропомиозин альфа 1 (говядина), Миозиновая легкая цепь (говядина), Белок подобный легкой цепи миозина 3 (свинина), фосфорилируемые легкие цепи миозина MKC1f (свинина), фосфорилируемые легкие цепи миозина MYL1 (говядина), Мышечная енолаза (свинина), Мышечная енолаза (говядина), М-цепь креатинфосфокиназы (свинина), М-цепь креатинфосфокиназы (говядина), Фруктозобисфосфат альдолаза А (свинина) Гомолог говядины, Фруктозобисфосфат альдолаза А (говядина), Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназа (свинина), Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназа (говядина), Миоглобин (свинина), Миоглобин (говядина) объясняется их стабильностью в технологии приготовления вареных колбасных изделий. Использование иного состава маркерных белков, согласно научным исследованиям, не обеспечивало достижение технического результата, прежде в обеспечении точности аутентификации.

Заявляемый способ подтверждения аутентичности вареных колбасных изделий по их протеомному профилю иллюстрируется схемой определения аутентичности вареных колбасных изделий на фиг. 1. Вареное колбасное изделие подвергают двумерному электрофорезу в полиакриламидном геле. Извлекаются маркерные белки с последующей масс-спектрометрической идентификациейя, с использованием например автоматической системы распознавания белков по международной автоматической базе данных. Идентификация осуществляется в отношении следующих маркерных белков: Тропомиозин альфа 1 (свинина), Тропомиозин альфа 1 (говядина), Миозиновая легкая цепь (говядина), Белок подобный легкой цепи миозина 3 (свинина), фосфорилируемые легкие цепи миозина MLC1f (свинина), фосфорилируемые легкие цепи миозина MYL1 (говядина), Мышечная енолаза (свинина), Мышечная енолаза (говядина), М-цепь креатинфосфокиназы (свинина), М-цепь креатинфосфокиназы (говядина), Фруктозобисфосфат альдолаза А (свинина) Гомолог говядины, Фруктозобисфосфат альдолаза А (говядина), Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназа (свинина), Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназа (говядина), Миоглобин (свинина), Миоглобин (говядина). Затем двумерная электрофореграмма геля исследуемого образца сравнивается с эталонной электрофореграммой геля вареного колбасного изделия.

На Фиг. 2. (а, б, в) демонстрируется подтверждение применимости выбранного метода для подтверждения аутентичности вареных колбасных изделий по протеомному профилю. Так на двумерной электрофореграмме (а) образца колбасы вареной подтверждается присутствие только свинины и говядины в соответствии с рецептурой; на 2-ДЭ (б и в) обнаруживаются также не заявленные компоненты - немышечные белки (соевые) и белок курицы, что отмечено пунктирными прямоугольниками. При этом, присутствие дополнительных белков дает менее интенсивное окрашивание других белков в маркерной группе, означающее весомое количество не заявленных белков в образце при неизменном общем содержании белка в пробе.

Способ подтверждения аутентичности вареных колбасных изделий, включающий двумерный электрофорез в полиакриламидном геле исследуемого изделия и эталонного образца с последующим сравнением маркерных белков в полученных электрофореграммах, которые идентифицируют масс-спектрометрически после извлечения из полиакриламидного геля, отличающийся тем, что в качестве маркерных белков выбирают Тропомиозин альфа 1 (свинина), Тропомиозин альфа 1 (говядина), Миозиновую легкую цепь (говядина), Белок, подобный легкой цепи миозина 3 (свинина), фосфорилируемые легкие цепи миозина MKC1f (свинина), фосфорилируемые легкие цепи миозина MYL1 (говядина), Мышечную енолазу (свинина), Мышечную енолазу (говядина), М-цепь креатинфосфокиназы (свинина), М-цепь креатинфосфокиназы (говядина), Фруктозобисфосфат альдолазу А (свинина) Гомолог говядины, Фруктозобисфосфат альдолазу А (говядина), Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназу (свинина), Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназу (говядина), Миоглобин (свинина), Миоглобин (говядина).



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии и клинической фармакологии, и может быть использовано с целью оценки функциональной активности гликопротеина-Р (Pgp) в гематоэнцефалическом барьере для осуществления эффективной и безопасной фармакотерапии ряда неврологических заболеваний.

Изобретение относится к медицине, педиатрии, аллергологии, детской гастроэнтерологии. Комплексную диагностику пищевой аллергии к белкам коровьего молока у детей грудного возраста проводят путем выявления диагностических критериев.

Группа изобретений относится к модуляции уровней белков сыворотки для лечения пациентов с синдромом хрупкой X-хромосомы (FXS) и нарушениями аутистического спектра (ASD).

Группа изобретений относится к модуляции уровней белков сыворотки для лечения пациентов с синдромом хрупкой X-хромосомы (FXS) и нарушениями аутистического спектра (ASD).

