Способ изолированного выделения и изготовления гистологических структур стекловидного тела

Авторы патента:

Дибирова Саида Магомедсултановна (RU)

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

G01N1/28 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2734280:

Федеральное государственное автономное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для изолированного выделения и изготовления гистологических структур с последующим изучением анатомо-топографических и гистологических особенностей стекловидного тела (СТ). Способ изолированного выделения и изготовления гистологических структур СТ включает помещение аутопсированного глаза в раствор формалина. Согласно изобретению аутопсированный глаз человека устанавливают на подложку, затем, оставляя передний отрезок склеры интактным, склеру в четырех миллиметрах от лимба по кругу разрезают между прямыми мышцами и формируют из нее лепестки, которые затем отсекают. Далее формируют лепестки сосудистой и сетчатой оболочек и отсекают их. Производят последовательное окрашивание суспензией из солей малорастворимых металлов структур СТ: корковых слоев, цистерн, каналов. Окрашенные структуры СТ поэтапно отсепаровывают и иммобилизуют на адгезивно-метрическом планшете или в биопсийном мешочке, закладываемом в биопсийную кассету, фиксируют в растворе формалина, обезвоживают в спиртах восходящей концентрации, заливают в парафин, приготавливают гистологические срезы и окрашивают гематоксилин-эозином. Технический результат - возможность послойного выделения и гистологического исследования отдельных структур СТ, что позволяет получить новые данные о топографо-анатомическом взаимоотношении между структурами, не нарушив целостность образцов тканей, провести в дальнейшем гистологическое исследование изолированных структур СТ. 2 пр.

Наиболее близким аналогом является способ фиксации и приготовления гистологических препаратов (Патент РФ на изобретение №2525436), по которому после энуклеации глаза, в энуклеированном глазу формируют маркеры его пространственного положения: прошивают склеру нитками, оставляя «хвостики» в каждой метке. Маркированный глаз помещают в фиксирующий раствор формалина, после фиксации глаз промывают проточной водой, обезвоживают в спиртах с возрастающей концентрацией, заливают в парафин, формируют блоки, затем закрепляют на бруске так, чтобы пространственное положение глаза соответствовало его исходной ориентации в пространстве, для чего парафиновый блок, содержащий глаз, ориентируют по вышеописанным нитяным меткам. Изготавливают срезы и производят окрашивание.

Недостатком данного способа является отсутствие возможности послойного выделения и гистологического исследования отдельных структур СТ.

Задачей изобретения является создание нового способа выделения и изготовления структур СТ, позволяющего морфологически исследовать СТ, контрастировать и выделять все структуры СТ: корковые слои, цистерны, каналы, проводить в дальнейшем их изолированное гистологическое исследование, при этом сохраняя структуры в неизменном виде для исследования.

Техническим результатом является возможность послойного выделения и гистологического исследования отдельных структур СТ, что позволит получить новые данные о топографо-анатомическом взаимоотношении между структурами, не нарушив целостность образцов тканей, провести в дальнейшем гистологическое исследование изолированных структур СТ.

Технический результат достигается тем, что в способе изолированного выделения и изготовления гистологических препаратов СТ, включающем помещение аутопсированного глаза в раствор формалина, согласно изобретению, аутопсированный глаз человека устанавливают на подложку, затем, оставляя передний отрезок склеры интактным, склеру в четырех миллиметрах от лимба по кругу разрезают между прямыми мышцами и формируют из нее лепестки, которые затем отсекают, далее формируют лепестки сосудистой и сетчатой оболочек и отсекают их, производят последовательное окрашивание суспензией из солей малорастворимых металлов структур СТ: корковых слоев, цистерн, каналов. Окрашенные структуры СТ поэтапно отсепаровывают и иммобилизируют на адгезивно-метрическом планшете или в биопсийном мешочке, закладываемом в биопсийную кассету, фиксируют в растворе формалина, обезвоживают в спиртах восходящей концентрации, заливают в парафин, приготавливают гистологические срезы и окрашивают гематоксилин-эозином.

Использование для выделения структур СТ суспензии из солей малорастворимых металлов, и иммобилизация их на адгезивно-метрическом планшете или в биопсийном мешочке, с последующей укладкой в кассету, создает возможность послойного выделения и последующего изолированного морфологического изучения выделенных структур СТ, при этом сохранив их целостность и после прохождения всех этапов гистологической обработки, вплоть до изготовления срезов и окрашивания, это позволит получить новые данные о пространственной анатомии и гистологии СТ, а также выявить характер патологических изменений СТ при различных патологиях.

