Конъюгат, содержащий лиганд рецепторов нейротензина, и его применение

Изобретение относится к конъюгату, представленному общей структурной формулой (1): [TM1]-[AD1]-[LM]-[AD2]-[TM2] (1), где TM1 представляет собой первую адресующую часть, где первая адресующая часть способна связываться с первой мишенью, AD1 представляет собой первый соединительный фрагмент или отсутствует, LM представляет собой линкерный фрагмент или отсутствует, AD2 представляет собой второй соединительный фрагмент или отсутствует и TM2 представляет собой вторую адресующую часть, где вторая адресующая часть способна связываться со второй мишенью; где первая адресующая часть и/или вторая адресующая часть представляет собой соединение формулы (2), где R¹-R⁵, AA-COOH, ALK раскрыты в формуле изобретения, при условии, что по меньшей мере одна из адресующих частей TM1 или TM2 представляет собой соединение формулы (2). Также предложена фармацевтическая композиция, содержащая указанный конъюгат, которая обладает ингибирующей активностью лиганда на рецептор нейротензина 1. 2 н. и 18 з.п. ф-лы, 14 ил., 14 табл., 32 пр.

 

Настоящее изобретение относится к конъюгату; композиции, содержащей конъюгат; конъюгату и композиции, соответственно, для применения в способе диагностики заболевания; конъюгату и композиции, соответственно, для применения в способе лечения заболевания; конъюгату и композиции, соответственно, для применения в способе диагностики и лечения заболевания, которое упоминается также как «тера(г)нозис» или «тера(г)ностика»; конъюгату и композиции, соответственно, для применения в способе идентификации пациента, будет ли пациент реагировать или, вероятно, не будет реагировать на лечение заболевания; конъюгату и композиции, соответственно, для применения в способе выбора пациента из группы пациентов, которые возможно будут реагировать или, вероятно, не будут реагировать на лечение заболевания; конъюгату и композиции, соответственно, для применения в способе стратификации группы пациентов на пациентов, которые вероятно отреагируют на лечение заболевания, и на пациентов, которые вероятно не отреагируют на лечение заболевания; конъюгату и композиции, соответственно, для применения в способе доставки эффектора к ткани, экспрессирующей рецептор нейротензина; способу диагностики заболевания с использованием конъюгата и композиции, соответственно; способу лечения заболевания с использованием конъюгата и композиции, соответственно; способу диагностики и лечения заболевания, который упоминается также как «тера(г)нозис» или «тера(г)ностика», с использованием конъюгата и композиции, соответственно; способу доставки эффектора к ткани, экспрессирующей рецептор нейротензина с использованием конъюгата и композиции, соответственно; и набору, содержащему соединение и композицию, соответственно.

Нейротензин NT представляет собой нейропептид, состоящий из 13 аминокислот (pyroGlu¹-Leu²-TyR³-Glu⁴-Asn⁵-Lys⁶-Pro⁷-Arg⁸-Arg⁹-Pro¹⁰-Tyr¹¹-Ile¹²-Leu¹³-OH) (SEQ ID №: 1), который участвует в регуляции лютеинизирующего гормона и высвобождении пролактина и значительно взаимодействует с дофаминергической системой. Нейротензин, у которого была обнаружена способность вызывать заметное расширение кровеносных сосудов в экспонированных областях кожи анестезированных крыс, впервые был выделен из экстрактов бычьих гипоталамусов (Carraway et al., J. Biol. Chem., 1973, 248, 6854-6861).

Нейротензин распределен по всей центральной нервной системе, при этом самые высокие уровни его находятся в ядрах гипоталамуса, миндалин и прилежащем ядре. Это вызывает различные эффекты, включая обезболивание, гипотермию и повышенную двигательную активность. Он также участвует в регуляции метаболизма дофамина. На периферии нейротензин был обнаружен в эндокринных клетках тонкой кишки, где он управляет секрецией и сокращением гладкой мускулатуры (Friry et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 2002, 290, 1161-1168).

Нейротензин связывается рецепторами нейротензина. Известны три рецептора нейротензина, а именно, рецептор нейротензина 1, называемый также NTR1, рецептор нейротензина 2, называемый также NTR2, и рецептор нейротензина 3, называемый также NTR3. Эти рецепторы нейротензина представляют собой трансмембранные рецепторы, которые связывают нейротрансмиттер нейротензин (Vincent et al., Trends Pharmacol. Sci., 1999, 20, 302-309; Pelaprat, Peptides, 2006, 27, 2476-2487). NTR1 и NTR2, которые кодируются генами NTSR1 и NTSR2, содержат семь трансмембранных спиралей и связаны с G белком. NTR3 имеет единственный трансмембранные домен и кодируется геном SORT1.

Рецептор нейротензина 1 (NTR1) был клонирован в 1990 из мозга крыс, и было обнаружено, что он действует как обладающий высокой аффинностью левокабастин-нечувствительный рецептор к нейротензину (Tanaka et al., Neuron, 1990, 4, 847-854). Аффинность нейротензина к рецептору может быть снижена как ионами натрия, так и гуанозин-трифосфатом (ГТФ) (Vincent et al., Trends Pharmacol. Sci., 1999, 20, 302-309). NTR1 экспрессируется преимущественно в центральной нервной системе и кишечнике (гладкая мускулатура, слизистая оболочка и нервные клетки). В центральной нервной системе экспрессия была обнаружена в диагональной полоске Брока, медиальном септальном ядре, базальном крупноклеточном ядре, супрахиазматическом ядре, супрамаммилярной области, черной субстанции и вентральной области покрышки. Рецептор также экспрессируется в нейронах спинномозговых ганглий спинного мозга. Преобладающей реакцией на активацию рецептора с помощью нейротензина является активация фосфолипазы C, что приводит к увеличению внутриклеточной концентрации кальция. Рецептор может также стимулировать образование цАМФ, активацию MAP-киназы и индукцию регулирующих рост генов, таких как Krox-24 (Vincent et al., Trends Pharmacol. Sci., 1999, 20, 302-309).

Рецептор нейротензина 2 (NTR2) представляет собой белок, который в организме человека кодируется геном NTSR2 (Vincent et al., Trends Pharmacol. Sci., 1999, 20, 302-309; Mazella et al., J. Neurosci., 1996, 16, 5613-5620; Ramez et al., J. Invest. Dermatol., 2001, 117, 687-693). Белок, кодируемый этим геном, относится к семейству рецепторов, связанных с G-белками, которые активируют систему вторичных мессенджеров фосфатидилинозитол-кальция. Исследования по связыванию и фармакологические исследования показывают, что этот рецептор связывает нейротензин, а также несколько других лигандов, уже описанных для NTR1. Однако, в отличие от NTR1, NTR2 распознает с высокой степенью аффинности левокабастин, антагонист H1-гистаминовых рецепторов, который, как показано ранее, конкурирует с нейротензином за низкоаффинные участки связывания центральной нервной системы. Такая активность предполагает, что этот рецептор может иметь физиологическое значение, и что может существовать природный агонист рецептора.

Рецептор нейротензина 3 (NTR3) является рецептором, не связанным с G белком. кДНК кодирует белок длиной 833-аминокислотых остатков, на 100% идентичный недавно клонированному gp95/сортилину и далее обозначаемому как NTR3/gp95/сортилин (Mazella, Cell Signal., 2001, 13, 1-6; Vincent et al., Trends Pharmacol. Sci., 1999, 20, 302-309). NTR3 представляет собой сортинг белок, участвующий в направленной миграции клеток и нейропептидной сигнализации. Физиологическая и клеточная роли сортилина/NTR3 во многих аспектах являются предполагаемыми и еще находятся на стадии обсуждения.

Помимо центральной нервной системы, NTR1 высоко экспрессируется в организме млекопитающих и организме человека, в частности, на нескольких опухолевых клетках при некоторых опухолевых показаниях, тогда как экспрессия NTR1 в большинстве других тканей организма млекопитающего и организма человека либо не существует, либо является низкой. Только для толстого кишечника описана слабая или умеренная экспрессия в физиологических условиях.

В следующей таблице суммированы данные по экспрессии NTR1, описанные в предшествующем уровне техники, с указанием ткани, степени экспрессии, метода обнаружения и соответствующих ссылок.

Ткань	Экспрессия	Метод определения Ссылка
Центральная нервная система (например, черное вещество, супрахиазматическое ядро)	+++	Авторадиография, иммуногистохимия, гибридизация in situ например, Boudin et al., J. Comp. Neurol., 1996, 373, 76-89 (и ссылки в документе)
Толстая кишка (слизистая оболочка, нормальная)	+/-	Гибридизация in situ Gui et al., Peptides, 2008, 29, 1609-15
Толстая кишка (гладкая мускулатура, нормальная)	+/++	Авторадиография Rettenbacher et al., Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol., 2001, 364, 291-304
Протоковая аденокарцинома поджелудочной железы	+++	Авторадиография, RT-PCR, иммуногистохимия, исследования клеточных линий Reubi et al., Gut, 1998, 42, 546-50; Ehlers et al., Ann. Surg., 2000, 231, 838-48; Iwase et al., Cancer, 1997, 79, 1787-1793; Wang et al., Neuropeptides, 2011, 45, 151-156; Wang et al., Clin. Cancer Res., 2000, 6, 566-571
Мелкоклеточный рак легких	++	Авторадиография, исследования клеточных линий Reubi et al., Int. J. Cancer, 1999, 82, 213-218; Moody et al., Peptides, 2001, 22, 109-115
Рак простаты	++	RT-PCR (ксенотрансплантаты), функциональные исследования, Taylor et al., Prostate, 2012, 72, 523-32; Amorino et al., Oncogene, 2007, 26, 745-756; Valerie et al., Cancer Res., 2011, 71, 6817-6826; Swift et al., Cancer Res., 2010, 70, 347-356; Almeida et al., Peptides, 2010, 31, 242-247
Колоректальный рак	++/+++	RT-PCR, гибридизация in situ, иммуногистохимия, мышиная модель, исследования клеточных линий Chao et al., J. Surg. Res., 2005, 129, 313-321; Gui et al., Peptides, 2008, 29, 1609-1615; Bossard et al., Peptides, 2007, 28, 2030-2035; Bugni et al., Int. J. Cancer, 2012, 130,1798-1805; Haase et al., Anitcancer Res., 2006, 26, 3527-3533; Martin et al., Gastroenterology, 2002, 123, 1135-1143
Рак молочной железы	+	Иммуногистохимия Souaze et al., Cancer Res., 2006, 66, 6243-6249; Dupouy et al., PLoS One, 2009, 4, e4223
Менингиома	+++	Авторадиография Reubi et al., Int. J. Cancer, 1999, 82, 213-218
Саркома Юинга	+++	Авторадиография Reubi et al., Int. J. Cancer, 1999, 82, 213-218
Мезотелиома плевры	++	Иммуногистохимия Alifano et al., Biochimie, 2010, 92, 164-170
Рак головы и шеи	+	Функциональное исследование Shimizu et al., Int. J. Cancer, 2008, 123, 1816-1823
Рак легких	++	Иммуногистохимия, исследования клеточных линий, RT-PCR Alifano et al., Clin. Cancer Res., 2010, 16, 4401-4410; Moody et al., Panminerva Med., 2006, 48, 19-26; Ocejo-Garcia et al., Lung Cancer, 2001, 33, 1-9
Стромальные опухоли желудочно-кишечного тракта	++	Gromova et al., PLoS One, 2011, 6, e14710
Лейомиома матки	++	Иммуногистохимия, RT-PCR Rodriguez et al., Biol. Reprod., 2010, 83, 641-647; Rodriguez et al., Int. J. Gynecol Pathol, 2011, 30, 354-363
Т-клеточная лимфома кожи	++	Проточная цитометрия Ramez et al., J. Invest. Dermatol, 2001, 117, 687-693

Данные указания экспрессирующих NTR1 опухолей включают, но этим не ограничиваются, протоковую аденокарциному поджелудочной железы, мелкоклеточный рак легких, рак простаты, колоректальный рак, рак молочной железы, менингиому, саркому Юинга, мезотелиому плевры, рак головы и шеи, немелкоклеточный рак легких, стромальные опухоли желудочно-кишечного тракта, лейомиому матки и Т-клеточную лимфому кожи. Предпочтительной группой указанных экспрессирующих NTR1 опухолей являются протоковая аденокарцинома поджелудочной железы, мелкоклеточный рак легких, рак простаты, колоректальный рак, рак молочной железы, менингиома и саркома Юинга.

Ввиду такой селективной экспрессии NTR1, NTR1 рассматривается в качестве подходящей мишени для лекарственных препаратов и диагностических средств

В предшествующем уровне техники были описаны агонисты и антагонисты, связывающиеся с NTR1. Одним классом таких агонистов NTR1 являются пептиды, связывающиеся с NTR1.

Большинство этих агонистических пептидов являются производными нейротензина, его восьми C-концевых аминокислот Lys⁶-Pro⁷-Arg⁸-Arg⁹-Pro¹⁰-Tyr¹¹-Ile¹²-Leu¹³ (NT6-13) (SEQ ID №: 2) или его шести C-концевых аминокислот Arg⁸-Arg⁹-Pro¹⁰-Tyr¹¹-Ile¹²-Leu¹³ (NT8-13) (SEQ ID №: 3). Модификации включают, например, N-метилирование, восстановленных амидных связей, β-Ala или D-Lys в положении 7, Gly(PipAm) в положении 8, Dab или Phe(4-Gu) в положении 9, Dmt в положении 11, Tle или tBuGly в положении 12, D-Leu или Cha в положении 13, а также их комбинации. В US 4439359 описаны циклические октапептидные аналоги нейротензина. В US 4425269 описаны метаболически замещенные аналоги нейротензина. В WO 1999/052539 описаны аналоги нейротензина с новой неприродной аминокислотой неотриптофан. В WO 2000/078796 описаны меченые производные нейротензина, некоторые из них с улучшенной устойчивостью к ферментативному разложению. В WO 1995/022341 описаны меченые пептидные соединения. В US 2010/0256055 описаны конъюгаты нейротензина или аналогов нейротензина и их применение. В US 4110321 описан синтетический тридекапептид [Gln⁴]-нейротензин, обладающий гормональной активностью. В WO 2011006985 описаны аналоги нейротензина для радиоизотопного нацеливания на рецептор нейротензин-позитивных опухолей. В EP 0606804, WO 1996/031531, WO 1997/004311 и WO 1998/001472 описаны маркеры для рецептора нейротензина, включая флуоресцентно меченные маркеры. В US 5407916 описаны миметики нейротензина в качестве агентов центральной нервной системы.

Эти пептиды, а также дополнительные лиганды NTR1, а именно: нейромедин N и ксенин, могут быть использованы для целей визуализации и в терапевтических целях. Обычно агонист содержит терапевтически или диагностически активный эффектор, такой как хелатированную металлическую метку, и, более конкретно, хелатированную радиометку, подходящую для терапии и диагностики, соответственно. Агонист, содержащий эффектор, связывается с рецептором, и после связывания с рецептором агонист, содержащий эффектор, интернализируется рецептором, и таким образом агонист, содержащий эффектор, захватывается в мишеневую клетку. Специалисту в данной области техники должно быть понятно, что такое захватывание агониста, содержащего эффектор, может сопровождаться высвобождением эффектора из агониста. Кроме того, при таком захватывании эффектор и/или агонист могут быть подвергнуты метаболическому преобразованию. Такое метаболическое преобразование может происходить посредством обмена веществ и ферментативной активности, в частности, организма, в который был введен агонист, содержащий эффектор, и, более конкретно, метаболизмом клетки и ткани, соответственно, в которые был интернализирован агонист, содержащий эффектор.

Потенциальную полезность меченных металлом специфических пептидных агонистов рецепторов нейротензина для использования в сцинтиграфической или ОФЭКТ или ПЭТ визуализации и лучевой терапии можно проиллюстрировать на примере ^99mTc-меченного аналога нейротензина (NT) ^99mTc-Demotensin VI (Gabriel et al., Cancer Biother. Radiopharm., 2011, 26, 557-563).

Меченные металлом специфические лиганды рецепторов нейротензина были использованы также для доклинической визуализации опухолей, например, ксенотрансплантатов НТ29 опухолей, экспрессирующих NTR1, с использованием ^99mTc-NTXIX (Garcia-Garayoa et al., Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging, 2009, 36, 37-47). Такими специфическими лигандами рецепторов нейротензина являются аналоги NT (8-13) (Garcia-Garayoa et al., Nucl. Med. Biol., 2001, 28, 75-84; Garcia-Garayoa et al., J. Nucl. Med., 2002, 43, 374-383; Garcia-Garayoa et al., Nucl. Med. Biol., 2006, 33, 495-503; Garcia-Garayoa et al., Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging, 2009, 36, 37-47; Bergmann et al., Nucl. Med. Biol., 2002, 29, 61-72; Bruehlmeier et al., Nucl. Med. Biol., 2002, 29, 321-327; Blauenstein et al., Cancer Biother. Radiopharm., 2004, 19, 181-188; Maes et al., J. Med. Chem., 2006, 49, 1833-1836), demotensins (Nock et al., J. Med. Chem., 2006, 49, 4767-4776; Maina et al., Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging, 2007, 34, 1804-1814), аналоги NT (6-13) (Alshoukr et al., Bioconjug. Chem., 2009, 20, 1602-1610; Alshoukr et al., Bioconjug. Chem., 2011, 22, 1374-1385) и аналоги неротензина, разработанные компанией Biosynthema (Achilefu et al., J. Med. Chem., 2003, 46, 3403-3411; de Visser et al., Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging, 2003, 30, 1134-1139; and Janssen et al., Cancer Biother. Radiopharm., 2007, 22, 374-381).

Было установлено, что (в основном) меченные металлом пептиды, полученные из нейротензина, имеют очень короткий период полужизни в циркулирующей крови в связи с быстрым почечным клиренсом, как это часто наблюдается для пептидных молекул. Следовательно, для таких молекул накопление в опухоли весьма ограничено.

В международной патентной заявке WO 98/33531 описаны способы определения и локализации злокачественных опухолей человека с использованием нейротензина, агонистов пептида NTR и антагонистов пептида NTR, соответственно. В разделе примеров WO 98/33531 показано применение меченных ¹²⁵I и немеченых нейротензина и его фрагментов, действующих в качестве агонистов при рецепторной авторадиографии криостатных срезов образцов опухолей.

В US 5723483 описаны низкомолекулярные соединения, которые являются активными в качестве антагонистов NTR1, такие как SR142948. Однако эти низкомолекулярные соединения и, в частности, SR142948, проникают через гематоэнцефалический барьер и, таким образом это не подходит ни для радионуклидной терапии опухолей, ни для радиоактивной диагностики опухолей и, в частности, визуализации, поскольку предпочтительными являются опухоли, которые экспрессируют NTR1, а облучение центральной нервной системы или любое другое нерадиоактивное воздействие по уничтожению клеток может оказывать вредное действие на пациента. Помимо этого, радиомечение указанных соединений является сложным. Еще более сложным является разработка и синтез радиомеченого производного указанных соединений без снижения или уничтожения исходной и желаемой высокой аффинности к NTR1.

В приведенном выше обзоре предшествующего уровня техники относительно попыток разработать соединение, которое может быть использовано в диагностике и/или терапии экспрессирующих NTR1 опухолей, в результате чего при такой диагностике и лечении, как правило, используется радиомеченый вариант такого соединения, проиллюстрированы сложности в разработке такого вида соединений, являющихся эффективными и, таким образом, подходящими для таких диагностических и терапевтических целей. Крайне важным является, чтобы соединение обладало подходящими свойствами in vivo нацеливания и фармакокинетическими свойствами. Однако хорошо известно, что радионуклидные химические и ассоциированные связи имеют решающее значение, особенно в отношении присоединения к соединению эффектора, который подает сигнал, необходимый для диагностики, или который обеспечивает терапевтически эффективную активность. Такой эффектор может быть присоединен к соединению либо непосредственно, либо через соединительный фрагмент. В случае, если эффектор является радиомеченым, и радиоактивная метка прикреплена к соединению посредством соединительного фрагмента, такого, как, например, хелатор, мечение таких соединительного фрагмента и хелатора, соответственно, является еще одним важным шагом в идентификации подходящего соединения (Fritzberg et al., J. Nucl. Med., 1992, 33, 394-397). Следовательно, тип радионуклида, тип соединения, которое опосредует связывание мишени, и способ, используемый для соединения их друг с другом, может иметь непредсказуемое воздействие на свойства радиомеченого варианта соединения. Теоретически, высокая аффинность соединения как такового, то есть без радиометки, соединительной части и/или хелатора, соответственно, если таковые имеются, к целевому рецептору облегчает удерживание соединения и, в частности, его варианта с радиоактивной меткой в тканях, экспрессирующих мишеневый рецептор. Однако хорошо известно, что аффинность и рецепторная специфичность соединения как такового, то есть без радиометки, линкера и хелатора, соответственно, если таковые имеются, могут быть полностью изменены в процессе химической модификации и радионуклидного мечения (Fani et al., J. Nucl. Med., 2012, 53, 1481-1489). Таким образом, оптимальное соединение, и тем более его вариант с радиоактивной меткой, подходящее для диагностики и терапии, соответственно, заболевания, это вопрос удачи, а не рационального и предсказуемого процесса разработки. Это тем более справедливо в том случае, если такое соединение является частью конъюгата, и этот конъюгат содержит указанное соединение, нацеленное на рецептор, экспрессируемый тканями, таким образом, это соединение выступает в качестве первой адресующей части, и конъюгат содержит второе соединение, способное связываться со второй мишенью, при этом вторая мишень может отличаться, но не обязательно, от первой мишени.

