Способ профессионального отбора сотрудников силовых ведомств рф и лиц, деятельность которых связана с высокой опасностью для жизни и здоровья, для эффективного выполнения служебной деятельности в экстремальных условиях

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к молекулярно-генетическим исследованиям. Предложен способ профессионального отбора сотрудников силовых ведомств РФ и лиц, деятельность которых связана с высокой опасностью для жизни и здоровья, для эффективного выполнения служебной деятельности в экстремальных условиях, включающий выявление лиц без психиатрической и антисоциальной патологии путем использования клинико-генеалогического метода и определение комплекса генотипов нейромедиаторных систем в препаратах ДНК сотрудника молекулярно-генетическим методом. Установление наличия или сочетания генотипа СС гена DRD2, генотипов 4/7, 4/8, 5/7, 6/7, 7/7 гена DRD4, генотипа 9/9 гена DAT (SLC6A3), генотипов D/D и 12/12 гена 5-НТТ, аллеля 3 или 4 гена МАО, генотипа A/G гена СОМТ предрасполагает к адекватной и успешной деятельности в данных профессиях. Изобретение обеспечивает независимый, воспроизводимый и достоверный результат отбора кандидатов к эффективной боевой деятельности в силовых ведомствах.

 

Изобретение относится к области медицине, а именно к генетике с применением клинико-генеалогического и молекулярно-генетического исследования и психиатрии.

Использование генетических данных, в качестве уточняющего критерия, которые не зависят от условий проведения, специалиста и испытуемого, предполагает более достоверный и целенаправленный результат отбора лиц в следующие категории профессий:

- в войсковые подразделения Вооруженных Сил Российской Федерации;

- для авиации: летчики гражданские и военные, космонавты и т.д.;

- для водолазной деятельности: специалисты-водолазы, выполняющие подводно-технические и аварийно-спасательные работы и специалисты -подводные пловцы, выполняющие боевые задачи;

- для специалистов военного и промышленного альпинизма;

- отбор для снайперской деятельности в Вооруженные Силы Российской Федерации, в школу олимпийского резерва по стрелковым видам спорта;

- в школу олимпийского резерва по боевым видам спорта;

- в другие профессии, условия деятельности которых, связанны с высоким риском для жизни и здоровья (опасные для жизни).

В перспективе планируется профильный отбор, в зависимости от специфики выполняемых задач. Выявление лиц, обладающих фенотипом, наиболее соответствующим задачам сотрудников специальных силовых подразделений, экстремальных профессий и т.д., позволит повысить боевые, профессиональные, спортивные, результаты на фоне сокращения материальных и временных затрат на их подготовку. Однако выявление фенотипических особенностей, соответствующих задачам данных подразделений, затрудняется необходимостью достаточно длительного наблюдения за их поведением в условиях подготовки и боевых действий. В то же время, на уровне экспериментальных и практических исследований давно рассматривается вопрос генетической предрасположенности к различным видам деятельности, в том числе - участию в боевых действиях.

Существует ряд профессий, включающих решение задач, требующих особой психической предрасположенности и подготовленности, определенных физических данных, позволяющих решать задачи связанные, с максимальным напряжением психических и физических функций, в том числе связанные с высоким риском для жизни и здоровья. В первую очередь, эти качества детерминированы биологически, т.е. генетически, на которые потом накладывается соответствующая подготовка (или другие средовые воздействия, причем, как социально приемлемые, так и неприемлемые (антисоциальные)).

В Российской федерации аналогичных работ с результатами исследования еще нет, существуют неполные аналоги.

С использованием методов ДНК-диагностики стараются определить физические и физиологические данные к результативной деятельности, в зависимости от поставленных задач. Известны способы определения данных способностей: «Способ выявления предрасположенности к длительным физическим нагрузкам», патент РФ №2468086 (МКИ C12Q 1/00, C12N 15/12. А61 В 10/00), где для 2011137584/10, где рассматриваются полиморфизмы rs2070744 (С786Т) гена NOS3 и rs5370 (G925T) гена EDN, для выявления генетической предрасположенности человека к длительной физической работе и выполнению длительных физических тренировок на развитие выносливости. В заявке на изобретение «Способ определения предрасположенности человека к различным видам физической работоспособности и генетическая панель для осуществления этого способа», РФ №2006136292/13 анализируются гены АроЕ, ecNOS, AGT, АСЕ, BKR, ADRB1, ADRB2, VDR3, PPAR-α, PPAR-γ, UCP2, UCP3, ACTN3, AGTR1, AGTR2, REN, AR, PPAR-δ, PGC1A с учетом всех возможных мутаций (полиморфизмов), имеющих функциональное значение и ассоциированных и/или ассоциации которых будут показаны с различными типами физической работоспособности и/или которые могут влиять на физиологические, биохимические, гистологические и др. способности, ассоциированные с определенным типом физической работоспособности (выносливость, скорость, сила).

