Способ получения соединения n-(3,5-диметилфенил)-n'-(2-трифторметилфенил)гуанидина

Настоящее изобретение относится к способу получения кристаллической твердой формы A соединения N-(3,5-диметилфенил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидина формулы (I), показывающей точку плавления 131,5°C. Способ включает взаимодействие соли соединения формулы (II) или смеси соли соединения формулы (II) и соединения формулы (II) с цианамидным соединением формулы (III) в присутствии полярного органического растворителя и кристаллизацию соединения формулы (I) в присутствии смеси (C₁-C₃)спирта и воды. Предлагаемый способ позволяет получать соединение формулы (I) в кристаллической твердой форме с высокой чистотой. 6 з.п. ф-лы, 2 пр., 4 ил.

 

Настоящее изобретение относится к способу получения соединения N-(3,5-диметилфенил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидина формулы (I). Настоящее изобретение также относится к способу получения кристаллической твердой формы соединения формулы (I), в частности кристаллической твердой формы А, и к их фармацевтической композиции. Настоящее изобретение также относится к кристаллической твердой форме соединения формулы (I) для использования в качестве лекарственного средства, в частности для лечения состояния, опосредованного клеточными белками Rho-GTPазами.

Уровень техники

ГТФазы семейства Rho является молекулярными переключателями, которые контролируют сигнальные пути, регулирующие реорганизацию актинового цитоскелета, экспрессию генов, развитие клеточного цикла, выживаемость клеток и другие клеточные процессы. В числе других функций, они участвуют в клеточном цикле и регуляции клеточного деления, также участвуют в секреции, эндоцитозе, фагоцитозе, мембранном трафике и апоптозе. Белки семейства Rho составляют одну из трех основных ветвей суперсемейства Ras. Белки Rho демонстрируют приблизительно 30% сходство аминокислот с белками Ras. В настоящее временя идентифицировано, по меньшей мере, 23 белка семейства Rho млекопитающих, включая RhoA, Rac1 и Cdc42.

В опухолевых клетках, помимо присутствия дерегулирования пролиферации, присутствуют изменения их морфологических характеристик и, в случае метастазирования, они приобретают способность преодолевать тканевые барьеры. Rho-ГТФазы играют важную роль в регулировании морфологии и подвижности клеток. Соединение, способное специфически ингибировать активность Rho-ГТФазы, является определенной альтернативой в терапии злокачественной опухоли.

Соединение N-(3,5-диметилфенил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидин, представленное структурной формулой (I), является мощным и селективным ингибитором клеточных белков Rho-ГТФаз:

В частности, соединение формулы (I) можно использовать для ингибирования клеточного белка Rho-родственной ГТФазы Rac1. Соответственно, соединение формулы (I), в качестве ингибитора клеточного белка Rho-родственной ГТФазы Rac1, может быть использовано для лечения заболеваний, опосредуемых клеточными белками Rac1 млекопитающих, в частности для лечения любых состояний, опосредованных клеточными белками Rho-ГТФазами, например Rac1.

Получение и терапевтическое применение соединения формулы (I) описаны в Европейском патенте EP2766342.

В ЕР 2766342 описан способ получения соединения 25 (см. пример 1), которое соответствует соединению формулы (I) по настоящему изобретению. Способ, описанный в ЕР 2766342, включает взаимодействие эквимолярных количеств раствора хлоргидрата 3,5-диметиланилина и N-(2-трифторметил)фенил)цианамида в абсолютном этаноле при температуре кипения с обратным холодильником в течение 15 часов. Неочищенное соединение формулы (I) очищали колоночной хроматографией смесью гексана и этилацетата в присутствии триэтиламина. Очищенное соединение формулы (I) получали в виде твердого соединения белого цвета с температурой плавления 127°С. Однако в европейском патенте ЕР 2766342 не описан способ получения кристаллической твердой формы соединения формулы (I). Кроме того, использование предельных реакционных условий в течение длительного периода времени и использование немасштабных способов очистки, таких как хроматография, создают значительные трудности для увеличения масштабов его промышленного производства.

С другой стороны, полиморфизм является свойством некоторых молекул принимать более одной кристаллической формы в твердом состоянии. Одна молекула может приводить к образованию множества кристаллических форм (также называемых ʺполиморфамиʺ), обладающими различными физическими свойствами. Присутствие и физические свойства различных кристаллических форм могут быть определены различными методами, такими как рентгеновская дифракционная спектроскопия, дифференциальная сканирующая калориметрия, инфракрасная спектроскопия и температура плавления. Различия физических свойств различных кристаллических твердых форм обусловлены ориентацией и межмолекулярными взаимодействиями соседних молекул в совокупности твердых макрочастиц. Соответственно, полиморфы представляют собой отличающиеся твердые вещества, имеющие одну и ту же молекулярную формулу, но обладающие различными благоприятными и/или неблагоприятными физическими свойствами по сравнению с другими формами в семействе полиморфов. Присутствие и физические свойства полиморфов являются непредсказуемыми.