Задачей, лежащей в основе настоящего изобретения, является получение соединения, которое подходит в качестве диагностического агента и/или фармацевтического средства, в частности, если указанное соединение содержит диагностически и/или терапевтически активный эффектор. Следующей задачей, лежащей в основе настоящего изобретения, является разработка соединения, которое подходит в качестве диагностического агента и/или фармацевтического агента, особенно, если оно конъюгировано с диагностически и/или терапевтически активным эффектором, и которое не проникает через гематоэнцефалический барьер. Следующей задачей, лежащей в основе настоящего изобретения, является разработка соединения, которое подходит в качестве диагностического агента и/или фармацевтического агента, особенно, если оно конъюгировано с диагностически и/или терапевтически активным эффектором, при диагностике и/или терапии заболевания, при котором больные клетки и/или пораженные ткани экспрессируют NTR1. Еще одной задачей, лежащей в основе настоящего изобретения, является разработка соединения, которое подходит для доставки диагностически и/или терапевтически эффективного агента к больной клетке и/или пораженной ткани, соответственно, и, более конкретно, к больной клетке и/или пораженной ткани, экспрессирующих NTR1. Также задачей, лежащей в основе настоящего изобретения, является разработка способа диагностики заболевания, способа лечения и/или предупреждения заболевания и способа комбинированной диагностики и лечения заболевания; предпочтительно, таким заболеванием является заболевание с участием экспрессирующей NTR1 клетки и/или ткани. Еще одной задачей, лежащей в основе настоящего изобретения, является разработка способа идентификации пациента, будет ли пациент реагировать или, вероятно, не будет реагировать на лечение заболевания, способа выбора пациента из группы пациентов, которые возможно будут реагировать или, вероятно, не будут реагировать на лечение заболевания. Кроме того, задачей, лежащей в основе настоящего изобретения, является разработка фармацевтической композиции, содержащей соединение, обладающее характеристиками, описанными выше. Помимо этого, задачей, лежащей в основе настоящего изобретения, является создание набора, который подходит для использования в любом из описанных выше способов.

Эти и другие задачи решаются содержанием прилагаемых независимых пунктов формулы изобретения. Предпочтительные варианты осуществления могут быть взяты из прилагаемых зависимых пунктов формулы изобретения.

Кроме того, эти и другие задачи решаются с помощью следующих вариантов осуществления изобретения.

Вариант осуществления изобретения 1: Конъюгат, представленный общей структурной формулой (1)

[TM1]-[AD1]-[LM]-[AD2]-[TM2] (1),

где

TM1 представляет собой первую адресующую часть, где первая адресующая часть способна связываться с первой мишенью,

AD1 представляет собой первый соединительный фрагмент или отсутствует,

LM представляет собой линкерный фрагмент или отсутствует,

AD2 представляет собой второй соединительный фрагмент или отсутствует, и

TM2 представляет собой вторую адресующую часть, где вторая адресующая часть способна связываться со второй мишенью;

где первая адресующая часть и/или вторая адресующая часть представляет собой соединение формулы (2)

где

R¹ выбран из группы, включающей водород, метил и циклопропилметил;

AA-COOH представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей 2-амино-2-адамантанкарбоновую кислоту, циклогексилглицин и 9-амино-бицикло[3.3.1]нонан-9-карбоновую кислоту;

R² выбран из группы, включающей (C₁-C₆)алкил, (C₃-C₈)циклоалкил, (C₃-C₈)циклоалкилметил, галоген, нитро и трифторметил;

ALK представляет собой (C₂-C₅)алкилиден;

R³, R⁴ и R⁵, каждый и независимо, выбраны из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил, при условии, что один из R³, R⁴ и R⁵ представлен следующей формулой (3):

где

ALK̓ представляет собой (C₂-C₅)алкилиден;

R⁶ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил; и

R⁷ представляет собой связь;

или его фармакологически приемлемая соль, сольват или гидрат.

Вариант осуществления изобретения 2: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 1, где конъюгат содержит эффекторный фрагмент, указанный эффекторный фрагмент содержит или способен содержать эффектор, где эффектор выбран из группы, включающей диагностически активный агент, терапевтически активный агент и их комбинацию.

Вариант осуществления изобретения 3: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения 1 и 2, где R¹ представляет собой метил.

Вариант осуществления изобретения 4: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения 1, 2 и 3, где AA-COOH представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей 2-амино-2-адамантанкарбоновую кислоту и циклогексилглицин.

Вариант осуществления изобретения 5: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 4, где AA-COOH представляет собой 2-амино-2-адамантанкарбоновую кислоту.

Вариант осуществления изобретения 6: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 4, где AA-COOH представляет собой циклогексилглицин.

Вариант осуществления изобретения 7: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения 1, 2, 3, 4, 5 и 6, предпочтительно, по любому из вариантов осуществления изобретения 1 и 2, где R² представляет собой изопропил.

Вариант осуществления изобретения 8: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения 1, 2, 3, 4, 5, 6 и 7, предпочтительно, по любому из вариантов осуществления изобретения 1 и 2, где R³, R⁴ и R⁵, каждый и независимо, выбраны из группы, включающей водород и метил, при условии, что один из R³, R⁴ и R⁵ представлен следующей формулой (3):

где

ALK̓ представляет собой (C₂-C₅)алкилиден;

R⁶ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил.

Вариант осуществления изобретения 9: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 8, где R⁶ выбран из группы, включающей водород и метил.

Вариант осуществления изобретения 10: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 и 9, где R³, R⁴ и R⁵, каждый и независимо, представляют собой метил, при условии, что один из R³, R⁴ и R⁵ представлен следующей формулой (3):

где

ALK̓ представляет собой (C₂-C₅)алкилиден;

R⁶ выбран из группы, включающей водород и метил.

Вариант осуществления изобретения 11: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10, предпочтительно, по любому из вариантов осуществления изобретения 1, 2 и 10, где ALK и ALK', оба представляют собой пропилен, или где-либо ALK представляет собой пропилен, и ALK' представляет собой (C₂-C₅)алкилиден, либо ALK представляет собой (C₂-C₅)алкилиден, и ALK' представляет собой пропилен.

Вариант осуществления изобретения 12: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения 1 и 2, где

R¹ представляет собой метил;

AA-COOH представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей 2-амино-2-адамантанкарбоновую кислоту и циклогексилглицин; и

R² представляет собой изопропил.

Вариант осуществления изобретения 13: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения 1, 2 и 12, где

R³, R⁴ и R⁵, каждый и независимо, выбраны из группы, включающей водород и метил, при условии, что один из R³, R⁴ и R⁵ представлен следующей формулой (3):

где

ALK̓ представляет собой (C₂-C₅)алкилиден;

R⁶ выбран из группы, включающей водород и метил.

Вариант осуществления изобретения 14: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения 1 и 2, где

R¹ представляет собой метил;

AA-COOH представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей 2-амино-2-адамантанкарбоновую кислоту и циклогексилглицин;

R² представляет собой изопропил;

R³, R⁴ и R⁵, каждый и независимо, выбраны из группы, включающей водород и метил, при условии, что один из R³, R⁴ и R⁵ представлен следующей формулой (3):

где

ALK̓ представляет собой (C₂-C₅)алкилиден; и

R⁶ выбран из группы, включающей водород и метил.

Вариант осуществления изобретения 15: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 13 и 14, предпочтительно, по любому из вариантов осуществления изобретения 12, 13 и 14, где

R³, R⁴ и R⁵, каждый и независимо, представляют собой метил, при условии, что один из R³, R⁴ и R⁵ представлен следующей формулой (3):

где

ALK̓ представляет собой (C₂-C₅)алкилиден; и

R⁶ выбран из группы, включающей водород и метил.

Вариант осуществления изобретения 16: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 и 15, предпочтительно, по любому из вариантов осуществления изобретения 12, 13, 14 и 15, где

ALK и ALK', оба представляют собой пропилен, или где-либо ALK представляет собой пропилен, и ALK' представляет собой (C₂-C₅)алкилиден, либо ALK представляет собой (C₂-C₅)алкилиден, и ALK' представляет собой пропилен.

Вариант осуществления изобретения 17: Конъюгат в соответствии с любым из вариантов осуществления изобретения 1 и 2, где

R¹ представляет собой метил; AA-COOH представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей 2-амино-2-адамантанкарбоновую кислоту и циклогексилглицин;

R² представляет собой изопропил; и

ALK и ALK', оба представляют собой пропилен, или где-либо ALK представляет собой пропилен, и ALK' представляет собой (C₂-C₅)алкилиден, либо ALK представляет собой (C₂-C₅)алкилиден, и ALK' представляет собой пропилен.

Вариант осуществления изобретения 18: Конъюгат в соответствии с любым из вариантов осуществления изобретения 1 и 2, где

R¹ представляет собой метил;

AA-COOH представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей 2-амино-2-адамантанкарбоновую кислоту и циклогексилглицин;

R² представляет собой изопропил;

R³, R⁴ и R⁵, каждый и независимо, выбраны из группы, включающей водород и метил, при условии, что один из R³, R⁴ и R⁵ представлен следующей формулой (3):

где

R⁶ выбран из группы, включающей водород и метил; и

ALK и ALK', оба представляют собой пропилен, или где-либо ALK представляет собой пропилен, и ALK' представляет собой (C₂-C₅)алкилиден, либо ALK представляет собой (C₂-C₅)алкилиден, и ALK' представляет собой пропилен.

Вариант осуществления изобретения 19: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 18, где первая адресующая часть выбрана из группы, включающей соединение формулы (4), соединение формулы (5) и соединение формулы (6), где

соединение формулы (4) представляет собой

соединение формулы (5) представляет собой

соединение формулы (6) представляет собой

Вариант осуществления изобретения 20: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 19, где вторая адресующая часть и первая адресующая часть представляют собой адресующие части, определенные в любом из вариантов осуществления изобретения от 1 до 19.

Вариант осуществления изобретения 21: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 20, где

первая адресующая часть выбрана из группы, включающей

соединение формулы (4)

соединение формулы (5) представляет собой

и

соединение формулы (6) представляет собой

где вторая адресующая часть выбрана из группы, включающей

соединение формулы (4)

соединение формулы (5) представляет собой

и

соединение формулы (6) представляет собой

Вариант осуществления изобретения 22: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения 20 и 21, где

первая адресующая часть представляет собой соединение формулы (4)

и

где вторая адресующая часть представляет собой соединение формулы (4)

Вариант осуществления изобретения 23: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения 20 и 21, где

первая адресующая часть представляет собой соединение формулы (4)

и

где вторая адресующая часть представляет собой соединение формулы (5)

Вариант осуществления изобретения 24: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения 20 и 21, где

первая адресующая часть представляет собой соединение формулы (4)

и

где вторая адресующая часть представляет собой соединение формулы (6)

Вариант осуществления изобретения 25: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 24, где первая адресующая часть и/или вторая адресующая часть отличаются от соединения формулы (7)

Вариант осуществления изобретения 26: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 25, предпочтительно, по любому из вариантов осуществления изобретения от 20 до 25, где первая адресующая часть и вторая адресующая часть разделены от 4 до 1000 ковалентными связями, предпочтительно, от 5 до 150 ковалентными связями, более предпочтительно, от 10 до 40 ковалентными связями.

Вариант осуществления изобретения 27: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 26, предпочтительно, по любому из вариантов осуществления изобретения от 20 до 26, где линкерный фрагмент LM представлен общей формулой:

-[X]_a- [Y]- [Z]_b- (VIII),

где

[X]_a представляет собой фрагмент структурного элемента, образованный количеством «a» структурных элементов X, или отсутствует,

[Y] представляет собой разветвленный фрагмент или отсутствует,

[Z]_b представляет собой фрагмент структурного элемента, образованный количеством «b» структурных элементов Z, или отсутствует,

и где «a» и «b», индивидуально и независимо друг от друга, обозначают любое целое число 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и 20, при условии, что a+b обозначает 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 или 0; предпочтительно, «a» и «b», индивидуально и независимо друг от друга, обозначают любое целое число 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10, более предпочтительно, любое целое число из 0, 1, 2, 3, 4 и 5.

Вариант осуществления изобретения 28: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 27, где фрагмент структурного элемента [X]_a связан с соседним фрагментом посредством связи, где эта связь индивидуально и независимо выбрана из группы, включающей амидную связь, уреидную связь, карбаматную связь, сложноэфирную связь, простую эфирную связь, тиоэфирную связь и дисульфидную связь, и где соседний фрагмент выбран из группы, включающей разветвленный фрагмент [Y], фрагмент структурного элемента [Z]_b, второй соединительный фрагмент AD2, вторую адресующую часть TM2, первый соединительный фрагмент AD1 и первую адресующую часть TM1.

Вариант осуществления изобретения 29: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения 27 и 28, где структурный элемент X представлен общей формулой

где

Lin², если присутствует, и Lin³, если присутствует, каждый и независимо, выбраны из группы, включающей -CO-, -NR¹⁰-, -S-, -CO-NR¹⁰-, -CS-NR¹⁰-, -O-, -сукцинимид- и -CH₂-CO-NR¹⁰-;

где

«-сукцинимид-» означает

R¹⁰ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил;

и азот во всех содержащих азот фрагментах связан с R⁹;

и где R⁹ выбран из -(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₃-C₈)карбоцикло-, -арилена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-арилена-, -арилен-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-арилен-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)карбоцикло-, -(C₃-C₈)карбоцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)карбоцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₃-C₈)гетероцикло-, (C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)гетероцикло-, -(C₃-C₈)гетероцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)гетероцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(CH₂CH₂O)_r-, и -(CH₂)_s-(CH₂CH₂O)_r-(CH₂)_t-;

и где

r обозначает любое целое число из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10;

s обозначает любое целое число из 0, 1, 2, 3 и 4; и

t обозначает любое целое число из 0, 1, 2, 3 и 4.

Вариант осуществления изобретения 30: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 27 до 29, где фрагмент структурного элемента [X]_a представляет собой пептид.

Вариант осуществления изобретения 31: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 27 до 30, где фрагмент структурного элемента [Z]_b связан с соседним фрагментом посредством связи, где эта связь индивидуально и независимо выбрана из группы, включающей амидную связь, уреидную связь, карбаматную связь, сложноэфирную связь, простую эфирную связь, тиоэфирную связь и дисульфидную связь, и где соседний фрагмент выбран из группы, включающей разветвленный фрагмент [Y], фрагмент структурного элемента [X]_a, первый соединительный фрагмент AD1, первую адресующую часть TM1, второй соединительный фрагмент AD2 и вторую адресующую часть TM2.

Вариант осуществления изобретения 32: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 31, где структурный элемент Z представлен общей формулой

где

Lin², если присутствует, и Lin³, если присутствует, каждый и независимо, выбраны из группы, включающей -CO-, -NR¹⁰-, -S-, -CO-NR¹⁰-, -CS-NR¹⁰-, -O-, -сукцинимид- и -CH₂-CO-NR¹⁰-;

где

«-сукцинимид-» означает

R¹⁰ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил;

и азот во всех содержащих азот фрагментах связан с R⁹;

и где R⁹ выбран из -(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₃-C₈)карбоцикло-, -арилена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-арилена-, -арилен-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-арилен-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)карбоцикло-, -(C₃-C₈)карбоцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)карбоцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₃-C₈)гетероцикло-, (C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)гетероцикло-, -(C₃-C₈)гетероцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)гетероцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(CH₂CH₂O)_r- и -(CH₂)_s-(CH₂CH₂O)_r-(CH₂)_t-;

и где

r обозначает любое целое число из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10;

s обозначает любое целое число из 0, 1, 2, 3 и 4; и

t обозначает любое целое число из 0, 1, 2, 3 и 4.

Вариант осуществления изобретения 33: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 27 до 32, где фрагмент структурного элемента [Z]_b представляет собой пептид.

Вариант осуществления изобретения 34: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 27 до 33, где разветвленный фрагмент [Y] связан с соседним фрагментом посредством связи, где эта связь индивидуально и независимо выбрана из группы, включающей амидную связь, уреидную связь, карбаматную связь, сложноэфирную связь, простую эфирную связь, тиоэфирную связь и дисульфидную связь, и где соседний фрагмент выбран из группы, включающей фрагмент структурного элемента [X]_a, первый соединительный фрагмент AD1, первую адресующую часть TM1, фрагмент структурного элемента [Z]_b, второй соединительный фрагмент AD2 и вторую адресующую часть TM2.

Вариант осуществления изобретения 35: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 34, где разветвленный фрагмент [Y] представлен структурой, как описано в любом из вариантов осуществления изобретения от 28 до 33 для фрагмента структурного элемента [X]_a и фрагмента структурного элемента [Z]_b.

Вариант осуществления изобретения 36: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения 34 и 35, где разветвленный фрагмент [Y] содержит реакционноспособную группу, которая дает возможность образовать связь с соответствующей дополняющей реакционноспособной группой, и эта связь, отдельно и независимо, выбрана из группы, включающей амидную связь, уреидную связь, тиоуреидную связь и аминную связь.

Вариант осуществления изобретения 37: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 36, где первый соединительный фрагмент AD1 опосредует связь с первой адресующей частью TM1 и с соседним фрагментом, где соседний фрагмент выбран из группы, включающей линкерный фрагмент LM, фрагмент структурного элемента [X]_a, разветвленный фрагмент Y, фрагмент структурного элемента [Z]_b, второй соединительный фрагмент AD2 и вторую адресующую часть TM2.

Вариант осуществления изобретения 38: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 37, где связь, индивидуально и независимо, выбрана из группы, включающей амидную связь, сульфонамидную связь, уреидную связь, тиоэфирную связь, простую эфирную связь, карбаматную связь, аминную связь, триазольную связь, оксимную связь, гидразоновую связь, дисульфидную связь, пиразиновую связь и дигидропиразиновую связь.

Вариант осуществления изобретения 39: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 37 до 38, где первый соединительный фрагмент AD1, предпочтительно, перед образованием какой-либо связи имеет следующую структуру:

RG3-R8-RG4 (10)

где RG3 представляет собой реакционноспособную группу, как описано в настоящем документе, предпочтительно, реакционноспособную группу, указанную в таблице 2, или выбранную из группы, включающей амино, карбоновую кислоту, активированную карбоновую кислоту, хлор, бром, йод, сульфгидрил, гидроксил, сульфоновую кислоту, активированную сульфоновую кислоту, сложные эфиры сульфоновой кислоты, такие как мезилат или тозилат, акцепторы Михаэля, напряженные алкены, такие как транс-циклооктен, изоцианат, изотиоцианат, альдегид, кетон, аминоокси, гидразид, гидразин, азид, алкин и тетразин;

где RG4 представляет собой реакционноспособную группу, как описано в настоящем документе, предпочтительно, реакционноспособную группу, указанную в таблице 2, или выбранную из группы, включающей амино, карбоновую кислоту, активированную карбоновую кислоту, хлор, бром, йод, сульфгидрил, гидроксил, сульфоновую кислоту, активированную сульфоновую кислоту, сложные эфиры сульфоновой кислоты, такие как мезилат или тозилат, акцепторы Михаэля, напряженные алкены, такие как транс-циклооктен, изоцианат, изотиоцианат, альдегид, кетон, аминоокси, гидразид, гидразин, азид, алкин и тетразин; и

где R8 выбран из -(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₃-C₈)карбоцикло-, -O-(C₁-C₈)алкила-, -арилена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-арилена-, -арилен-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)карбоцикло, -(C₃-C₈)карбоцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₃-C₈)гетероцикло-, (C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)гетероцикло-, -(C₃-C₈)гетероцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(CH₂CH₂O)_r- и -(CH₂CH₂O)_r-CH₂-; и где

r обозначает любое целое число из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10;

предпочтительно, R8 представляет собой

a) -(CH₂-CH₂-O)_r-CH₂-, где r обозначает целое число из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10, предпочтительно, r обозначает 2; или

b) -(C₁-C₁₀)алкилиден-, более предпочтительно, -(CH₂)_N-; где n обозначает целое число из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10, предпочтительно, n обозначает 1, 2, 3, 4, и 5.

Вариант осуществления изобретения 40: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 39, где второй соединительный фрагмент AD2 опосредует связь со второй адресующей частью TM2 и с соседним фрагментом, где соседний фрагмент выбран из группы, включающей линкерный фрагмент LM, фрагмент структурного элемента [Z]_b, разветвленный фрагмент Y, фрагмент структурного элемента [X]_a, первый соединительный фрагмент AD1 и первую адресующую часть TM1.

Вариант осуществления изобретения 41: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 40, где связь индивидуально и независимо выбрана из группы, включающей амидную связь, сульфонамидную связь, уреидную связь, тиоэфирную связь, простую эфирную связь, карбаматную связь, аминную связь, триазольную связь, оксимную связь, гидразоновую связь, дисульфидную связь, пиразиновую связь и дигидропиразиновую связь.

Вариант осуществления изобретения 42: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 40 до 31, где второй соединительный фрагмент AD2, предпочтительно, перед образованием какой-либо связи имеет следующую структуру:

RG3-R8-RG4 (10)

где RG3 представляет собой реакционноспособную группу, как описано в настоящем документе, предпочтительно, реакционноспособную группу, указанную в таблице 2, или выбранную из группы, включающей амино, карбоновую кислоту, активированную карбоновую кислоту, хлор, бром, йод, сульфгидрил, гидроксил, сульфоновую кислоту, активированную сульфоновую кислоту, сложные эфиры сульфоновой кислоты, такие как мезилат или тозилат, акцепторы Михаэля, напряженные алкены, такие как транс-циклооктен, изоцианат, изотиоцианат, альдегид, кетон, аминоокси, гидразид, гидразин, азид, алкин и тетразин;

где RG4 представляет собой реакционноспособную группу, как описано в настоящем документе, предпочтительно, реакционноспособную группу, указанную в таблице 2, или выбранную из группы, включающей амино, карбоновую кислоту, активированную карбоновую кислоту, хлор, бром, йод, сульфгидрил, гидроксил, сульфоновую кислоту, активированную сульфоновую кислоту, сложные эфиры сульфоновой кислоты, такие как мезилат или тозилат, акцепторы Михаэля, напряженные алкены, такие как транс-циклооктен, изоцианат, изотиоцианат, альдегид, кетон, аминоокси, гидразид, гидразин, азид, алкин и тетразин; и

где R8 выбран из -(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₃-C₈)карбоцикло-, -O-(C₁-C₈)алкила-, -арилена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-арилена-, -арилена-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)карбоцикло, -(C₃-C₈)карбоцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₃-C₈)гетероцикло-, (C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)гетероцикло-, -(C₃-C₈)гетероцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(CH₂CH₂O)_r- и -(CH₂CH₂O)_r-CH₂-; и где

r обозначает любое целое число из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10;

предпочтительно, R8 представляет собой

a) -(CH₂-CH₂-O)r-CH₂-, где r обозначает целое число из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10, предпочтительно, r обозначает 2; или

b) -(C₁-C₁₀)алкилиден-, более предпочтительно, -(CH₂)_N-; где n обозначает целое число из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10, предпочтительно, n обозначает 1, 2, 3, 4, и 5.