В изобретении «Способ определения наследственной предрасположенности человека к спортивной деятельности и оценки рисков для здоровья», патент РФ №2646479, МПК G01N33/50, C12Q1/68, предлагают генотипирование по локусам АСЕ, PPPARGC1A, PPARGC1B, PPARG2, PPARA, PPARD, VDR, CALCR, VEGFA, GNB3, NOS3, AGT 704, AGT 521, IL6. Затем производят расчет баллов по показателям: выносливость, скорость, сила по формуле. Полученные результаты сравнивают со средними общими баллами по популяции.

В способе «Скрининг генотипа actn3 для анализа спортивных способностей» патент РФ №2388829 МПК C12Q 1/68, C12N 15/12. основанном на оценке генотипа полиморфизма 577RX гена ACTN3. Показано, что генотип 577RR положительно связан со спринтерскими или силовыми способностями; генотип 577ХХ отрицательно связан со спринтерскими или силовыми способностями; генотип 577ХХ положительно связан с выносливостью; генотип 577RX положительно связан со спринтерскими или силовыми способностями; а генотип 577RX отрицательно связан с выносливостью у женщин. Способ позволяет подобрать вид спорта или вид соревнований для индивидуума, например, скоростно-силовой вид спорта или вид спорта, требующий выносливости.

В публикации Моссе И.Б. также обсуждаются генотипы, связанные с физическими качествами (при изучении спортсменов). Ответственные за скоростно-силовые качества или выносливость - генотип Ins/Del гена АСЕ, генотип R577XX гена ACTN3, генотип Ala55Val ген UCP2), генотип Рrоl2А1а гена PPARG, генотип 02-91+гена BDKRB2, генотип С34Т гена AMPD1, генотип 4а/4b гена eNOS. Что касается восстановления организма после травм, то наличие аллелей «е4» гена АРОЕ и генотипа Arg/Arg гена ТР53 значительно повышает вероятность серьезных последствий мозговых травм у боксеров (Моссе И.Б. Генетика спорта: вчера, сегодня, завтра. Труды БГУ. Беларусь, 2012, том 7, часть 1).

В патенте РФ №2 642 603 «Способ профессионального отбора лиц для работ по уничтожению боевых отравляющих веществ», МПК G01N 33/49 полагают прошедшими профессиональный отбор лица, у которых не выявлено увеличения числа клеток с хромосомными аберрациями, превышающих нормальный уровень спонтанных хромосомных аберраций более чем в 2 раза. Предлагается также способ, в котором на препаратах окрашенных хромосом, определяют цитогенетические показатели методом оценки уровня компенсаторно-приспособительных и адаптационных возможностей организма космонавтов (оптимальные в пределах 18,0-20,6 у.е. показателя (дозы) активных рибосомных генов) - патент №2015156928 «Способ оценки уровня компенсаторно-приспособительных и адаптационных возможностей организма космонавтов» МПК G01N 33/53.

В карте генов человека, связанных с работоспособностью и фитнесом от 2007 г. «The Human Gene Map for Performance and Health-Related Fitness Phenotypes: the 2006-2007 update», представлено 214 аутосомных генов, семь генов на Х-хромосоме и 18 митохондриальных генов, а также 75 локусов количественных признаков, которые влияют на фенотипы физической формы и работоспособности (Bray MSl, Hagberg JM, L, Rankinen T, Roth SM, Wolfarth В, Bouchard С.The human gene map for performance and health-related fitness phenotypes: the 2006-2007 update. Med Sci Sports Exerc. 2009 Jan;41(l):35-73.).

