Способ получения противовирусного лекарственного средства

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения противовирусного средства на основе комплекса дезоксирибонуклеата натрия с железом. Способ получения противовирусного средства на основе комплекса дезоксирибонуклеата натрия с железом осуществляют за счет растворения фармацевтически приемлемой водорастворимой соли железа (III) и дезоксирибонуклеата натрия в воде для инъекций до определенной концентрации, выдерживают полученный раствор в течение определенного времени до реакции образования комплекса, стабилизируют и консервируют полученный раствор, нагревают с последующей осветляющей и стерилизующей фильтрацией раствора. Вышеописанный способ позволит эффективно предотвращать самораспад и деструкцию полученного комплекса во времени. 2 з.п. ф-лы, 5 пр.

 

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности и медицины и касается противовирусного средства, на основе комплекса дезоксирибонуклеата натрия с железом (III).

Актуальным направлением современной медицины является борьба с вирусными заболеваниями, прочно удерживающими первое место среди всей инфекционной патологии человека. Также значительный интерес представляет проблема иммунотерапии, поскольку в настоящее время особенностью состояния здоровья населения в мире (по данным ВОЗ) является снижение иммунореактивности. Наличие нарушений в иммунной системе снижает эффективность проводимой базовой терапии, создает предпосылки для затяжного течения, хронизации патологического процесса. Таким образом, поиск и клиническая оценка новых препаратов с противовирусным и иммуномодулирующим действием, являются перспективными и актуальными.

В настоящее время в медицинской практике при различной инфекционной патологии нашел применение эффективный препарат на основе природной ДНК - Ферровир. Действующим веществом препарата является субстанция, представляющая собой Дезоксирибонуклеат натрия с железом комплекс (Desoxyribonucleate sodium with ferrum complex) (https://www.rlsnet.ru/mnn_index_id_5276.htm).

Препарат оказывает противовирусное и иммуномодулирующее действия, активизирует противовирусный, противогрибковый и противомикробный иммунитеты. Проявляет противовирусное действие в отношение различных РНК- и ДНК-содержащих вирусов. Клинический опыт применения препарата показал его высокую активность, хорошую переносимость, отсутствие токсичности (IС50>4000мкг/мл), и нежелательных побочных эффектов. При терапии СПИД/ВИЧ-инфекции 14-дневное курсовое применение Ферровира повышает уровень CD4+лимфоцитов в крови. Это повышение продолжается в течение 1-1,5 месяца после окончания курса лечения. Одновременно снижается вирусная нагрузка в организме, выражающаяся в снижении концентрации РНК ВИЧ в сравнении с исходным уровнем. При рецидивирующей герпетической инфекции сокращается тяжесть и продолжительность рецидива, наступает быстрая и длительная ремиссия после 10-дневного курсового лечения. Применение Ферровира в комплексном лечении больных хроническим гепатитом С способствует улучшению переносимости лечения (уменьшение головокружения, тошноты и т.д.), снижению репликативной активности всех генотипов вируса HCV, переведению процесса в латентную фазу с восстановлением клеток печени и отсутствием вирусной репликации. Препарат характеризуется высокой степенью активности при совместном присутствии вирусов основного и оппортунистического заболеваний. Химиотерапевтический индекс препарата - более 20, что характерно для высокоактивных лекарственных средств. Однако существующие методы получения данного препарата и других препаратов на основе природных дезоксирибонуклеиновых кислот не обеспечивают достаточно эффективных мер по преодолению основных недостатков, таких как происходящая деградация и денатурация ДНК, приводящая к снижению биологической активности и фармакологической нестабильности конечного продукта.

Известен патент РФ 2158592, опубл. 10.11.2000, раскрывающий противовирусный иммунотропный препарат, который содержит комплекс натриевой соли дезоксирибонуклеиновой кислоты молекулярной массы не более 500 кД и гиперхромным эффектом не менее 10% с оксидом железа. Для получения препарата иммуномодулятор дезоксирибонуклеат натрия модифицируют 3-валентным оксидом железа. При этом расчетное количество дезоксирибонуклеата растворяют в водном растворе расчетного количества оксида железа с последующей очисткой, фильтрацией и

стерилизацией полученного препарата. В патенте не раскрывается возможность использования солей трехвалентного железа. Данный способ не обеспечивает достаточную стабильность при хранении.

Известен способ получения иммунотропного противовирусного препарата на основе натриевой соли нативной дезоксирибонуклеиновой кислоты ДНК-Na, заключающийся в том, что из животного сырья получают биологически-активную — субстанцию натриевой соли нативной дезоксирибонуклеиновой кислоты (Na-ДНК) с молекулярной массой 270-500 кД, гиперхромным эффектом - не ниже 37%, содержанием белка - менее 1%. Далее, расчетное количество ДНК-Na для приготовления 1,5% раствора иммунотропного препарата отвешивается и растворяется в водном растворе определенной концентрации соли одного из переходных металлов из ряда: цинк, марганец, железо, кобальт, сурьма, процесс растворения проводят при нормальной температуре и выдерживают в течение 6 ч. Проводят процесс стерилизации полученного препарата через мембраны с размером пор 0,22 мкм и стерильный розлив в терапевтических дозах (патент RU 2172632 C1, опубл. 27.08.2001). Данный источник может быть указан в качестве ближайшего аналога- прототипа. В патенте не раскрывается, какие соединения железа и какой валентности могут быть использованы.