Вариант осуществления изобретения 43: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 2 до 42, где эффекторный фрагмент EM связан, предпочтительно, ковалентно связан с разветвленным фрагментом Y.

Вариант осуществления изобретения 44: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 2 до 42, где эффекторный фрагмент EM связан, предпочтительно, ковалентно связан со второй адресующей частью TM2.

Вариант осуществления изобретения 45: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 44, где вторая адресующая часть TM2 отличается от соединения формулы (2) и/или отличается от соединения формулы (7)

Вариант осуществления изобретения 46: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 45, где конъюгат содержит третий соединительный фрагмент AD3.

Вариант осуществления изобретения 47: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 46, где соединительный фрагмент AD3 опосредует связь между разветвленным фрагментом [Y] и эффекторным фрагментом EM.

Вариант осуществления изобретения 48: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 47, где соединительный фрагмент AD3 опосредует связь между второй адресующей частью TM2 и эффекторным фрагментом EM.

Вариант осуществления изобретения 49: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 48, где вторая адресующая часть TM2 отличается от соединения формулы (2) и/или отличается от соединения формулы (7)

Вариант осуществления изобретения 50: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 47 до 49, где связь выбрана из группы, включающей амидную связь, сульфонамидную связь, уреидную связь, тиоуреидную связь, тиоэфирную связь, простую эфирную связь, карбаматную связь, аминную связь, триазоловую связь, оксимную связь, гидразоновую связь, дисульфидную связь, пиразиновую связь и дигидропиразиновую связь.

Вариант осуществления изобретения 51: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 46 до 50, где третий соединительный фрагмент AD3 имеет структуру формулы

-Lin⁴-R⁹-Lin⁵- (11);

где

R⁹ выбран из -(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₃-C₈)карбоцикло-, -арилена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-арилена-, -арилен-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-арилен-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)карбоцикло-, -(C₃-C₈)карбоцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)карбоцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₃-C₈)гетероцикло-, (C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)гетероцикло-, -(C₃-C₈)гетероцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)гетероцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(CH₂CH₂O)_r и -(CH₂)_s-(CH₂CH₂O)_r-(CH₂)_t-;

и где

r обозначает любое целое число из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10;

s обозначает любое целое число из 0, 1, 2, 3 и 4; и

t обозначает любое целое число из 0, 1, 2, 3 и 4;

Lin⁴ выбран из группы, включающей -CO-, -NR¹⁰-, -CO-NR¹⁰-, -CS-NR¹⁰-, -CH₂- и связи, предпочтительно, ковалентной связиь, более предпочтительно, прямой связи;

где R¹⁰ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил, и;

Lin⁵ выбран из группы, включающей -CO-, -S-, -NR¹⁰-, - CO-NR¹⁰-, -CS-NR¹⁰-, -O-, -CH₂-, -SO₂-, -сукцинимид-, -CH₂-CO-NR¹⁰-, -C=C- (в случае, например, триазола), =N-O-, =N-N-, =N-N-CO-, -N=N-N- (в случае, например, триазола), -HC= и -R³C= (оксим и гидразон);

где R¹⁰ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил.

Вариант осуществления изобретения 52: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 51, где присутствуют оба, фрагмент первого адаптора AD1 и второй соединительный фрагмент AD2.

Вариант осуществления изобретения 53: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 52, где присутствует линкерный фрагмент LM.

Вариант осуществления изобретения 54: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 53, где присутствует линкерный фрагмент LM, где линкерный фрагмент LM представляет собой пептид, и где пептид встроен в формулу (1) либо в направлении N->C, либо в направлении C->N.

Вариант осуществления изобретения 55: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 54, где конъюгат дополнительно содержит третий соединительный фрагмент [AD3], где третий соединительный фрагмент опосредует связь эффекторного фрагмента с конъюгатом.

Вариант осуществления изобретения 56: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 2 до 55, где эффекторный фрагмент выбран из группы, включающей эффектор, акцептор и -[акцептор-эффектор], где

акцептор представляет собой фрагмент, который опосредует связывание эффектора с третьим соединительным фрагментом AD3, если он присутствует, или акцептор представляет собой фрагмент, который опосредует связывание эффектора с разветвленным фрагментом [Y], и

эффектор выбран из группы, включающей диагностически активный агент и терапевтически активный агент.

Вариант осуществления изобретения 57: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 56, где акцептор представляет собой хелатор, предпочтительно, хелатор выбран из группы, включающей DOTA, NOTA, DTPA, TETA, EDTA, NODAGA, NODASA, TRITA, CDTA, BAT, DFO или HYNIC, более предпочтительно, хелатор представляет собой DOTA.

Вариант осуществления изобретения 58: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения 56 или 57, где акцептор содержит ароматический фрагмент, где ароматический фрагмент выбран из группы, включающей индол и бензол, предпочтительно, бензол замещен, по меньшей мере, одним гетероатомом, где гетероатом выбран из группы, включающей O, N и S.

Вариант осуществления изобретения 59: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 2 до 58, предпочтительно, вариант осуществления изобретения 57, где эффектор представляет собой диагностически активный нуклид, предпочтительно, диагностически активный радионуклид, или терапевтически активный нуклид, предпочтительно, терапевтически активный радионуклид.

Вариант осуществления изобретения 60: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 59, где один из первой адресующей части TM1 и второй адресующей части TM2 выбран из группы, включающей антитело, связывающий антиген фрагмент антитела, тяжелую цепь верблюжьего IgG (hcIgG), антитело IFNAR хрящевых рыб, белковый каркас, мишень-связывающий пептид, пептидную нуклеиновую кислоту (PNA), мишень-связывающий полипептид или белок, мишень-связывающую молекулу нуклеиновой кислоты, углевод, липид и мишень-связывающую малую молекулу.

Вариант осуществления изобретения 61: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 60, где конъюгат выбран из группы, включающей конъюгаты формул (12), (12a), (13), (13a), (14), (14a), (15), (15a), (16), (16a), (17), (17a), (18), (18a), (19), (19a), (20), (20a), (21), (21a), (22), (22a), (23), (23a), (24), (24a), (25), (25a), (26), (26a), (27), (27a), (28), (29) и (30):

предпочтительно, конъюгатом являются конъюгаты формул (12), (13), (14), (15), (16), (17), (18), (21), (22), (23), (24), (25), (26) и (27), и диагностически активный радионуклид и терапевтически активный радионуклид образуют хелатное соединение с помощью хелаторов формул (12), (13), (14), (15), (16), (17), (18), (21), (22), (23), (24), (25), (26) и (27); более предпочтительно, диагностически активный радионуклид и терапевтически активный радионуклид выбран из группы, включающей ¹¹¹In, ¹⁷⁷Lu, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ⁶⁴Cu и ⁹⁰Y.

Вариант осуществления изобретения 62: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 2 до 61, где эффектор выбран из группы, включающей малую молекулу, антитело, антиген-связывающий фрагмент антитела, антикалин, аптамер, шпигельмер, антипролиферативный агент, антимиграционный агент, антиангиогенный агент, цитостатический агент, цитотоксический агент, антитромботический агент, противовоспалительный агент, антифлогистонный агент, антикоагулянтный агент, антибактериальный агент, противовирусный агент, противогрибковый агент, эндогенный флуорофор, полициклическое ароматическое соединение, кумарин, хинолин, индол, имидазол, УФ-возбужденный флуорофор, флуоресцеин, родамин, нафтоксантеновый краситель, фенантридин, BODIPY-краситель, цианин, фталоцианин, ксантен, акридин, оксазин, полиены, оксонол, бензимидазол, азаметин, стирил, тиазол, антрахинон, нафталимид, аза[18]аннулен, порфин, комплекс металл-лиганд, скварен, производное 8-гидроксихинолина, полиметин, нанокристалл, флуоресцентный белок, белок, перилен, фталоцианин, ап-конверсионный краситель, дикетопирролoпиррол, молекулу семейства порфиринов, включая, но этим не ограничиваясь, производное гематопорфирина и молекулу на основе производного гематопорфирина, производное бензопорфирина, 5-аминолевулиновую кислоту и тексапирин; молекулу семейства хлорофиллов, включая, но этим не ограничиваясь, хлорин, пурпурин и бактериохлорин; краситель, включая, но этим не ограничиваясь, фталоцианин и нафталоцианин, небольшой одноядерный или многоядерный парамагнитный хелат, металлoпорфирин, полимерный или макромолекулярный носитель, предпочтительно, ковалентно или нековалентно меченный парамагнитным хелатом), дисперстный CA, включая фторированную или нефторированную парамагнитную мицеллу или липосому и парамагнитную или супермагнитную частицу, например, оксид железа, Gd3+-меченный цеолит, диамагнитный CEST полимер; диамагнитный гиперполяризационный зонд, включая, но этим не ограничиваясь, газы и аэрозоли, ¹³C-меченное соединение или ион, улучшающий ультразвуковой контраст агент, содержащий оболочку и ядро, где оболочка, предпочтительно, состоит из вещества, выбранного из группы, включающей фосфолипид, поли-[D,L-лактид-ко-гликолид] (PLGA), сывороточный альбумин, полимер, перфлутрен, коллоид на основе углерода для определения смещения фаз, перфлексан, липид/галактозу, гексафторид серы, перфтороктил бромид, поверхностно-активное вещество, олигопептид и галактозу, и ядро, предпочтительно, состоит из вещества, выбранного из группы, включающей воздух, перфторуглерод, декафторбутан, октафторпропан, додекафторпентан и перфторбутан, углеродную нанотрубку, предпочтительно, однослойную углеродную нанотрубку или многослойную углеродную нанотрубку, фуллерен, дендример, квантовую точку, липосому, кремниевую наночастицу, магнитную наночастицу, липидную наночастицу, включая, но этим не ограничиваясь, наноэмульсию, полимерную наночастицу, наночастицу на основе альбумина и нанокристалл; и нуклеиновую кислоту, малую молекулу, аминокислоту, пептид, белок, углевод, липид, гликобелок, гликан или липобелки, предпочтительно, обладающие антипролиферативными, антимиграционными, антиангиогенными, цитостатическими и/или цитотоксическими свойствами.

Вариант осуществления изобретения 63: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 62, где первая мишень является такой же, как и вторая мишень.

Вариант осуществления изобретения 64: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 63, где первая адресующая часть и вторая адресующая часть нацелены на ту же мишень.

Вариант осуществления изобретения 65: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 64, где первая адресующая часть и вторая адресующая часть нацелены на ту же молекулу-мишень.

Вариант осуществления изобретения 66: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 62, где вторая адресующая часть TM2 нацелена на мишень, отличающуюся от мишени первой адресующей частью.

Вариант осуществления изобретения 67: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 66, где вторая адресующая часть нацелена на мишень, отличающуюся от рецептора нейротензина 1, и где, предпочтительно, первая адресующая часть TM1 нацелена на NTR, предпочтительно на NTR1.

Вариант осуществления изобретения 68: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 67, где мишень, атакуемая второй адресующей частью, представляет собой мишень, экспрессированную опухолевыми клетками.