Как известно, даже исходя из исторический данных, не все однозначно зависит от физической формы человека. Например, военные обладающие средними (и даже скромными) физическими данными могут быть успешными и результативными бойцами. Такие примеры мы видим в контингенте антисоциальных личностей, где высокую иерархию могут занимать не выдающиеся в физическом плане мужчины. У лиц, выполняющих служебно-боевые задачи, или спортсменов наличие безупречной физической (и спортивной) формы не гарантирует высший результат в их деятельности (или соревнованиях), т.к. в первую очередь это обусловлено психическими характеристиками индивидуума. Т.е. в ситуациях, требующих максимального физического и психического напряжения, и при наличии угрозы для жизни и здоровья при осуществлении деятельности в экстремальных условиях, служебно-боевых операций индивидуум должен обладать способностью подавить волнение, максимально мобилизоваться, мгновенно ориентироваться в ситуации, прогнозировать развитие событий и выбирать наиболее стратегически верное решение и поведение. В силу того, что за тип мышления, эмоции, влечения, поведение и т.д. отвечают особенности функционирования нейромедиаторной системы головного мозга, следовательно, именно она имеет ведущее значение в эффективной и успешной деятельности с дальнейшим совершенствованием профессиональных навыков. Т.к. особенности нейромедиаторной системы детерминированы генетически, соответственно, гены данной системы следует рассматривать первую очередь.

Существуют работы, где изучаются полиморфизмы генов нейромедиаторной системы у спортсменов. При исследовании генов серотониновой системы у спортсменов, мужчин и женщин, силовых видов спорта и в контрольной группе генетический анализ по гену 5-НТТ (SLC6A4) показал более высокую частоту генотипа SS у спортсменов, также отмечена тенденция к увеличению частоты объединенных генотипов локуса 5HTTL PR по VNTR и SN Р rs25531 - SASA по сравнению с контрольной группой. У синхронисток было выявлено, что непрямая агрессия выше, а раздражительность и негативизм ниже у спортсменок генотипом типа SS 5-НТТ гена по сравнению с другими группами (LS и типы LL) (Бутовская П.Р., Лазебный О.Е., Фехретдинова Д.И., Васильев В.А., Просикова Е.А., Лысенко В.В., Удина И.Г., Бутовская М.Л. Выявление ассоциации полиморфизма четырех генов серотониновой системы (5-HTTL, 5-НТ1А, 5-НТ2А и МАОА) с чертами личности у спортсменов силовых видов спорта. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2015, - N 4, - с. 9-15; Малюченко Н.В., Сысоева О.В., Ведяков A.M., Тимофеева М.А., Портнова Г.В., Иваницкий A.M., Тоневицкий А.Г., Кирпичников М.П. Ассоциация генетического полиморфизма 5НТТ с агрессивностью у спортсменов. Журнал высшей нервной деятельности им. И.П. Павлова. 2007, - N 3. - С.с. 276-281).

При оценке распределения частот аллелей гена катехол-О-метилтрансферазы (СОМТ) у боксеров - мастеров, кандидатов и имеющих 1-й разряд, в зависимости от спортивной квалификации обнаружено, что частота 158Меl-аллеля гена СОМТ в группе боксеров повышается с ростом квалификации. Боксеры с Val/Val-генотипом точнее и быстрее выполняли задания тестов. Авторы предполагают, что, объяснением этого может служить более высокая в этой группе скорость приема и переработки информации. У боксеров обнаружена ассоциация Met/Met-генотипа с более высокими показателями по сравнению с носителями Val-аллеля по тремору (количеством касаний) и целевой точности. Боксеры с гомозиготным генотипом Met/Met были склонны недоотмерять текущее время в среднем на 20,7 (3,2) мс, в то время как носители СОМТ Val-аллеля переотмеряли его в среднем на 6,8 (1,3) мс (Михайлова Е.В, Лифанов А.Д., Рахматуллина Л.Ш., Финогентова Л.А., Деменев С.В., Хадыева М.Н. Влияние полиморфизма гена катехол-о-метилтрансферазы (СОМТ) на точность движений квалифицированных спортсменов. Ученые записки СПбГМУ им. акад. И. П. Павлова. 2014, Т. XXI, - N 1, - С. 60-62.).