Способ осуществляется следующим образом, аутопсированный глаз помещают на подложку, например, в чашку Петри, ножницами производят разрезание склеры в 4 мм от лимба по кругу, оставляя интактным передний отрезок глаза. Затем из склеры, разрезая ее между прямыми мышцами, формируют "лепестки". Сформированные лепестки полностью удаляют. Точно так же при помощи пинцета и ножниц Ваннаса формируют лепестки сосудистой оболочки и сетчатки, которые в последующем отсекаются. При помощи иглы 30 G, начиная с поверхности СТ, проводится поэтапное окрашивание и выделение всех структур СТ. Используемая контрастная композиция представляет собой суспензию из солей малорастворимых металлов, размер частиц которой составляет меньше 5 микрон и плотность которой 4.4 г/см3. С помощью эндовитреальных ножниц и пинцета производится отсепаровывание и отсекание слоев, цистерн и каналов СТ. Данные структуры (биоптат) иммобилизируют на адгезивно-метрическом планшете, состоящем из метрической части и адгезивной части или в биопсийном мешочке, помещаемом в биопсийную кассету. Метрическая часть планшета имеет размеры 50×65×3 мм, состоит из пористого материала с метрической сеткой 3×3 мм. Адгезивная часть планшета состоит из смеси нитрата целлюлозы и ацетатных полимеров, имеет пористость 0,45 мкм и состоит из базы размером 30×10 мм и прикрепленных к ней под углом 90 градусов адгезивных полос размером 34×3 мм, край которых скошен под углом 45 градусов. Биопсийный мешочек состоит из высокопрочного нейлона, представляет собой мелкопористую сеточку и закладывается в биопсийную кассету из полиоксиметиленполиацетата. Планшет или кассету помещают в фиксирующий раствор 10% раствора формалина на 24 часа, и в таком виде контейнер с биоптатом подвергают всем этапам гистологической обработки, не извлекая биоптат вплоть до окрашивания срезов, сохраняя целостность структур СТ.

Пример 1

Два глаза донора: женщина, 61 год. Причина смерти: острая сердечная недостаточность. Время смерти 06.11.19 16:00 время энуклеации 07.11.2019 - 10:00 Время проведения эксперимента 07.11.2019 - 15:00 По предложенному нами способу было произведено препарирование СТ двух глаз донора (OD, OS); с целью улучшения визуализации были удалены все оболочки глазного яблока. Контрастируя структуры СТ суспензией из солей сульфата бария, используя витреоретинальные ножницы и пинцет, были выделены и взяты кортикальные слои, оптико-цилиарный канал, ретро-цилиарные цистерны. Все материалы были иммобилизированы в биопсийных мешочках, которые затем поместили в биопсийные кассеты, после проведения всех этапов гистологической обработки, было проведено гистологическое изучение отдельных структур СТ.

Пример 2

Два глаза донора: мужчина, 62 года, причина смерти: острая сердечная недостаточность, кардиомиопатия. Время смерти 13.10.19 - 23.00; время энуклеации 14.10.19 - 11.00; время проведения эксперимента 14.10.19 - 16.00. После проведения препарирования СТ двух глаз донора (OD, OS), выделения при помощи контрастирования суспензией из солей ацетата меди структур СТ, используя витреоретинальные ножницы и пинцет, были выделены и взяты кортикальные слои, оптико-цилиарный канал, ретро-цилиарные цистерны. Используя адгезивно-метрический планшет, на котором были иммобилизированы все выделенные структуры СТ, и были доставлены в лабораторию, где были проведены все этапы гистологической обработки, и гистологическое изучение отдельных структур СТ. По предложенному способу изолированного выделения и изготовления гистологических структур СТ было произведено препарирование и гистологическое исследование СТ на 15 изолированных глазах человека. Из полученного материала были изготовлены стеклопрепараты для проведения дальнейшего гистологического изучения. Материал был признан пригодным и информативным.