Изобретение относится к области медицины, а именно к детской кардиологии. Изобретение представляет собой способ прогнозирования риска развития приобретенной кардиомиопатии перед занятиями спортом, включающий определение в сыворотке крови у детей за 1 месяц до начала занятий спортом концентрации тропонина-Т, N-концевого натрийуретического пептида, интерлейкина-4 (ИЛ-4) и интерлейкина-6 (ИЛ-6), при этом прогнозируют высокий риск развития приобретенной кардиомиопатии при концентрации тропонина-Т от 0,37 до 0,48 нг/мл, при концентрации N-концевого натрийуретического пептида от 66,2 до 77,1 пг/мл, при концентрации ИЛ-4 от 2,6 до 3,1 пг/мл и при концентрации ИЛ-6 от 7,3 до 9,7 пг/мл и прогнозируют низкий риск развития вторичной кардиомиопатии при концентрации тропонина-Т от 0,21 до 0,36 нг/мл, при концентрации N-концевого натрийуретического пептида от 35,3 до 43,5 пг/мл, при концентрации ИЛ-4 от 3,4 до 4,58 пг/мл и при концентрации ИЛ-6 от 5,6 до 6,9 пг/мл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к детской кардиологии. Изобретение представляет собой способ прогнозирования риска развития приобретенной кардиомиопатии перед занятиями спортом, включающий определение в сыворотке крови у детей за 1 месяц до начала занятий спортом концентрации тропонина-Т, N-концевого натрийуретического пептида, интерлейкина-4 (ИЛ-4) и интерлейкина-6 (ИЛ-6), при этом прогнозируют высокий риск развития приобретенной кардиомиопатии при концентрации тропонина-Т от 0,37 до 0,48 нг/мл, при концентрации N-концевого натрийуретического пептида от 66,2 до 77,1 пг/мл, при концентрации ИЛ-4 от 2,6 до 3,1 пг/мл и при концентрации ИЛ-6 от 7,3 до 9,7 пг/мл и прогнозируют низкий риск развития вторичной кардиомиопатии при концентрации тропонина-Т от 0,21 до 0,36 нг/мл, при концентрации N-концевого натрийуретического пептида от 35,3 до 43,5 пг/мл, при концентрации ИЛ-4 от 3,4 до 4,58 пг/мл и при концентрации ИЛ-6 от 5,6 до 6,9 пг/мл.

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, и может быть использовано для снижения уровней глюкозы у субъекта. Способ включает обеспечение субъекта рационом с низким содержанием белков, содержащим менее 10% калорий, приходящихся на источники белков, в течение первого периода времени, составляющего от 5 до 14 дней.

Изобретение относится к области медицины, а именно к детской кардиологии. Изобретение представляет собой способ прогнозирования риска развития приобретенной кардиомиопатии у спортсменов, включающий определение у детей, занимающихся спортом в течение 2-3 лет, в сыворотке крови концентрации тропонина-Т, N-концевого натрийуретического пептида, интерлейкина-4 (ИЛ-4) и интерлейкина-6 (ИЛ-6), при этом прогнозируют высокий риск развития приобретенной кардиомиопатии при концентрации тропонина-Т от 0,76 до 0,91 нг/мл, при концентрации N-концевого натрийуретического пептида от 78,2 до 92,5 пг/мл, при концентрации ИЛ-4 от 1,8 до 2,5 пг/мл и при концентрации ИЛ-6 от 8,3 до 10,1 пг/мл; прогнозируют низкий риск развития приобретенной кардиомиопатии при концентрации тропонина-Т от 0,48 до 0,72 нг/мл, при концентрации N-концевого натрийуретического пептида от 44,3 до 71,5 пг/мл, при концентрации ИЛ-4 от 3,2 до 4,0 пг/мл и при концентрации ИЛ-6 от 7,1 до 8,1 пг/мл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к детской кардиологии. Изобретение представляет собой способ прогнозирования риска развития приобретенной кардиомиопатии у спортсменов, включающий определение у детей, занимающихся спортом в течение 2-3 лет, в сыворотке крови концентрации тропонина-Т, N-концевого натрийуретического пептида, интерлейкина-4 (ИЛ-4) и интерлейкина-6 (ИЛ-6), при этом прогнозируют высокий риск развития приобретенной кардиомиопатии при концентрации тропонина-Т от 0,76 до 0,91 нг/мл, при концентрации N-концевого натрийуретического пептида от 78,2 до 92,5 пг/мл, при концентрации ИЛ-4 от 1,8 до 2,5 пг/мл и при концентрации ИЛ-6 от 8,3 до 10,1 пг/мл; прогнозируют низкий риск развития приобретенной кардиомиопатии при концентрации тропонина-Т от 0,48 до 0,72 нг/мл, при концентрации N-концевого натрийуретического пептида от 44,3 до 71,5 пг/мл, при концентрации ИЛ-4 от 3,2 до 4,0 пг/мл и при концентрации ИЛ-6 от 7,1 до 8,1 пг/мл.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, или выявления пациента с риском развития физиологического шока.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложены способы выделения белкового высокомолекулярного комплекса активации каспазы-2 человека, формирующегося в раковых клетках в ответ на обработку ДНК-повреждающим химиотерапевтическим препаратом.
Предложены способ и устройство для распознавания жидкости, содержащей положительно заряженные частицы и/или отрицательно заряженные частицы. Согласно изобретению электрическое поле прикладывается к жидкости посредством приложения напряжения к положительному электроду и отрицательному электроду, расположенным в жидкости, для притягивания отрицательно заряженных частиц к положительному электроду, чтобы сконцентрировать отрицательно заряженные частицы в первой части жидкости, и притягивания положительно заряженных частиц к отрицательному электроду, чтобы сконцентрировать положительно заряженные частицы во второй части жидкости, причем напряжение регулируется на основании по меньшей мере одного из веса заряженных частиц и величины заряда заряженных частиц.
Предложены способ и устройство для распознавания жидкости, содержащей положительно заряженные частицы и/или отрицательно заряженные частицы. Согласно изобретению электрическое поле прикладывается к жидкости посредством приложения напряжения к положительному электроду и отрицательному электроду, расположенным в жидкости, для притягивания отрицательно заряженных частиц к положительному электроду, чтобы сконцентрировать отрицательно заряженные частицы в первой части жидкости, и притягивания положительно заряженных частиц к отрицательному электроду, чтобы сконцентрировать положительно заряженные частицы во второй части жидкости, причем напряжение регулируется на основании по меньшей мере одного из веса заряженных частиц и величины заряда заряженных частиц.

