Способ идентификации генно-трансформированных семян сои и кукурузы, обработанных протравителем на основе производных фенилпиррола

Авторы патента:

A01N59/00 - Биоциды, репелленты или аттрактанты или регуляторы роста растений, содержащие элементы или неорганические соединения

Владельцы патента RU 2742508:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Орловский государственный аграрный университет имени Н.В. Парахина" (RU)

Изобретение относится к сельскому хозяйству и биотехнологии, а именно к способу идентификации ГМО в семенах с протравителем на основе производных фенилпиррола. Изобретение представляет собой способ идентификации генно-трансформированных семян сои, обработанных протравителем на основе производных фенилпиррола, согласно изобретению определяется активность фермента ацетилхолинэстеразы, при этом, если для семян сои значение активности меньше 90 мкмоль/г, то семена генно-модифицированные. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и биотехнологии, а именно к способам идентификации генно-инженерных трансформаций в семенах, обработанных протравителем на основе производных фенилпиррола.

Известен список генномодифицированных семян растений и имеются наборы для выявления генно-инженерных модификаций в них. Значительная часть выполняемых операций и реакций является трудоемкой и затратной. Вместе с тем на сегодняшний день требуется быстро дешево выявлять генные модификации в посевном материале и пищевой продукции.

В качестве метода определения генно-инженерных трансформаций известен метод идентификации и количественного определения новых линий ГМО (МУК 4.2.3309-15 Методы идентификации и количественного определения новых линий ГМО 2-го поколения в пищевых продуктах).

Известны ГОСТы на методы анализа для обнаружения ГМО (ГОСТ Р 52173-2003 Сырье и продукты пищевые. Метод идентификации генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения.

ГОСТ Р 52174-2003 Биологическая безопасность. Сырье и продукты пищевые. Метод идентификации генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения с применением биологического микрочипа).

В протравленных семенах сельскохозяйственных растений трудно определить наличие генно-инженерных трансформаций методом ПЦР в реальном времени. Системный протравитель, которым обработаны ГМО-семена, ингибирует ДНК-полимеразу. Данный факт ограничивает возможности этого метода при использовании семенного материала, так как нет возможности полностью «смыть» протравитель.

Фенилпирролы - это класс высокоэффективных фунгицидов, которые ингибируют рост мицелия патогенных грибов, вызывающих болезни сельскохозяйственных культур. Механизм действия данных веществ связан с формированием и нарушением функции клеточных мембран патогенов. Фунгициды эффективно подавляет развитие патогенов из рода Fusarium и Tilletia, вызывающих болезни проростков зерновых культур, а также из рода Altemaria, Ascochyta, Aspergillus, Fusarium, Helminthosporium, Rhizoctonia и Penicillium spp., вызывающих болезни проростков других культур. Используется для протравления семян.

Недостатком предлагаемых методов является их низкая экономическая эффективность, а так же то, что их действие не распространяется на семена, обработанные химическими протравителями на основе производных фенилпиррола.

Задачей изобретения является выявление генно-инженерных трансформаций в семенах сои и кукурузы, обработанных протравителем.

Поставленная задача решается благодаря тому, что в известном способе идентификации генно-трансформированных семян сои и кукурузы, обработанных протравителем на основе производных фенилпиррола, согласно изобретению, определяется активность фермента ацетилхолинэстеразы, при этом, если для семян сои значение активности меньше 90 мкмоль/г, а для семян кукурузы меньше 150 мкмоль/г, то семена генномодифицированные.

Показания активности ацетилхолинэстеразы измеряли в семенах сои и кукурузы, обработанных протравителем на основе производных фенилпиррола и без протравителя.

Испытания проводили на 13-и сортах сои: 1 - Аннушка, 2 - Свапа, 3 - Хпп, 5 - Амандина, 6 - Абелина, 7 - Парадис, 8 - ПР 1134501, 9 - НС Катя, 10 - Пруденс, 11 - Максус, 12 - Оресса, 13 - Ланцетная, 14 - Красная мега; и 5-и сортах кукурузы: 1 - Pioner Hi-Bred ПР-РВ-511, 2 - Pioner, 3 - LG2195, 4 - Марлиз 470, 5 - Grizzly.

Семена сои под номерами 11- Максус, 12 - Оресса и кукурузы 1-Pioner Hi-Bred ПР-РВ-511, 4-Марлиз 470 обработаны протравителем на основе производных фенилпиррола.

Активность ацетилхолинэстеразы определяли общепринятым колориметрическим тестом с бутирилхолином. Холинэстераза катализирует гидролиз бутирилтиохолина с образованием бутирата и тиохолина. Тиохолин восстанавливает железо (III) в гексацианоферрате до (II). Проводили измерение кинетики реакции, согласно которой снижение оптической плотности раствора прямо пропорционально активности холинэстеразы в пробе. Активность ацетилхолинэстеразы выражали в мкмоль на грамм пробы.

Пример 1

Активность ацетилхолинэстеразы в генномодифицированных образцах, обработанных протравителем составляет: Максус - 68,5 мкмоль/г, Оресса -70,5 мкмоль/г. У негенномодифицированных образцов без протравителя данный показатель составляет: Аннушка - 342,5 мкмоль/г, Свапа - 184,9 мкмоль/г, Хпп - 474,5 мкмоль/г, Амандина - 753,5 мкмоль/г, Абелина - 1585,2 мкмоль/г, Парадис - 137 мкмоль/г, ПР 1134501 (Канада) - 274 мкмоль/г, Ланцетная - 253 мкмоль/г, Красная мега - 356 мкмоль/г. (табл.1).