Таким образом, использование заявленного нами способа, позволяет контрастировать и выделять структуры СТ (корковые слои, цистерны, каналы) и не нарушив целостность образцов тканей, провести гистологическое исследование изолированных структур СТ. Это позволяет получить новые данные о топографо-анатомическом взаимоотношении между структурами СТ, расширить представления о гистологических особенностях СТ в норме и проводить анализ изменений при различных патологических процессах.

Способ изолированного выделения и изготовления гистологических структур стекловидного тела (СТ), включающий помещение аутопсированного глаза в раствор формалина, отличающийся тем, что аутопсированный глаз человека устанавливают на подложку, затем, оставляя передний отрезок склеры интактным, склеру в четырех миллиметрах от лимба по кругу разрезают между прямыми мышцами и формируют из нее лепестки, которые затем отсекают, далее формируют лепестки сосудистой и сетчатой оболочек и отсекают их, производят последовательное окрашивание структур СТ, а именно корковых слоев, цистерн, каналов суспензией из солей малорастворимых металлов, окрашенные структуры СТ поэтапно отсепаровывают и иммобилизируют на адгезивно-метрическом планшете или в биопсийном мешочке, закладываемом в биопсийную кассету, фиксируют в растворе формалина, обезвоживают в спиртах восходящей концентрации, заливают в парафин, приготавливают гистологические срезы и окрашивают гематоксилин-эозином.

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, к способу прогнозирования персистирующих свойств Staphylococcus aureus, циркулирующих в окружающей среде стационара.

Способ прогнозирования эффективности коррекции поведенческих расстройств у детей с аутизмом при соблюдении безглютеновой диеты // 2733713

Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии, и может быть использовано в качестве вспомогательного метода при составлении плана лечения пациентов с нарушениями аутистического спектра.

Способ прогнозирования риска развития отдаленных метастазов у больных операбельными формами рака молочной железы с метастазами в регионарные лимфоузлы // 2733697

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и касается прогнозирования риска развития отдаленных метастазов у больных операбельными формами рака молочной железы с метастазами в регионарные лимфоузлы.

Способ оценки насыщения эозинофилов мокроты и назального секрета эозинофильным катионным протеином // 2733451

Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине. Описан способ оценки насыщения эозинофилов мокроты и назального секрета эозинофильным катионным протеином.

Способ экспресс-диагностики связи кисты поджелудочной железы с протоковой системой // 2733171

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано для экспресс-диагностики связи кисты поджелудочной железы с протоковой системой. Осуществляют оценку состояния ее содержимого.

Способ экспресс-диагностики связи кисты поджелудочной железы с протоковой системой // 2733171

Способ прогнозирования развития хориоамнионита у женщин с обострением цитомегаловирусной инфекции во втором триместре беременности и угрозой невынашивания // 2733168

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству. Способ прогнозирования развития хориоамнионита у женщин с обострением цитомегаловирусной инфекции во втором триместре беременности и угрозой невынашивания заключается в том, что у женщин во втором триместре беременности с угрозой невынашивания определяют маркеры обострения цитомегаловирусной инфекции в баллах (А), содержание в сыворотке крови интерлейкина – 6 (IL-6) (пг/мл) (В); толщину плаценты при её ультразвуковом исследовании в баллах (С), проводят оценку клинико-эхографических признаков угрозы невынашивания в баллах (N), а затем прогнозируют развитие хориоамнионита с помощью дискриминантного уравнения: D = -1,085×А - 0,870×В - 2,056×С - 0,504×N, где D – дискриминантная функция, и при D равном или больше -15,86 прогнозируют отсутствие риска развития хориоамнионита, при D меньше -15,86 прогнозируют развитие хориоамнионита.

Способ прогнозирования риска развития гематогенных метастазов у больных немелкоклеточным раком легкого после операции // 2733160

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии и может быть использовано для определения риска развития гематогенного метастазирования у больных немелкоклеточным раком легкого (НМРЛ) после проведения радикального оперативного лечения.