Изобретение относится к области биохимии. Описано изобретение, включающее способ отбора нуклеиновых кислот по размеру.

Изобретение относится к медицине и касается анализа одного или нескольких гликированных гемоглобинов в биологическом образце. Способ анализа осуществляют посредством капиллярного электрофореза одного или нескольких гликированных гемоглобинов в биологическом образце, причем указанные гликированные гемоглобин или гемоглобины включают по меньшей мере одну бета-цепь глобина, включающую остаток глюкозы, связанный с аминокислотой в N-концевом положении указанной цепи бета-глобина.

Изобретение относится к устройству для приложения электрического поля, способу его использования, а также способу его изготовления. Устройство для приложения электрического поля к проводящему объему содержит блок для приложения электрического поля, выполненный с возможностью генерирования электрического поля, имеющего профиль дискретного электрического поля; проводящий объем; электрическую граничную область, образованную между проводящим объемом и блоком для приложения электрического поля и расположенную таким образом, что дискретное электрическое поле приложено к электрической граничной области посредством блока для приложения электрического поля в месте, отделенном от проводящего объема.

Изобретение относится к области медицины, в частности к анестезиологии и реаниматологии, и предназначено для прогноза развития инфекционных осложнений у пострадавших с тяжелой травмой, кровопотерей и выраженной гипоксией.

Заявленное изобретение относится к приборам измерения заряженных частиц в пробах для анализов в биологии, химии, промышленности или экологии, в частности к приборам для измерения концентрации ионов, например концентрации ионов лития, в пробах, таких как пробы крови.

Изобретение относится к паразитологии и касается способа видовой ДНК-дифференциации гельминтов - возбудителей церкариального дерматита человека. Дифференциацию четырех видов Trichobilharzia: Т.

Изобретение относится к областям медицины, в частности к урологии, нефрологии и курортологии, и позволяет своевременно и с большой точностью диагностировать мочекаменную болезнь.

Изобретение относится к области исследования физических свойств вещества, в частности к исследованию процессов в плазме и в газоразрядных приборах, между анодом и катодом в которых при фиксированном расстоянии между ними подается напряжение.

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для контроля аутентичности и качества вареных колбасных изделий. Для этого проводят двумерный электрофорез в полиакриламидном геле исследуемого изделия и эталонного образца с последующим сравнением маркерных белков в полученных электрофореграммах, которые идентифицируют масс-спектрометрически после извлечения из полиакриламидного геля. В качестве маркерных белков выбирают Тропомиозин альфа 1, Тропомиозин альфа 1, Миозиновую легкую цепь, Белок, подобный легкой цепи миозина 3, фосфорилируемые легкие цепи миозина MKC1f, фосфорилируемые легкие цепи миозина MYL1, Мышечную енолазу, Мышечную енолазу, М-цепь креатинфосфокиназы, М-цепь креатинфосфокиназы, Фруктозобисфосфат альдолазу А Гомолог говядины, Фруктозобисфосфат альдолазу А, Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназу, Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназу, Миоглобин, Миоглобин. Изобретение обеспечивает высокую достоверность определения аутентичности вареных колбасных изделий. 2 ил.

Наверх