Фармацевтические препараты для лечения вирусных инфекций глаза

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и предназначена для лечения аденовирусной инфекции глаза. Для этого применяют РНКазу суперсемейства РНКазы А посредством местного введения РНКазы в глаз. Также обеспечивается применение РНКазы суперсемейства РНКазы А при изготовлении лекарственного препарата для местного лечения аденовирусной инфекции глаза. В другом воплощении представлен способ лечения аденовирусной инфекции глаза, предусматривающий стадию местного введения в глаз терапевтически эффективного количества РНКазы суперсемейства РНКазы А. Использование группы изобретений позволяет повысить эффективность лечения аденовирусной инфекции глаза. 3 н. и 39 з.п. ф-лы, 4 ил., 1 пр.

 

Предпосылки изобретения

Настоящее изобретение относится к вирусным инфекциям глаза и, более конкретно, относится к способам и фармацевтическим препаратам для лечения вирусных инфекций глаза. В своем самом прямом смысле настоящее изобретение относится к лечению инфекций человеческого глаза, вызванных вирусами Herpesviridae (включая без ограничения цитомегаловирус человека, вирус опоясывающего герпеса и вирус ветряной оспы) и вирусами Adenoviridae.

Вирусные заболевания глаза могут иметь значительные последствия. Вирус простого герпеса типа 1 может вызывать конъюнктивит и кератит, цитомегаловирус человека может вызвать ретинит, аденовирус типов 8, 19, 29 и 37 может вызвать эпидемический кератоконъюнктивит, а аденовирус типов 3, 4 и 7 может вызвать фарингоконъюнктивную лихорадку. Вирус опоясывающего герпеса (HZV), член семейства Herpesviridae, может вызвать серьезное заболевание глаза при воздействии на область тройничного нерва. Опоясывающий герпес с поражением глаза, тяжелая форма острого опоясывающего герпеса, является результатом реактивации вируса ветряной оспы (VZV) (другого члена семейства Herpesviridae) в тройничном (пятом черепном) нерве. Любая ветвь нерва может быть затронута, хотя чаще всего участвует лобная ветвь в первом отделении тройничного нерва. Эта лобная ветвь иннервирует почти все окулярные и периокулярные структуры. Опоясывающий герпес с поражением глаза в этом конкретном месте может привести к слепоте и требует быстрого и эффективного терапевтического подхода.

Цитомегаловирус человека (CMV) является еще одним членом семейства Herpesviridae. По меньшей мере 60% населения США подвержено воздействию CMV, с распространенностью более 90% в группах высокого риска (например, дети в утробе, чьи матери заражаются CMV во время беременности, люди с HIV и реципиенты трансплантатов).

Ретинит, вызванный CMV, является одной из наиболее распространенных оппортунистических инфекций у людей со СПИДом или фармакологически индуцированной иммуносупрессией. Пациенты с ретинитом, вызванным CMV, обычно демонстрируют прогрессирующее снижение остроты зрения, которое может прогрессировать до слепоты. Для предотвращения рецидива ретинита необходимо длительное лечение CMV.

Сообщали о синдроме восстановления иммунитета (IRIS) у 16%-63% HIV-инфицированных пациентов с ретинитом, вызванным CMV, после начала HAART (высокоактивная антиретровирусная терапия). IRIS CMV может проявляться как безболезненные мушки перед глазами, помутнение зрения, фотопия, снижение остроты зрения или глазная боль. У некоторых пациентов может развиться макулярный отек, приводящий к потере зрения или пролиферативной витреоретинопатии, спонтанному виреозному кровоизлиянию и отслоению сетчатки.

Известным является лечение вирусных инфекций глаза с помощью ацикловира, но такое лечение не является полностью удовлетворительным. Ацикловир для местного применения должен применяться часто и вызывает раздражение глаза. Ацикловир для перорального применения вызывает значительные побочные эффекты. Другие противовирусные медицинские препараты, такие как ганцикловир, валацикловир и валганцикловир, используют для лечения вирусных инфекций глаза, и такое лечение также не является полностью удовлетворительным. Ганцикловир вводят внутривенно, и поэтому его нельзя использовать за пределами, например, стационарных условий. Противовирусные медицинские препараты для перорального применения, такие как валацикловир и валганцикловир, имеют недостатки; они, как известно, вызывают лихорадку, сыпь, диарею и гематологические эффекты (например, нейтропению, анемию, тромбоцитопению). В некоторых случаях нейтропения может реагировать на снижение дозы или применение лекарственных средств, которые стимулируют продуцирование нейтрофилов костным мозгом в качестве гранулоцитарного колониестимулирующего фактора [G-CSF] или гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора [GM-CSF]. С этими токсическими эффектами трудно справляться.

Поэтому было бы преимущественно обеспечить лучший способ и лучший фармацевтический препарат для лечения вирусных инфекций глаза у людей.