Одним из наиболее важных физических свойств фармацевтического соединения, которое может образовывать полиморфы, является его растворимость в водном растворе, в частности, растворимость в желудочных соках пациента. Другие важные свойства относятся, в числе других, к стабильности, биодоступности, легкости получения фармацевтической композиции, простоте введения. Поскольку некоторые кристаллические твердые формы в большей степени соответствуют одному типу композиции, а другие формы соответствуют другим различным композициям, разработка новых кристаллических твердых форм, таких как, например, кристаллические твердые формы (то есть полиморфы), позволяет улучшить характеристики содержащих их фармацевтических композиций. Кроме того, в зависимости от терапевтических показаний, предпочтительной может быть та или иная фармацевтическая композиция.

Особенно желаемые улучшения/преимущества кристаллической твердой формы соединения формулы (I) включают: улучшение физико-химических свойств для облегчения ее производства или ее объединения в лекарственной композиции; для повышения абсорбции и/или биодоступности; легко достигаемой при более постоянных физико-химических свойствах; обеспечение большей адаптивности при получении лекарственной композиции или облегчение технологии ее получения; наличие улучшенных диспергирующих свойств, что обеспечивает повышение скорости диспергирования, в частности при диспергировании в водной физиологической среде, или снижение гигроскопичности; повышение стабильности; и обеспечение новых способов введения.

Наиболее желательно, чтобы новая кристаллическая твердая форма объединяла более одного из, или даже большую часть, этих преимуществ.

Таким образом, существует потребность в разработке более экономичного и более легко реализуемого в промышленности способа получения соединения формулы (I), в частности, для получения новой кристаллической твердой формы соединения формулы (I), пригодного для использования в фармацевтической промышленности и, в частности, для лечения состояния, опосредованного клеточными белками Rho-GTPазами.

Сущность изобретения

Авторы настоящего изобретения обнаружили новый способ получения соединения формулы (I), который включает взаимодействие соли анининового соединения формулы (II) с цианамидным соединением формулы (III) при умеренной температуре и в течение короткого периода времени. Это способ является эффективным, поскольку он включает использование коммерчески доступных или легко получаемых исходных веществ, что позволяет упростить получение в промышленных масштабах.

Кроме того, способ по изобретению осуществляют в реакционных условиях, которые обеспечивают получение соединения формулы (I) в неочищенной форме, содержащей спектр примесей, которые могут быть легко удалены путем перекристаллизации. В частности, способ по изобретению позволяет получать сырой продукт соединения формулы (I) в кристаллической твердой форме.

Кроме того, соединение можно получить в виде кристаллической твердой формы А, как путем кристаллизации из реакционной среды, так и путем перекристаллизации в определенных условиях. Это эффективно, потому что кристаллическая твердая форма A соединения (I) обладает соответствующими физическими и химическими свойствами для ее использования в фармацевтической промышленности.

Таким образом, первый аспект настоящего изобретения относится к способу получения соединения N-(3,5-диметилфенил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидина формулы (I),

который включает взаимодействие соли соединения формулы (II), или смеси соли соединения формулы (II) и соединения формулы (II)

,

с цианамидным соединением формулы (III),

в присутствии полярного органического растворителя.

Второй аспект изобретения представляет собой кристаллическую твердую форму А соединения N-(3,5-диметилфенил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидина формулы (I), которая показывает температуру плавления 131,5°С.

Третий аспект изобретения представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую терапевтически эффективное количество кристаллической твердой формы A соединения N-(3,5-диметилфенил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидина формулы (I) по настоящему изобретению вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами или носителями.

Четвертым аспектом изобретения является кристаллическая твердая форма A соединения N-(3,5-диметилфенил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидина формулы (I) по настоящему изобретению для использования в качестве лекарственного средства.

Пятый аспект изобретения представляет собой кристаллическую твердую форму А соединения N-(3,5-диметилфенил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидина формулы (I) по настоящему изобретению для применения в лечении состояния, опосредованного клеточными белками Rho-ГТФазами.

Краткое описание чертежей

На фиг.1 показана кривая ДСК (дифференциальная сканирующая калориметрия) кристаллической твердой формы A соединения формулы (I) по настоящему изобретению. Спектр выражает тепловой поток (Вт/г) в зависимости от температуры (°C).