Вариант осуществления изобретения 69: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 68, где опухоль выбрана из группы A, где группа A включает новообразования; новообразование, доброкачественное; новообразование, неясное, доброкачественное или злокачественное; новообразование, злокачественное; новообразование, метастатическое; новообразование, злокачественное, неясное, первичное или метастатическое; опухолевые клетки, доброкачественные; опухолевые клетки, неясные, доброкачественные или злокачественные; опухолевые клетки, злокачественные; злокачественную опухоль, мелкоклеточный тип; злокачественную опухоль, гигантоклеточный тип; злокачественную опухоль, ветереновидный клеточный тип; эпителиальные новообразования; эпителиальную опухоль, доброкачественную; карциному in situ; карциному; карциному, метастатическую; карциноматоз; эпителиому, доброкачественную; эпителиому, злокачественную; крупноклеточный рак; карциному, недифференцированный тип; карциному, анапластический тип; плеоморфную карциному; гигантоклеточную и веретеноклеточную карциному; гигантоклеточную карциному; веретеноклеточную карциному; псевдосаркоматоидную карциному; полигональноклеточный рак; рак из сферических клеток; микроопухоль; мелкоклеточную карциному; овсяно-клеточный рак; мелкоклеточный рак, ветереновидный тип клеток; папиллярные и плоскоклеточные новообразования; папиллому (за исключением папилломы мочевого пузыря M81201); папиллярную карциному in situ; папиллярную карциному; бородавчатую папиллому; бородавчатую карциному; плоскоклеточную папиллому; папиллярную плоскоклеточную карциному; инвертированную папиллому; папилломатоз; плоскоклеточную карциному in situ; плоскоклеточную карциному; плоскоклеточную карциному, метастатическую; плоскоклеточную карциному, ороговевающий тип; плоскоклеточную карциному, крупноклеточную, неороговевающий тип; плоскоклеточную карциному, мелкоклеточную, неороговевающий тип; плоскоклеточную карциному, веретеноклеточный тип; плоскоклеточный рак лимфоузлов; плоскоклеточную карциному in situ с сомнительной инвазией в строму; плоскоклеточную карциному, микроинвазивную; эритроплазию Кейру; болезнь Боуэну; лимфоэпителиальную карциному; базальноклеточные новообразования; базальноклеточную опухоль; базальноклеточную карциному; многоцентровую карциному базальных клеток; базальноклеточную карциному, тип очаговой склеродермии; базальноклеточную карциному, фиброэпителиальный тип; базальную плоскоклеточную карциному; метатипическую карциному; интраэпидермальную эпителиому Ядассона; трихоэпителиому; трихофолликулому; трихолеммому; пиломатриксому; переходно-клеточные папилломы и карциномы; переходно-клеточную папиллому; уротелиальную папиллому; переходно-клеточную карциному in situ; переходно-клеточную карциному; папиллому шнейдера; переходно-клеточную папиллому, инвертированный тип; карциному шнейдера; переходно-клеточную карциному, веретеноклеточный тип; базалоидную карциному; клоакогенный рак; папиллярную переходно-клеточную карциному; аденомы и аденокарциномы; аденому; бронхиальную аденому; аденокарциному in situ; аденокарциному; аденокарциному, метастатическую; фиброзную аденокарциному; пластический линит; поверхностный рак; аденокарциному, кишечный тип; карциному, диффузный тип; мономорфную аденому; базальноклеточную аденому; аденому; инсулярную карциному; инсулиному; инсулиному, злокачественную; глюкагоному; глюкагоному, злокачественную; гастриному; гастриному, злокачественную; смешанную инсулярную и экзокринную аденокарциному; аденому желчных протоков; холангиокарциному; цистаденому желчных протоков; цистаденокарциному желчных протоков; печеночно-клеточную аденому; гепатоцеллюлярную карциному; гепатохолангиому, доброкачественную; комбинированную гепатоцеллюлярную и холангиоцеллюлярную карциному; трабекулярную аденому; трабекулярную аденокарциному; эмбриональную аденому; эккринную кожную цилиндрому; аденокистозную карциному; решетчатую карциному; аденоматозный полип; аденокарциному в аденоматозном полипе; аденому; тубулярную аденокарциному; аденоматозный полипоз толстой кишки; аденокарциному при аденоматозном полипозе толстой кишки; множественные аденоматозные полипы; солидную карциному; недифференцированный рак; карциноидную опухоль; карциноидную опухоль, злокачественную; карциноидную опухоль, аргентаффиновую; карциноидную опухоль, аргентаффиновую, злокачественную; карциноидную опухоль, неаргентаффиновую; карциноидную опухоль, неаргентаффиновую, злокачественную; карциноидную опухоль в слизистой, злокачественную; сложную карциноидную опухоль; легочный аденоматоз; бронхиолоальвеолярный рак; альвеолярную аденому; альвеолярную аденокарциному; папиллярную аденому; папиллярную аденокарциному; ворсинчатую аденому; аденокарциному в ворсинчатой аденоме; ворсинчатую аденокарциному; тубулярно ворсинчатую аденому; хромофобную аденому; хромофобную карциному; ацидофильную аденому; ацидофильную карциному; смешанную ацидофильную-базофильную аденому; смешанную ацидофильную-базофильную карциному; оксифильную аденому; оксифильную аденокарциному; базофильную аденому; базофильную карциному; светлоклеточную аденому; светлоклеточную аденокарциному; гипернефроидную опухоль; почечно-клеточную карциному; светлоклеточную аденофиброму; зернисто-клеточную карциному; аденому из главных клеток; водянисто-светлоклеточную аденому, водянисто-светлоклеточную аденокарциному; смешанноклеточную аденому; смешанноклеточную аденокарциному; липоаденому; фоликуллярную аденому; фоликуллярную аденокарциному; фоликуллярную аденокарциному, хорошо дифференцированный тип; фоликуллярную аденокарциному, трабекулярный тип; микрофоликуллярную аденому; макрофоликуллярную аденому; папиллярную и фоликуллярную аденокарциному; некапсулированную склерозирующую карциному; полиэндокринные аденомы; юкстагломерулярную опухоль; аденому коры надпочечника; карциному коры надпочечника; аденому коры надпочечника, тип компактных клеток; аденому коры надпочечника, сильно пигментированный вариант; аденому коры надпочечника, светлоклеточный тип; аденому коры надпочечника из клеток клубочковой зоны; аденому коры надпочечника, смешанноклеточный тип; эндометриоидную аденому; эндометриоидную аденому, пограничной злокачественности; эндометриоидную карциному; эндометриоидную аденофиброму; эндометриоидную аденофиброму, пограничной злокачественности; эндометриоидную аденофиброму, злокачественную; аднексальные новообразования и новообразования придатков кожи; аденому придатков кожи; аденому потовых желез; опухоль потовых желез; аденокарциному потовых желез; апокринную аденому; апокринную аденокарциному; эккринную акроспирому; эккринную спираденому; гидроцистому; папиллярную гидраденому; папиллярную сирингоаденому; сирингому; аденому сальных желез; аденокарциному сальных желез; аденому серной железы; аденокарциному серной железы; мукоэпидермоидные новообразования; мукоэпидермоидную опухоль; мукоэпидермоидную карциному; кистозное, муцинозное и серозное новообразования; цистаденому; цистаденокарциному; серозную цистаденому; серозную цистаденому, пограничной злокачественности; серозную цистаденокарциному; папиллярную цистаденому; папиллярную цистаденому, пограничной злокачественности; папиллярную цистаденокарциному; папиллярную серозную цистаденому; папиллярную серозную цистаденому, пограничной злокачественности; папиллярную серозную цистаденокарциному; серозную поверхностную папиллому; серозную поверхностную папиллому, пограничной злокачественности; серозную поверхностную папиллярную карциному; муцинозную цистаденому; муцинозную цистаденому, пограничной злокачественности; муцинозную цистаденокарциному; папиллярную муцинозную цистаденому; папиллярную муцинозную цистаденому, пограничной злокачественности; папиллярную муцинозную цистаденокарциному; муцинозную аденому; муцинозную аденокарциному; псевдомиксому брюшины; муцинпроидуцирующую аденокарциному; перстневидно-клеточный рак; метастатический перстневидно-клеточный рак; протоковые, дольковые и медуллярные новообразования; внутрипротоковую карциному, неинфильтрирующую; инфильтрирующую протоковую карциному; комедокарциному, неинфильтрирующую; комедокарциному; ювенильную карциному молочной железы; внутрипротоковую папиллому; неинфильтрирующую внутрипротоковую папиллярную аденокарциному; внутрикистозную папиллярную аденому; неинфильтрирующую внутрикистозную карциному; внутрипротоковый папилломатоз; субареолярный протоковый папилломатоз; медуллярную карциному; медуллярную карциному с амилоидозом стромы; медуллярную карциному с лимфоидной стромой; дольковую карциному in situ; дольковую карциному; инфильтрирующую дуктулярную карциному; воспалительную карциному; болезнь Педжета, молочной железы; болезнь Педжета и инфильтрирующий протоковый рак молочной железы; экстрамамиллярный рак Педжета (исключая болезнь костей Педжета); новообразования из звездчатых клеток; аденому из звездчатых клеток; опухоль из звездчатых клеток; карциному из звездчатых клеток; сложные эпителиальные новообразования; аденосквамозный рак; аденолимфому; аденокарциному с плоскоклеточной метаплазией; аденокарциному с участками хрящевой и костной метаплазии; аденокарциному с веретеноклеточной метаплазией; аденокарциному с апокринной метаплазией; тимому, доброкачественную; тимому, злокачественную; ограниченную гонадную опухоль; секс шнур-стромальную опухоль; текому; тека-клеточную карциному; лютеому; зернисто-клеточную опухоль; зернисто-клеточную опухоль, злокачественную; зернисто-клеточную-тека-клеточную опухоль; андробластому, доброкачественную; андробластому, злокачественную; опухоль клеток Сертоли-Лейдига; арренобластому; тубулярную андробластому; карциному из клеток Сертоли; тубулярную андробластому с накоплением липидов; опухоль из клеток Лейдига, доброкачественную; опухоль из клеток Лейдига; опухоль из клеток Лейдига, злокачественную; клеточную внутрипротоковую опухоль; липидно-клеточную опухоль яичника; опухоль добавочного надпочечника; параганглиомы и гломусные опухоли; параганглиому, параганглиому, злокачественную; симпатическую параганглиому; парасимпатическую параганглиому, нехромаффинную параганглиому; хемодектому; опухоль каротидного тельца; экстра(вне)-надпочечниковую параганглиому; экстра(вне)-надпочечниковую параганглиому, злокачественную; феохромоцитому, феохромоцитому, злокачественную; гломангиосаркому; гломусную опухоль; гломангиому; невусы и меланому; пигментный невус; злокачественную меланому; узловую меланому; баллоноклеточный невус; баллоноклеточную меланому; галоневус; фиброзную папулу носа; нейроневус; магноцеллюлярный невус; непигментированный невус; амеланотическую меланому; юнкциональный невус; злокачественную меланому при юнкциональном невусе; предраковый меланоз; злокачественную меланому при предраковом меланозе; меланотическую веснушку Хатчинсона; злокачественную меланому при меланотической веснушке Хатчинсона; поверхностную распространяющуюся меланому; интрадермальный невус; сложный невус; гигантский пигментный невус; злокачественную меланому при гигантском пигментном невусе; эпителиоидный и веретеноклеточный невус; эпителиоидноклеточную меланому; веретеноклеточную меланому; веретеноклеточную меланому, тип A; веретеноклеточную меланому, тип B; смешанную эпителиоидную и веретеноклеточную меланому; голубой невус; голубой невус, злокачественный; целлюлярный голубой невус; опухоли мягких тканей и саркомы; опухоль мягких тканей, доброкачественную; саркому; саркоматоз; веретеноклеточную саркому; гигантоклеточную саркому (за исключением саркомы кости M92503); мелкоклеточную саркому; эпителиоидноклеточную саркому; фиброматозные новообразования; фиброму; фибросаркому; фибромиксому; фибромиксосаркому; периостальную фиброму; приостальную фибросаркому; фасциальную фиброму; фасциальную фибросаркому; инфантильную фибросаркому; иластофиброму; агрессивный фиброматоз; абдоминальный фиброматоз; десмопластическую фиброму; фиброзную гистиоцитому; атипичную фиброзную гистиоцитому; фиброзную гистиоцитому, злокачественную; фиброксантому; атипичную фиброксантому; фиброксантому, злокачественную; дерматофиброму; прогрессирующую рецидивирующую дерматофиброму; дерматофибросаркому; миксоматозные новообразования; миксому; миксосаркому; липоматозные новообразования; липому; липосаркому; фибролипому; липосаркому, хорошо дифференцированный тип; фибромиксолипому; миксоидную липосаркому; круглоклеточную липосаркому; плеоморфную липосаркому; липосаркому смешанного типа; внутримышечную липому; веретеноклеточную липому; ангиомиолипому; ангиомиолипосаркому; ангиолипому; ангиолипому, инфильтрирующую; миелолипому; гиперному; липобластоматоз; миоматозные новообразования; лейомиому; внутрисосудистый лейомиоматоз; лейомиосаркому; эпителиоидную лейомиому; эпителиоидную лейомиосаркому; целлюлярную лейомиому; лейомиому с причудливыми ядрами; ангиомиому; ангиомиосаркому; миому; миосаркому; рабдомиому; рабдомиосаркому; плеоморфную рабдомиосаркому; рабдомиосаркому смешанного типа; фетальную рабдомиому; взрослую рабдомиому; эмбриональную рабдомиосаркому; альвеолярную рабдомиосаркому; сложные смешанные и стромальные новообразования; эндометриальную стромальную саркому; эндолимфатический стромальный миоз; аденомиому; плеоморфную аденому; смешанную опухоль, злокачественную; смешанную мюллерову опухоль; мезодермальную смешанную опухоль; мезобластическую нефрому; нефробластому; эпителиальную нефробластому; мезенхимальную нефробластому; гепатобластому; карциносаркому; карциносаркому, эмбриональный тип; миоэпителиому; мезенхимому, доброкачественную; мезенхимому; мезенхимому, злокачественную; эмбриональную саркому; фиброэпителиальные новообразования; опухоль Бреннера; опухоль Бреннера, пограничной злокачественности; опухоль Бреннера, злокачественную; фиброаденому; внутриканальную фиброаденому; перитубулярную фиброаденому; аденофиброму; серозную аденофиброму; муцинозную аденофиброму; целлюлярную внутриканальную фиброаденому; листовидную цистосаркому; листовидную цистосаркому, злокачественную; ювенильную фиброаденому; синовиальные новообразования; синовиому, доброкачественную; синовиальную саркому; синовиальную саркому, веретеноклеточный тип; синовиальную саркому, эпителиоидный клеточный тип; синовиальную саркому, бифазный тип; светлоклеточную саркому сухожилий и апоневрозы; мезотелиальные новообразования; мезотелиому, доброкачественную; мезотелиому, злокачественную; фиброзную мезотелиому, доброкачественную; фиброзную мезотелиому, злокачественную; эпителиоидную мезотелиому, доброкачественную; эпителиоидную мезотелиому, злокачественную; мезотелиому, бифазный тип, доброкачественную; мезотелиому, бифазный тип, злокачественную; аденоматоидную опухоль; герминогенные новообразования; дисгерминому; семиному; семиному, анапластический тип; сперматоцитную семиному; герминому; эмбриональную карциному; опухоль эндодермального синуса; полиэмбриому; гонадобластому; тератому, доброкачественную; тератому; тератому, злокачественную; тератокарциному; злокачественную тератому, недифференцированный тип; злокачественную тератому, промежуточный тип; дермоидную кисту; дермоидную кисту со злокачественной трансформацией; яичниковый зоб; яичниковый зоб, злокачественный; струмальную карциноидную опухоль; трофобластические новообразования; пузырный занос; инвазивный пузырный занос; хориокарциному; хориокарциному, комбинированную с тератомой; злокачественную тератому; трофобласт; мезонефромы; мезонефрому, доброкачественную; мезонефроидную опухоль; мезонефрому, злокачественную; эндосальпингиому; опухоли кровеносных сосудов; гемангиому; гемангиосаркому; кавернозую гемангиому; венозную гемангиому; рацемозную гемангиому; звездоклеточную саркому; гемангиоэндотелиому, доброкачественную; гемангиоэндотелиому; гемангиоэндотелиому, злокачественную; капиллярную гемангиому; внутримышечную гемангиому; саркому Капоши; ангиокератому; бородавчатую кератоидную гемангиому; гемангиоперицитому, доброкачественную; гемангиоперицитому; гемангиоперицитому, злокачественную; ангиофиброму; гемангиобластому; опухоли лимфатических сосудов; лимфангиому; лимфангиосаркому; капиллярную лимфангиому; кавернозную лимфангиому; кистозную лимфангиому; лимфангиомиому; лимфангиомиоматоз; гемолимфангиому; остеомы и остеосаркомы; остеому; остеосаркому; хондробластическую остеосаркому; фибробластическую остеосаркому; телеангиэктатическую остеосаркому; остеосаркому при костной болезни Педжета; юкстакортикальную остеосаркому; остеоидную остеому; остеобластому; хондроматозные новообразования; остеохондрому; остеохондроматоз; хондрому; хондроматоз; хондросаркому; юкстакортикальную хондрому; юкстакортикальную хондросаркому; хондробластому; хондробластому, злокачественную; мезенхимальную хондросаркому; хондромиксоидную фиброму; гигантоклеточные опухоли; гигантоклеточную опухоль кости; гигантоклеточную опухоль кости, злокачественную; гигантоклеточную опухоль мягких тканей; злокачественную гигантоклеточную опухоль мягких тканей; неоднородные костные опухоли; саркому Юинга; адамантиному длинных костей; окостеневшую фиброму; одонтогенные опухоли; одонтогенную опухоль, доброкачественную; одонтогенную опухоль; одонтогенную опухоль, злокачественную; дентиному; цементому; цементобластому, доброкачественную; цементирующуюся фиброму; гигантскую цементому; одонтому; сложную одонтому; комплексную одонтому; амелобластическую фибро-одонтому; амелобластическую одонтосаркому; аденоматоидную одонтогенную опухоль; кальцинирующуюся одонтогенную кисту; амелобластому; амелобластому, злокачественную, одонтоамелобластому; сквамозную одонтогенную опухоль; одонтогенную миксому; одонтогенную фиброму; амелобластическую фиброму; амелобластическую фибросаркому; кальцинирующуюся эпителиальную одонтогенную опухоль; смешанные опухоли; краниофарингиому; пинеалому; пинеоцитому; пинеобластому; меланотическую нейроэктодермальную опухоль; хордому; глиомы; глиому, злокачественную; церебральный глиоматоз; смешанную глиому; субэпендимальную глиому; субэпендимальную гигантоклеточную астроцитому; папиллому хориоидного сплетения; папиллому хориоидного сплетения, злокачественную; эпендимому; эпендимому, анапластический тип; папиллярную эпендимому; миксопапиллярную эпендимому; астроцитому; астроцитому, анапластический тип; протоплазматическую астроцитому; гемистоцитарную астроцитому; фибриллярную астроцитому; пилоидную астроцитому; спонгиобластому; спонгиобластому полярную; астробластому; глиобластому; гигантоклеточную глиобластому; глиобластому с саркоматозным компонентом; примитивную полярную спонгиобластому; олигодендроглиому; олигодендроглиому, анапластический тип; олигодендробластому; медуллобластому; десмопластическую медуллобластому; медулломиобластому; мозжечковую саркому; монстроцеллюлярную саркому; нейроэпителиоматозные новообразования; ганглионейрому; ганглионейробластому; ганглионейроматоз; нейробластому; медуллоэпителиому; тератоидную медуллоэпителиому; нейроэпителиому; спонгионейробластому; ганглиоглиому; нейроцитому; пачиниеву опухоль; ретинобластому; ретинобластому, дифференцированный тип; ретинобластому, недифференцированный тип; ольфакторную нейрогенную опухоль; эстезионейроцитому; эстезионейробластому; эстезионейроэпителиому; менингиомы; менингиому; менингиоматоз; менингиому, злокачественную; менинготелиоматозную менингиому; фиброзную менингиому; псаммоматозную менингиому; ангиоматозную менингиому; гемангиобластическую менингиому; гемангиоперицитомную менингиому; переходную менингиому; папиллярную менингиому; менингеальный саркоматоз; опухоль оболочки нерва; нейрофиброму; нейрофиброматоз; нейрофибросаркому; меланотическую нейрофиброму; плексиформную нейрофиброму; неврилеммому; невриматоз; неврилеммому, злокачественную; нейрому; зернисто-клеточные опухоли и альвеолярную мягкотканую саркому; зернисто-клеточную опухоль; зернисто-клеточную опухоль, злокачественную; альвеолярную мягкотканую саркому; лимфомы; неуточненную или диффузную лимфоматозную опухоль; доброкачественную, злокачественную лимфому; злокачественную лимфому, неходжкинский тип; злокачественную лимфому, недифференцированный клеточный тип; злокачественную лимфому, тип стволовые клетки; злокачественную лимфому, тип конволютированные клетки; лимфосаркому; злокачественную лимфому, лимфоплазмацитоидный тип; злокачественную лимфому, иммуноластический тип; злокачественную лимфому, смешанную лимфоцитарную-гистиоцитную; злокачественную лимфому, центробластическую-центроцитарную, диффузную; злокачественную лимфому из клеток центрального фолликула; злокачественную лимфому, лимфоцитарную, хорошо дифференцированную; злокачественную лимфому, лимфоцитарную, промежуточной дифференциации; злокачественную лимфому, центроцитарную; злокачественную лимфому из клеток центрального фолликула, расщепленных; злокачественную лимфому, лимфоцитарную, слабо дифференцированную; пролимфоцитарную лимфосаркому; злокачественную лимфому, центробластический тип; злокачественную лимфому из клеток центрального фолликула, нерасщепленных; ретикулосаркомы; ретикулосаркому; ретикулосаркому, плеоморфную клеточного типа; ретикулосаркому, узловую; болезнь Ходжкина; болезнь Ходжкина, лимфоцитарное преобладание; болезнь Ходжкина, смешанная клеточность; болезнь Ходжкина, лимфоидное истощение; болезнь Ходжкина, лимфоидное истощение, диффузный фиброз; болезнь Ходжкина, лимфоидное истощение, ретикулярный тип; болезнь Ходжкина, склерозирующая узловая; болезнь Ходжкина, склерозирующая узловая, целлюлярная фаза; парагранулому Ходжкина; гранулому Ходжкина; саркому Ходжкина; лимфомы, узловую или фоликуллярную; злокачественную лимфому, узловую; злокачественную лимфому, смешанную лимфоцитарную-гистиоцитную; узловую; злокачественную лимфому, центробластическую-центроцитарную, фоликуллярную; злокачественную лимфому, лимфоцитарную, хорошо дифференцированную, узловую; злокачественную лимфому, лимфоцитарную, промежуточной дифференциации, узловую; злокачественную лимфому из клеток центрального фолликула, расщепленных, фоликуллярную; злокачественную лимфому, лимфоцитарную, слабо дифференцированную, узловую; злокачественную лимфому, центробластический тип, фоликуллярную; злокачественную лимфому из клеток центрального фолликула, нерасщепленных, фоликуллярую; грибовидный микоз; грибовидный микоз; болезнь Цезари; смешанные ретикулоэндотелиальные новообразования; микроглиому; злокачественный гистиоцитоз; гистиоцитный медуллярный ретикулоз; болезнь Леттерера-Сиве; плазмоклеточные опухоли; плазмоклеточную миелому; плазмоклеточную опухоль, доброкачественную; плазмоцитому; плазмоклеточную опухоль, злокачественную; тучноклеточные опухоли; мастоцитому; тучноклеточную саркому; злокачественную мастоцитоз; опухоль Беркитта; лейкемии; лейкоз; острый лейкоз; подострую лейкемию; хроническую лейкемию; алейкемический лейкоз; сложные лейкозы; сложный лейкоз; лимфоидные лейкозы; лимфолейкоз; острый лимфолейкоз; подострый лимфолейкоз; хронический лимфолейкоз; алейкемический лимфолейкоз; пролимфоцитарной лейкоз; лейкозы плазматических клеток; лейкоз плазматических клеток; эритролейкемии; эритролейкемию; острую эритремию; хроническую эритремию; лимфосаркомы клеток лейкемии; лимфосаркому клеток лейкемии; миелоидные лейкемии; миелоидную лейкемию; острую миелоидную лейкемию; подострую миелоидную лейкемию; хроническую миелоидную лейкемию; алейкемическую миелоидную лейкемию; нейрофильную лейкемию; острую промиелоцитарную лейкемию; базофильный лейкоз; базофильный лейкемию; эозинофильные лейкозы; эозинофильный лейкоз; моноцитарные лейкозы; моноцитарный лейкоз; острый моноцитарный лейкоз; подострый моноцитарный лейкоз; хронический моноцитарный лейкоз; алейкемический моноцитарный лейкоз; смешанные лейкозы; тучноклеточную лейкемию; мегакариоцитарную лейкемию; мегакариоцитарный миелоз; миелоидную саркому; волосатоклеточный лейкоз; смешанные миелопролиферативные и лимфопролиферативные заболевания; истинную полицитемию; острый панмиелоз; хроническое миелопролиферативное заболевание; миелосклероз с миелоидной метаплазией; идиопатическую тромбоцитемию; хроническое лимфопролиферативное заболевание; и острую лимфобластическую лейкемию (ОЛЛ), острый миелоидный лейкоз (ОМЛ), адренокортикальную карциному, онкологические заболевания, связанные со СПИДом, саркому Капоши, лимфому, рак анального канала, рак червеобразного отростка, астроцитомы, детские, атипичную тератоидную/рабдоидную опухоль, базальноклеточная карциному, рак желчных протоков, внепеченочный, рак мочевого пузыря, рак кости, опухоли семейства саркомы Юинга, остеосаркому и злокачественную фиброзную гистиоцитому, глиому ствола головного мозга, опухоль головного мозга, астроцитомы, опухоли головного и спинного мозга, атипичную тератоидо/рабдоидную опухоль центральной нервной системы, эмбриональные опухоли центральной нервной системы, герминогенные опухоли центральной нервной системы, краниофарингиому, эпендимому, рак молочной железы, рак молочной железы у мужчин, бронхиальные опухоли, лимфому Беркитта, карциноидную опухоль, гастроинтестинальный рак, аденокарциному без выявленного первичного очага, опухоли сердца, детские, атипичную тератоидо/рабдоидную опухоль центральной нервной системы, эмбриональные опухоли, герминогенную опухоль, детскую, лимфому, первичную, рак шейки матки, раковые заболевания у детей, хордому, хронический лимфолейкоз (ХЛЛ), хронический миелолейкоз (ХМЛ), хронические миелопролиферативные заболевания, рак толстой кишки, колоректальный рак, кожную Т-клеточную лимфому, внепеченочный рак желчных протоков, протоковую карциному in situ (DCIS), эмбриональные опухоли центральной нервной системы, эндометриальный рак, эпендимому, детскую, эзофагеальный рак, эстезионейробластому, саркому Юинга, внечерепную герминогенную опухоль, экстрагонодальную герминогенную опухоль, рак глаза, внутриглазную меланому, ретинобластому, злокачественную фиброзную гистиоцитому кости, остеосаркому, рак желчного пузыря, рак желудка, гастроинтестинальную карциноидную опухоль, стромальные опухоли желудочно-кишечного тракта (GIST), герминогенную опухоль, герминогенную опухоль центральной нервной системы, герминогенную опухоль яичника, тестикулярную герминогенную опухоль, гестационную трофобластическую болезнь, глиому, волосатоклеточный лейкоз, рак головы и шеи, рак сердца, детский, гепатоцеллюлярный рак, гистиоцитоз, клетку Лангерганса, лимфому Ходжкина, гипофарингеальный рак, инсулярные опухоли, нейроэндокринные опухоли поджелудочной железы, почки, почечно-клеточной рак, опухоль Вильмса, гистиоцитоз из клеток Лангерганса, рак гортани, лейкемию, рак губ и полости рта, рак печени (первичный), дольковую карциному in situ (LCIS), рак легких, немелкоклеточный рак легких, мелкоклеточный рак легких, связанную со СПИДом лимфому, лимфому не-Ходжкина, первичную лимфому центральной нервной системы (ЦНС), макроглобулинемию Вальденстрема, меланому, интраокулярную (глаз), карциному из клеток Меркеля, мезотелиому, злокачественную, метастатический сквамозный рак шеи с клинически неидентифицированной первичной опухолью с обнаруженными метастазами карциномы средней части пищеварительного тракта, включая ген NUT, рак ротовой полости, полиэндокринные синдромы неоплазии, детские, множественную миелому/плазмаклеточный неоплазм, грибовидный микоз, миелодиспластические синдромы, миелодиспластические/миелопролиферативные новообразования, миелоидный лейкоз, хронический (ХМЛ), макроглобулинемию Вальденстрема, меланому, интраокулярную (глаз), карциному из клеток Меркеля, мезотелиому, злокачественную, метастатический сквамозный рак шеи с клинически неидентифицированной первичной опухолью с обнаруженными метастазами, карциному средней части пищеварительного тракта с участием гена NUT, рак ротовой полости, полиэндокринные синдромы неоплазии, детские, множественную миелому/плазмаклеточный неоплазм, грибовидный микоз, миелодиспластические синдромы, миелодиспластические/миелопролиферативные новообразования, миелоидный лейкоз, хронический (ХМЛ), миелоидный лейкоз, острый (ОМЛ), множественную миелому, миелопролиферативные заболевания, хронические, рак носовой полости и околоносовых пазух, назофарингеальный рак, нейробластому, оральный рак, рак полости рта, губы и ротоглоточный рак, остеосаркому и злокачественную фиброзную гистиоцитому кости, эпителиальный рак яичника, пограничную опухоль яичника, рак поджелудочной железы, нейроэндокринные опухоли поджелудочной железы (инсулярные опухоли), детский папилломатоз, параганглиому, рак околоносовых пазух и носовой полости, рак паращитовидной железы, рак полового члена, фарингеальный рак, феохромоцитому, опухоль гипофиза, плазмоклеточный неоплазм/множественную миелому, плевролегочную бластому, детскую, беременность и рак молочной железы, рак простаты, ректальный рак, почечно-клеточный (почки) рак, переходно-клеточный рак почечной лоханки и мочеточника, рабдомиосаркому, детскую, рак слюнной железы, саркому Юинга, Капоши, остеосаркому (костный рак), рабдомиосаркому мягких тканей матки, синдром Сезари, рак кожи, немеланому, рак тонкой кишки, саркому мягких тканей, плоскоклеточную карциному-см. рак кожи (немеланома), сквамозный рак шеи с клинически неидентифицированной первичной опухолью с обнаруженными метастазами, рак желудка (желудочный), T-клеточную лимфому, кожный-см. грибовидный микоз и синдром Сезари, тестикулярный рак, рак горла, тимому и плоскоклеточную карциному, рак щитовидной железы, переходно-клеточный рак почечной лоханки и мочевого пузыря, карциному с неизвестной первичной локализацией, необычные злокачественные новообразования у детей, переходно-клеточный рак мочевого пузыря и почечной лоханки, уретральный рак, рак матки, эндометриальный, саркому матки, рак влагалища, рак вульвы, макроглобулинемию Вальденстрема и раковые заболевания женской половой сферы.