Известно, что различные ферментативно активные рибонуклеазы, включая ранпирназу и другие белки, которые характеризуются высокой гомологичностью к ней, обладают противовирусной активностью и обладают активностью в отношении вирусов в семействе Herpesviridae (в частности, включая без ограничения вирус простого герпеса типов 1 и 2 и цитомегаловирус человека), а также в отношении аденовируса типа 2. Однако, известно, что белки очень раздражают глаз из-за интенсивного воспалительного ответа, опосредуемого Т-клетками. По этой причине, хотя ранпирназа и другие родственные белки были исследованы в отношении применения против различных вирусных инфекций, они не были исследованы для применения против вирусных инфекций глаза.

Несмотря на то, что ожидали, что белковая ранпирназа будет вызывать раздражение в глазу, в модели кроликов изучали раздражение ранпирназы для местного применения в глазу. В этом эксперименте продемонстрировали, что ранпирназа не является раздражающей, что определено с использованием Согласованной на глобальном уровне системы критериев оценки классификации и офтальмологических критериев оценки Европейского экономического сообщества. Это был выдающийся результат, поскольку введение чужеродного белка в глаз может вызвать раздражение роговицы. В результате ожидается, что ранпирназа и другие белки, которые характеризуются высокой гомологичностью к ней, будут пригодны при лечении вирусных заболеваний человеческого глаза.

Краткое описание графических материалов

Настоящее изобретение будет лучше понятно со ссылкой на следующие иллюстративные и неограничивающие графические материалы, на которых

на фиг. 1 показана шкала, используемая для оценки поражений глаз, наблюдаемых у кролика, которого подвергли тесту Дрейза;

на фиг. 2 показаны результаты теста Дрейза, в котором раствор ранпирназы применяли в отношении правого глаза трех кроликов;

на фиг. 3 показаны результаты теста Дрейза согласно фиг. 2, в котором не обрабатывали левый глаз каждого кролика; и

на фиг. 4 показаны офтальмологические критерии оценки Европейского экономического сообщества, используемые для классификации раздражения глаза, вызванного тестируемым образцом в тесте Дрейза.

Подробное описание предпочтительных вариантов осуществления

Ранпирназа представляет собой белковую ферментативно активную рибонуклеазу, которая раскрыта и заявлена в патенте США №5559212. В патентах США №№5728805, 6239257, 7229824 и 8518399 раскрыты три другие белковые ферментативно активные рибонуклеазы, которые характеризуются высокой гомологичностью в отношении ранпирназы:

a) РНКаза с SEQ ID NO: 2 в патенте США №5728805, упоминаемая в данном документе как «вариант '805»;

b) РНКаза с SEQ ID NO: 2 в патенте США №6239257, упоминаемая в данном документе как «амфиназа 2»; и

c) РНКаза с SEQ ID NO: 59 в патенте США №7229824, упоминаемая в данном документе как «rAmphinase 2».

В патенте США №8518399 раскрыто, что ранпирназа, вариант '805 и rAmphinase 2 обладают противовирусной активностью в отношении вирусов Herpesviridae, в частности, включая без ограничения вирус простого герпеса типов 1 и 2 и цитомегаловирус человека. Основываясь на ее сходстве с этими тремя ферментативно активными рибонуклеазами, считается, что амфиназа 2 также будет обладать этими активностями.

Кроме того, в международной патентной заявке WO 2015/148768 A2 раскрыто, что ранпирназа обладает противовирусной активностью в отношении ряда вирусов, включая аденовирус типа 2.

РНКазы суперсемейства РНКазы А представляют собой пиримидинспецифические эндонуклеазы, обнаруженные в большом количестве в поджелудочной железе определенных млекопитающих и некоторых рептилий. Они участвуют в эндонуклеолитическом расщеплении 3'-фосфомононуклеотидов и 3'-фосфоолигонуклеотидов, заканчивающихся на C-P или U-P с 2'-3'-циклическими фосфатными промежуточными соединениями. Члены этого суперсемейства включают ранпирназу и ее варианты, амфиназу, rAmphinase 2, рибонуклеазы бычьей семенной железы и головного мозга; несекреторные рибонуклеазы почки; рибонуклеазы печеночного типа, ангиогенин; эозинофильный катионный белок и рибонуклеазы поджелудочной железы от разных видов, включая рибонуклеазы поджелудочной железы человека и быка.

Ранпирназа представляет собой РНКазу, выделенную из ооцитов леопардовой лягушки Rana pipiens, которая раскрыта в патенте США №5559212, и ранее была известна как ONCONASE®. Аминокислотная последовательность ранпирназы представлена в SEQ ID NO: 1. Ранпирназу протестировали, и было обнаружено, что она является цитотоксичной в отношении раковых клеток из-за ее ферментативной активности в отношении РНК.