На фФиг.2 показан инфракрасный спектр кристаллической твердой формы А соединения формулы (I) по настоящему изобретению. Кривая выражает коэффициент пропускания (T) по отношению к значению волнового числа (см^-1).

На фиг.3 показана кривая ДСК сравнительной кристаллической твердой формы соединения формулы (I), известной из уровня техники. Спектр выражает тепловой поток (Вт/г) относительно температуры (°C).

На фиг.4 показан инфракрасный спектр сравнительной кристаллической твердой формы соединения формулы (I), известного из уровня техники. Кривая выражает коэффициент пропускания (T) относительно значения волнового числа (см^-1).

Подробное описание изобретения

Все термины, используемые в настоящей заявке, если не указано иное, должны пониматься в их обычном значении, известном в данной области техники. Другие более конкретные определения для некоторых терминов, используемых в настоящей заявке, приведены ниже и предназначены для единообразного применения в описании и формуле изобретения, если иное прямо предусмотренное определение не дает более широкое определение.

Термин ʺкомнатная температураʺ относится к температуре, соответствующей 20°С - 25°С.

Как указано выше, аспект настоящего изобретения относится к способу получения соединения формулы (I). Способ осуществляют в таких условиях, которые позволяют получить соединение формулы (I) в кристаллизованной неочищенной форме, легко очищаемой путем перекристаллизации.

В варианте осуществления изобретения, необязательно в сочетании с одним или несколькими признаками различных вариантов осуществления, описанных выше или ниже, способ включает взаимодействие соли анилинового соединения формулы (II) с цианамидным соединением формулы (III) в присутствии полярного органического растворителя.

В альтернативном варианте осуществления изобретения, необязательно в сочетании с одним или несколькими признаками различных вариантов осуществления, описанных выше или ниже, способ включает взаимодействие смеси анилинового соединения формулы (II) и соли анилинового соединения формулы (II) с цианамидным соединением формулы (III) в присутствии полярного органического растворителя.

В варианте осуществления изобретения, необязательно в сочетании с одним или несколькими признаками различных вариантов осуществления, описанных выше или ниже, соль соединения формулы (II) представляет собой неорганическую соль; предпочтительно галогенгидратную соль, выбранную из группы, состоящей из хлоргидрата, бромгидрата и йодид гидрата; более предпочтительно соль соединения формулы (II) представляет собой хлоргидратную соль.

В варианте осуществления изобретения, необязательно в сочетании с одним или несколькими признаками различных вариантов осуществления, описанных выше или ниже, полярный органический растворитель выбран из (C₁-C₃) спирта и смеси (C₁-C₃) спирта и воды. Термин ʺспиртʺ относится к углеводороду, в котором один или несколько атомов водорода замещены одной или несколькими группами -ОН. Углеводород содержит количество атомов углерода, указанное в описании или формуле изобретения. Термин ʺспиртʺ также включает гликолевые соединения.

В варианте осуществления изобретения, необязательно в сочетании с одним или несколькими признаками различных вариантов осуществления, описанных выше или ниже, полярный органический растворитель представляет собой (C₁-C₃) спирт, выбранный из группы, состоящей из этанола, 2-пропанола (то есть, изопропанола) и н-пропанола; предпочтительно этанол; и наиболее предпочтительно абсолютный этанол.

В варианте осуществления изобретения, необязательно в сочетании с одним или несколькими признаками различных вариантов осуществления, описанных выше или ниже, полярный органический растворитель представляет собой смесь (C₁-C₃) спирта и воды; предпочтительно этанола и воды. В варианте осуществления изобретения, необязательно в сочетании с одним или несколькими признаками различных вариантов осуществления, описанных выше или ниже, полярный органический растворитель представляет собой смесь этанола и воды, где смесь содержит 83% по объему этанола и 17% по объему воды. В контексте изобретения термин ʺ% по объемуʺ относится к процентному содержанию по объему каждого растворителя (то есть этанола и воды), необходимого для обеспечения получения соединения формулы (I). Использование смеси смеси (C₁-C₃) спирта и воды в качестве полярного органического растворителя является эффективным, поскольку позволяет снизить экономическую стоимость способа.

Преимущественно, по сравнению со способом, описанным в уровне техники, исходное вещество в сочетании с реакционными условиями способа позволяет получить неочищенное соединение формулы (I), имеющее соответствующий спектр примесей, которое легко кристаллизуется. В отличие от описанного в уровне техники, неочищенное соединение формулы (I) по настоящему изобретению имеет спектр примесей, который позволяет удалить примеси путем перекристаллизации. Кроме того, очищенное соединение формулы (I) находится в кристаллической форме, имеющей спектр примесей, который соответствует обязательным требованиям фармацевтической промышленности.