Вариант осуществления изобретения 70: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 69, где мишень выбрана из группы, включающей мишени, экспрессированные в какой-либо опухоли, злокачественном новообразовании, при опухолевом заболевании, раковом заболевании, признаке опухоли или признаке злокачественного новообразования, предпочтительно, мишень выбрана из группы B, где группа B содержит 14C5 антиген, антиген с молекулярной массой 18-22 кДа клеточной поверхности сквамозно-клеточной карциномы у людей, 3H11 антиген, A33 антиген, Abl киназу, активированную лейкоцитарную молекулу адгезии (ALCAM), активин-рецептороподобную киназу-1, AKT1, AKT2, AKT3, альдегидоксидазу, альдостерон синтазу, ALK, щелочную фосфатазу, рецептор фолиевой кислоты альфа, альфа(3)бета(1) интегрин, альфа(4)бета(1) интегрин, альфа(5)бета(1), альфа(v)бета(3) интегрин, альфа(v)бета(6) интегрин, альфа-1A адренергический рецептор, альфа-3 интегриновый рецептор, транспортер аминокислот ASC, транспортер аминокислот ASCT2, транспортер аминокислот L, аминопептидазу N (ANP, CD13), андрогенный рецептор (AR), ангиопоэтин-/-2, ангиопоэтин-1, ангиопоэтин-1 рецептор, антиапоптотический белок BCL-XL, анти-дансил (DNS) рецептор, антиген OC183B2, декарбоксилазу ароматических аминокислот (AAAD), рецептор предсердного натрийуретического пептида 1, рецептор предсердного натрийуретического пептида 2, транспортер аминокислот A-типа, Aurora C, Aurora-A, Aurora-B, авидин, B7-H3, BAFF, Bcl-2, Bcr-Abl-тирозин киназу, бета-2-микроглобулин (B2M), бета-галактозидазу, бета-глюкуронидазу, бета-субъединицу хорионического гонадотропина человека (бета-hCG), биотин, рецептор бомбензина, рецептор бомбезина подтипа 3, BRAF, Btk, антиген CA 125, CA19.9, CA27.29, CAAG-1/KAAG-1, кадгерин 2, кальцитонин, рецептор кальцитонина, кальциево-активируемый хлоридный канал, калпаин, поверхностно-связанные с раковыми клетками нуклеосомы, карбоангидразу II, карбоангидразу IX, карциноэмбриональный антиген (CEA), протеогликаны хрящевого матрикса, каспазу-3, каспазу-7, катенин, катепсин, катепсин B, катепсин D, катепсин E, катепсин K, катепсины H, CBP, CC49, рецептор CCK-1 (CCK-A), CCND1 (циклин D1), CD105 (эндоглин, EDG), CD117 (c-набор), CD11b, CD123, CD13, CD137 антиген, CD14 антигены, CD15, CD16a, CD16b, CD19, CD20, CD21, CD22, CD25, CD27, CD3, CD30, CD33, CD37, CD4, CD40, CD44 (сплайс-варианты, например, v6), CD44 рецептор, CD52, CD70, CD77 (гликосфинголипид Gb3), CD95, CD96, CDK1, CDK2, CDK2, CDK4, CDK4, CDK6, CDK7, CDK9, молекулу клеточной адгезии CEACAM, CEACAM5 (связанная с карциноэмбриональным антигеном молекула клеточной адгезии 5), нуклеолин клеточной поверхности, антиген p53 целлюлярной опухоли, центромерный белок E, хемокиновый рецептор 4 (CXCR4), рецептор холецистокинина подтипа 2 (CCK-2), рецептор холецистокинина типа A (CCK-A), холиновую киназу, холиновый транспортер, подобный холиновому транспортеру белок 4, хондроитинсульфат протеогликан TENB2, хромогранин A (CgA), CIF, CK2, рецептор клаудин 4, клаудин-18, клаудин-6, клустерин, c-MET, c-MYC, коллаген, коллаген XXIII, поверхностный гликобелок при раке толстой кишки, рецептор колониестимулирующего фактора-1 (CSF-1R), транспортер меди 1, рецептор кортикотропин-рилизинг фактора 1 (CRFR1), рецептор кортикотропин-рилизинг фактора 2 (CRFR2), COX-2, коксаки-аденовирусный рецептор (CAR), CTLA4, циклин зависимую киназу, цистин-глутаматный обменник, цитохром p450 (гипоксическая ткань), ферменты семейства 11B цитохрома P450, рецептор эпидермального фактора роста de2-7, дельта подобный 4, дисиалоганглиозид 2 (GD2), дисиалоганглиозиды, белок DKK2, ДНК топоизомеразу I, ДНК топоизомеразу II, допаминовый рецептор D2, DPPIV, DR5, E2F1, E-кадгерин, фибронектин ED-A, фибронектин ED-B, рецептор EGF HER2, EGFR (HER1), тирозин киназу EGFR, EGFR2, EGFRivIII, EGFRvIII, EGP-1 (эпителиальный гликопротеин-1), eIF4E, фактор элонгации 1A, EMMPRIN (CD147), эндосиалин, рецептор эндостатина, рецептор эндотелина A (ETA), рецептор эндотелина B, белок ENG, EpCAM (адгезивная молекула эпителиальных клеток), рецептор EphA2, EphrinB4 рецептор, эпидермальный фактор роста домен-подобный-7 (EGFL7), рецептор эпидермального фактора роста 3, рецептор эпидермального фактора роста вариант удаления, de2-8, ErbB2, ErbB-2 экстрацеллюлярный домен, рецептор эритропоэтина, E-селектин, рецептор эстрогена (ER), FAK, фарнезил-трансферазу, ферритин, рецептор FGF, рецептор FGF-3, фибрин, альфа-цепь, фибрин-фибронектиновый комплексы, фибриноген, белок активации фибробластов альфа (FAPα), фибронектин, Flt3, эмбриональный антиген-2, фолат-гидролазу, рецептор фолата, рецептор эстрогена, сопряженный с G-белком, рецептор галактозы, галектин-3, гамма-секретазу, гамма-семинопротеин, желудочную слизь, рецепторы гастрина, рецептор гастрин-высвобождающего пептида (ГВП), рецептор гастрин/холецистокинина-2 (CCK-2, CCK-B), антиген GD3, желатиназу B (матриксная металлопротеиназа 9, MMP-9), желатиназы (MMP-2), GIP (гастроингибиторный полипептид), рецептор глюкагон-подобного пептида 1, глюкокортикоидный рецептор (GR), глюкозный транспортер, глюкозный транспортер (GLUT1), глюкозный транспортер (GLUT5), глюкозидазу, систему транспортеров GLUT, глутаматкарбоксипептидазу II (GCP II), глутаматные транспортеры, транспортер глютамина, гликоген синтазу киназу-3 бета, рецептор гликобелков IIb/IIIa (GPIIb/IIIa рецептор), глипикан 3, GnRH, рецептор гонадотропин-рилизинг гормона, gpA33, GPNMB, рецептор GPR54, рецептор гуанилатциклазы C (GC-C), гаптоглобин β-цепь из раковых клеток простаты, HB-EGF, HDM2, HE4, белок теплового шока HSP 90, гепаран сульфат протеогликаны (HSPG), гепараназу, кофактор гепарина II (неоваскулярный эндотелий), фактор роста гепатоцитов (HGF), рецептор фактора роста гепатоцитов, гепсин, HER3, гексокиназу, рецептор липопротеинов высокой плотности (HDLR), гистондеацетилазу (HDAC), гистондеацетилазу 4, гистондеацетилазу 6, антиген HLA-DR, HLA-DR10, HММ-MAA (меланома-ассоциированный антиген с высокой молекулярной массой), hsp70, поверхностный антиген клетки глиомы человека, белок спермы человека 17, гиалуронидазу (HAdase), гипоксия-индуцируемый фактор 1 (HIF-1), IGF1R, IgG1, рецептор IL-13, IL-1β, IL-4R, IL-6, IL-6R, IL-8RB, индуцибельную синтазу оксида азота (iNOS), белок, связывающий инсулиноподобный фактор роста 7 (IGFBP7), инсулиновый рецептор, инсулиноподобный фактор роста, рецептор инсулиноподобного фактора роста 1 (IGF-1R), интегрин α2β1, интегрин αvβ4, интегрины αvβ5, молекулу межклеточной адгезии 1 (ICAM-1), рецептор интерлейкина 11 (IL-11R), рецептор интерлейкина 11 р, альфа-цепь, интерлейкин 13 альфа 2, рецептор интерлейкина 18 (IL-18R), рецептор интерлейкина 2 (IL-2R), рецептор интерлейкина 6 (IL-6R), интерлейкин-18, рецептор интерлейкина-7, кишечную щелочную фосфатазу, JAK1, JAK2, JAK3, JNK1/MAPK8, рецептор, содержащий домен вставки киназы (KDR), белок веретена деления кинезин, KIR, белок клеточной адгезии L1, антиген L1-CAM, антиген La, лактатдегидрогеназу, рецептор лактоферрина, LAG3, ламинин, рецептор ламинина, L-транспортер аминокислот (LAT), LAT1, LAT2, лектин, лектин, легумаин/аспарагинил эндопептидазу, лейкотриен A4 гидролазу, рецептор 1 лейкотриена B4, антиген Льюиса Y, рецептор липопротеинов низкой плотности (LDLR), белок-1, связанный с рецептором липопротеинов низкой плотности, LRRC15, рецептор гормона, высвобождающего лютеинизирующий гормон, рецептор к лютеинизирующему гормону/хорионическому гонадотропину (LH/CG), рецептор гиалуронана 1 эндотелия лимфатических сосудов (LYVE-1), макрофагальный колониестимулирующий фактор 1, маммаглобин-A, MAP киназу p38, MARK3, матриксную металлопротеиназу 2 (MMP-2), матриксную металлопротеиназу 7 (MMP-7), матриксную металлопротеиназу-12, матриксную металлопротеиназу 13, матриксную металлопротеиназу-9, матриксные металлопротеиназы (мембранный тип-1), Mcl-1, MCT1, MCT4, Mdr1, MEK1, MEK2, рецептор меланокортина 1 (MC1R), меланин, феномеланин, рецептор меланоцит-стимулирующего гормона, фактор мезенхимально-эпителиального перехода (c-Met), мезотелин, мезотелин-ADC, микросомальную эпоксидгидролазу, микротрубочки, MIF, миндин/RG-1 белок экстрацеллюлярного матрикса, митотический кинезин Eg5, MMP14, MMP-3, моноаминоксидазу B (MAO-B), моносиалоганглиозид (сиалозилированный антиген Lea), MTF-1, mTOR, MTORC1, MTORC2, MUC1, муцин MUC2, белок, ассоциированный с множественной лекарственной устойчивостью 1, Na+-зависимый мио-инозитоловый котранспортер-1/2 (SMIT-1/2), N-ацетил α-связанную кислотой дипептидазу (NAALADase), N-ацетилированную альфа-связанную L-амино дипептидазу, NAD-зависимую деацетилазу сиртуин-1, NADH оксидазу, NCAM, нектин-4, неприлизин, нейтральный кадгерин, нейтральную молекулу клеточной адгезии (NCAM), нейробластома-специфичный антиген клеточной поверхности, рецептор нейрокинина 1 (NK1), рецептор нейромедина-B (NMBR), рецептор нейромедина-K (NK-3R), рецептор 1 нейропептида Y (NPY1-R), рецептор 2 нейропептида Y (NPY2-R), рецептор нейропептида Y типа 4 (NPY4-R), нейропилин-1, рецепторы нейропилина-1, нейротензин, рецептор нейротензина, рецептор нейротензина 1 (NTSR1), рецептор нейротензина 2 (NTSR2), никотиновый ацетилхолиновый рецептор, альфа4бета2, не-камптотецин топо 1, Notch, NPY, NRH дегидрогеназу [хинон] 2, NRP1, NTRK1, ядерный фактор каппа-B, белок матрикса ядра 22, нуклеолин, NY-ESO-1, OX40, рецептор окситоцина, P70-S6 киназу 1, PARP-1, PD-1, PDGFR, PDGFRA, PDGFRB, периферальный бензодиазепиновый рецептор (PBR), пероксиредоксин I, гамма-рецептор, активируемый пролифератором пероксисом (PPARгамма), P-гликобелок (Pgp), фосфатидилэтаноламин, фосфатидилсерин, PI3K, PIGF, PIK-1, PIM киназу, рецептор активирующего гипофизарную аденилатциклазу полипептида типа I, плацентарную щелочную фосфатазу (PLAP), ингибитор активаторов плазминогена (PAI-1), плектин-1, PlGF, PLK-1, PNK3 (протеинкиназа N3), поло-подобную киназу 1 (PLK1), поли [ADP-рибоза] полимеразу 1, рецептор полиамина, рецептор прогестерона (PR), рецептор прогестина, лиганд 1 белка программируемой смерти клеток (PD-L1), рецептор пролактина, пропрессофизин-подобный белок антиген клеточной поверхности, простата-специфичный антиген, антиген стволовых клеток предстательной железы (PSCA), простатический специфический мембранный антиген (PSMA), протеинкиназу B, протеинкиназу C, протеинкиназу D, белок-тирозин фосфатазу SHP-1, прото-онкогенный c-набор; тирозин-протеинкиназный набор; рецептор фактора роста тучных/стволовых клеток; CD117, PSCA, PTPN1, пуромицин чувствительную аминопептидазу (PSA), Raf-1, RANKL, Ras, рецептор конечных продуктов усиленного гликозилирования (RAGE), ренин, рецептор ретиноидной кислоты альфа, рибозилдигидроникотинамид дегидрогеназу, Robo1, Robo4, RON, секретин, сериновую протеазу матриптазу, серин-рацемазу, серин/треонин киназу (Akt), серин/треонин-протеинкиназу Chk1, серин/треонин-протеинкиназу Chk2, серин/треонин-протеинкиназу PLK, Siglec-15, рецептор сигма-2, сигма-рецептор, SIRT1, smoothened-рецептор, соматостатиновый рецептор, соматостатиновый рецептор 1 (SSTR1), соматостатиновый рецептор 2 (SSTR2), соматостатиновый рецептор 3 (SSTR3), соматостатиновый рецептор подтипа 4, соматостатиновый рецептор типа 5, сортилин (NTR3), сфингозин-киназу, Src, STAT3, Stathim, STEAP1, стерилсульфатазу, рецептор вещества P (NK-1R), рецептор вещества K (NK-2R), сурвивин, Syk, TAG 72, теломеразу, TEM5, TEM8, тенасцин, тенасцин-C, TENB2, TFPI, TGF-бета 1, TGF-бета 2, TGF-бета 3, тиоредоксин, тиоредоксин редуктазу, антиген Томсена-Фриденрейха, тимидинкиназу, тимидинфосфорилазу, тироглобулин, тканевый фактор, Toll-подобный рецептор 9, топоизомеразу, TORC1, трансферриновый рецептор (TfR), транслокаторный белок, белок TRPM8, тубулин (микротрубочки), ассоциированный с опухолью гликобелок 72 (TAG-72), эндотелиальный опухолевый маркер 1 (TEM1), рецептор фактора некроза опухоли, рецептор 1 родственного фактору некроза опухоли лиганда, индуцирующего апоптоз (TRAIL-R1), рецептор 2 родственного фактору некроза опухоли лиганда, индуцирующего апоптоз (TRAILR2), фактор некроза опухоли-α, опухолеспецифический антиген гликобелка IOR C2, TWEAK, TYK2, тирозин гидроксилазу, антиген - недостаточно гликозилированный муцин (uMUC-1), уридин-цитидин киназу 2 (UCK2), урокиназу, рецептор урокиназного активатора плазминогена, рецептор урокиназного активатора плазминогена, рецептор активатор плазминогена урокиназного типа (uPAR), молекулу адгезии сосудистого эндотелия 1 (VCAM-1), сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), рецептор сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGFR), рецептор сосудистого эндотелиального фактора роста 2 (VEGFR2), рецептор сосудистого эндотелиального фактора роста 3, рецептор вазоактивного кишечного пептида (VPAC1), рецептор вазоактивного кишечного полипептида 2 (VPAC2), изоформ VEGF A, VEGFB, VEGF-C, белок 2 потенциалозависимого анион селективного канала (VDAC2), белок 3 потенциалозависимого анион селективного канала (VDAC3), киназу Wee1A, XIAP, α-фетобелок (AFP), рецептор β-D-галактозы и β-глюкуронидазу.

Вариант осуществления изобретения 71: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 70, где вторая адресующая часть выбрана из группы, включающей антитело, связывающий антиген фрагмент антитела, тяжелую цепь верблюжьего IgG (hcIgG), антитело IFNAR хрящевых рыб, белковый каркас, мишень-связывающий пептид, пептидную нуклеиновую кислоту (PNA), мишень-связывающий полипептид или белок, мишень-связывающую молекулу нуклеиновой кислоты, углевод, липид и мишень-связывающую малую молекулу.

Вариант осуществления изобретения 72: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 2 до 71, где эффектор представляет собой диагностически активный нуклид или терапевтически активный нуклид, где диагностически активный нуклид и терапевтически активный радионуклид, отдельно и независимо, выбраны из группы, включающей ^113mIn, ^99mTc, ⁶⁷Ga, ⁵²Fe, ⁶⁸Ga, ⁷²As, ¹¹¹In, ⁹⁷Ru, ²⁰³Pb, ⁶²Cu, ⁶⁴Cu, ⁵¹Cr, ^52mMn, ¹⁵⁷Gd, ⁶⁴Cu, ⁸⁹Zr, и ¹⁷⁷Lu, ¹⁸⁶Re, ⁹⁰Y, ⁶⁷Cu, ⁶⁸Ga, ⁶⁹Er, ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁴²Pr, ¹⁴³Pr, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ¹⁶¹Tb, ¹⁰⁹Pd, ¹⁸⁸Rd, ¹⁸⁸Re, ⁷⁷As, ¹⁶⁶Dy, ¹⁶⁶Ho, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁵³Sm, ¹⁵⁹Gd, ¹⁷²Tm, ⁹⁰Y, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁰⁵Rh, ¹¹¹Ag, ²¹³Bi, ²²⁵Ac, ^177mSn и ²²⁷Th.

Вариант осуществления изобретения 73: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 72, где конъюгат взаимодействует с рецептором нейротензина, где рецептор нейротензина, предпочтительно, выбран из группы, включающей рецептор нейротензина 1 (NTR1) и рецептор нейротензина 2 (NTR2).

Вариант осуществления изобретения 74: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 73, где конъюгат представляет собой антагонист NTR, предпочтительно, NTR1.

Вариант осуществления изобретения 75: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 74, где конъюгат имеет IC₅₀, равную 100 нМ или менее, предпочтительно, 50 нМ или менее, для мишени, на которую нацелена либо первая адресующая часть TM1, либо для мишени, на которую нацелена вторая адресующая мишень TM2, предпочтительно, конъюгат имеет IC₅₀, равную 100 нМ или менее, предпочтительно, 50 нМ или менее для NTR, более предпочтительно, для NTR1.

Вариант осуществления изобретения 76: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 75, где адресующая часть отличается от гликозида.

Вариант осуществления изобретения 77: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 76, где гликозид представляет собой N-гликозид, C-гликозид, O-гликозид или S-гликозид, предпочтительно, гликозид представляет собой N-гликозид.

Вариант осуществления изобретения 78: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 77, где конъюгат отличается от соединения (89), включая ¹⁸F аналог этого соединения:

Вариант осуществления изобретения 79: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 78 для применения в способе диагностики заболевания.

Вариант осуществления изобретения 80: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 79, где заболеванием является заболевание с участием мишени, на которую нацелена первая адресующая часть TM1 или вторая адресующая часть TM2, предпочтительно, заболеванием является заболевание с участием рецептора нейротензина, более предпочтительно, заболеванием является заболевание с участием рецептора нейротензина 1.

Вариант осуществления изобретения 81: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 80, где заболеванием является заболевание, не связанное с тканью центральной нервной системы и/или клетками центральной нервной системы.

Вариант осуществления изобретения 82: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 79 до 81, где заболевание выбрано из группы, включающей опухоли и гематологические злокачественные новообразования.

Вариант осуществления изобретения 83: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 82, где опухоль выбрана из группы, включающей протоковую аденокарциному поджелудочной железы, мелкоклеточный рак легких, рак простаты, колоректальный рак, рак молочной железы, менингиому, саркому Юинга, мезотелиому плевры, рак головы и шеи, немелкоклеточный рак легких, стромальные опухоли желудочно-кишечного тракта, лейомиому матки и Т-клеточную лимфому кожи, предпочтительно, протоковую аденокарциному поджелудочной железы, мелкоклеточный рак легких, рак простаты, колоректальный рак, рак молочной железы, менингиому, саркому Юинга, и показания, относящиеся к группе A, как это определено в настоящем документе.

Вариант осуществления изобретения 84: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 79 до 83, где эффектор представляет собой радиоактивный металл, где, предпочтительно, радиоактивный металл образует хелатное соединение с помощью акцептора, где акцептор представляет собой хелатор.

Вариант осуществления изобретения 85: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 84, где радиоактивным металлом является диагностически эффективный радиоактивный металл.

Вариант осуществления изобретения 86: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 85, где радиоактивный металл выбран из группы, включающей ^113mIn, ^99mTc, ⁶⁷Ga, ⁵²Fe, ⁶⁸Ga, ⁷²As, ¹¹¹In, ⁹⁷Ru, ²⁰³Pb, ⁶²Cu, ⁶⁴Cu, ⁵¹Cr, ^52mMn, ¹⁵⁷Gd, ⁶⁴Cu, ⁸⁹Zr и ¹⁷⁷Lu; более предпочтительно, радиоактивный металл выбран из группы, включающей ^99mTc, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ¹¹¹In, ⁸⁹Zr и ¹⁷⁷Lu; и, более предпочтительно, радиоактивным металлом является ¹¹¹In, ¹⁷⁷Lu или ⁸⁹Zr.

Вариант осуществления изобретения 87: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 79 до 83, где эффектор представляет собой радионуклид, где, предпочтительно, радионуклид ковалентно связан с акцептором, где акцептор содержит ароматический фрагмент, где ароматический фрагмент выбран из группы, включающей индол и бензол, предпочтительно, бензол замещен, по меньшей мере, одним гетероатомом, где гетероатом выбран из группы, включающей O, N и S.

Вариант осуществления изобретения 88: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 87, где радионуклид представляет собой диагностически эффективный радиоактивный галоген.