Вариант ранпирназы раскрыт в патенте США №5728805 (далее в данном документе - « вариант '805»). «Вариант '805» также представляет собой РНКазу, и аналогично было обнаружено, что он является цитотоксичным в отношении определенных раковых клеток. Вариант '805 является близким вариантом ранпирназы; его аминокислотная последовательность идентична аминокислотной последовательности ранпирназы, за исключением того, что она содержит валин вместо изолейцина в положении 11, аспарагин вместо аспарагиновой кислоты в положении 20, и аргинин вместо серина в положении 103 аминокислотной последовательности ранпирназы. В некоторых вариантах осуществления вариант '805 упоминается как «Val11, Asn20, Argl03-ранпирназа». Аминокислотная последовательность варианта '805 представлена в SEQ ID NO: 2.

Амфиназа 2 также является РНКазой. Она представляет собой белок, идентифицированный как 2325p4 в патенте США №6239257, и также было обнаружено, что она является цитотоксичной в отношении раковых клеток. Аминокислотная последовательность амфиназы 2 представлена в SEQ ID NO: 3.

Рекомбинантная амфиназа 2 («rAmphinase 2») схожа с амфиназой 2, но имеет остаток Met в положении 1 и не содержит гликановых фрагментов, которые расположены в амфиназе 2 в положениях 27 и 91. rAmphinase 2 описана в патенте США №7229824. Аминокислотная последовательность rAmphinase 2 представлена в SEQ ID NO: 4.

Термин «его функциональный эквивалент» предназначен для включения белков, которые отличаются от любой встречающейся в природе РНКазы делецией, добавлением или замещением одной или более аминокислот, но сохраняют активность РНКазы. Например, рассмотренный выше вариант '805 можно рассматривать в качестве функционального производного ранпирназы, поскольку он содержит три аминокислотные замены по сравнению с аминокислотной последовательностью ранпирназы, но все же обладает активностью РНКазы.

В одном варианте осуществления термин «РНКаза суперсемейства РНКазы А» также включает слитые белки РНКазы, в частности ранпирназу, с другим белком, таким как антитело или фрагмент антитела. Такой слитый белок описан в WO 2005/080586 A1. В альтернативном варианте осуществления термин «РНКаза суперсемейства РНКазы А» не включает такие слитые белки, подразумевая, что РНКаза является единственным активным белком, который используется для лечения вирусной инфекции глаза.

Все из патентов США №№5559212, 5728805, 6239257, 7229824, 8518399, 8663964 и публикаций заявок США 2012-0003266 и 2014-0037610 включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте для всех целей.

Как обсуждалось ранее, было обнаружено, что РНКазу суперсемейства РНКазы А, в частности ранпирназу, можно применять при лечении вирусного заболевания глаза. «Вирусные заболевания глаза» представляют собой заболевания, которые проявляют симптомы преимущественно в глазе субъекта и которые вызваны вирусами, а не бактериями. Симптомы заболеваний глаза включают зуд, чрезмерное выделение глазной жидкости, красный или розовый цвет конъюнктивы, боль, сухие глаза, светочувствительность, опухшие глаза, выделения из глаз и помутнение зрение. Вирусные заболевания глаза включают без ограничения конъюнктивит и кератит, хориоретинит, ретинит, кератоконъюнктивит, фарингоконъюнктивную лихорадку и ретинит, вызванный CMV.

Вирусный конъюнктивит, также известный как «розовый глаз», характеризуется воспалением наружного слоя белой части глаза и внутренней поверхности века.

Это делает глаз розовым или красноватым. Также это может сопровождаться болью, жжением, чесанием или зудом. Вирусный конъюнктивит обычно вызван аденовирусом. Другие вирусы, которые могут быть ответственны за конъюнктивальную инфекцию, включают вирус простого герпеса (HSV), вирус ветряной оспы (VZV), энтеровирус 70, вирус Коксаки A24, контагиозный моллюск и вирус иммунодефицита человека (HIV).

Вирусный кератит представляет собой воспаление роговицы, которое преимущественно вызвано вирусом простого герпеса. Это состояние зачастую сопровождается болью - от умеренной до сильной - и обычно сопровождается одним или более из следующих симптомов: боль, нарушение зрения, светобоязнь и покраснение глаза.

Хориоретинит представляет собой воспаление сосудистой оболочки (тонкого пигментированного сосудистого слоя глаза) и сетчатки глаза. Он является формой заднего увеита. Симптомы могут включать наличие плавающих черных пятен, помутнение зрения, боль или покраснение глаза, чувствительность к свету или чрезмерное слезотечение. Хориоретинит может быть вызван инфекцией, вызванной цитомегаловирусом (CMV), вирусом ветряной оспы (HZV), вирусом лихорадки денге, вирусом Западного Нила или вирусом лимфоцитарного хориоменингита (LCMV).

В частности, вирусные заболевания глаза вызваны вирусом из семейства вирусов Herpesviridae или аденовирусом, выбранным из группы, состоящей из 3, 4, 7, 8, 19, 29 и 37.

Herpesviridae представляют собой вирусы с геномом в виде двухцепочечной линейной ДНК, которые классифицируются в классе I Балтимора. Вирусы из семейства Herpesviridae, вызывающие вирусные заболевания глаза, включают без ограничения вирусы простого вируса типа 1, цитомегаловирус человека и вирус опоясывающего герпеса, в частности вирус опоясывающего герпеса с поражением глаза.