В варианте осуществления изобретения, необязательно в сочетании с одним или несколькими признаками различных вариантов осуществления, описанных выше или ниже, способ по изобретению осуществляют при температуре, составляющей от 60°С до 75°С; предпочтительно от 65°C до 72°C. В варианте осуществления изобретения, необязательно в сочетании с одним или несколькими признаками различных вариантов осуществления, описанных выше или ниже, процесс осуществляют при температуре 70°С.

Исходные вещества (II) и (III) являются коммерчески доступными или могут быть получены любым способом, известным из уровня техники. В варианте осуществления, необязательно в сочетании с одним или несколькими признаками различных вариантов осуществления, описанных выше или ниже, способ согласно изобретению, как определено выше, дополнительно включает предыдущую стадию взаимодействия соединения 3,5-диметилфенилтиомочевины формулы (IV) в таких реакционных условия, которые обеспечивают соединение формулы (III) с использованием KOH и (CH₃COO)₂Pb·3H₂O, как показано на следующей схеме:

Исходное вещество (IV) также является коммерчески доступным или может быть получено любым способом, известным из уровня техники.

Также в изобретении предлагается способ получения соединения N-(3,5-диметилфенил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидина формулы (I), как определено выше, которое дополнительно включает дополнительную стадию кристаллизации соединения формулы (I) с получением кристаллической твердой формы.

Кристаллизация представляет собой процесс образования твердых кристаллов из однородного раствора, который включает химический метод разделения на твердую и жидкую фазы, в котором происходит массопередача растворенного вещества из жидкого раствора в чистую кристаллическую твердую фазу. Термин ʺкристаллʺ или ʺкристаллическое твердое веществоʺ или ʺкристаллическая твердая формаʺ представляет собой твердое вещество, составляющие которого расположены в высокоупорядоченной микроскопической структуре, образуя кристаллическую решетку, которая простирается во всех направлениях. Кроме того, макроскопические монокристаллы обычно идентифицируются по их геометрической форме, содержащей плоские грани со специфическими характерными ориентациями.

Получение кристаллической твердой формы соединения формулы (I) может осуществляться любым способом, известным из уровня техники. Например, путем образования раствора растворителя, содержащего соединение формулы (I), и индуцирования осаждения кристаллической твердой формы соединения формулы (I) путем охлаждения, добавления антирастворителя или добавления соединения формулы (I) в качестве затравки.

Выбор условий кристаллизации имеет решающее значение для определения кристаллической твердой формы соединения формулы (I) и его физических и химических характеристик.

В варианте осуществления изобретения, необязательно в сочетании с одним или несколькими признаками различных вариантов осуществления, описанных выше или ниже, способ включает кристаллизацию неочищенного соединения формулы (I) из смеси (C₁-C₃) спирта и воды; предпочтительно (C₁-C₃) спирт представляет собой этанол. В предпочтительном варианте осуществления, необязательно в сочетании с одним или несколькими признаками различных вариантов осуществления, описанных выше или ниже, способ включает кристаллизацию неочищенного соединения формулы (I) из смеси (C₁-C₃) спирта и воды, смесь содержит 83% по объему этанола и 17% по объему воды. В контексте изобретения термин ʺ% по объемуʺ относится к процентному содержанию по объему каждого растворителя (то есть этанола и воды), необходимого для обеспечения получения соединения формулы (I). В этих условиях полученная кристаллическая форма представляет собой кристаллическую форму А. Кристаллическую форму А можно получить непосредственно из реакционной среды с использованием указанных выше условий или путем осуществления перекристаллизации в указанных условиях.

Второй аспект изобретения представляет собой кристаллическую твердую форму А соединения N-(3,5-диметилфенил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидина формулы (I) по настоящему изобретению, которая демонстрирует точку плавления, составляющую 131,5°C.

Как описано в примерах, ¹H ЯМР спектр, ¹³С ЯМР спектр, масс-спектроскопия и элементный анализ кристаллической твердой формы А соединения формулы (I) по настоящему изобретению соответствуют соединению 25, описанному в Европейской патентной заявке под номером EP2766342.

Кристаллическая твердая форма А соединения формулы (I) представляет собой кристаллическую твердую форму, которая показывает в дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) эндотермический эффект с пиком при 132,42°C с соответствующей удельной теплотой 80,37 Дж/г. Кристаллическое твердое тело A представляет собой кристаллическое твердое тело, которое соответствует графику дифференциальной сканирующей калориметрии, показанному на фиг.1. Эта кривая отличается от кривой кристаллических твердых форм соединения формулы (I), известного из уровня техники.