Вариант осуществления изобретения 89: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 88, где радиоактивный галоген выбран из группы, включающей ¹⁸F, ¹²³I, ¹²⁴I, ¹²⁵I, ¹³¹I, ⁷⁵Br, ⁷⁶Br, ⁷⁷Br, ⁸²Br и ²¹¹At; более предпочтительно, радионуклид выбран из группы, включающей ¹²³I, ¹²⁴I.

Вариант осуществления изобретения 90: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 79 до 89, где способом диагностики является метод визуализации.

Вариант осуществления изобретения 91: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 90, где метод визуализации выбран из группы, включающей сцинтиграфию, однофотонную эмиссионную компьютерную томографию (ОФЭКТ) и позитронно-эмиссионную томографию (ПЭТ).

Вариант осуществления изобретения 92: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 79 до 91, где способ включает введение диагностически эффективного количества соединения субъекту, предпочтительно, млекопитающему, где млекопитающее выбрано из группы, включающей человека, домашних животных, домашних питомцев и домашний скот, более предпочтительно, субъект выбран из группы, включающей человека, собаку, кошку, лошадь и корову, и, наиболее предпочтительно, пациентом является человек.

Вариант осуществления изобретения 93: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 78, для применения в способе лечения заболевания.

Вариант осуществления изобретения 94: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 93, где заболеванием является заболевание с участием мишени, на которую нацелена первая адресующая часть TM1 или вторая адресующая часть TM2, предпочтительно, заболеванием является заболевание с участием рецептора нейротензина, предпочтительно, заболеванием является заболевание с участием рецептора нейротензина 1.

Вариант осуществления изобретения 95: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 94, где заболеванием является заболевание, не связанное с тканью центральной нервной системы и/или клетками центральной нервной системы.

Вариант осуществления изобретения 96: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 93 до 94, где заболевание выбрано из группы, включающей опухоли и гематологические злокачественные новообразования.

Вариант осуществления изобретения 97: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 96, где опухоль выбрана из группы, включающей протоковую аденокарциному поджелудочной железы, мелкоклеточный рак легких, рак простаты, колоректальный рак, рак молочной железы, менингиому, саркому Юинга, мезотелиому плевры, рак головы и шеи, немелкоклеточный рак легких, стромальные опухоли желудочно-кишечного тракта, лейомиому матки и Т-клеточную лимфому кожи, предпочтительно, протоковую аденокарциному поджелудочной железы, мелкоклеточный рак легких, рак простаты, колоректальный рак, рак молочной железы, менингиому, саркому Юинга и показания, относящиеся к группе A, определенной в настоящем документе.

Вариант осуществления изобретения 98: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 95 до 97, где эффектор представляет собой терапевтически активный агент.

Вариант осуществления изобретения 99: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 93 до 98, где способ включает введение терапевтически эффективного количества конъюгата субъекту, предпочтительно, млекопитающему, где млекопитающее выбрано из группы, включающей человека, домашних животных, домашних питомцев и домашний скот, более предпочтительно, субъект выбран из группы, включающей человека, собаку, кошку, лошадь и корову, и, наиболее предпочтительно, пациентом является человек.

Вариант осуществления изобретения 100: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 93 до 97, где эффектор представляет собой радиоактивный металл, где, предпочтительно, радиоактивный металл образует хелатное соединение с помощью акцептора, где акцептор представляет собой хелатор.

Вариант осуществления изобретения 101: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 100, где радиоактивный металл выбран из группы, включающей ¹⁸⁶Re, ⁹⁰Y, ⁶⁷Cu, ⁶⁸Ga, ⁶⁹Er, ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁴²Pr, ¹⁴³Pr, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ¹⁶¹Tb, ¹⁰⁹Pd, ¹⁸⁸Rd, ¹⁸⁸Re, ⁷⁷As, ¹⁶⁶Dy, ¹⁶⁶Ho, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁵³Sm, ¹⁵⁹Gd, ¹⁷²Tm, ⁹⁰Y, ¹¹¹In, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷⁷Lu, ¹⁰⁵Rh, ¹¹¹Ag, ²¹³Bi, ²²⁵Ac, ⁶⁴Cu, ^177mSn и ²²⁷Th, предпочтительно, радиоактивный металл выбран из группы, включающей ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ⁹⁰Y, ¹⁵³Sm, ⁶⁸Ga и ¹⁷⁷Lu; и, более предпочтительно, радиоактивный металл выбран из группы, включающей ⁹⁰Y и ¹⁷⁷Lu.

Вариант осуществления изобретения 102: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 93 до 99, где эффектор представляет собой радионуклид, где, предпочтительно, радионуклид ковалентно связан с акцептором, где акцептор содержит ароматический фрагмент, где ароматический фрагмент выбран из группы, включающей индол и бензол, предпочтительно, бензол замещен, по меньшей мере, одним гетероатомом, где гетероатом выбран из группы, включающей O, N и S.

Вариант осуществления изобретения 103: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 102, где радионуклидом является радиоактивный галоген.

Вариант осуществления изобретения 104: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 103, где радиоактивный галоген выбран из группы, включающей ¹²³I, ¹²⁵I и ¹²⁹I.

Вариант осуществления изобретения 105: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 78 для применения в способе идентификации пациента, будет ли пациент реагировать или, вероятно, не будет реагировать на лечение заболевания, где способ идентификации пациента включает проведение способа диагностики с использованием соединения по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 78, предпочтительно, способ диагностики заболевания, как описано в любом из вариантов осуществления изобретения от 79 до 92.

Вариант осуществления изобретения 106: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 78 для применения в способе применения в способе выбора пациента из группы пациентов, которые возможно будут реагировать или, вероятно, не будут реагировать на лечение заболевания, где способ выбора пациента из группы пациентов включает проведение способа диагностики с использованием соединения по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 78, предпочтительно, способ диагностики заболевания, как описано в любом из вариантов осуществления изобретения от 79 до 92.

Вариант осуществления изобретения 107: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 78 для применения в способе стратификации группы пациентов на пациентов, которые вероятно отреагируют на лечение заболевания, и на пациентов, которые вероятно не отреагируют на лечение заболевания, где способ стратификации группы пациентов включает проведение способа диагностики с использованием соединения по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 78, предпочтительно, способ диагностики заболевания, как описано в любом из вариантов осуществления изобретения от 79 до 92.

Вариант осуществления изобретения 108: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 105 до 107, где заболеванием является заболевание с участием рецептора нейротензина, предпочтительно, заболеванием является заболевание с участием рецептора нейротензина 1.

Вариант осуществления изобретения 109: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 108, где заболеванием является заболевание, не связанное с тканью центральной нервной системы и/или клетками центральной нервной системы.

Вариант осуществления изобретения 110: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 105 до 109, где заболевание выбрано из группы, включающей опухоли и гематологические злокачественные новообразования.

Вариант осуществления изобретения 111: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 110, где опухоль выбрана из группы, включающей протоковую аденокарциному поджелудочной железы, мелкоклеточный рак легких, рак простаты, колоректальный рак, рак молочной железы, менингиому, саркому Юинга, мезотелиому плевры, рак головы и шеи, немелкоклеточный рак легких, стромальные опухоли желудочно-кишечного тракта, лейомиому матки и Т-клеточную лимфому кожи, предпочтительно, протоковую аденокарциному поджелудочной железы, мелкоклеточный рак легких, рак простаты, колоректальный рак, рак молочной железы, менингиома, саркому Юинга, и показания, относящиеся к группе A как это определено в настоящем документе.

Вариант осуществления изобретения 112: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 105 до 111, где способом диагностики является метод визуализации.

Вариант осуществления изобретения 113: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 112, где метод визуализации выбран из группы, включающей сцинтиграфию, однофотонную эмиссионную компьютерную томографию (ОФЭКТ) и позитронно-эмиссионную томографию (ПЭТ).

Вариант осуществления изобретения 114: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 105 до 113, предпочтительно, по любому из вариантов осуществления изобретения 112 и 113, где эффектор представляет собой радиоактивный металл, где, предпочтительно, радиоактивный металл образует хелатное соединение с акцептором, где акцептор представляет собой хелатор.

Вариант осуществления изобретения 115: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 105 до 113, предпочтительно, по любому из вариантов осуществления изобретения 112 и 113, где эффектор представляет собой радиоактивный галоген, где, предпочтительно, радиоактивный галоген ковалентно связан акцептором, где акцептор содержит ароматический фрагмент, где ароматический фрагмент выбран из группы, включающей индол и бензол, предпочтительно, бензол замещен, по меньшей мере, одним гетероатомом, где гетероатом выбран из группы, включающей O, N и S.

Вариант осуществления изобретения 116: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 78 для применения в способе доставки эффектора к рецептору нейротензина, предпочтительно, рецептору нейротензина 1, или для применения в способе доставки эффектора к мишени, на которую нацелена либо первая адресующая часть TM1, либо вторая адресующая часть TM2, где эффектор выбран из группы, включающей диагностически активный агент и терапевтически активный агент.

Вариант осуществления изобретения 117: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 116, где рецептор нейротензина экспрессируется клеткой и/или тканью, где, предпочтительно, экспрессирующая нейротензин клетка и/или экспрессирующая нейротензин ткань отличается от клетки центральной нервной системы и/или ткани центральной нервной системы.

Вариант осуществления изобретения 118: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 116 до 117, где экспрессирующей NTR1 тканью является экспрессирующая NTR1 ткань опухоли или экспрессирующая NTR1 ткань гематологической злокачественной опухоли, и где экспрессирующей NTR1 клеткой является экспрессирующая NTR1 опухолевая клетка или экспрессирующая NTR1 клетка гематологической злокачественной опухоли.

Вариант осуществления изобретения 119: Конъюгат по варианту осуществления изобретения 118, где опухоль выбрана из группы, включающей протоковую аденокарциному поджелудочной железы, мелкоклеточный рак легких, рак простаты, колоректальный рак, рак молочной железы, менингиому, саркому Юинга, мезотелиому плевры, рак головы и шеи, немелкоклеточный рак легких, стромальные опухоли желудочно-кишечного тракта, лейомиому матки и Т-клеточную лимфому кожи, предпочтительно, протоковую аденокарциному поджелудочной железы, мелкоклеточный рак легких, рак простаты, колоректальный рак, рак молочной железы, менингиому, саркому Юинга, и показания, относящиеся к группе A как это определено в настоящем документе.

Вариант осуществления изобретения 120: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 105 до 119, где эффектор представляет собой радионуклид, предпочтительно, радиоактивный металл или радиоактивный галоген, более предпочтительно, эффектор представляет собой эффектор соединения по любому из вариантов осуществления изобретения от 1 до 78.

Вариант осуществления изобретения 121: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 116 до 120, где способ включает введение эффективного количества соединения и/или эффектора субъекту, предпочтительно, млекопитающему, где млекопитающее выбрано из группы, включающей человека, домашних животных, домашних питомцев и домашний скот, более предпочтительно, субъект выбран из группы, включающей человека, собаку, кошку, лошадь и корову, и наиболее предпочтительно, пациентом является человек.

Вариант осуществления изобретения 122: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 116 до 121, где доставка осуществляется для диагностики, лечения и/или комбинации диагностики и лечения.

Вариант осуществления изобретения 123: Конъюгат по любому из вариантов осуществления изобретения от 121 до 122, где эффективным количеством является диагностически эффективное количество и/или терапевтически эффективное количество.

Вариант осуществления изобретения 124: Композиция, предпочтительно, фармацевтическая композиции, где композиция содержит соединение в соответствии с любым из вариантов осуществления изобретения от 1 до 78 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

Вариант осуществления изобретения 125: Композиция по варианту осуществления изобретения 124 для применения в любом способе, определенном в любом из предшествующих вариантов осуществления изобретения.

Вариант осуществления изобретения 126: Способ диагностики заболевания у пациента, где способ включает введение пациенту диагностически эффективного количества соединения в соответствии с любым из вариантов осуществления изобретения от 1 до 78.

Вариант осуществления изобретения 127: Способ по варианту осуществления изобретения 126, где конъюгат содержит диагностически активный агент, причем агентом является, предпочтительно, радионуклид.

Вариант осуществления изобретения 128: Способ лечения заболевания у пациента, где способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества конъюгата в соответствии с любым из вариантов осуществления изобретения от 1 до 79.

Вариант осуществления изобретения 129: Способ по варианту осуществления изобретения 128, где конъюгат содержит терапевтически активный агент, причем агентом является, предпочтительно, радионуклид.

Вариант осуществления изобретения 130: Способ в соответствии с любым из вариантов осуществления изобретения от 126 до 129, где заболеванием является заболевание с участием рецептора нейротензина, предпочтительно, заболеванием является заболевание с участием рецептора нейротензина 1 или заболеванием с участием мишени, на которую нацелена первая адресующую часть TM1 или вторая адресующая часть TM2.

Вариант осуществления изобретения 131: Способ в соответствии с любым из вариантов осуществления изобретения от 126 до 129, где заболевание выбрано из группы, включающей опухоли и гематологические злокачественные новообразования.

Вариант осуществления изобретения 132: Набор, содержащий конъюгат в соответствии с любым из вариантов осуществления изобретения от 1 до 78, один или несколько из возможных вспомогательных веществ и, необязательно, одно или несколько устройств, где устройство выбрано из группы, включающей маркировочное устройство, устройство для очистки, манипулятор, радиопротекторное устройство, аналитическое устройство или устройство для доставки.

Вариант осуществления изобретения 133: Набор по варианту осуществления изобретения 132 для применения в любом способе, определенном в любом из предшествующих вариантов осуществления изобретения.

Настоящее изобретение основано на неожиданном обнаружении авторами настоящего изобретения, что конъюгат по настоящему изобретению не только связывается с NTR1 с высокой аффинностью, но и не проникает через гематоэнцефалический барьер. Эта характеристика позволяет применять конъюгат по настоящему изобретению при диагностике, а также при лечении заболеваний, таких как, но этим не ограничиваясь, опухолей, особенно опухолей, отличных от опухолей центральной нервной системы, в различных их формах, более конкретно, в таких их формах, при которых требуется прохождение диагностически и/или терапевтически эффективного агента через гематоэнцефалический барьер. C этими характеристиками согласуется высокое и стойкое поглощение опухолями и, в частности, экспрессирующими NTR1 опухолями, а также экспрессирующими NTR1 гематологическими злокачественными опухолями, в сочетании с низким уровнем поглощения и быстрым выведением немишеневыми органами, таким образом, обеспечивая превосходное соотношение между накоплением в опухоли и накоплением в соответствующей нормальной ткани. При использовании соединения по изобретению, соотношение между накоплением в опухоли и накоплением в соответствующей нормальной ткани составляет, по меньшей мере, 1,5, предпочтительно, больше чем 2, и, более предпочтительно, больше чем 5. Соотношение между накоплением в опухоли и накоплением в соответствующей нормальной ткани, предпочтительно, определяется как интенсивность сигнала опухоли, деленной на интенсивность фонового сигнала. Интенсивность сигналов обычно, как правило, измеряется с помощью анализа представляющей интерес области (ROI) опухоли и анализа ROI окружающих здоровых тканей в качестве фона (смотри, Palmedo et al., Nucl Med Biol, 2002, 29, 809-815). Вышеописанное обнаружение еще более удивительно, поскольку конъюгат по настоящему изобретению включает вторую целевую часть, где такая вторая адресующая часть не оказывает нежелательного воздействия на характеристики первой адресующей части. Не желая быть связанными какой-либо теорией, изобретатели настоящей заявки предполагают, что связывание конъюгата с NTR1 опосредуется адресующей частью, где такая адресующая часть представляет собой соединение формулы (2):

где

R³, R⁴ и R⁵, каждый и независимо, выбраны из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил, при условии, что один из R³, R⁴ и R⁵ представлен следующей формулой (3)

где

ALK̓ представляет собой (C₂-C₅)алкилиден;

R⁶ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил; и

R⁷ представляет собой связь.

Еще одним удивительным обнаружением, лежащим в основе настоящего изобретения, является то, что путем связывания соединения формулы (2) с каким-либо из остальных фрагментов конъюгата по изобретению посредством связи, представленной R⁷, такой другой фрагмент и другие фрагменты, соответственно, не оказывают вредного влияния на общие характеристики связывания соединений по изобретению с NTR1, по крайней мере, не до такой степени, что делало бы связывание конъюгата по настоящему изобретению неспецифическим, таким, которое, предпочтительно, приводило бы к значению IC50 конъюгата по настоящему изобретению по отношению к NTR1 более 10 мкм, или которое не позволяло бы использовать конъюгат по настоящему изобретению в различных способах, описанных в настоящем документе, и, в частности, в способах лечения и/или профилактики заболевания, как определено в данном документе, и в способах диагностики заболевания, как определено в данном документе. Таким образом, неожиданно, положение R⁷, то есть образование связи, представленной R⁷, как представляется, не препятствует связыванию конъюгата по настоящему изобретению с NTR1. Благодаря этому другие остатки, присоединенные к соединению формулы (2) в конъюгате по настоящему изобретению, могут варьироваться в широком диапазоне, что дополнительно подтверждается в разделе примеров.

В свете указанных неожиданно обнаруженных характеристик, но не желая быть связанными какой-либо теорией, благодаря этим двум адресующим частям, в рамках индикации может быть успешно диагностировано и, соответственно, пройти лечение, большее количество пациентов. Кроме того, можно успешно диагностировать и, соответственно, подвергнуть лечению все больше поражений в расчете на одного пациента. Кроме того, возможно, что поражение может быть обработано более однородно и тем самым более эффективно, в том случае, если две адресующие части конъюгата по настоящему изобретению нацелены на различные мишени, и, если мишени неоднородно экспрессированы в поражении, однако каждая из мишеней для конъюгата по настоящему изобретению экспрессирует по-разному, что выражается уровнем экспрессии и/или пространственным профилем экспрессии. Кроме того, таким образом можно диагностировать и, соответственно, подвергнуть лечению опухоли, экспрессирующие мишень с низкой плотностью, такой как, например, 5000 копий мишень или менее в расчете на опухолевую клетку, при этом указанные опухоли экспрессируют вторую мишень с высокой плотностью, такой как, например, больше чем 5000 копий второй мишени на опухолевую клетку. Кроме того, таким образом возможно диагностировать и, соответственно, подвергнуть лечению опухоли, экспрессирующие первую мишень с низкой плотностью, такой как, например, 5000 копий мишени или менее на опухолевую клетку, при этом указанные опухоли экспрессируют любое число копий второй мишени, на которую нацелен конъюгат по настоящему изобретению. Следовательно, также благодаря эффектам авидности и повторного связывания достигается более длительное время удерживания, которое согласуется с более эффективной дозой, и, таким образом, улучшением диагностики и терапии соответствующего заболевания. Благодаря связывающим характеристикам конъюгата по настоящему изобретению возможно также нацеливание на первую мишень, на которую нацелена первая адресующая часть, и, таким образом, на клетку, ткань и орган, соответственно, экспрессирующих такую первая мишень, независимо от нацеливания на вторую мишень, на которую нацелена вторая адресующая часть и, таким образом, на клетку, ткань и орган, соответственно, экспрессирующих такую вторую мишень; и наоборот. И, наконец, мишень по настоящему изобретению, если она конъюгирована с эффектором, предоставляет такой эффектор в активной форме, несмотря на то, что эффектор связан с конъюгатом.

В зависимости от характеристик первой адресующей части конъюгата по настоящему изобретению с точки зрения того, является ли такая первая адресующая часть агонистом или антагонистом мишени, на которую нацелена первая адресующая часть, и от характеристик второй адресующей части конъюгата по настоящему изобретению с точки зрения того, является ли такая вторая адресующая часть агонистом или антагонистом мишени, на которую нацелена вторая адресующая часть, общие характеристики конъюгата по изобретению будут превалировать в качестве агониста или превалировать в качестве антагониста. Например, в случае, когда первая адресующая часть нацелена на NTR1, первая адресующая часть обычно представляет собой антагонист; если в таких условиях вторая адресующая часть нацелена на вторую мишень, которая, в одном варианте осуществления изобретения, отличается от NTR1, или которая, в альтернативном варианте осуществления изобретения, представляет собой NTR1, и такая вторая адресующая часть также действует как антагонист для такой второй мишени, то конъюгат по настоящему изобретению обычно рассматривается как антагонист; если, однако, вторая адресующая часть нацелена на вторую мишень, которая, в одном варианте осуществления изобретения, отличается от NTR1, или которая, в альтернативном варианте осуществления изобретения, представляет собой NTR1, и такая вторая адресующая часть действует как агонист для такой второй мишень, конъюгат по настоящему изобретению по существу обладает свойствами как антагониста, так и агониста. В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению такие конъюгат интернализирован клеткой, где, предпочтительно, такая интернализация предоставляет эффектор, то есть диагностически активный эффектор и/или терапевтически активный эффектор, диагностически эффективный и, соответственно, терапевтически эффективный. В предпочтительном варианте осуществления изобретения конъюгата по настоящему изобретению конъюгат содержит адресующую часть, которая действует как агонист мишени, на которую нацелена такая адресующая часть, и где активность такого агониста приводит к интернализации конъюгата по настоящему изобретению в клетку.

