Способ получения донорского трансплантата боуменового слоя роговицы

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии. Размещают склеро-роговичный диск в искусственной передней камере, проводят деэпителизацию, на роговице размещают мягкую контактную линзу равномерной толщины. С помощью оптической когерентной томографии корректируют глубину планируемой фемтодиссекции в соответствии с толщиной Боуменового слоя. Проводят с помощью фемтосекундного лазера выкраивание трансплантата и выравнивают его стромальную поверхность путем абляции с помощью эксимерного лазера. Для выкраивания трансплантата предпочтительно использование лазерной системы Ziemer FEMTO LDV Z8 и мягкой контактной линзы толщиной 170 мкм. Способ обеспечивает получение Боуменового слоя с гладкой стромальной поверхностью без избытка стромальной ткани, равномерной толщины и с минимальной вероятностью выбраковки донорского материала. 2 з.п. ф-лы, 1 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно, к офтальмологии и предназначено для получения донорского трансплантата Боуменового слоя роговицы.

В настоящее время в хирургическом лечении инкурабельной патологии роговицы предпочтение отдается селективной замене патологически измененных слоев роговицы с помощью ламеллярной (селективной) кератопластики.

Одним из видов селективной кератопластики является трансплантация Боуменового слоя, ее возможности не ограничиваются только эктатической патологией роговицы Способ бесшовной трансплантации изолированного слоя роговицы имеет большой потенциал. В то же время процесс формирования трансплантата Боуменового слоя сложен и недостаточно стандартизирован, что ограничивает его широкое применение. По данным литературы в 30% случаев формирование трансплантата Боуменового слоя заканчивается неудачей по причине избыточного количества стромы в трансплантате, либо по причине его разрыва и повреждения [Lie J, Droutsas K, Ham L, et al. Isolated Bowman Layer transplantation to manage persistent subepithelial haze after excimer laser surface ablation. J Cataract Refract Surg. 2010;36:1036-1041].

Боуменовый слой роговицы - ацеллюлярная (от cellula - клетка) коллагеновая структура, толщиной около 10 мкм, располагающаяся между базальной мембраной эпителия и стромой. Вследствие того, что Боуменовый слой рыхло связан со стромой роговицы, его отделение без стромальной ткани представляет большие сложности. Это делает невозможным прогнозирование толщины трансплантата Боуменового слоя и обеспечение его ацеллюлярности.

Известен способ получения Боуменового слоя роговицы для последующей трансплантации с целью купирования прогрессирования далекозашедшего кератоконуса, при котором донорскую роговицу размещают в искусственной передней камере, деэпителизируют, проводят поверхностный разрез 360° с использованием иглы 30G по периферии роговицы, отделяют Боуменовый слой от передней стромы на 360° в направлении центральной части роговицы. Боуменовый слой, самопроизвольно сворачивающийся в «рулон», погружают в 70% этанол для удаления всех эпителиальных клеток, затем промывают сбалансированным солевым раствором BSS и хранят в среде для культивирования органов [van Dijk K, Parker J, Tong CM, et al. Midstromal isolated Bowman Layer graft for reduction of advanced keratoconus: a technique to postpone penetrating or deep anterior lamellar keratoplasty. JAMA Ophthalmol. 2014;132:495-501].

Известен способ получения Боуменового слоя роговицы, при котором с донорской роговицы удаляют эпителий, выкраивают корнеосклеральный диск и размещают его в искусственной передней камере в условиях гипотонии, проводят маркировку по центру и циркулярно по границе роговицы, надрез роговицы проводят алмазным ножом с микрометром, отслаивают пинцетом Боуменовый слой от стромы, помещают эпителиальной стороной на внутреннюю поверхность мягкой контактной линзы, расправляют, прижимают выпуклой поверхностью второй мягкой контактной линзы и помещают в контейнер с консервирующим раствором или с силикагелем для последующего хранения [патент RU 2647197, 14.03.2018].

Ближайшим аналогом предлагаемого способа является способ получения Боуменового слоя, включающий размещение донорской роговицы в искусственной передней камере, деэпителизацию и получение Боуменового слоя с помощью фемтосекундного лазера, что обеспечивает получение более гладкой поверхности, чем при мануальной технике [Parker J, Forest Huls, Cooper E, Graves P, Groeneveld-van Beek E, Lie J, Melles G. Technical feasibility of isolated Bowman Layer graft preparation by Femtosecond laser: a pilot s tudy. Eur J Ophthalmol. 2017 Nov 8; 27(6):675-677]. Однако способ не применим на практике в клинике из-за отсутствия программного обеспечения. Однако при формировании трансплантата без предварительного измерения толщины Боуменового слоя невозможно точно прогнозировать толщину трансплантата и объем остаточной стромы. Присутствие стромальных волокон в составе трансплантата приводит к увеличению его толщины, формированию неравномерного профиля трансплантата, увеличению количества антигенов, что в конечном итоге, будет влиять на биологические, оптические и функционально-рефракционные результаты операции.