Кристаллическая твердая форма А соединения формулы (I) также демонстрирует инфракрасный спектр, который содержит характеристические пики при 3477, 3430, 3416, 3371, 3299, 3084, 2925, 1649, 1615, 1596, 1519, 1503, 1483, 1316, 1123, 1107, 1033, 850, 764. Форма кристаллического твердого вещества А представляет собой форму кристаллического твердого вещества, которая имеет инфракрасный спектр, показанный на фиг.2. Этот спектр отличается от спектра кристаллической твердой формы соединения формулы (I), известного из уровня техники.

В варианте осуществления изобретения, необязательно в сочетании с одним или несколькими признаками различных вариантов осуществления, описанных выше или ниже, кристаллическая твердая форма А соединения формулы (I) может быть определена способом его получения, как определено выше, и, следовательно, кристаллическая твердая форма А соединения формулы (I), получаемого способом по изобретению, рассматривается как часть изобретения. Таким образом, кристаллическое твердое вещество A соединения формулы (I), получаемое способом, включающим взаимодействие соли соединения формулы (II), или смеси соли соединения формулы (II) и соединения формулы (II), с цианамидным соединением формулы (III) в присутствии полярного органического растворителя, необязательно с последующей стадией перекристаллизации соединения формулы (I). Для целей изобретения выражения ʺполучаемыеʺ, ʺполученныеʺ и эквивалентные выражения используются взаимозаменяемо и, в любом случае, выражение ʺполучаемыеʺ охватывает выражение ʺполученныеʺ.

Третий аспект изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество кристаллической твердой формы A соединения N-(3,5-диметилфенил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидина формулы (I) по настоящему изобретению, вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами или носителями.

Выражение ʺтерапевтически эффективное количествоʺ, используемое в настоящем документе, относится к количеству соединения формулы (I), которое при введении является достаточным для предотвращения развития или ослабления, до некоторой степени, одного или нескольких симптомов заболевания, подвергаемого лечению. Конкретная доза соединения формулы (I), вводимого в соответствии с настоящим изобретением, будет, безусловно, определяться конкретными обстоятельствами, связанными с этим заболеванием, включая вводимое соединение, способ введения, конкретное состояние, подлежащее лечению, и аналогичные факторы.

Выражение ʺфармацевтически приемлемые вспомогательные вещества или носителиʺ относится к фармацевтически приемлемым веществам, композициям или носителям. Каждый компонент должен быть фармацевтически приемлемым в смысле совместимости с другими ингредиентами фармацевтической композиции. Он также должен быть подходящим для использования при контакте с тканью или органом человека и животного без вызывания чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции, иммуногенности или других проблем или осложнений, соразмерных с разумным соотношением выгоды/риска.

Композиции по настоящему изобретению могут быть получены в соответствии со способами, хорошо известными из уровня техники. Соответствующие вспомогательные вещества и/или носители и их количества могут быть легко определены специалистами в данной области в соответствии с типом получаемой композиции.

Четвертым аспектом изобретения является кристаллическая твердая форма A соединения N-(3,5-диметилфенил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидина формулы (I) по настоящему изобретению для использования в качестве лекарственного средства.

В варианте осуществления, необязательно в сочетании с одним или несколькими признаками различных вариантов осуществления, описанных выше или ниже, кристаллическая твердая форма A соединения N-(3,5-диметилфенил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидина формулы (I), как определено выше, для применения в лечении состояния, опосредованного клеточными белками Rho-ГТФазы, в частности клеточными белками Rac1.

Этот аспект можно было бы также сформулировать как использование фармацевтической композиции, определенной выше, для получения лекарственного средства для профилактики и/или лечения состояния, опосредованного клеточными белками Rho-ГТФазами, в частности клеточными белками Rac1. Он также относится к способу профилактики и/или лечения млекопитающего, страдающему состоянием или подверженному состоянию, опосредованному клеточными белками Rho-ГТФазы, в частности клеточными белками Rac1, причем способ включает введение указанному млекопитающему эффективного количества фармацевтической композиции по настоящему изобретению.

В настоящем описании, термин ʺлечениеʺ означает устранение, уменьшение или ослабление причины, воздействий или развития состояния; и включает снижение скорости развития, остановку темпов развития, улучшение состояния и излечение этого состояния. Также включено лечение в качестве профилактической меры (например, профилактика). Термин ʺлечениеʺ включает комбинированные методы лечения и терапии, в которых два или более методов лечения или терапии объединены, например, последовательно или одновременно. Примеры лечения и терапии включают, но ими не ограничиваются, химиотерапию (введение активных веществ, включая, например, лекарственные средства, антитела, например, при иммунотерапии), пролекарства (например, при фотодинамической терапии, ген-направленной терапии фермент-пролекарство (GDEPT), антитело-направленной фермент пролекарственной терапии (ADEPT) и т.д.); хирургическое вмешательство; радиационную терапию; и генную терапию. Для целей настоящего изобретения лечение включает, но ими не ограничивается, облегчение, улучшение или устранение одного или нескольких симптомов заболевания; уменьшение степени заболевания; стабилизацию (то есть не ухудшение) состояния заболевания; задержку или замедление развития заболевания; улучшение или смягчение состояния заболевания; и ремиссию заболевания (частичную или полную).