В одном варианте осуществления изобретения конъюгат по настоящему изобретению является антагонистом по отношению к NTR1. Неожиданным обнаружением явилась пригодность антагониста к NTR1 для применения в диагностике и/или терапии заболеваний и, в частности, заболеваний с участием экспрессирующих NTR1 клеток и экспрессирующей NTR1 ткани. В данной области техники преобладающим мнением является, что для того, чтобы обеспечить подходящие средства для диагностики и/или лечения таких заболеваний, должен использоваться агонист к NTR1, особенно, если диагностически активный агент или терапевтически активный агент, обычно называемый как эффектор, является радиомеченым, такой как радионуклид. Разумным основанием для такого мнения в данной области техники является то, что для эффективности in vivo диагностики и терапии, особенно в случае, когда в такой диагностике и терапии используется радиоактивная метка, такая как радионуклид, присоединенный к соединению, обладающему аффинностью к мишеневой молекуле, такой как рецептор, необходимо, чтобы такое соединение демонстрировало хорошие свойства интернализации, приводящие к высокому уровню накопления и удерживания in vivo соединения, и, таким образом, эффектора в ткани и клетках, соответственно, экспрессирующих молекулу-мишень. Как хорошо известно из молекулярно-фармакологических исследований, эффективность интернализации обычно обеспечивается преимущественно агонистами (Bodei et al., J. Nucl. Med., 2006, 47, 375-377; Koenig et al., Trends Pharmacol. Sci., 1997, 18, 276-287; Cescato et al., J. Nucl. Med., 2006, 47, 502-511; Ginj et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2006, 103, 16436-16441), поэтому предполагается использование агонистов молекул-мишеней, а не антагонистов молекул-мишеней. В соответствии с этим и, как является очевидным из упомянутого выше предшествующего уровня техники, соединение, подходящее для применения в диагностике и/или терапии заболевания, где в заболевании участвуют экспрессирующие NTR1 клетки и экспрессирующая NTR1 ткань, соответственно, должно вызывать или выявлять диагностический или терапевтический эффект NTR1 путем взаимодействия с NTR1, при помощи которого соединение далее интернализуется в экспрессирующие NTR1 клетки. Из-за этого этот вид соединения предшествующего уровня техники действует в качестве агониста к NTR1. Такая интернализации, предпочтительно, происходит с помощью эндоцитоза. В противоположность этому, антагонист к NTR1 в качестве конъюгата по изобретению нейтрализует действие агониста к NTR1 и, предпочтительно, не интернализуется в NTR1 экспрессирующих клетках. В связи с этим следует отметить, что авторы настоящего изобретения обнаружили, что конъюгат по изобретению неожиданно связывается с более высоким числом участков связывания по сравнению с агонистом, имеющим сопоставимую аффинность связывания.

Выражение алкил, как предпочтительно используется в настоящем документе, относится, каждое и по отдельности, к насыщенной углеводородной группе с прямой или разветвленной цепью и обычно сопровождается префиксом, который определяет число атомов углерода, которое она может содержать. Например, выражение (C₁-C₆)алкил означает, каждый и по отдельности, любой из метила, этила, н-пропила, изопропила, н-бутила, изобутила, втор-бутила, трет-бутила, н-пентила, 1-метил-бутила, 1-этил-пропила, 3-метил-бутила, 1,2-диметил-пропила, 2-метил-бутила, 1,1-диметил-пропила, 2,2-диметилпропила, н-гексила, 1,1-диметил-бутила и любых других изоформ алкильных групп, содержащих шесть насыщенных атомов углерода.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, (C₁-C₄)алкил означает, каждый и по отдельности, любой из метила, этила, н-пропила, изопропила, н-бутила, изобутила, втор-бутила и трет-бутила.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, (C₂-C₅)алкил означает, каждый и по отдельности, любой из этила, н-пропила, изопропила, н-бутила, изобутила, втор-бутила, трет-бутила, н-пентила, 2-пентила, 2-метил-бутила, 3-метил-бутила, 3-пентила, 3-метил-бут-2-ила, 2-метил-бут-2-ила и 2,2-диметилпропила.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, (C₁-C₅)алкил означает, каждый и по отдельности, любой из метила, этила, н-пропила, изопропила, н-бутила, изобутила, втор-бутила, трет-бутила, н-пентила, 2-пентила, 2-метил-бутила, 3-метил-бутила, 3-пентила, 3-метил-бут-2-ила, 2-метил-бут-2-ила и 2,2-диметилпропила.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, (C₁-C₆)алкил означает, каждый и по отдельности, любой из метила, этила, н-пропила, изопропила, н-бутила, изобутила, втор-бутила, трет-бутила, н-пентила, 2-пентила, 2-метил-бутила, 3-метил-бутила, 3-пентила, 3-метил-бут-2-ила, 2-метил-бут-2-ила, 2,2-диметилпропила, н-гексила, 2-гексила, 2-метил-пентила, 3-метил-пентила, 4-метил-пентила, 3-гексила, 2-этил-бутила, 2-метил-пент-2-ила, 2,2-диметил-бутила, 3,3-диметил-бутила, 3-метил-пент-2-ила, 4-метил-пент-2-ила, 2,3-диметил-бутила, 3-метил-пент-3-ила, 2-метил-пент-3-ила, 2,3-диметил-бут-2-ила и 3,3-диметил-бут-2-ила.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, (C₁-C₈)алкил относится к насыщенной или ненасыщенной углеводородной группе с прямой или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 8 атомов углерода. Типичные представители (C₁-C₈)алкильных групп включают, но этим не ограничиваются, любую из метила, этила, н-пропила, изопропила, н-бутила, изобутила, втор-бутила, трет-бутила, н-пентила, 2-пентила, 2-метил-бутила, 3-метил-бутила, 3-пентила, 3-метил-бут-2-ила, 2-метил-бут-2-ила, 2,2-диметилпропила, н-гексила, 2-гексила, 2-метил-пентила, 3-метил-пентила, 4-метил-пентила, 3-гексила, 2-этил-бутила, 2-метил-пент-2-ила, 2,2-диметил-бутила, 3,3-диметил-бутила, 3-метил-пент-2-ила, 4-метил-пент-2-ила, 2,3-диметил-бутила, 3-метил-пент-3-ила, 2-метил-пент-3-ила, 2,3-диметил-бут-2-ила, 3,3-диметил-бут-2-ила, н-гептила, 2-гептила, 2-метил-гексила, 3-метил-гексила, 4-метил-гексила, 5-метил-гексила, 3-гептила, 2-этил-пентила, 3-этил-пентила, 4-гептила, 2-метил-гекс-2-ила, 2,2-диметил-пентила, 3,3-диметил-пентила, 4,4-диметил-пентила, 3-метил-гекс-2-ила, 4-метил-гекс-2-ила, 5-метил-гекс-2-ила, 2,3-диметил-пентила, 2,4-диметил-пентила, 3,4-диметил-пентила, 3-метил-гекс-3-ила, 2-этил-2-метил-бутила, 4-метил-гекс-3-ила, 5-метил-гекс-3-ила, 2-этил-3-метил-бутила, 2,3-диметил-пент-2-ила, 2,4-диметил-пент-2-ила, 3,3-диметил-пент-2-ила, 4,4-диметил-пент-2-ила, 2,2,3-триметил-бутила, 2,3,3-триметил-бутила, 2,3,3-триметил-бут-2-ила, н-октила, 2-октила, 2-метил-гептила, 3-метил-гептила, 4-метил-гептила, 5-метил-гептила, 6-метил-гептила, 3-октила, 2-этил-гексила, 3-этил-гексила, 4-этил-гексила, 4-октила, 2-пропил-пентила, 2-метил-гепт-2-ила, 2,2-диметил-гексила, 3,3-диметил-гексила, 4,4-диметил-гексила, 5,5-диметил-гексила, 3-метил-гепт-2-ила, 4-метил-гепт-2-ила, 5-метил-гепт-2-ила, 6-метил-гепт-2-ила, 2,3-диметил-гекс-1-ила, 2,4-диметил-гекс-1-ила, 2,5-диметил-гекс-1-ила, 3,4-диметил-гекс-1-ила, 3,5-диметил-гекс-1-ила, 3,5-диметил-гекс-1-ила, 3-метил-гепт-3-ила, 2-этил-2-метил-1-ила, 3-этил-3-метил-1-ила, 4-метил-гепт-3-ила, 5-метил-гепт-3-ила, 6-метил-гепт-3-ила, 2-этил-3-метил-пентила, 2-этил-4-метил-пентила, 3-этил-4-метил-пентила, 2,3-диметил-гекс-2-ила, 2,4-диметил-гекс-2-ила, 2,5-диметил-гекс-2-ила, 3,3-диметил-гекс-2-ила, 3,4-диметил-гекс-2-ила, 3,5-диметил-гекс-2-ила, 4,4-диметил-гекс-2-ила, 4,5-диметил-гекс-2-ила, 5,5-диметил-гекс-2-ила, 2,2,3-триметил-пентила, 2,2,4-триметил-пентила, 2,3,3-триметил-пентила, 2,3,4-триметил-пентила, 2,4,4-триметил-пентила, 3,3,4-триметил-пентила, 3,4,4-триметил-пентила, 2,3,3-триметил-пент-2-ила, 2,3,4-триметил-пент-2-ила, 2,4,4-триметил-пент-2-ила, 3,4,4-триметил-пент-2-ила, 2,2,3,3-тетраметил-бутила, 3,4-диметил-гекс-3-ила, 3,5-диметил-гекс-3-ила, 4,4-диметил-гекс-3-ила, 4,5-диметил-гекс-3-ила, 5,5-диметил-гекс-3-ила, 3-этил-3-метил-пент-2-ила, 3-этил-4-метил-пент-2-ила, 3-этил-гекс-3-ила, 2,2-диэтил-бутила, 3-этил-3-метил-пентила, 4-этил-гекс-3-ила, 5-метил-гепт-3-ила, 2-этил-3-метил-пентила, 4-метил-гепт-4-ила, 3-метил-гепт-4-ила, 2-метил-гепт-4-ила, 3-этил-гекс-2-ила, 2-этил-2-метил-пентила, 2-изопропил-пентила, 2,2-диметил-гекс-3-ила, 2,2,4-триметил-пент-3-ила и 2-этил-3-метил-пентила. (C₁-C₈)алкильная группа может быть незамещенной или может быть замещена одной или более группами, включая, но этим не ограничиваясь, (C₁-C₈)алкил, -O-[(C₁-C₈)алкил], -арил, -CO-R', -O-CO-R', -CO-OR', -CO-NH₂, -CO-NHR', -CO-NR'₂, -NH-CO-R', -SO₂-R', -SO-R', -OH, -галоген, -N₃, -NH₂, -NHR', -NR'₂ и -CN; где каждый R' независимо выбран из -(C₁-C₈)алкила и арила.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, (C₃-C₆)алкил означает, каждый и по отдельности, любой из N-пропила, изопропила, н-бутила, изобутила, втор-бутила, трет-бутила, н-пентила, 2-пентила, 2-метил-бутила, 3-метил-бутила, 3-пентила, 3-метил-бут-2-ила, 2-метил-бут-2-ила, 2,2-диметилпропила, н-гексила, 2-гексила, 2-метил-пентила, 3-метил-пентила, 4-метил-пентила, 3-гексила, 2-этил-бутила, 2-метил-пент-2-ила, 2,2-диметил-бутила, 3,3-диметил-бутила, 3-метил-пент-2-ила, 4-метил-пент-2-ила, 2,3-диметил-бутила, 3-метил-пент-3-ила, 2-метил-пент-3-ила, 2,3-диметил-бут-2-ила и 3,3-диметил-бут-2-ила.

Выражение алкилиден, как предпочтительно используется в настоящем документе, относится к насыщенной углеводородной группе с прямой или разветвленной цепью, где указаны две точки замещения. Простые алкильные цепи, где две точки замещения находятся на максимальном расстоянии друг от друга, такие как метан-1,1-диил, этан-1,2-диил, пропан-1,3-диил, бутан-1,4-диил и пентан-1,5-диил указываются также как метилен (который упоминается также как метан-1,1-диил), этилен (который упоминается также как этан-1,2-диил), пропилен (который упоминается также как пропан-1,3-диил), бутилен (который упоминается также как бутан-1,4-диил) и пентилен (который упоминается также как пентан-1,5-диил).

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, (C₁-C₄)алкилиден означает, каждый и по отдельности, любой из метилена, этан-1,2-диила, пропан-1,3-диила, пропан-1,2-диила, бутан-1,4-диила, бутан-1,3-диила, бутан-1,2-диила, 2-метил-пропан-1,2-диила и 2-метил-пропан-1,3-диила.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, (C₂-C₅)алкилиден означает, каждый и по отдельности, любой из этан-1,2-диила, пропан-1,3-диила, пропан-1,2-диила, бутан-1,4-диила, бутан-1,3-диила, бутан-1,2-диила, 2-метил-пропан-1,2-диила, 2-метил-пропан-1,3-диила, пентан-1,5-диила, пентан-1,4-диила, пентан-1,3-диила, пентан-1,2-диила, пентан-2,3-диила, пентан-2,4-диила и любого другого разветвленного изомера с 5 атомами углерода, предпочтительно, (C₂-C₅)алкилиден означает, каждый и по отдельности, любой из этан-1,2-диила, пропан-1,3-диила, бутан-1,4-диила и пентан-1,5-диила.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, (C₂-C₁₀)алкилиден означает, каждый и по отдельности, любой из этан-1,2-диила, пропан-1,3-диила, пропан-1,2-диила, бутан-1,4-диила, бутан-1,3-диила, бутан-1,2-диила, 2-метил-пропан-1,2-диила, 2-метил-пропан-1,3-диила, пентан-1,5-диила, пентан-1,4-диила, пентан-1,3-диила, пентан-1,2-диила, пентан-2,3-диила, пентан-2,4-диила, любого другого изомера с 5 атомами углерода, гексан-1,6-диила, любого другого изомера с 6 атомами углерода, гептан-1,7-диила, любого другого изомера с 7 атомами углерода, октан-1,8-диила, любого другого изомера с 8 атомами углерода, нонан-1,9-диила, любого другого изомера с 9 атомами углерода, декан-1,10-диила и любого другого изомера с 10 атомами углерода, предпочтительно, (C₂-C₁₀) алкилиден означает, каждый и по отдельности, любой из этан-1,2-диила, пропан-1,3-диила, бутан-1,4-диила, пентан-1,5-диила, гексан-1,6-диила, гептан-1,7-диила, октан-1,8-диила, нонан-1,9-диила и декан-1,10-диила.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, (C₁-C₁₀)алкилиден означает, каждый и по отдельности, любой из метилена, этан-1,2-диила, пропан-1,3-диила, пропан-1,2-диила, бутан-1,4-диила, бутан-1,3-диила, бутан-1,2-диила, 2-метил-пропан-1,2-диила, 2-метил-пропан-1,3-диила, пентан-1,5-диила, пентан-1,4-диила, пентан-1,3-диила, пентан-1,2-диила, пентан-2,3-диила, пентан-2,4-диила, любого другого изомера с 5 атомами углерода, гексан-1,6-диила, любого другого изомера с 6 атомами углерода, гептан-1,7-диила, любого другого изомера с 7 атомами углерода, октан-1,8-диила, любого другого изомера с 8 атомами углерода, нонан-1,9-диила, любого другого изомера с 9 атомами углерода, декан-1,10-диила и любого другого изомера с 10 атомами углерода, предпочтительно, (C₁-C₁₀) алкилиден означает, каждый и по отдельности, любой из метилена, этан-1,2-диила, пропан-1,3-диила, бутан-1,4-диила, пентан-1,5-диила, гексан-1,6-диила, гептан-1,7-диила, октан-1,8-диила, нонан-1,9-диила и декан-1,10-диила. (C₁-C₁₀)алкилиденовая группа может быть незамещенной или может быть замещена одной или более группами, включая, но этим не ограничиваясь, (C₁-C₈)алкил, -O-[(C₁-C₈)алкил], -арил, -CO-R', -O-CO-R', -CO-OR', -CO-NH₂, -CO-NHR', -CO-NR'₂, -NH-CO-R', -SO₂-R', -SO-R', -OH, -галоген, -N₃, -NH₂, -NHR', -NR'₂ и -CN; где каждый R' независимо выбран из -(C₁-C₈)алкила и арила.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, «арил» относится к карбоциклической ароматической группе. Примеры арильных групп включают, но этим не ограничиваются, фенил, нафтил и антраценил. Карбоциклическая ароматическая группа или гетероциклическая ароматическая группа может быть незамещенной или может быть замещена одной или более группами, включая, но этим не ограничиваясь, -(C₁-C₈)алкил, -O-[(C₁-C₈)алкил], -арил, -CO-R', -O-CO-R', -CO-OR', -CO-NH₂, -CO-NHR', -CO-NR'₂, -NH-CO-R', -SO₂-R', -SO-R', -OH, -галоген, -N₃, -NH₂, -NHR', -NR'₂ и -CN; где каждый R', независимо, выбран из -(C₁-C₈)алкила и арила.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, (C₃-C₈)циклоалкил означает, каждый и по отдельности, любой из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила, циклогептила и циклооктила.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, (C₃-C₈) карбоцикл относится к 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-членному насыщенному или ненасыщенному неароматическому карбоциклическому кольцу. Характерные (C₃-C₈)карбоциклы включают, но этим не ограничиваются, любой из -циклопропила, -циклобутила, -циклопентила, -циклопентадиенила, -циклогексила, -циклогексенила, -1,3-циклогексадиенила, -1,4-циклогексадиенила, -циклогептила, -1,3-циклогептадиенила, -1,3,5-циклогептатриенила, -циклооктила и -циклооктадиенила. (C₃-C₈)карбоциклильная группа может быть незамещенной или может быть замещена одной или более группами, включая, но этим не ограничиваясь, (C₁-C₈)алкил, -O-[(C₁-C₈)алкил], -арил, -CO-R', -O-CO-R', -CO-OR', -CO-NH₂, -CO-NHR', -CO-NR'₂, -NH-CO-R', -SO₂-R', -SO-R', -OH, -галоген, -N₃, -NH₂, -NHR', -NR'₂ и -CN; где каждый R' независимо выбран из -(C₁-C₈)алкила и арила.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, (C₃-C₈)карбоцикло относится к (C₃-C₈)карбоциклильной группе, определенной выше, где один из атомов водорода карбоциклильной группы заменен на связь.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, (C₃-C₈)циклоалкилметил означает, каждый и по отдельности, любой из циклопропилметила, циклобутилметила, циклопентилметила, циклогексилметила, циклогептилметила и циклооктилметила.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, арилен относится к арильной группе, которая имеет две ковалентные связи и может быть орто, мета или пара конфигурации, как показано на следующих структурах:

в которых фенильная группа может быть незамещенной или может быть замещена четырьмя группами, включая, но этим не ограничиваясь, (C₁-C₈)алкил, -O-[(C₁-C₈)алкил], -арил, -CO-R', -O-CO-R', -CO-OR', -CO-NH₂, -CO-NHR', -CO-NR'₂, -NH-CO-R', -SO₂-R', -SO-R', -OH, -галоген, -N₃, -NH₂, -NHR', -NR'₂ и -CN; где каждый R', независимо, выбран из -(C₁-C₈)алкила и арила.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, (C₃-C₈)гетероцикл относится к ароматическому или неароматическому (C₃-C₈)карбоциклу, в котором от одного до четырех кольцевых атомов углерода независимо заменены гетероатомом из группы, состоящей из O, S и N. Характерные примеры (C₃-C₈)гетероцикла включают бензофуранил, бензотиофен, индолил, бензопиразолил, кумаринил, изохинолинил, пирролил, тиофенил, фуранил, тиазолил, имидазолил, пиразолил, триазолил, хинолинил, пиримидинил, пиридинил, пиридонил, пиразинил, пиридазинил, изотиазолил, изоксазолил и тетразолил. (C₃-C₈)гетероцикл может быть незамещенным или может быть замещен до семи группами, включая (C₁-C₈)алкил, -O-[(C₁-C₈)алкил], -арил, -CO-R', -O-CO-R', -CO-OR', -CO-NH₂, -CO-NHR', -CO-NR'₂, -NH-CO-R', -SO₂-R', -SO-R', -OH, -галоген, -N₃, -NH₂, -NHR', -NR'₂ и -CN; где каждый R' независимо выбран из -(C₁-C₈)алкила и арила.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, (C₃-C₈)гетероцикло относится к (C₃-C₈)гетероциклильной группе, определенной выше, где один из атомов водорода карбоциклильных групп заменен на связь. (C₃-C₈)гетероцикло может быть незамещенным или может быть замещен до шести группами, включая (C₁-C₈)алкил, -O-[(C₁-C₈)алкил], -арил, -CO-R', -O-CO-R', -CO-OR', -CO-NH₂, -CO-NHR', -CO-NR'₂, -NH-CO-R', -SO₂-R', -SO-R', -OH, -галоген, -N₃, -NH₂, -NHR', -NR'₂ и -CN; где каждый R' независимо выбран из -(C₁-C₈)алкила и арила.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, термин «галоген» или «галогенид» означает, каждый и по отдельности, любой из F, Cl, Br, I и At.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, термин «-сукцинимид-» относится к бивалентной структуре в соответствии с формулой (9)

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, атомы с неуказанными атомными номерами массы в любой структурной формуле или в любом случае настоящего описания, включая формулу изобретения, являются либо атомами неопределенного изотопного состава, природными смесями изотопов, либо отдельными изотопами. Особенно это относится к атомам галогена, включая, но этим не ограничиваясь, F Cl, Br, I и At, и к атомам металла, включая, но этим не ограничиваясь, Sc, Cr, Mn, Co, Fe, Cu, Ga, Sr, Zr, Y, Mo, Tc, Ru, Rh, Pd, Pt, Ag, In, Sb, Sn, Te, I, Pr, Pm, Dy, Sm, Gd, Tb, Ho, Dy, Er, Yb, Tm, Lu, Sn, Re, Rd, Os, Ir, Au, Pb, Bi, Po, Fr, Ra, Ac, Th и Fm.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, хелатор представляет собой соединение, которое способно образовывать хелат, где хелатом является соединение, предпочтительно, циклическое соединение, в котором в образовании кольца участвует металл или фрагмент, имеющий электронный зазор или неподеленную пару электронов. Более предпочтительно, хелатор является таким типом соединения, в котором одиночный лиганд занимает более одного центра координации на центральном атоме.

В некоторых вариантах воплощения некоторые части соединений по настоящему изобретению содержат аминокислотные последовательности, как это предусмотрено в настоящем документе. Общеизвестные аминокислоты, называемые также природными аминокислотами, указываются их стандартными однобуквенными или трехбуквенными кодами, как указано в таблице 1.