Задачей изобретения является разработка стандартизированного способа получения трансплантата изолированного Боуменового слоя.

Техническим результатом предлагаемого способа является получение Боуменового слоя с гладкой стромальной поверхностью без избытка стромальной ткани, равномерной толщины и с минимальной вероятностью выбраковки донорского материала.

Технический результат достигается за счет сочетания использования фемтосекундного лазера для выкраивания трансплантата Боуменового слоя и эксимерного лазера для абляции стромы полученного лоскута, а также за счет корректировки глубины планируемой фемтодиссекции в соответствии с толщиной Боуменового слоя с помощью ОКТ и использования мягкой контактной линзы после деэпителизации.

Трансплантат Боуменового слоя возможно формировать любым фемтосекундным лазером. Однако предпочтительным является использование фемтолазерной системы Ziemer FEMTO LDV Z8, позволяющей проводить ОКТ с измерением и последующей корректировкой толщины формируемого трансплантата. Эксимерлазерная абляция обеспечивает дополнительное уменьшение толщины и выравнивание стромальной поверхности. Благодаря наличию мягкой контактной линзы равномерной толщины расстояние между источником лазерного излучения и поверхностью Боуменового слоя увеличивается, в частности, на 170 мкм. Это позволяет установить глубину реза 190-200 мкм (с учетом присутствия контактной линзы) и получить трансплантат необходимой толщины.

Формирование трансплантата с предварительным измерением толщины Боуменового слоя позволяет точно прогнозировать толщину трансплантата и объем остаточной стромы. Отсутствие стромальных волокон в составе трансплантата приводит к уменьшению его толщины, формированию равномерного профиля трансплантата, уменьшению количества антигенов, что в конечном итоге, будет положительно сказываться на биологических, оптических и функционально-рефракционных результатах операции.

Способ осуществляют следующим образом.

Размещают склеро-роговичный диск в искусственной передней камере, проводят деэпителизацию, на роговице размещают мягкую контактную линзу равномерной толщины. С помощью оптической когерентной томографии корректируют глубину планируемой фемтодиссекции в соответствии с толщиной Боуменового слоя. Проводят с помощью фемтосекундного лазера выкраивание трансплантата и выравнивают его стромальную поверхность путем абляции с помощью эксимерного лазера. Для выкраивания трансплантата предпочтительно использование лазерной системы Ziemer FEMTO LDV Z8 и мягкой контактной линзы толщиной 170 мкм.

Пример. Корнеосклеральный диск диаметром 17-18 мм фиксировали в искусственной передней камере (Katena, США). После деэпителизации для лучшей визуализации Боуменовый слой окрасили 0,06% трипановым синим (Vision BlueTM, DORC International, Нидерланды). На роговицу надели мягкую контактную линзу диаметром 11 мм и толщиной 170 мкм (изготовлена на заказ). Далее осуществили «стыковку» фемтолазерной рукояткой Ziemer FEMTO LDV Z8 (Швейцария). С помощью ОКТ измерили толщину формируемого трансплантата. После окончания фемтодиссекции и «расстыковки» пинцетом и шпателем отделили остаточные мостики и трансплантат отслоили от подлежащей стромы. Сформированный лоскут перевернули стромальной поверхностью вверх и уложили в ложе роговицы (эпителиальной стороной вниз). Провели абляцию эксимерным лазером толщиной 10 мкм для достижения гладкой стромальной поверхности и удаления остаточной стромы. После этого трансплантат на 30 секунд погрузили в 70% раствор этилового спирта для элиминации остаточных клеток эпителия, затем трансплантат промыли сбалансированным солевым раствором (BSS). После повторного окрашивания Боуменового слоя 0,06% раствором трипанового синего трансплантат поместили на внутреннюю (вогнутую) поверхность мягкой контактной линзы (1-day ACUVUE; Johnson & Johnson Vision Care, США), расправили и прижали наружной (выпуклой) поверхностью второй мягкой контактной линзы (1-day ACUVUE; Johnson & Johnson Vision Care, США) и поместили в контейнер с консервирующим раствором.

Таким образом, предложенный способ обеспечивает стандартизированное и автоматизированное формирование трансплантата Боуменового слоя с гладкой стромальной поверхностью, без избытка стромальной ткани и с минимальной вероятностью выбраковки донорской ткани.

1. Способ получения донорского трансплантата Боуменового слоя роговицы, включающий размещение склеро-роговичного диска в искусственной передней камере, деэпителизацию и выкраивание трансплантата с помощью фемтосекундного лазера, отличающийся тем, что после деэпителизации на роговице размещают мягкую контактную линзу равномерной толщины, с помощью оптической когерентной томографии корректируют глубину планируемой фемтодиссекции в соответствии с толщиной Боуменового слоя, проводят выкраивание трансплантата и выравнивают его стромальную поверхность путем абляции с помощью эксимерного лазера.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для выкраивания трансплантата используют лазерную систему Ziemer FEMTO LDV Z8.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют мягкую контактную линзу толщиной 170 мкм.