Соединение формулы (I) по изобретению представляет собой ингибиторы клеточного белка Rho-ГТФаза, более конкретно клеточного белка Rac1, используемые для лечения состояния, опосредованного клеточным белком Rho-ГТФазой, предпочтительно состояния, опосредованного клеточным белком Rac1.

Термин ʺзаболевание, опосредованное клеточным белком Rac1ʺ, используемый в настоящем документе, относится к состоянию, при котором клеточный белок Rac1 и/или действие Rac1 является важным или необходимым, например, для начала, развития, экспрессии и т.д. этого состояния.

Поскольку известно, что киназы Rho-ГТФазы играют основную роль в клеточном цикле и, в частности, Rac1, в предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения, заболевания, состояния и/или нарушения, которые можно предотвратить, уменьшенить интенсивность или лечить с помощью соединений по настоящему изобретению, являются пролиферативными заболеваниями. Полагают, что снижение активности Rho-ГТФазы, в частности Rac1, оказывает благоприятное воздействие на заболевание, если снижение активности Rac1, по меньшей мере, на 10%, предпочтительно, по меньшей мере, на 20%, предпочтительно, по меньшей мере, на 30%, приводит к улучшению, по меньшей мере, одного клинического показателя этого заболевания. Примерами таких показателей являются скорость пролиферации, которая предпочтительно снижается, клеточная дифференцировка, которая предпочтительно индуцируется.

Кроме того, предпочтительно, что пролиферативные заболевания были выбраны из группы, состоящей из преканцероза; дисплазии; метаплазии; рака желудочно-кишечного тракта или рака толстой и прямой кишки, печени, поджелудочной железы, почек, мочевого пузыря, предстательной железы, эндометрия, яичника, яичек, меланомы, диспластической слизистой оболочки полости рта, инвазивных пероральных злокачественных опухолей, мелкоклеточных и немелкоклеточных карцином легкого, гормононезависимых злокачественных опухолей молочной железы, переходноклеточных и плоскоклеточных злокачественных опухолей, неврологических злокачественных опухолей, включая нейробластому, глиомы, глиобластому, астроцитомы, остеосаркомы, саркомы мягких тканей, гемангиомы, эндокринологических опухолей, гематологических неоплазий, включая лейкозы, лимфомы и другие миелопролиферативные и лимфопролиферативные заболевания, карцином in situ, гиперпластических поражений, аденом, фибром, гистиоцитоза, хронических воспалительных пролиферативных заболеваний, сосудистых пролиферативных заболеваний и вирус-индуцированных пролиферативных заболеваний, кожных заболеваний, характеризующихся гиперпролиферацией кератиноцитов и/или Т-клеток. Особо предпочтительными заболеваниями, поддающимися лечению с помощью соединений по настоящему изобретению, являются глиобластома; а также злокачественная опухоль толстой кишки, злокачественная опухоль яичника, злокачественная опухоль предстательной железы и злокачественная опухоль желудка и аденокарциномы, более предпочтительно инвазивные аденокарциномы.

Таким образом, настоящее изобретение также относится к активным соединениям, которые являются антипролиферативными агентами. Используемый в настоящем документе термин ʺантипролиферативный агентʺ относится к соединению, которое лечит пролиферативное состояние (то есть соединение, которое используется для лечения пролиферативного состояния).

Субъектом может быть эукариот, животное, позвоночное животное, млекопитающее, грызун (например, морская свинка, хомяк, крыса, мышь), представитель семейства мышиных (например, мышь), представитель семейства псовых (например, собака), представитель семейства кошачьих (например, кошка), представитель семейства лошадиных (например, лошадь), примат, обезьяноподобные (например, обезьяна или человекообразная обезьяна), обезьяна (например, мартышка, бабуин), человекообразная обезьяна (например, горилла, шимпанзе, орангутан, гиббон) или человек. Предпочтительно, субъектом является человеком.

Лечение, определенное выше, может применяться в виде монотерапии или может включать в дополнение к соединению формулы (I) по изобретению обычно применяемое хирургическое вмешательство или лучевую терапию или химиотерапию.