Adenoviridae представляют собой вирусы с двухцепочечной ДНК, которые классифицируются в классе I Балтимора. Аденовирус типов 8, 19, 29 и 37 может вызывать эпидемический кератоконъюнктивит, а аденовирус типов 3, 4 и 7 может вызывать фарингоконъюнктивную лихорадку, аденовирус, типы 8, 19, 29 и 37 могут вызвать эпидемический кератоконъюнктивит, а аденовирус типов 3, 4 и 7 может вызывать фарингоконъюнктивную лихорадку.

Термины «лечить» и «лечение», используемые в данном документе, относятся к введению субъекту, имеющему вирусную инфекцию глаза, терапевтически эффективного количества РНКазы, такой как ранпирназа, вариант ранпирназы, такой как вариант '805, амфиназа 2 или rAmphinase 2. Используемый в данном документе термин «лечение» охватывает любое лечение вирусной инфекции глаза, что приводит в результате к необходимому фармакологическому и/или физиологическому эффекту, включая остановку развития заболевания, приведение к регрессии заболевания, ограничение распространения вируса от одной клетки к другой в пределах индивидуума, ограничение репликации вируса у индивидуума, ограничение проникновения вируса в клетку индивидуума и уменьшение количества вирусов у индивидуума или ткани этого индивидуума.

Термин «терапевтически эффективное количество» используется в данном документе взаимозаменяемо с термином «терапевтически эффективная доза» и относится к количеству РНКазы, которое приводит к улучшению или устранению симптомов заболевания или состояния, подлежащих лечению. Терапевтически эффективное количество РНКазы, такой как ранпирназа, вариант '805, амфиназа 2 или rAmphinase 2, в одном варианте осуществления задерживает или сводит к минимуму начало вирусной инфекции глаза у субъекта или ускоряет или увеличивает выздоровление субъекта от нее. В одном варианте осуществления РНКаза снижает титр вируса в глазе инфицированного субъекта. В другом варианте осуществления РНКаза предотвращает увеличение титра вируса в глазе инфицированного субъекта. В одном варианте осуществления терапевтически эффективное количество РНКазы обеспечивает терапевтическое преимущество при лечении или терапии вирусной инфекции глаза. В одном варианте осуществления терапевтически эффективное количество РНКазы уменьшает распространение вируса от одной клетки в другую. Терапевтически эффективное количество может также предотвращать заболевание и/или уменьшать тяжесть симптомов.

Терапевтически эффективное количество может быть определено специалистом в данной области техники в качестве предмета обычного эксперимента. Терапевтически эффективную дозировку фармацевтической композиции может легко определить специалист в данной области техники, например, из исследований на животных. Кроме того, специалист в данной области техники может осуществлять клинические исследования на человеке для определения предпочтительной эффективной дозы для человека. Такие клинические исследования являются обычными и хорошо известны из уровня техники. Точная доза, которая подлежит применению, также будет зависеть от способа введения. Эффективные дозы могут быть экстраполированы из кривых доза-ответ, полученных из систем тестирования in vitro или на животных. РНКазу можно вводить субъекту, нуждающемуся в этом, в виде разовой дозы или нескольких доз. В одном варианте осуществления РНКазу вводят субъекту, нуждающемуся в этом, один раз в день или в виде нескольких доз в день. В одном варианте осуществления РНКазу вводят субъекту до тех пор, пока не будут устранены симптомы и/или пока субъект не будет больше подвержен риску заражения вирусом.

В некоторых вариантах осуществления введение терапевтически эффективного количества РНКазы, в частности ранпирназы, уменьшает титр вируса в глазу по сравнению с контролем, не обработанным РНКазой, но инфицированным вирусом, по меньшей мере на 10%, предпочтительно по меньшей мере на 15% или предпочтительно по меньшей мере на 20% и наиболее предпочтительно по меньшей мере на 25%.

В некоторых вариантах осуществления введение терапевтически эффективного количества РНКазы, в частности ранпирназы, приводит к уменьшению титра вируса ниже уровня обнаружения. Определение титров вируса раскрыто, например, в Reischl (1996) Front Biosci. l:e 72-7, Application of molecular biology-based methods to the diagnosis of infectious diseases.

В некоторых вариантах осуществления РНКазу, в частности ранпирназу, можно вводить в течение 6 часов после появления первых симптомов вирусной инфекции глаза. В других вариантах осуществления РНКазу можно вводить в течение 8, 10, 12, 15, 18 или 24 часов после появления первых симптомов вирусной инфекции глаза или в течение двух, трех, четырех или пяти дней после появления первых симптомов вирусной инфекции глаза.

В некоторых вариантах осуществления вводят несколько доз РНКазы, в частности ранпирназы. Частота введения этих нескольких доз может варьироваться в зависимости от таких факторов, как тяжесть симптомов. Например, РНКазу можно вводить один раз в неделю, два раза в неделю, три раза в неделю, четыре раза в неделю, через день, один раз в день, два раза в день или три раза в день.