Данные и другие аналогичные работы рассматривают ассоциацию генотипов генов нейромедиаторной системы с результатами психологических опросников или опять же связывают с физиологическими данными. Следует отметить, что психологическое тестирование (особенно при приме на работу) имеет очень много ограничений в связи с недостоверностью ответов (обследуемый старается себя выгодно презентовать, подготовка к ним, в том числе к психо-физиологическое обследование на полиграфе), устареванием опросников и т.д., что в целом искажает результаты обследования вплоть полного несоответствия действительности.

Задачей нашего изобретения является определение наследственной предрасположенности для профессионального отбора сотрудников силовых ведомств РФ, лиц, деятельность которых связана с высокой опасностью для жизни и здоровья, спортсменов используя генетический метод, включающий клинико-генеалогическое и молекулярно-генетическое исследования.

Изобретение включает определение полиморфизмов генов нейромедиаторной системы и их сочетаний, обуславливающих наличие в фенотипе у мужчин психических и психофизиологических особенностей, наиболее соответствующих задачам, стоящим перед контингентом, профессионально выполняющим служебные обязанности в боевой обстановке, занимающимся спортом, и т.д. В настоящее время определение фенотипических особенностей, соответствующих профессиональным задачам данного контингента, с использованием только психологических и нейрофизиологических методов, затрудняется необходимостью достаточно длительного наблюдения за их поведением в условиях подготовки и боевых действий.

В первую очередь представляем генотипы генов нейромедиаторной системы головного мозга, отвечающих за особенности мышления, эмоций, поведенческих реакций, особенности функционирования вегетативной нервной деятельности и т.д.

В изобретении представляем комплекс генотипов нейромедиаторных систем: дофаминового рецептора 2-типа (DRD2, rs 1800497), дофаминового рецептора 4-типа (DRD4, VNTR), дофамин-транспортного белка (DAT, VNTR), серотонинового транспортера (5-НТТ, ID и VNTR), моноаминооксидазы (МАО, VNTR), катехол-О-метилтрансферазы (СОМТ, rs4680),

Основную группу исследования, т.е. эталонный контингент, составили мужчины русской и чеченской национальности, психически здоровые, без реакций на тяжелый стресс, без тяжелых соматических заболеваний, с наследственностью не отягощенной антисоциальными расстройствами. Отбор проводился с использованием неоднократного психиатрического, клинико-психологического, а также клинико-генеалогического обследования. Уточняем, отсутствие противоправных поступков в анамнезе данных мужчин и отсутствие фактов наказаний за противоправные деяния у родственников по обеим линиям (информация проверялась через правоохранительные органы) являлось одним из важных критериев включения. Все мужчины имеют высшее образование, хорошие спортивные результаты, занимались водолазной, альпинистской деятельностью, парашютным и безпарашютным десантированием и периодически выполняют служебно-боевые обязанности, связанные с высоким риском для жизни и здоровья. Контингент прошел профессиональный и многократно медицинский отбор, эффективно выполняет поставленные служебные (спортивные) задачи. Было проведено психологическое тестирование с использованием ряда стандартных валидных опросников, в том числе ПФЛ -результаты не соответствовали действительности. В преимущественно это связано с неискренностью кандидатов, т.к. обследуемые стараются презентовать себя с положительной по их представлению стороны.

Во вторую (полярную) группу включили мужчин, совершивших противоправные деяния различной степени тяжести, в том числе самые тяжкие.

Третью - контрольную группу составили мужчины и подростки из обшей популяции.

Важный факт: сравнивая контингент первой группы - сотрудников специальных подразделений со второй полярной группой мужчин с антисоциальным поведением обнаружили, что по ряду исследуемых нами генов они имеют аналогичное распределение частот генотипов полиморфизмов, но по другим генотипам они отличаются как от общей популяции, так, и от мужчин, склонных к совершению противоправных деяний. То есть, мужчины конкретно эталонной обследуемой группы имеют совпадения по некоторым маркерам, которые позволяют максимально эффективно выполнять определенные задачи, но не имеют в целом схожий с осужденными генотип. По всей видимости, от этих нюансов и зависит, в каком направлении пойдет развитие личности.