Задачей настоящего изобретения является разработка более эффективного способа получения противовирусного препарата на основе комплекса дезоксирибонуклеата натрия с железом.

Задача решается следующим способом получения:

В качестве исходных компонентов для создания комплекса используется натриевая соль дезоксирибонуклеиновой кислоты, выделяемая из животного сырья, тимуса, селезенки сельскохозяйственных животных, печени, молоки лососевых, осетровых и прочих промысловых рыб и водорастворимые соли железа (III).

В качестве натриевой соли дезоксирибонуклеиновой кислоты может быть использована субстанция, полученная известными из уровня техники

способами. Например, такие субстанции раскрыты в патентах RU 2309759 C1, RU 2236853 C1, RU 2673802 C2 и т.п. Предпочтительно использование субстанции с гиперхромным эффектом не менее 40%.

В качестве водорастворимых солей железа используют фармацевтически приемлемые соли железа, например хлорид железа (III), сульфат железа (III), цитрат железа (III), аспартат железа (III) и т.п. Предпочтительно использование хлорида трехвалентного железа.

В качестве вспомогательного вещества служащего стабилизатором ионной среды и консерватором биологических молекул используются фармацевтически приемлемые водорастворимые соли натрия. Примерами таких солей могут быть сульфат, гидрокарбонат, хлорид, фосфат, сукцинат, цитрат, глюконат и др. Предпочтительно согласно изобретению используют хлорид натрия.

При приготовлении лекарственного средства используется следующая последовательность:

a) растворение соль железа (III) в воде для инъекций до концентрации в интервале 0,01- 0,08 г/л с целью получения раствора с ионами железа (Fe³⁺);

b) растворение дезоксирибонуклеат натрия до концентрации в интервале 0,1 - 25,0 г/л с целью образования устойчивого комплекса дезоксирибонуклеата натрия с железом (III);

c) экспозиция раствора в течении времени в интервале от 0,5 до 5,0 часов с целью полноты проведения реакции образования комплекса;

d) растворение вспомогательного вещества до концентрации в интервале от 1,0 до 10,0 г/л с целью создания в растворе достаточной ионной силы для стабилизации биологических молекул и консервации раствора;

e) контроль и корректировка pH раствора 0,1н NaOH в интервале 5,0 — 8,0;

f) нагрев раствора до 25-35 °C;

g) осветляющая и стерилизующая фильтрация раствора с использованием фильтров с диаметром пор от 1,0 до 0,2 мкм.

Способ позволяет получить препарат, в котором в качестве активного вещества используется комплекс дезоксирибонуклеата натрия с железом (III) обладающий противовирусным действием в отношении РНК и ДНК-содержащих вирусов в частности гепатита С, клещевого энцефалита, герпеса и прочее.

Противовирусный эффект препарата определяется стимуляцией Toll-like receptor 9 (TLR9) плазмоцитоидных дендритных клеток. Они дифференцируются в дендритные клетки 2 типа — это интерферон- продуцирующие клетки, которые в свою очередь секретируют большое количество IFN — 1 типа (α и β) и способствуют дифференцировке наивных T-лимфоцитов в T-хелперы 2 типа. Под влиянием последних, происходит дифференцировка B-лимфоцитов в плазматические клетки, секретирующие Ig G2, IgG4, IgM. Интерфероны активируют гены, ответственные за эффект прямой противовирусной активности. Кроме прямого действия на вирусную репликацию, IFN α\β, IFN γ активируют макрофаги и NK – клетки усиливая их противовирусную активность.

Технический результат заключается в предотвращении самораспада и деструкции означенного комплекса во времени.

Высокая стабильность препарата достигается с помощью выбора комплексообразующей соли, а именно водорастворимой соли железа, а также определенной последовательности операций, позволяющей с высокой степенью вероятности воспроизводить требуемые физико-химические свойства лекарственного средства и, следовательно, гарантировать высокий терапевтических эффект от применения лекарственного препарата.

Данное техническое решение можно сопроводить следующими примерами:

Пример 1. В 10 литрах воды для инъекций растворяют 100 мг хлорида железа (III) до концентрации 0,01 г/л, далее в раствор добавляют навеску натрия дезоксирибонуклеата в количестве 10,0 г до концентрации 0,1 г/л, раствор перемешивают до полного растворения в течение 30 минут. pH

раствора 8,0. В полученный раствор добавляют навеску натрия хлорида в количестве 10 г, перемешивают 10 минут, нагревают до температуры 25°C и фильтруют через фильтр 0,65 мкм и 0,2 мкм. Стерильный раствор разливают в стеклянные стерилизованные флаконы объемом 10, 20, 50 мл и герметично укупоривают. Полученное средство используют в качестве ингаляций ротовой полости с целью профилактики бронхиальных проявлений, а также аденовирусных инфекций.