Продолжительность введения РНКазы, в частности ранпирназы, т.е. период, в течение которого вводят РНКазу, может варьироваться в зависимости от таких факторов, как тяжесть симптомов, восприимчивость пациента и т.д. Например, РНКазу можно вводить в течение периода в диапазоне от одного дня, трех дней, семи дней, двух недель, четырех недель, двух месяцев, трех месяцев, четырех месяцев, пяти месяцев или шести месяцев или дольше.

РНКазу, в частности ранпирназу или фармацевтическую композицию, содержащую РНКазу, предпочтительно ранпирназу, предпочтительно вводят местно в глаз, что означает, что РНКазу или фармацевтическую композицию, содержащую РНКазу, вводят непосредственно в глаз, а не в другое место организма. Местное введение может обеспечиваться посредством глазных капель, суспензии, эмульсии, мази, раствора, геля, липосом, наночастиц, микроэмульсий, наноэмульсий, наносуспензий, ниосом, дендримеров и гидрогелей.

Участок действия ранпирназы, вводимой местно, может представлять собой различные слои роговицы, конъюнктивы, склеры и других тканей переднего сегмента, такого как радужная оболочка и цилиарное тело (передний увеит).

В качестве альтернативы, РНКазу, предпочтительно ранпирназу или фармацевтическую композицию, содержащую РНКазу, предпочтительно ранпирназу, можно вводить в стекловидное тело, в камеру глаза, субконъюнктивально, в субтеноновое пространство глаз, позади глазного яблока или околосклерально.

Фармацевтическая композиция, содержащая РНКазу, предпочтительно ранпирназу, должна являться стерильной для введения в глаз.

Подходящие вспомогательные вещества для офтальмологических фармацевтических композиций включают без ограничения консерванты, такие как хлорид бензалкония, поликватерний-1 (Polyquad), перборат натрия, оксихлорокомплекс (Purite®), хлорбутанол, бензетония хлорид, цетилпиридиния хлорид, бензилбромид, EDTA, полиаминопропила бигуанид, нитрат фенилртути, ацетат фенилртути, тимеросал, мертиолат, ацетат и борат фенилртути, сульфат полимиксина В, хлоргексидин, метил- и пропилпарабены, фенилэтиловый спирт, хлорид четвертичного аммония, бензоат натрия, пропионат натрия, сорбиновая кислота и SofZia.

Другие вспомогательные вещества в фармацевтической композиции для введения в глаз можно использовать для контроля вязкости композиции и включают повидон, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, метилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу и карбоксиметилцеллюлозу.

Поверхностно-активные вещества можно добавлять в фармацевтическую композицию для диспергирования нерастворимых ингредиентов или для содействия солюбилизации. Предпочтительно, используют неионные поверхностно-активные вещества, такие как полисорбаты, включая полисорбат 80 или полисорбат 20. Другие подходящие поверхностно-активные вещества включают полиоксил-40-стеарат и полиэтиленгликоль.

Как правило, фармацевтическая композиция также содержит ингредиент для регулирования рН композиции и для буферизации в пределах определенного диапазона рН. Фармацевтическая композиция может характеризоваться рН от 5,0 до 7,5. В качестве буфера можно использовать носитель на основе борной кислоты или модифицированный фосфатный буфер Серенсена.

Кроме того, можно использовать средство, регулирующее тоничность, для регулирования тоничности композиции. Подходящие ингредиенты, регулирующие тоничность, включают без ограничения хлорид натрия, нитрат натрия, сульфат натрия, хлорид калия, декстрозу, глицерин, пропиленгликоль и маннит.

Используемый в данном документе термин «фармацевтическая композиция» охватывает композицию, подходящую для введения субъекту, например, млекопитающему, в частности человеку. В общем, «фармацевтическая композиция» является стерильной и не содержит загрязняющих веществ, которые способны вызывать нежелательный ответ у субъекта.

Используемый в данном документе термин «фармацевтически приемлемый носитель» включает все возможные растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства, изотонические средства и средства, задерживающие поглощение и т.п. Применение таких сред и средств для фармацевтически активных веществ хорошо известно из уровня техники. Эти средства, как правило, являются безопасными, нетоксичными и не являются ни биологически, ни иным образом нежелательными.

В фармацевтические композиции также можно включать дополнительные активные ингредиенты. РНКазу, в частности, ранпирназу и варианты ранпирназы, представленные в данном документе, можно вводить вместе с другими биологически активными средствами. В качестве альтернативы, РНКаза, предпочтительно ранпирназа, является единственным биологически активным средством в фармацевтической композиции.