В описании и формуле изобретения слово ʺсодержитʺ и варианты слова не предназначены для исключения других технических признаков, добавок, компонентов или стадий. Дополнительные цели, преимущества и признаки изобретения станут очевидными для специалистов в данной области после рассмотрения описания или могут быть изучены посредством практического осуществления изобретения. Следующие примеры и чертежи приведены в качестве иллюстрации, и они не предназначены для ограничения настоящего изобретения.

Примеры

Все реагенты были коммерчески доступны. Точки плавления измеряли с помощью Buchi mod B-545. ¹H и ¹³C ЯМР спектры регистрировали на спектрометре Varian VNMRS-500. Элементарный анализ регистрировали с помощью анализатора LECO CHNS-932. Спектры масс-спектроскопии регистрировали с помощью оборудования LС/MS DVL-agilent, используя метод API-ES (ионизация электрораспылением при атмосферном давлении) в режиме положительно заряженных ионов. ИК-спектры регистрировали посредством Spectrum One FT-IT с помощью дисков с бромидом калия (2 мг/300 мг). Спектры ДСК регистрировали посредством TA Instruments Mod. Q20. Для ДСК измерений необходимо, чтобы образцы (1 г и 1,5 г) были заключены в алюминиевый тигель, который затем герметизировали и нагревали при температуре от 40°С до 250°С со скоростью 10°С/мин.

Пример 1. Кристаллическая твердая форма A соединения N-(3,5-диметилфенил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидина формулы (I)

Стадия A. Получение 3,5-диметилфенилтиомочевины формулы (IV)

К смеси 3,5-диметиланилина (V) (Aldrich) (194 г) и воды (800 мл) при перемешивании медленно добавляли HCl (192 г) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали в течение 15 минут. Затем при комнатной температуре добавляли тиоцианат аммония (VI) (Biopack) (134 г). Полученную смесь нагревали при 96°C в течение 15 часов при перемешивании. По истечении этого времени смесь охлаждали при перемешивании до 25°С и выдерживали при температуре от 20°С до 25°С при перемешивании. Полученный осадок фильтровали в вакууме, промывали водой и сушили с получением неочищенной 3,5-диметилфенилтиомочевины формулы (IV) (235 г).

Неочищенное соединение формулы (IV) растворяли в горячем этаноле (96%, 1,4 л) и к полученной смеси добавляли горячий толуол (450 мл). Осадок перемешивали в течение ночи при 25°C. После этого осадок отфильтровывали, промывали охлажденным этанолом (96%) и сушили воздухом, затем в вакууме с получением соединения формулы (IV) в виде кристаллической твердой формы (156 г, температура плавления 170-172°C).

Стадия В. Получение 3,5-диметилфенилцианамида формулы (III)

Получали растворы A-C: раствор А получали растворением 3,5-диметилфенилтиомочевины формулы (IV) (72 г, 0,4 моль) в воде (300 мл). Раствор В получали растворением КОН (224 г) в воде (600 мл). Раствор С получали растворением (CH₃COO)₂Pb·3H₂O (167 г) в воде (200 мл). Затем растворы А-С хранили при 95°C при перемешивании.

К раствору А добавляли раствор В при 95°С при перемешивании с последующим добавлением раствора С при 95°С при перемешивании. Образовывался осадок и полученную смесь нагревали при температуре кипения с обратным холодильником в течение 2 минут. По истечении этого времени смесь охлаждали при 0°С. Смесь фильтровали, подкисляли добавлением уксусной кислоты (260 мл) и промывали холодной водой (×6 порциями). Затем смесь фильтровали и сушили в вакууме с получением соединения формулы (III) (53 г).

Соединение формулы (III) растворяли в горячем толуоле (200 мл). Затем добавляли активированный уголь и полученную смесь фильтровали через слой предварительно нагретого дикалита. После этого добавляли 60 мл горячего н-гексана и смесь охлаждали и кристаллизовали при 0°C. Кристаллы сушили воздухом, затем в вакууме с получением соединения формулы (III) в виде белого кристаллического твердого вещества (34 г, выход 58%, температура плавления 118-120°C).

Стадия C. Получение кристаллической твердой формы A N-(3,5-диметилфенил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидина формулы (I)

К смеси хлоргидрата 2-трифторметиланилина формулы (II-HCl) (Aldrich) (15 г, 0,076 моль) и 2-трифторметиланилина формулы (II) (6 г, 0,037 моль) (Aldrich) в абсолютном этаноле (145 мл) и воде (30 мл) добавляли 3,5-диметилфенилцианамид формулы (III) (3 г, 0,0163). Полученную смесь нагревали до 60°С при перемешивании и медленно добавляли 3,5-диметилфенилцианамид формулы (III) (10,2 г, 0,0556) в течение 1 ч при 60°С при перемешивании.