Таким образом, изучение активности фермента ацетилхолинэстеразы в семенах сои, обработанных протравителем, показало, что значения активности ацетилхолинэстеразы в генномодифицированных образцах, обработанных протравителем, находятся в пределах ниже 90 мкмоль/г.

Пример 2

При исследовании активности ферментов ацетилхолинэстеразы в генномодифицированных семенах кукурузы, обработанных протравителем на основе производных фенилпиррола, наблюдалась следующая тенденция:

активность фермента ацетилхолинэстеразы у сорта 1-Pioner Hi-Bred ПР-РВ-511 составляет 136,5 мкмоль/г, у сорта 4-Марлиз 470- 158,9 мкмоль/г.

В негенномодифицированных образцах кукурузы без протравителя показатели активности ацетилхолинэстеразы составляют у сортов: кукуруза LG2195 - 168,4 мкмоль/г, кукуруза Grizzly - 284,9 мкмоль/г, Pioner - 203,7 мкмоль/г (табл.2).

Таким образом, активность фермента ацетилхолинэстеразы семян кукурузы в генномодифицированных образцах, обработанных протравителем на основе производных фенилпиррола ниже, примерно в 2 раза, по сравнению с активностью ацетилхолинэстеразы в образцах кукурузы, необработанных протравителем.

Способ идентификации генно-трансформированных семян сои, обработанных протравителем на основе производных фенилпиррола, заключающийся в определении в семенах сои активности фермента ацетилхолинэстеразы, при этом, если для семян сои значение активности меньше 90 мкмоль/г, то семена генно-модифицированные.

Изобретение относится к области сельского хозяйства и может применяться в технологии возделывания табака при выращивании рассады. Способ включает предпосевную обработку семян табака путем замачивания и опрыскивание растений регулятором роста в основные фазы формирования рассады, в фазах "ушки" и "годная к высадке рассада".

Пестицид и агрохимикат на основе хелатной формы фульвовой кислоты // 2738483

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Хелатная форма ионов серебра Аg+, содержащая в качестве хелатообразователя фульвовую кислоту C135H182O95N5S2, применяется в качестве действующего вещества пестицида, выбранного из бактерицида, фунгицида, консерванта при закладке плодов на хранение, регулятора роста растений, а также в качестве агрохимиката для питания растений.

Применение композиции и способа для уменьшения содержания бактериальных спор в суспензии пульпы // 2730872

Изобретение относится к области производства бумаги, картона. Композиция, содержащей катионогенное поверхностно-активное вещество, которое включает первичную или вторичную аммониевую головную группу и линейную незамещенную C12-алкильную хвостовую группу, применяют для стимулирования прорастания бактериальных эндоспор в суспензии пульпы для изготовления бумаги, картона и т.

Гидрогелевый препарат для противопатогенной защиты почвы // 2726561

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Гидрогелевый препарат представляет собой редкосшитый гидрофильный акриловый сополимер, содержащий в полимерной матрице наполнитель в виде мелкоизмельченного торфа и ионы серебра в соотношении, % масс.: гидрофильный акриловый сополимер - 70-82; торфяной наполнитель - 14-23; ионы серебра - 0,5 - 1,0; вода остаточная - остальное.

Природный инсектицид и способ борьбы с вредителями картофеля на его основе // 2724665

Изобретение относится к сельскому хозяйству, к защите растений от вредителей. Природный инсектицид представляет собой водную суспензию мелкодисперсного порошка цеолитсодержащего трепела Хотынецкого месторождения с удельной поверхностью не менее 95 м2/г и размером частиц 100 мкм, состоящий из совокупности кремнийсодержащих соединений, при этом в качестве основного водорастворимого соединения, он содержит аморфный кремний не менее 10,53 мас.

Набор частей для применения в фунгицидном контроле // 2717805

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Набор частей, содержащий множество компонентов, подлежащих смешиванию, как указано в инструкции для применения в фунгицидном контроле, где указанное множество компонентов содержит множество фунгицидов, выбранных по меньшей мере из одного направленного на множественные сайты контактного фунгицида, по меньшей мере первого системного фунгицида и по меньшей мере второго системного фунгицида, при условии, что указанные первый и второй системные фунгициды не являются одинаковыми.

Способ обработки содержащих целлюлозу осадков сточных вод для получения облицовочного картона и этанола из целлюлозы // 2715846

Изобретение относится к способу обработки первичного осадка, который образуется на водоочистных сооружениях, таких как включенных в целлюлозный завод или целлюлозно-бумажный завод.

Способ обогащения чеснока посевного (allium sativum l.) германием // 2712441

Настоящее изобретение относится к обогащению растений чеснока посевного германием. Предложен способ обогащения растений чеснока посевного германием путем трехкратной обработки растений в период начала, средины и окончания интенсивного роста листьев Герматранолом концентрацией 0,15%, растворенным в 1%-ном растворе диметилсульфоксида.

Инсектицидная композиция // 2704443

Изобретение относится к средствам для борьбы с насекомыми, а именно к инсектицидной композиции. Предложенная инсектицидная композиция содержит порошок пористого минерала и борной кислоты.

Способ получения инсектицидного препарата для уничтожения синантропных насекомых // 2691696

Изобретение относится к нетоксичным средствам уничтожения вредных насекомых и может применяться в быту против синантропных насекомых, таких как тараканы, постельные клопы, муравьи, домовые сверчки и т.д.