Способ диагностики острого коронарного синдрома // 2733077

Изобретение относится к медицинской технике, а именно к способу диагностики острого коронарного синдрома. Способ включает формирование базы данных, содержащей информацию о результатах клинического анализа крови пациентов с острым коронарным синдромом и здоровых людей группы контроля, которую в дальнейшем используют для обучения нейронных сетей, после чего осуществляют взятие цельной венозной крови обследуемого пациента, перемешивают пробу крови, затем производят исследование клинического анализа крови на автоматическом гематологическом анализаторе, после этого результаты исследования копируют с анализатора в виде FCS-файлов и переносят на персональный компьютер для предварительной обработки и машинного анализа, причем предварительная обработка включает перевод оператором при помощи программного обеспечения, позволяющего работать с FCS-файлами, графических изображений в виде скатерограмм анализа крови пациента в цифровой эквивалент - вектор, который содержит информацию обо всех исследованных клетках в виде данных их расположения по осям скатерограммы X и Y, при этом оператор с учетом морфологических показателей представленных на анализ клеток крови дифференцирует их на три субпопуляции: нейтрофилы, лимфоциты и моноциты, после чего полученный результат в цифровом эквиваленте сохраняют в отдельный файл программы для работы с электронными таблицами, затем в вышеуказанном цифровом эквиваленте скатерограммы анализа крови пациента - векторе отсекают последние элементы, а именно координаты клеток, так, чтобы количество элементов обследуемого пациента соответствовало количеству элементов пациентов, результаты которых находятся в предварительно сформированной базе данных, после чего все элементы векторов обследуемого пациента объединяются последовательно в один общий глобальный вектор Vglob, затем стандартизируют полученный вектор путем вычитания из глобального вектора обследуемого пациента среднего значения соответствующих векторов из предварительно сформированной базы данных и последующего деления на стандартное отклонение соответствующих векторов базы данных, затем применяют метод главных компонент для уменьшения размерности признаков с n элементов до 2-4 главных компонент {Xn}, сохранив при этом как можно больше изменчивости признаков, посредством программного обеспечения для математических вычислений, в результате получают сокращенный вектор, затем производят стандартизацию с помощью описанных выше действий уже сокращенного вектора до вида , после чего применяют ансамбль из нейронных сетей, которые обучают на предварительно сформированной базе данных пациентов с острым коронарным синдромом и здоровых людей группы контроля путем внесения информации в программное обеспечение для машинного анализа об их результатах клинического анализа крови и окончательного диагноза - «острый коронарный синдром» или «здоров», при этом количество нейронных сетей в ансамбле зависит от результатов оценки точности предсказания окончательного диагноза и составляет от 1 до 10, при этом используют композиции алгоритмов, каждый из которых параллельно обучают на подпространстве обучающей выборки из предварительно сформированной базы данных пациентов с острым коронарным синдромом и здоровых людей группы контроля, причем из множества обучающей выборки отбирают от 1 до n подмножеств путем случайного выбора элементов с повторениями в каждом из наблюдений подмножества, чтобы затем передать их математическим моделям для анализа с последующей агрегацией данных в ансамбль и расчета вероятности положительного диагноза, при этом подмножества рассматривают как репрезентативные и независимые значения истинного распределения данных, и на каждом из подмножеств обучают нейронную сеть как модель, при этом применяют ансамблевый метод, причем после обучения нейронных сетей и их агрегации в ансамбль проверяется их точность на тестовой выборке, при этом по итогу обучения нейронных сетей и приемлемому результату тестирования, при условии ошибки результатов оценки менее 5%, аналогичным образом производят исследование клинического анализа крови обследуемого пациента, а для оценки положительного диагноза в процентах строят график, где используют поля вероятности для классификации диагнозов в двухмерном подпространстве, которые представляют собой оси абсцисс и ординат, соответствующих главным компонентам, причем указанные поля рассматривают как зрение нейронных сетей для неизвестных случаев, при этом диагноз обследуемому пациенту ставят следующим образом: если результаты пациента окажутся в области графика, выделенной для отрицательного диагноза, то ансамбль нейронных сетей выдаст наиболее высокую вероятность для отрицательного диагноза, если в области графика, выделенной для положительного диагноза - наиболее высокую вероятность для положительного диагноза - острый коронарный синдром.

Способ расчета риска развития прогрессии плоскоклеточного рака гортани // 2732976

Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии, может быть использовано для оценки риска развития прогрессии заболевания при лечении пациентов с плоскоклеточным раком гортани.

Дисковый образец для оценки конструкционной прочности материала // 2734276

Изобретение относится к испытательной технике, в частности к образцам для оценки прочности материалов при сложном напряженно-деформированном состоянии (НДС), характеризуемом двухосным растяжением или сжатием.