Не является ли РНКаза раздражающей для глаза можно определить в тесте Дрейза с использованием Согласованной на глобальном уровне системы критериев оценки классификации и с использованием офтальмологических критериев оценки Европейского экономического сообщества. В тесте Дрейза РНКазу помещают в конъюнктивальный мешок глаза кролика, и глаз исследуют через 1, 24, 48 и 72 часа после введения ранпирназы. Оцениваемые критерии представляют собой помутнение роговицы, поражение радужной оболочки, конъюнктивальное покраснение и конъюнктивальный отек. Если балл для каждого из этих критериев равен нулю, РНКаза не считается раздражающей для глаза. Дополнительная информация об оценке может быть взята из фиг. 1-4.

Как указано выше, до настоящего изобретения ни один специалист в данной области техники не вводил в глаз ранпирназу или любую из трех других вышеописанных белковых ферментативно активных рибонуклеаз. Однако, такое введение ранпирназы было смоделировано с использованием теста Дрейза, и результаты этого эксперимента показали, что ранпирназа не является раздражающей, что определено с использованием двух принятых стандартов.

Пример

В качестве тестируемого образца использовали 0,1% мл раствор, состоящий из 0,1% ранпирназы в запатентованном водном растворе, используемом в качестве носителя. Использовали трех кроликов, каждый из которых представлял собой самца новозеландского белого кролика, которому во время эксперимента было приблизительно 16 недель, и вес которого составлял 3,3-3,4 кг.

После введения двух капель тетракаина - анестетика, вводимого при премедикации, на поверхность роговицы обоих глаз каждого кролика, тестируемый образец помещали в конъюнктивальный мешок правого глаза каждого кролика, осторожно оттягивая нижнее веко от глазного яблока; веки осторожно удерживали вместе в течение приблизительно одной секунды, чтобы ограничить потерю тестируемого материала. Левый глаз каждого кролика оставался необработанным и служил в качестве контроля. Глаза животных исследовали через 1 (±15 минут), 24, 48 и 72 часа (±1 час) после введения тестируемого образца. Оценки окулярной реакции по тесту Дрейза (фиг. 1) регистрировали вручную при каждом исследовании (фиг. 2 и 3). Как видно на фиг. 2, у каждого животного наблюдали окулярную реакцию через один час после введения тестируемого образца, но в каждом случае эту реакцию полностью устраняли в течение 24 часов и после этого.

Для определения степени раздражения, вызванного тестируемым образцом, с использованием офтальмологических критериев оценки Европейского экономического сообщества (фиг. 4), общие баллы раздражения глаза для исследований в 24, 48 и 72 часа отдельно добавляли для помутнения роговицы, поражения радужной оболочки, конъюнктивального покраснения и конъюнктивального отека и средние баллы для этих параметров оценки сопоставляли с офтальмологическими критериями оценки Европейского экономического сообщества. Поскольку все эти баллы (и, следовательно, рассчитанные средние баллы) были равны нулю, тестируемый субъект не считался раздражающим, что определено офтальмологическими критериями оценки Европейского экономического сообщества.

Для определения степени раздражения, вызванного тестируемым образцом, с использованием Согласованной на глобальном уровне системы критериев оценки классификации, 24, 48 и 72-часовые баллы добавляли отдельно для каждого животного, и каждую сумму делили на 3 (три временные точки) для получения индивидуальных средних баллов для каждого животного. Поскольку все эти баллы (и, следовательно, рассчитанные коэффициенты) были равны нулю, тестируемый субъект не считался раздражающим, что определено Согласованной на глобальном уровне системой критериев оценки классификации.

Следовательно, эти данные тестов демонстрируют новый и неожиданный результат: ранпирназа, доставляемая в глаз в водном растворе, не является раздражающей, что определено Согласованной на глобальном уровне системой критериев оценки классификации и офтальмологическими критериями оценки Европейского экономического сообщества, даже несмотря на то, что ранпирназа представляет собой белок (который, как ожидается, будет раздражать глаз).

Хотя этот эксперимент проводили с использованием раствора ранпирназы в запатентованном водном носителе, специалист в данной области техники счел бы вероятным, что растворы трех вышеуказанных белковых ферментативно активных рибонуклеаз будут вести себя таким же образом из-за их сходств с ранпирназой в отношении активности и гомологии.

Хотя по меньшей мере один предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения был описан выше, настоящее описание не является ограничивающим и является исключительно иллюстративным. Объем настоящего изобретения определяется только формулой изобретения, которая приведена далее.

--->

Перечень последовательностей

<110> Тамир Байотекнолоджи, Инк.