Нами установлено, что предрасположенность к эффективной боевой деятельности (спортивной - бойцовские виды), предусматривает наличие у мужчин комплекса качеств, включающего агрессивность в сочетании с высокой степенью самоконтроля и внутренней дисциплины, способность к быстрой адаптации в различных условиях, несущих высокий риск для жизни и здоровья, обучаемость, способность к достижению высокой степени физической тренированности. Например, можно говорить о «контролируемой агрессии» без предрасположенности к патологическому насилию у обследованных сотрудников специальных подразделений, бойцов силовых видов спорта, которая способствует адекватному поведению при достижении высоких служебно-боевых и спортивных результатов. Каждое из этих качеств является результатом взаимодействия наследственности и воспитания, причем роль наследственных факторов остается недостаточно изученной, более того, даже подходы к их выявлению во многих случаях еще практически не определены.

Генетическое обследование включало клинико-генеалогическое и молекулярно-генетическое исследования. Для определения полиморфизмов изучаемых генов использовались ранее опубликованные методики.

Метод молекулярно-генетического анализа включал подготовку препаратов ДНК. Экстракция ДНК из крови проводилась методом фенол-хлороформной экстракции. К образцу крови (-10 мл) добавляли 5-6 объемов буфера А (10 мМ трис-HCl, рН=7.5; 10 мМ NaCl; 3 мМ MgCl2) и проводили гемодиализ, растирая сгустки в гомогенизаторе Поттера. Осадки, полученные центрифугированием при 2500 g, промывали дважды буфером А и ресуспендировали в 0,5 мл буфера В (10 мМ ЭДТА; 100 мМ NaCl; 50 мМ трис-HCl, рН=8.5). После добавления SDS до 0.5% и протеиназы К до 200 мкг/мл смесь инкубировали 2 часа при 65°С, или в течение ночи при 37°С. Депротеинизацию проводили последовательно водонасыщенным фенолом, смесью фенол-хлороформ (1:1) и хлороформом. ДНК осаждали добавлением раствора NH4Ac до 2.5 М и 2.5 V этанола. Осадок, полученный центрифугированием на микроцентрифуге «Eppendorf» в течение 10 минут, промывали 70% этанолом и растворяли в воде до концентрации ДНК 0,5 мкг/мкл.

Генотипирование TaqI полиморфизма (rs 1800497, Т>С) гена DRD2 выполняли по методике, описанной Wang TJ и соавт.(Wang TJ, Huang SY, Lin WW, Lo HY, Wu PL, Wang YS, Wu YS, Ко НС, Shih JC, Lu RB. Possible interaction between MAOA and DRD2 genes associated with antisocial alcoholism among Han Chinese men in Taiwan. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 2007 Jan 30;31(1):108-14.): Прямой праймер 5-CCT ТСС TGA GTG TCA TCA AC -3, обратный, 5- ACG GCT CCT TGC CCT СТА G -3. Условия ПЦР: 95°C 1 minute; 30 cycles of 95°C 30 sec, 59°C 30 sec, 72°C 30 sec. Реакционная смесь объемом 25 мкл содержала: 1,5 мкл тотальной ДНК; 75 мМ Tris-HCl, рН=9,0; 20 мМ (NH4)2S04; 0,01% Tween-20; по 2 мкМ каждого праймера; 2,5 мМ MgCl2; 0,2 мМ каждого из dNTP; 1 ед. акт.Taq-ДНК-полимеразы.К ПЦР продуктам добавлялась эндонуклеаза рестрикции TaqI (Сибэнзим, Россия). Результат оценивался после электрофореза в 4% полиакриламидном геле и окраски 0.1% бромистым этидием. Размер продукта в 237 п. н. соответствовал Т аллелю (А1), 125 и 112 пн - С аллелю.

По результатам нашего исследования установлено, что поставленные задачи (основная группа) наиболее эффективно выполняли мужчины с генотипом СС гена DRD2. Полиморфизм ТТ гена DRD2, который связывают с патологическим насилием при выраженной агрессии представлен менее, чем у двух процентов мужчин в данной группе (также, как и в популяционной). У осужденных за насильственные преступления он встречается в 20%, то есть различие с основной группой в 10 раз. Что хорошо согласуется с тем фактом, что среди обследованных мужчин из основной группы (и их родственников)- нет склонных к патологическим формам насилия.