Пример 2. В 10 литрах воды для инъекций растворяют 300 мг хлорида железа (III) до концентрации 0,03 г/л, далее в раствор добавляют навеску натрия дезоксирибонуклеата в количестве 25,0 г до концентрации 0,25 г/л, раствор перемешивают до полного растворения в течение 40 минут. рН раствора 7,5. В полученный раствор добавляют навеску натрия хлорида в количестве 30 г, перемешивают 15 минут, нагревают до температуры 27°C и фильтруют через фильтр 0,65 мкм и 0,2 мкм. Стерильный раствор разливают в стеклянные стерилизованные флаконы объемом 10, 20 мл и герметично укупоривают. Полученное средство используют в качестве капель в нос с целью профилактики ОРВИ, гриппа, а также синуситов и ринитов.

Пример 3. В 10 литрах воды для инъекций растворяют 500 мг хлорида железа (III) до концентрации 0,05 г/л, далее в раствор добавляют навеску натрия дезоксирибонуклеата в количестве 140,0 г до концентрации 14,0 г/л, раствор перемешивают до полного растворения в течение 90 минут рН раствора 6,5. В полученный раствор добавляют навеску натрия хлорида в количестве 10 г, перемешивают 20 минут, нагревают до температуры 30°C и фильтруют через фильтр 0,8 мкм, 0,65 мкм и 0,2 мкм. Стерильный раствор разливают в стеклянные стерилизованные флаконы объемом 5 мл и герметично укупоривают. Полученное средство используют для подкожного введения при лечении герпеса.

Пример 4. В 10 литрах воды для инъекций растворяют 600 мг хлорида железа (III) до концентрации 0,06 г/л, далее в раствор добавляют навеску натрия дезоксирибонуклеата в количестве 160,0 г до концентрации 16,0 г/л,

раствор перемешивают до полного растворения в течение 100 минут. pH раствора 6,0. В полученный раствор добавляют навеску натрия хлорида в количестве 90 г, перемешивают 30 минут, нагревают до температуры 33°C и фильтруют через фильтр 0,8 мкм, 0,65 мкм и 0,2 мкм. Стерильный раствор разливают в стеклянные стерилизованные флаконы объемом 5 мл и герметично укупоривают. Полученное средство используют в качестве внутримышечных инъекций при лечении гепатита C.

Пример 5. В 10 литрах воды для инъекций растворяют 800 мг хлорида железа (III) до концентрации 0,08 г/л, далее в раствор добавляют навеску натрия дезоксирибонуклеата в количестве 250,0 г до концентрации 25,0 г/л, раствор перемешивают до полного растворения в течение 150 минут. pH раствора 5,0. В полученный раствор добавляют навеску натрия хлорида в количестве 60 г, перемешивают 30 минут, нагревают до температуры 35°C и фильтруют через фильтр 0,8 мкм, 0,65 мкм и 0,2 мкм. Стерильный раствор расфасовывают в полимерные капсулы объемом 0,1, 0,2 и 0,5 мл. Полученное средство используют как кишечнорастворимые капсулы при лечении цитомегаловируса, ротовирусной инфекции и прочих инфекциях ЖКТ.

Анализы полученных препаратов в процессе хранения показали: сохранение подлинности; бесцветность; прозрачность; стерильность; нетоксичность; апирогенность; сохранение степени нативности; содержание РНК менее 0,1%; содержание белка – до 0,1%. Практически не было отмечено побочных эффектов. Препарат имеет более пролонгированный эффект терапии по сравнении препаратом по прототипу. Используемый для сравнения препарат по прототипу к концу срока годности вызывает повышение условного лихорадочного индекса, что свидетельствует о его меньшей стабильности.

1. Способ получения противовирусного средства на основе комплекса дезоксирибонуклеата натрия с железом, отличающийся тем, что растворяют фармацевтически приемлемую водорастворимую соль железа (III) в воде для инъекций до концентрации в интервале 0,01- 0,08 г/л, добавляют и растворяют дезоксирибонуклеат натрия до концентрации в интервале 0,1 – 25,0 г/л , выдерживают полученный раствор в течение времени в интервале от 0,5 до 5,0 часов для проведения реакции образования комплекса, стабилизируют и консервируют полученный раствор добавлением фармацевтически приемлемой водорастворимой соли натрия до концентрации в интервале от 1,0 до 10,0 г/л, корректируют рН раствора 0,1н NaOH до рН 5,0 – 8,0, нагревают до 25-35°С с последующей осветляющей и стерилизующей фильтрацией раствора с использованием фильтров с диаметром пор от 1,0 до 0,2 мкм.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что фармацевтически приемлемая водорастворимая соль железа (III) представляет собой хлорид железа (III).

3. Способ по любому из пп. 1, 2, отличающийся тем, что фармацевтически приемлемая водорастворимая соль натрия представляет собой натрия хлорид.