Скикера, Луис

Салли, Джейми

<120> ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ ГЛАЗА

<130> TAMI-015/01US 316630-2036

<140> US 15/180,270

<141> 2016-06-13

<150> US 62/175,961

<151> 2015-06-15

<160> 4

<170> PatentIn версии 3.5

<210> 1

<211> 104

<212> PRT

<213> Rana pipiens

<400> 1

Glu Asp Trp Leu Thr Phe Gln Lys Lys His Ile Thr Asn Thr Arg Asp

1 5 10 15

Val Asp Cys Asp Asn Ile Met Ser Thr Asn Leu Phe His Cys Lys Asp

20 25 30

Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Arg Pro Glu Pro Val Lys Ala Ile Cys

35 40 45

Lys Gly Ile Ile Ala Ser Lys Asn Val Leu Thr Thr Ser Glu Phe Tyr

50 55 60

Leu Ser Asp Cys Asn Val Thr Ser Arg Pro Cys Lys Tyr Lys Leu Lys

65 70 75 80

Lys Ser Thr Asn Lys Phe Cys Val Thr Cys Glu Asn Gln Ala Pro Val

85 90 95

His Phe Val Gly Val Gly Ser Cys

100

<210> 2

<211> 104

<212> PRT

<213> искусственный

<220>

<223> вариант '805 ранпирназы

<400> 2

Glu Asp Trp Leu Thr Phe Gln Lys Lys His Val Thr Asn Thr Arg Asp

1 5 10 15

Val Asp Cys Asn Asn Ile Met Ser Thr Asn Leu Phe His Cys Lys Asp

20 25 30

Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Arg Pro Glu Pro Val Lys Ala Ile Cys

35 40 45

Lys Gly Ile Ile Ala Ser Lys Asn Val Leu Thr Thr Ser Glu Phe Tyr

50 55 60

Leu Ser Asp Cys Asn Val Thr Ser Arg Pro Cys Lys Tyr Lys Leu Lys

65 70 75 80

Lys Ser Thr Asn Lys Phe Cys Val Thr Cys Glu Asn Gln Ala Pro Val

85 90 95

His Phe Val Gly Val Gly Arg Cys

100

<210> 3

<211> 114

<212> PRT

<213> Rana pipiens

<400> 3

Lys Pro Lys Glu Asp Arg Glu Trp Glu Lys Phe Lys Thr Lys His Ile

1 5 10 15

Thr Ser Gln Ser Val Ala Asp Phe Asn Cys Asn Arg Thr Met Asn Asp

20 25 30

Pro Ala Tyr Thr Pro Asp Gly Gln Cys Lys Pro Ile Asn Thr Phe Ile

35 40 45

His Ser Thr Thr Gly Pro Val Lys Glu Ile Cys Arg Arg Ala Thr Gly

50 55 60

Arg Val Asn Lys Ser Ser Thr Gln Gln Phe Thr Leu Thr Thr Cys Lys

65 70 75 80

Asn Pro Ile Arg Cys Lys Tyr Ser Gln Ser Asn Thr Thr Asn Phe Ile

85 90 95

Cys Ile Thr Cys Arg Asp Asn Tyr Pro Val His Phe Val Lys Thr Gly

100 105 110

Lys Cys

<210> 4

<211> 115

<212> PRT

<213> искусственный

<220>

<223> rAmphinase 2

<400> 4

Met Lys Pro Lys Glu Asp Arg Glu Trp Glu Lys Phe Lys Thr Lys His

1 5 10 15

Ile Thr Ser Gln Ser Val Ala Asp Phe Asn Cys Asn Arg Thr Met Asn

20 25 30

Asp Pro Ala Tyr Thr Pro Asp Gly Gln Cys Lys Pro Ile Asn Thr Phe

35 40 45

Ile His Ser Thr Thr Gly Pro Val Lys Glu Ile Cys Arg Arg Ala Thr

50 55 60

Gly Arg Val Asn Lys Ser Ser Thr Gln Gln Phe Thr Leu Thr Thr Cys

65 70 75 80

Lys Asn Pro Ile Arg Cys Lys Tyr Ser Gln Ser Asn Thr Thr Asn Phe

85 90 95

Ile Cys Ile Thr Cys Arg Asp Asn Tyr Pro Val His Phe Val Lys Thr

100 105 110

Gly Lys Cys

115

<---

1. Применение РНКазы суперсемейства РНКазы А для лечения аденовирусной инфекции глаза посредством местного введения РНКазы в глаз.

2. Применение по п. 1, где аденовирусная инфекция является причиной вирусного конъюнктивита, эпидемического кератоконъюнктивита или фарингоконъюнктивной лихорадки.

3. Применение по п. 1 или 2, где аденовирусная инфекция вызвана аденовирусом 3, аденовирусом 4, аденовирусом 7, аденовирусом 8, аденовирусом 19, аденовирусом 29 или аденовирусом 37.

4. Применение по любому из пп. 1-3, где РНКаза суперсемейства РНКазы А составлена в виде офтальмологической фармацевтической композиции.

5. Применение по п. 4, где офтальмологическая фармацевтическая композиция представляет собой раствор, суспензию, наносуспензию, эмульсию, микроэмульсию, наноэмульсию, мазь, гель, гидрогель, липосомы, ниосомы, наночастицы или дендримеры.

6. Применение по п. 4, где офтальмологическая фармацевтическая композиция дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель и/или фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

7. Применение по п. 1, где РНКаза суперсемейства РНКазы А вводится в виде глазных капель.

8. Применение по п. 1, где глаз является глазом человека.