Генотипирование VNTR (48 п. н.) полиморфизма гена DRD4 проводили по модифицированной методике Нанко с соавторами. Фрагмент ДНК гена DRD4, содержащий участок ДНК с вариабельным размером 96-384 п. о., амплифицировали с использованием праймеров: 5-AGGTG-GCACG-TCGCG-CCAAG-CTGCA-3 прямой; 5-TCTGC-GGTGG-AGTCT-GGGGT-GGGAG-3 обратный. Реакционная смесь для амплификации содержала 0,5-1 мкг геномной ДНК, прямой и обратный праймеры в концентрации 0,4 мкМ каждый, dNTP в концентрации 0,1 мМ каждого, 1,5 MMMgCl2, 10% диметилсульфоксид (DMSO), 0,01% по объему Tween-20, 20 мМ (NH4)S04, 75 мМ ТрисНС1 (рН 9,0) и 1,25 ед. Taq полимеразы. Общий объем смеси составлял 25 мкл. ПЦР проводили на амплификаторе Eppendorf Mastercycler gradient (Eppendorf Scientific Inc., США). Условия амплификации были следующими: 4 мин при 95°С, затем 35 циклов: 1 мин при 95°С, 1 мин при 65°С, 1 мин при 72°С. Продукты ПЦР анализировали электрофорезом в 4% полиакриламидном геле, в буфере, содержавшим 90 мМ Трис-борат (рН 8,0) и 2 мМ ЭДТА, с последующей окраской бромистым этидием. В качестве маркера молекулярного веса использовали ДНК маркеры 100 п. н. (Сибэнзим, Россия).

По гену DRD4 установлено - в основном контингенте высока доля, по сравнению с популяцией, носителей длинных аллелей - 4/7, 4/8, 5/7, 6/7, 7/7 (также как и в полярной группе), которые ассоциируются с предрасположенностью к экстремальному поведению, свойственному этим контингентам.

Генотипирование VNTR (40 п. н.) полиморфизма гена DAT использовали модифицированную методику Митчела с соавторами. Фрагмент ДНК гена DAT, содержащий участок ДНК с вариабельным размером 240-480 п. о., амплифицировали с использованием праймеров: 5-TGTGG-TGTAG-GGAAC-GGCCT-GAG-3 прямой; 5-CTTCC-TGGAG-GTCAC-GGCTC-AAGG-3 обратный. Реакционная смесь объемом 25 мкл содержала 0,5-1 мкг геномной ДНК, прямой и обратный праймеры в концентрации 0,4 мкМ каждый, dNTP в концентрации 0,4 мМ каждого, 2 мМ MgCl2, 0,01% по объему Tween-20, 98 мМ бета-меркаптоэтанол, 67 мМ ТрисНСЛ (рН 8.8) и 1,25 ед. Taq полимеразы. Каждый из 35 циклов амплификации состоял из денатурации (0,5 мин. при 95°С), отжига (0,5 мин. при 66°С) и синтеза (1,5 мин. при 72°С). Продукты ПЦР анализировали электрофорезом в 4% полиакриламидном геле, с последующей окраской бромистым этидием. В качестве маркера молекулярного веса использовали ДНК маркеры 100 п. н. (Сибэнзим, Россия).

По гену DAT (SLC6A3) представляют интерес носители генотипа 9/9, который связывают со склонностью к проявлению агрессивных реакций. В основной и полярной группах увеличено число носителей генотипа 9/9 гена DAT, по сравнению с популяционной. Возможно, склонность к проявлению агрессивных реакций положительно сказывается в профессиональном плане на эффективности боя или в соревнованиях. Причем, это поведение следует расценить как «контролируемую агрессию».