Полученную смесь нагревали при 70°C в течение 1 часа. По истечении этого времени смесь охлаждали при 15°С и добавляли NaOH 1н (около 71 г) при перемешивании до рН 9,0. Смесь с соединением формулы (I) хранили при 0°C в течение 15 часов. Твердое вещество фильтровали и сушили с получением неочищенного кристаллического соединения формулы (I) (4,8 г, выход 21%,≥98% ВЭЖХ).

Неочищенное кристаллическое соединение формулы (I) перекристаллизовывали из смеси этанола/воды с получением соединения формулы (I) в виде кристаллического твердого вещества А белого цвета.

¹H ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,61 (д, J=6,8 Гц, 1H), 7,44,7,41 (м, 1H), 7,07-7,04 (м, 2H), 6,81 (с, 2H), 6,73 (с, 1H), 4,31 (sa, 2H), 2,25 (с, 6H). ¹³C ЯМР (500 МГц, CDCl₃) 149,3, 147,7, 139,0, 132,8, 126,8 (кв., J=5,3 Гц), 125,8, 125,2 124,3 8кв, J=273 Гц), 123,8 (кв., J=28,7 Гц), 122,0, 120,2 21,2. IR (см^-1) 3477, 3430, 3416, 3371, 3299, 3084, 2925, 1649, 1615, 1596, 1519, 1503, 1483, 1316, 1123, 1107, 1033, 850, 764. EM (u.m.a.) [M+H]⁺=308. Аналитически вычислено для C₁₆H₁₆F₃N₃: %C, 62,53; %H, 5,25; %N, 13,67. Найдено: %C, 62,36; %H; 5,06; %N, 13,71. температура плавления: 131,6-131,7°C. ДСК (T_{начальная}) =132,42°C.

Пример 2. Сравнительная твердая форма соединения N-(3,5-диметилфенил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидина формулы (I)

Сравнительную твердую форму соединения формулы (I) получали способом, описанным в примере 1 для соединения 25 Европейской патентной заявки EP2766342. Этот способ включает взаимодействие эквимолярных количеств раствора хлоргидрата 3,5-диметиланилина и N-(2-трифторметил)фенил)цианамида в абсолютном этаноле при температуре кипения с обратным холодильником в течение 15 часов. Добавляли водный раствор NaOH до значения рН, равного 9. Смесь экстрагировали дихлорметаном. Органические фазы сушили над Na₂SO₄ и фильтровали. Растворитель упаривали с получением соединения формулы (I) в неочищенной твердой форме. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией с градиентом гексан:этилацетат в присутствии триэтиламина с получением чистой твердой формы соединения формулы (I).

¹H ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,61 (д, J=6,8 Гц, 1H), 7,44,7,41 (м, 1H), 7,07-7,04 (м, 2H), 6,81 (с, 2H), 6,73 (с, 1H), 4,32 (sa, 2H), 2,25 (с, 6H). IR (см^-1) 3486, 3382, 3278, 3228, 3060, 2917, 1651, 1597, 1562, 1483, 1454, 1370, 1320, 1251, 1167, 1117, 1033, 841, 757 (показано на фиг.4). EM (u.m.a.) [M+H]⁺=308. Аналитически вычислено для C₁₆H₁₆F₃N₃: %C, 62,53; %H, 5,25; %N, 13,67. Найдено: %C, 62,51; %H; 5,08; %N, 13,63. температура плавления: 129,4-129,5°C. ДСК (T_{начальная})=128,78°C (показано на фиг.3).

1. Способ получения кристаллической твердой формы A соединения N-(3,5-диметилфенил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидина формулы (I)

,

показывающей точку плавления 131,5°C,

включающий взаимодействие соли соединения формулы (II) или смеси соли соединения формулы (II) и соединения формулы (II)

с цианамидным соединением формулы (III)

в присутствии полярного органического растворителя и

кристаллизацию соединения формулы (I) в присутствии смеси (C₁-C₃)спирта и воды.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что способ осуществляют взаимодействием смеси соединения формулы (II) и соли соединения формулы (II) с цианамидным соединением формулы (III).

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что соль соединения формулы (II) представляет собой хлоргидратную соль соединения формулы (II).

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что полярный органический растворитель представляет собой (C₁-C₃)спирт.

5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что (C₁-C₃)спирт является этанолом.

6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что взаимодействие проводят при температуре от 60 до 75°C.

7. Способ по п. 1, где кристаллическая твердая форма A формулы (I) дополнительно показывает ДСК 132,4°C.