9. Применение по любому из пп. 1-8, где РНКаза суперсемейства РНКазы А включает ранпирназу, амфиназу, рибонуклеазу бычьей семенной железы и головного мозга, несекреторную рибонуклеазу почки, рибонуклеазу печеночного типа, ангиогенин, эозинофильный катионный белок или рибонуклеазу поджелудочной железы.

10. Применение по п. 9, где РНКаза суперсемейства РНКазы А представляет собой ранпирназу.

11. Применение по п. 10, где ранпирназа представляет собой рекомбинантную ранпирназу или слитый белок, содержащий ранпирназу.

12. Применение по п. 10, где ранпирназа представляет собой SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2.

13. Применение по п. 9, где амфиназа представляет собой рекомбинантную амфиназу или слитый белок, содержащий амфиназу.

14. Применение по п. 9, где амфиназа представляет собой SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 4.

15. Применение РНКазы суперсемейства РНКазы А при изготовлении лекарственного препарата для местного лечения аденовирусной инфекции глаза.

16. Применение по п. 15, где аденовирусная инфекция является причиной вирусного конъюнктивита, эпидемического кератоконъюнктивита или фарингоконъюнктивной лихорадки.

17. Применение по п. 15 или 16, где аденовирусная инфекция вызвана аденовирусом 3, аденовирусом 4, аденовирусом 7, аденовирусом 8, аденовирусом 19, аденовирусом 29 или аденовирусом 37.

18. Применение по любому из пп. 15-17, где лекарственный препарат составлен в виде офтальмологической фармацевтической композиции.

19. Применение по п. 18, где офтальмологическая фармацевтическая композиция представляет собой раствор, суспензию, наносуспензию, эмульсию, микроэмульсию, наноэмульсию, мазь, гель, гидрогель, липосомы, ниосомы, наночастицы или дендримеры.

20. Применение по п. 18, где офтальмологическая фармацевтическая композиция дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель и/или фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

21. Применение по п. 15, где лекарственный препарат вводится в виде глазных капель.

22. Применение по п. 15, где глаз является глазом человека.

23. Применение по любому из пп. 15-22, где РНКаза суперсемейства РНКазы А включает ранпирназу, амфиназу, рибонуклеазу бычьей семенной железы и головного мозга, несекреторную рибонуклеазу почки, рибонуклеазу печеночного типа, ангиогенин, эозинофильный катионный белок или рибонуклеазу поджелудочной железы.

24. Применение по п. 23, где РНКаза суперсемейства РНКазы А представляет собой ранпирназу.

25. Применение по п. 24, где ранпирназа представляет собой рекомбинантную ранпирназу или слитый белок, содержащий ранпирназу.

26. Применение по п. 24, где ранпирназа представляет собой SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2.

27. Применение по п. 23, где амфиназа представляет собой рекомбинантную амфиназу или слитый белок, содержащий амфиназу.

28. Применение по п. 23, где амфиназа представляет собой SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 4.

29. Способ лечения аденовирусной инфекции глаза, предусматривающий стадию местного введения в глаз терапевтически эффективного количества РНКазы суперсемейства РНКазы А.

30. Способ по п. 29, где РНКаза суперсемейства РНКазы А включает ранпирназу, амфиназу, рибонуклеазу бычьей семенной железы и головного мозга, несекреторную рибонуклеазу почки, рибонуклеазу печеночного типа, ангиогенин, эозинофильный катионный белок или рибонуклеазу поджелудочной железы.

31. Способ по п. 29, где РНКаза суперсемейства РНКазы А представляет собой ранпирназу.

32. Способ по п. 31, где ранпирназа представляет собой рекомбинантную ранпирназу или слитый белок, содержащий ранпирназу.

33. Способ по п. 31, где ранпирназа представляет собой SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2.

34. Способ по п. 30, где амфиназа представляет собой рекомбинантную амфиназу или слитый белок, содержащий амфиназу.

35. Способ по п. 30 или 34, где амфиназа представляет собой SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 4.

36. Способ по п. 29, где вирусная инфекция является причиной вирусного конъюнктивита, эпидемического кератоконъюнктивита или фарингоконъюнктивной лихорадки.

37. Способ по п. 29, где аденовирусная инфекция вызвана аденовирусом 3, аденовирусом 4, аденовирусом 7, аденовирусом 8, аденовирусом 19, аденовирусом 29 или аденовирусом 37.

38. Способ по п. 29, где РНКаза суперсемейства РНКазы А составлена в виде офтальмологической фармацевтической композиции.

39. Способ по п. 38, где офтальмологическая фармацевтическая композиция представляет собой раствор, суспензию, наносуспензию, эмульсию, микроэмульсию, наноэмульсию, мазь, гель, гидрогель, липосомы, ниосомы, наночастицы или дендримеры.

40. Способ по п. 38 или 39, где офтальмологическая фармацевтическая композиция дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель и/или фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

41. Способ по п. 29, где РНКазу суперсемейства РНКазы А вводят в виде глазных капель.

42. Способ по п. 29, где глаз является глазом человека.