Генотипирование двух полиморфизмов ID (44 п. н.) и VNTR (17 п. н.) гена 5НТТ. Праймеры для ID полиморфизма, прямой (5-GGCGTTGCCGCTCTGAATGCC-3) и обратный (5-CAGGGGAGATCCTGGGAGAGGT-3) согласно опубликованной методике (Heils и др. 1996). С праймеров произвели 265 фрагментов п. н. (вариант инсерции - вставки) или 221 фрагмент п. н. (вариант делеции). VNTR в 2-ом интроне из гена серотонинового транспортера был проанализирован с использованием прямого праймера 5-GTCAGTATCACAGGCTGCGAG-3 и обратного 5-TGTTCCTAGTCTTACGCCAGTG-3 для амплификации PCR как описано Ogilvie и др. (1996). Продукты амплификации состояли из трех аллелей 250 п. н. (9 повторов), 267 п. н. (10 повторов) и 300 п. н. (12 повторов). Стандартная PCR (полимеразная цепная реакция) была выполнена в 25 мкл объема, содержащих 80 нг геномной ДНК, 20 пикомоль каждого инициатора, 50 мМ KСl, 10 мМ Трис-HCl (рН 8.3), 1,5 мМ MgCl2, 0.01% желатин, 5% диметилсульфоксид, 200 мкМ каждого dNTP и 0,5 U Taq полимеразы ДНК. Продукт HTTLPR был произведен с использование 3,0 мкМ дезоксирибонуклеотида (dGTP/7-deaza-2'-dGTP). Образцы были амплифицированы в UNO 2 Thermoblock. После первичной денатурации в течение 5 минут при температуре 95°С были выполнены 35 температурных циклов, состоящих из 30 сек, при 95°С, 45 сек - при 57°С и 60 сек - при 72°С, сопровождающиеся заключительным этапом продолжительностью 5 минут при 72°С. Аллели были разделены путем электрофореза в агарозном геле при сравнении со стандартом размера ДНК.

По гену 5-НТТ - очень показательны носители генотипа D/D, особенно носители сочетания генотипов D/D и 12/12, которое встречается у большей части основной группы, тогда как у взрослых мужчин из общей популяции менее чем в двух процентах случаев. Аналогичное распределение генотипов гена НТТ и в группе мужчин, совершивших тяжкие насильственные противоправные деяния и убийства неоднократно. Предрасположенность обследуемого контингента к насильственному поведению и физическому агрессивному подавлению противника успешно реализуется в их профессиональной карьере, так как это положительно сказывается на их боевой эффективности.

Для генотипирования VNTR (30 п. н.) полиморфизма гена МАОА использовали методику Frazzetto G. с соавторами (Frazzetto G, Di Lorenzo G, Carola V, Proietti L, Sokolowska E, Siracusano A, Gross C, Troisi A. Early trauma and increased risk for physical aggression during adulthood: the moderating role of MAOA genotype. PLoS One. 2007 May 30;2(5):e486. PubMed PMID: 17534436; PubMed Central PMCID: PMC 1872046.2007). ПЦР выполняли с использованием праймеров: MAO-F (5-ACAGCCTGACCGTGGAGAAG-3) и MAO-R (5-GAACGGACGCTCCATTCGGA-3). Реакционная смесь объемом 25 мкл содержала 0.5-1 мкг геномной ДНК, прямой и обратный праймеры в концентрации 0,4 мкМ каждый, dNTP в концентрации 0.4 мМ каждого, 2 мМ MgCl2, 0.01% по объему Tween-20, 98 мМ бета-меркаптоэтанол, 67 мМ ТрисНСl (рН 8.8) и 1.25 ед. Taq полимеразы. Каждый из 35 циклов амплификации состоял из денатурации (1 мин. при 95°С), отжига (0,5 мин. при 64°С) и синтеза (1,5 мин. при 72°С). Продукты ПЦР анализировали электрофорезом в 4% полиакриламидном геле, с последующей окраской бромистым этидием. Длины продуктов 290 п. н. - 2 повтора, 320 п. н. - 3 повтора, 335 п. н. - 3,5 повтора, 350 п. н. - 4 повтора и 380 п. н. - 5 повторов, соответственно.

По гену МАО у трети мужчин основой группы встречается аллель с 3-мя повторами. Ген МАО с данным аллелем называют «геном воина». Установлено - носители генотипа, обуславливающего низкую активность МАО, имеют высокий риск стать членом вооруженной банды с выраженной жестокостью и частым использованием оружия в бою. Возможно, что «низкоактивные» аллели МАОА не связаны с повышенным агрессивным поведением как таковым, а скорее с повышенной агрессивной реактивностью на провокацию. В остальных случаях у мужчин присутствует аллель 4. В целом, как и в общей популяции русских мужчин.

Генотипирование полиморфизма Vall58Met (rs4680, A>G) гена СОМТ выполняли по следующей методике: прямой праймер 5-GGGCCTACTGTGGCTACTCAGCTGT-3, обратный праймер, 5-GGCATGCACACCTTGTCCTTCG -3. Условия ПЦР: 95°С 1 minute; 30 cycles of 95°С 30 sec, 66°С 30 sec, 72°С 30 sec. Реакционная смесь объемом 25 мкл содержала: 1,5 мкл тотальной ДНК; 75 мМ Tris-HCl, рН=9,0; 20 мМ (NH4)2S04; 0,01% Tween-20; по 2 мкМ каждого праймера; 2,5 мМ MgCl2; 0,2 мМ каждого из dNTP; 1 ед. акт.Taq-ДНК-полимеразы. К ПЦР продуктам добавлялась эндонуклеаза рестрикции AspLE I (Сибэнзим, Россия). Результат оценивался после электрофореза в 4% полиакриламидном геле и окраски 0.1% бромистым этидием. Размер продукта в 148 п. н. соответствовал А аллелю, 126 и 22 п. н. - G аллелю.

По гену СОМТ - в половине случаев у мужчин эталонной группы присутствует носительство гетерозиготного генотипа A/G, который кодирует цитозольный фермент Катехол-О-метилтрансферазу со средней функциональной активностью. СОМТ отвечает за инактивацию катехоламинов, в частности, которые выбрасываются в стрессовых ситуациях. У контингента бойцов эталонной группы средняя активность создает оптимальную для ситуации реакцию на стрессовое воздействие.

Использование способа определения генетических маркеров методом молекулярно-генетического тестирования в качестве критерия, который не зависит от условий проведения, специалиста и испытуемого, предполагает более достоверный результат отбора лиц в войсковые подразделения Вооруженных Сил Российской Федерации, в другие профессии, деятельность которых связана с высокой опасностью для жизни и здоровья, в определенные спортивные организации. На данном этапе исследования установлено, что наличие или сочетание определенных генотипов заявленных генов: генотипа СС гена DRD2, генотипов 4/7, 4/8, 5/7, 6/7, 7/7 гена DRD4, генотипа 9/9 гена DAT (SLC6A3), генотипов D/D и 12/12 гена 5-НТТ, аллеля 3 или 4 гена МАО в зависимости от вида поставленных задач, генотипа A/G гена СОМТ предрасполагает к адекватной и успешной деятельности в данных профессиях. В перспективе, возможно, ориентироваться на профильный отбор уже в зависимости от специфики выполняемых задач (например, снайперская деятельность). Данное изобретение позволит повысить боевые, профессиональные и спортивные результаты на фоне сокращения материальных и временных затрат на их подготовку. Также, позволит выделить группу лиц с отсутствием предрасположенности к посттравматическому стрессовому расстройству.

Способ профессионального отбора сотрудников силовых ведомств РФ и лиц, деятельность которых связана с высокой опасностью для жизни и здоровья, для эффективного выполнения служебной деятельности в экстремальных условиях, способствующий достоверному целенаправленному отбору в достижении адекватных результатов соответствующим задачам, стоящими перед специальными подразделениями, заключающийся в выявлении лиц без психиатрической и антисоциальной патологии путем использования клинико-генеалогического метода, включающего психиатрическое, клинико-психологическое интервьюирование, установление наследственности без антисоциальных расстройств, и использование молекулярно-генетического метода для определения комплекса генотипов нейромедиаторных систем в препаратах ДНК сотрудника: дофаминового рецептора 2-типа (DRD2, rs 1800497), дофаминового рецептора 4-типа (DRD4, VNTR), дофамин-транспортного белка (DAT, VNTR), серотонинового транспортера (5-НТТ, ID и VNTR), моноаминооксидазы (МАО, VNTR), катехол-О-метилтрансферазы (СОМТ, rs4680); с установлением наличия или сочетания генотипа СС гена DRD2, генотипов 4/7, 4/8, 5/7, 6/7, 7/7 гена DRD4, генотипа 9/9 гена DAT (SLC6A3), генотипов D/D и 12/12 гена 5-НТТ, аллеля 3 или 4 гена МАО, генотипа A/G гена СОМТ.