Таблица 1: Обычные аминокислоты и их сокращенное обозначение

3-буквенный код	1-буквенный код	Аминокислоты		3-буквенный код	1-буквенный код	Аминокислоты
Ala	A	Аланин		Met	M	Метионин
Cys	C	Цистеин		Asn	N	Аспарагин
Asp	D	Аспарагиновая кислота		Pro	P	Пролин
Glu	E	Глутаминовая кислота		Gln	Q	Глутамин
Phe	F	Фенилаланин		Arg	R	Аргинин
Gly	G	Глицин		Ser	S	Серин
His	H	Гистидин		Thr	T	Треонин
Ile	I	Изолейцин		Val	V	Валин
Lys	K	Лизин		Trp	W	Триптофан
Leu	L	Лейцин		Tyr	Y	Тирозин

Нетрадиционные аминокислоты, называемые также неприродными аминокислотами, представляют собой вид неолигомерного соединения, которое содержит аминогруппу и карбоксильную группу и не является обычной аминокислотой.

Примеры неприродных аминокислот, предпочтительно используемые для построения конъюгатов по настоящему изобретению, указываются в соответствии с их аббревиатурой или названием, как указано в таблице 2.

Таблица 2:

Аминокислотные последовательности пептидов, представленные в данном документе, изображаются в формате обычных пептидных последовательностей, как это понятно обычным специалистам в данной области. Например, трехбуквенный код или однобуквенный код обычной аминокислоты, или код, включающий аббревиатуры дополнительных структурных элементов, указывают на присутствие аминокислоты или структурного элемента в заданном положении внутри пептидной последовательности. Код каждой нетрадиционной аминокислоты или структурного элемента соединен с кодом следующей и/или предшествующей аминокислоты или структурного элемента в последовательность с помощью дефиса. Соседние структурные элементы связаны с помощью химической связи (обычно амидная связь или тиоэфирная связь). Образование химической связи удаляет гидроксильную группу из 1-карбоксильной группы аминокислоты, когда она расположена слева от соседней аминокислоты (например, Phe-соседняя аминокислота), и удаляет атом водорода из аминогруппы аминокислоты, когда она расположена справа от соседней аминокислоты (например, соседняя аминокислота-Phe). Понятно, что обе модификации могут применяться к одной и той же аминокислоте и применяться к соседним обычным аминокислотам, имеющимся в аминокислотных последовательностях без точно показанных дефисов. Там, где аминокислота содержит более одной амино и/или карбоксигруппы в боковой аминокислотной цепи, в принципе возможны все ориентации этих аминокислот, в противном случае предпочтительные ориентации точно указаны.

Для нетрадиционных аминокислот использовали 3-буквенный код, где первая буква указывает стереохимию C-α-атома. Например, первая прописная буква указывает, что в пептидной последовательности присутствует L-форма аминокислоты, тогда как нижний регистр первой буквы указывает, что в пептидной последовательности присутствует D-форма соответствующей аминокислоты. При использовании однобуквенного кода буква в нижнем регистре представляет D-аминокислоту, тогда как буква в верхнем регистре представляет L-аминокислоту. Если специально не оговорено, аминокислотные последовательности представлены в данном описании в направлении от N- к С-концевой части.

С-концы некоторых конъюгатов по данному изобретению, описанные в настоящем документе, точно проиллюстрированы включением OH, NH₂, или аббревиатурой для конкретного концевого амина, связанного с кодом C-концевой аминокислоты с помощью дефиса. N-концы нескольких пептидов, описанных в данном документе, точно проиллюстрированы включением водорода (для свободного N-конца) или аббревиатурой для конкретного концевой карбоновой кислоты, такой как Ac для уксусной кислоты, или другой химической группой или структурной формулой химических групп, связанных с кодом N-концевой аминокислоты с помощью дефиса.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, антагонист к NTR1 представляет собой соединение, которое ингибирует активность лиганда на NTR1, таком как нейротензин, и, более конкретно, ингибирует рецептор, опосредующий эффекты, которые возникают при связывании лиганда с NTR1. Более предпочтительно, антагонист к NTR1 связывается с NTR1. В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, эффектор представляет собой соединение, которое является диагностически и/или терапевтически активным в диагностике и терапии, соответственно, заболевания.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, диагностически активным соединением является соединение, которое является подходящим или может быть использовано в диагностике заболевания.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, диагностическим агентом или диагностически активным агентом является соединение, которое является подходящим или может быть использовано в диагностике заболевания.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, терапевтически активным соединением является соединение, которое является подходящим или может быть использовано при лечении заболевания.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, терапевтическим агентом или терапевтически активным агентом является соединение, которое является подходящим или может быть использовано при лечении заболевания.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, тераностически активное соединение представляет собой соединение, которое является подходящим или может быть использовано как для диагностики, так и для лечения заболевания.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, тераностический агент или тераностически активный агент представляет собой соединение, которое является подходящим или может быть использовано как для диагностики, так и для лечения заболевания.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, тераностика является методом объединенной диагностики и терапии заболевания; предпочтительно, объединенные диагностически и терапевтически активные соединения, используемые в тераностике, являются радиомечеными.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, лечением заболевания является лечение и/или предупреждение заболевания.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, заболевание с участием рецептора нейротензина является заболеванием, где клетки, экспрессирующие рецептор нейротензина, и ткань, экспрессирующая рецептор нейротензина, соответственно, возможно или точно являются причиной заболевания и/или симптомов заболевания, или являются частью патологии, лежащей в основе заболевания. В одном варианте заболевания, предпочтительно, при использовании в связи с лечением, для лечения и/или терапии заболевания, воздействие на клетки, ткани и патологии, соответственно, приводит к выздоровлению, лечению или облегчению заболевания и/или симптомов заболевания. В одном варианте заболевания, предпочтительно, при использовании в связи с диагностикой и/или диагностированием заболевания, мечение экспрессирующих рецептор нейротензина клеток и/или экспрессирующей рецептор нейротензина ткани позволяет отличить или различать указанные клетки и/или указанную ткань от здоровых или не экспрессирующих рецептор нейротензина клеток и/или здоровой или не экспрессирующей рецептор ткани. Более предпочтительно, такое распознавание или отличие формирует основу для упомянутых диагностики и диагностирования, соответственно. В одном варианте осуществления изобретения мечение означает взаимодействие обнаруживаемой метки либо напрямую, либо опосредованно с экспрессирующими рецептор нейротензина клетками и/или с экспрессирующей рецептор нейротензина тканью; более предпочтительно, такое взаимодействие включает или основано на взаимодействии метки или соединения, имеющему такую метку, с рецептором нейротензина.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, заболеванием с участием рецептора нейротензина 1 (NTR1) является заболевание, где клетки, экспрессирующие NTR1, и ткань, экспрессирующая NTR1, соответственно, возможно или точно являются причиной заболевания и/или симптомов заболевания, или являются частью патологии, лежащей в основе заболевания. В одном варианте осуществления изобретения заболевания, предпочтительно, при использовании в связи с лечением, для лечения и/или терапии заболевания, воздействие на клетки, ткани и патологии, соответственно, приводит к выздоровлению, лечению или облегчению заболевания и/или симптомов заболевания. В одном варианте заболевания, предпочтительно, при использовании в связи с диагностикой и/или диагностированием заболевания, мечение экспрессирующих NTR1 клеток и/или экспрессирующей NTR1 ткани позволяет отличить или различать указанные клетки и/или указанную ткань от здоровых или не экспрессирующих NTR1 клеток и/или здоровой или не экспрессирующей NTR1 ткани. Более предпочтительно, такое распознавание или отличие формирует основу для упомянутых диагностики и диагностирования, соответственно, заболевания. В одном варианте осуществления изобретения мечение означает взаимодействие обнаруживаемой меткой либо напрямую, либо опосредованно с экспрессирующими NTR1 клетками и/или с экспрессирующей NTR1 тканью; более предпочтительно, такое взаимодействие включает или основано на взаимодействии метки или соединения, имеющему такую метку, с рецептором NTR1.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, мишеневая клетка представляет собой клетку, которая экспрессирует NTR1 и является либо причиной заболевания и/или симптомов заболевания, либо являются частью патологии, лежащей в основе болезни.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, немишеневая клетка представляет собой клетку, которая либо не экспрессирует NTR1 и/или не является причиной заболевания и/или симптомов заболевания, либо являются частью патологии, лежащей в основе болезни.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, индикация представляет собой медицинскую индикацию.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, мишень представляет собой мишеневую молекулу или мишеневую структуру.

В одном варианте осуществления изобретения и предпочтительно, используемая в настоящем документе клетка участвует в заболевании или индикации, если такая клетка является или образует часть ткани и/или органа, затронутые таким заболеванием или индикацией, или если такая клетка вызывает это заболевание или индикацию, или если эта клетка является больной клеткой, где, предпочтительно, такая больная клетка вызывает заболевание или индикацию, или где больная клетка является или образует часть ткани и/или органа, затронутые таким заболеванием или индикацией.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, термин «опосредование связи» означает, что установлена связь или вид связи, предпочтительно, связь между двумя фрагментами. В предпочтительном варианте осуществления изобретения связь и вид связи являются такими, как определено в настоящем документе.

В той степени, как упоминается в настоящей заявке в отношении диапазона, указанного меньшим целым числом и большим целым числом, например, 1-4, такой диапазон представляет меньшее целое число, большее целое число и любое целое число между меньшим целым числом и большим целым числом. В пределах разумно допустимого диапазон на самом деле является индивидуализированным описанием указанного целого числа. В указанном примере диапазон 1-4, таким образом, означает, 1, 2, 3 и 4.

Предпочтительно, термины конъюгат по настоящему изобретению и соединение по настоящему изобретению используются взаимозаменяемо.

Конъюгат по настоящему изобретению представлен общей формулой (1)

[TM1]- [AD1]-[LM]- [AD2]-[TM2] (1),

где

TM1 представляет собой первую адресующую часть, где первая адресующая часть способна связываться с первой мишенью,

AD1 представляет собой первый соединительный фрагмент или отсутствует,

LM представляет собой линкерный фрагмент или отсутствует,

AD2 представляет собой второй соединительный фрагмент или отсутствует, и

TM2 представляет собой вторую адресующую часть, где вторая адресующая часть способна связываться со второй мишенью;

где первая адресующая часть и/или вторая адресующая часть представляет собой соединение формулы (2):

где

R¹ выбран из группы, включающей водород, метил и циклопропилметил;

AA-COOH представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей 2-амино-2-адамантанкарбоновую кислоту, циклогексилглицин и 9-амино-бицикло[3.3.1]нонан-9-карбоновую кислоту;

R² выбран из группы, включающей (C₁-C₆)алкил, (C₃-C₈)циклоалкил, (C₃C₈)циклоалкилметил, галоген, нитро и трифторметил;

ALK представляет собой (C₂-C₅)алкилиден;

R³, R⁴ и R⁵, каждый и независимо, выбраны из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил, при условии, что один из R³, R⁴ и R⁵ представлен следующей формулой (3)

где

ALK̓ представляет собой (C₂-C₅)алкилиден;

R⁶ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил; и

R⁷ представляет собой связь.

Основываясь на такой общей формуле, конъюгат по настоящему изобретению может быть реализован в различных вариантах воплощения, такие как варианты от (I) до (VII), представленные следующим образом

[TM1]- [AD1]-[LM]- [AD2]-[TM2] [TM1]- [LM]- [AD2]-[TM2] [TM1]- [AD2]-[TM2] [TM1]- [TM2] [TM1]- [AD1]-[LM]- [TM2] [TM1]- [AD1]-[TM2] [TM1]- [LM]- [TM2]

(I); (II); (III); (IV); (V); (VI) и (VII);

где в каждом и любом случае

TM1 представляет собой первую адресующую часть, где первая адресующая часть способна связываться с первой мишенью,

AD1 представляет собой первый соединительный фрагмент,

LM представляет собой линкерный фрагмент,

AD2 представляет собой второй соединительный фрагмент, и

TM2 представляет собой вторую адресующую часть, где вторая адресующая часть способна связываться со второй мишенью;

где первая адресующая часть и/или вторая адресующая часть представляет собой соединение формулы (2):

где

R¹ выбран из группы, включающей водород, метил и циклопропилметил;

AA-COOH представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей 2-амино-2-адамантанкарбоновую кислоту, циклогексилглицин и 9-амино-бицикло[3.3.1]нонан-9-карбоновую кислоту;

R² выбран из группы, включающей (C₁-C₆)алкил, (C₃-C₈)циклоалкил, (C₃C₈)циклоалкилметил, галоген, нитро и трифторметил;

ALK представляет собой (C₂-C₅)алкилиден;

R³, R⁴ и R⁵, каждый и независимо, выбраны из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил, при условии, что один из R³, R⁴ и R⁵ представлен следующей формулой (3)

где

ALK̓ представляет собой (C₂-C₅)алкилиден;

R⁶ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил; и

R⁷ представляет собой связь.

Как также описано в настоящем документе, линкерный фрагмент LM, в одном варианте осуществления изобретения, представлен следующей общей формулой:

-[X]_a- [Y]- [Z]_b- (VIII),

где

[X]_a представляет собой фрагмент структурного элемента, образованный количеством «a» структурных элементов,

[Y] представляет собой разветвленный фрагмент или отсутствует,

[Z]_b представляет собой фрагмент структурного элемента, образованный количеством «b» структурными элементов, и

где a и b, индивидуально и независимо друг от друга, обозначают любое целое число 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и 20, при условии, что a+b обозначает 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 или 0.

В свете вышеуказанного, вариантами от (VIII) до (XV) линкерного фрагмента LM являются следующие:

-[X]_a- [Y]- [Z]_b- (VIII),

-[X]_a- [Y] (IX),

-[X]_a (X),

-[X]_a- [Z]_b- (XI),

-[Y]- [Z]_b- (XII),

-[X]_a-[Z]_b- (XIII),

- [Y]- (XIV) и

- [Z]_b- (XV),

[X]_a представляет собой фрагмент структурного элемента, образованный количеством «a» структурных элементов X, или отсутствует

[Y] представляет собой разветвленный фрагмент или отсутствует,

[Z]_b представляет собой фрагмент структурного элемента, образованный количеством «b» структурных элементов Z, или отсутствует

и где «a» и «b», индивидуально и независимо друг от друга, обозначают любое целое число 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и 20, при условии, что a+b обозначает 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 или 0; предпочтительно, «a» и «b», индивидуально и независимо друг от друга, обозначают любое целое число 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10, более предпочтительно, любое целое число из 0, 1, 2, 3, 4 и 5.

В настоящее изобретение включено, что любой вариант воплощения линкерного фрагмента, как раскрыто в настоящем документе, и, в частности, варианты воплощения линкерного фрагмента от (VIII) до (XV), как раскрыто в настоящем документе, может быть реализован в любом варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению и, в частности, в вариантах воплощения от (I) до (VII) конъюгата по настоящему изобретению, как раскрыто в настоящем документе.

Специалисту в данной области техники следует принять во внимание, что различные фрагменты конъюгата по настоящему изобретению соединены или связаны друг с другом с помощью связи. Такая связь обычно указывается в формулах конъюгата по настоящему изобретению, таких как формула (1), или в вариантах воплощения от (I) до (VII) конъюгата по настоящему изобретению или в вариантах воплощения от (VIII) до (XV) линкерного фрагмента с помощью «-».

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, связь соединяет друг с другом, по меньшей мере, два атома двух независимых фрагментов и структурных элементов, соответственно. Такими фрагментами являются первая адресующая часть TM1, первый соединительный фрагмент AD1, линкерный фрагмент LM, второй соединительный фрагмент AD2, вторая адресующая часть TM2, третий соединительный фрагмент AD3 и эффекторный фрагмент EM, а также фрагмент структурного элемента X, фрагмент структурного элемента Z и фрагмент структурного элемента Y. Предпочтительной связью является химическая связь или совокупность химических связей. Более предпочтительно, химическая связь является ковалентной связью или совокупностью химических связей. Наиболее предпочтительно, связь является ковалентной связью или координационной связью. Как предпочтительно используется в настоящем документе, вариант воплощения координационной связи представляет собой связь или группу связей, как это реализуется, когда металл связан хелатором. В зависимости от вида от связанных между собой атомов и их атомного окружения создаются различные виды связей. Эти виды связей определяются типом атомного окружения, образуемого связью. Например, связывание фрагмента, содержащего первичный или вторичный амин, с фрагментом, содержащим карбоновую кислоту, приводит к связи, называемой амид (которая упоминается также как амидная связь, -CO-N-, -N-CO-). Специалисту в данной области техники следует принять во внимание, что связывание фрагмента, содержащего изотиоцианат, с фрагментом, содержащим первичный или вторичный амин, приводит к связи, называемой тиомочевина (которая упоминается также как тиомочевинная связь, -N-CS-N-), и связывание фрагмента, содержащего атом галоген, с фрагментом, содержащим сульфгидрил (-SH), приводит к связи, называемой простой тиоэфир (которая упоминается также как тиоэфирная связь, -S-).

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, аминная связь представляет собой связь, где атом N связан с атомом C (-N-C-). Конкретным видом аминной связи является такая, где атом N представляет собой связь с алифатическим атомом C, где такая связь называется также алкиламинной связью (-N-C_алк-). В одном варианте осуществления изобретения алкиламинная связь образуется путем взаимодействия фрагмента, содержащего первичную или вторичную аминогруппу, с фрагментом, содержащим альдегидную группу или кетоновую группу, либо в условиях восстановления, либо с последующим восстановлением.

В одном варианте осуществления изобретения связь с совокупностью химических связей представляет собой триазол, и она упоминается также как триазольная связь, где триазол, предпочтительно, 1,2,3-триазол, связывает два фрагмента. В одном варианте осуществления изобретения триазольная связь образуется путем взаимодействия фрагмента, содержащего азид, с фрагментом, содержащим алкин, взаимодействия катализируемого или не катализируемого, предпочтительно, солями меди.

Специалисту в данной области техники понятно, что существует несколько различных технических и относящихся к механизму химической реакции альтернатив для реализации конкретного вида связи, например, амидной связи. В этом случае, как правило, для активирования, по меньшей мере, одного компонента, например, карбоновой кислоты, используются специальные реагенты. Эти активированные образцы, такие как активные сложные эфиры или галогениды карбоновых кислот, в некоторых случаях выделяют и/или очищают перед использованием; альтернативно, такие активированные образцы образуются in situ и сразу подвергаются взаимодействию, т.е., без выделения и/или очистки.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе термин «опосредующее связывание» означает, что связь или вид связи устанавливается, предпочтительно, связью между двумя фрагментами. В предпочтительном варианте осуществления изобретения связь и вид связи являются такими, как это определено в настоящем документе.

Не ограничивающий перечень связей, предпочтительно используемых при присоединении к конъюгату по изобретению, и характерный вид расположения атомов представлены в таблице 3.

Таблица 3:

Далее представлены реакционноспособные группы и функциональные группы, которые могут использоваться или являются подходящими для образования связи между фрагментами, используемыми в вариантах воплощения конъюгата по настоящему изобретению:

первичный или вторичный амино, карбоновая кислота, активированная карбоновая кислота, хлор, бром, йод, сульфгидрил, гидроксил, сульфоновая кислота, активированная сульфоновая кислота, сложные эфиры сульфоновой кислоты, такие как мезилат или тозилат, акцепторы Михаэля, напряженные алкены, такие как транс-циклооктен, изоцианат, изотиоцианат, альдегид, кетон, аминоокси, гидразид, гидразин, азид, алкин и тетразин.

Как предпочтительно используется в настоящем документе, термин «активированная карбоновая кислота» относится к группе карбоновых кислот общей формулы -CO-X, где X представляет собой удаляемую группу. Например, активированные формы группы карбоновой кислоты могут включать, но этим не ограничиваются, хлорангидриды кислот, симметричные или несимметричные ангидриды и сложные эфиры. В некоторых вариантах осуществления изобретения группа активированной карбоновой кислоты представляет собой сложный эфир с пентафторфенолом, нитрофенолом, бензотриазолом, азабензотриазолом, тиофенолом или N-гидроксисукцинимидом (NHS) в качестве удаляемой группы.

Как предпочтительно используется в настоящем документе, термин «активированная сульфоновая кислота» относится к группе сульфоновых кислот общей формулы -SO₂-X, где X представляет собой удаляемую группу. Например, активированные формы сульфоновой кислоты могут включать, но этим не ограничиваются, сульфонил хлориды или ангидриды сульфоновых кислот. В некоторых вариантах осуществления изобретения группа активированной сульфоновой кислоты представляет собой сульфонилхлорид, где хлорид является удаляемой группой.

Как предпочтительно используется в настоящем документе, термин «акцептор Михаэля» относится к олефину, который замещен электронодефицитной группой, которая представлена в виде очень маленькой характеристической структуры (32)

где EWG представляет собой электроноакцепторную группу, такую как-CN, -NO₂, -CO-R̓, -CO-OR̓, -SO₂-R̓.

«Акцептор Михаэля» может взаимодействовать с нуклеофилами, особенно с сульфгидрильными группами, путем реакции присоединения, как показано следующим образом:

Например, акцепторы Михаэля включают, но этим не ограничиваются, α,β-ненасыщенные нитрилы, α,β-ненасыщенные нитро соединения, α,β-ненасыщенные альдегиды, α,β-ненасыщенные кетоны и производные α,β-ненасыщенных карбоновых кислот. В предпочтительном варианте осуществления изобретения акцептором Михаэля является малеимидная группа.

Концепция связывания: Базовая концепция, лежащая в основе настоящего изобретения, состоит в образовании связи между двумя фрагментами, где, предпочтительно, два фрагмента, то есть первый фрагмент и второй фрагмент, обладают дополняющими друг друга реакционноспособными группами, при этом, предпочтительно, первый фрагмент предоставляет первую реакционноспособную группу, и второй фрагмент предоставляет вторую реакционноспособную группу. После того, как реакционноспособные группы взаимодействуют, реакционноспособные группы или их реакционный продукт и, таким образом, в конечном счете, два фрагмента связываются друг с другом, по меньшей мере, одной ковалентной связью с образованием связи определенного вида. Природа образовавшейся связи зависит от реакционноспособных групп, участвующих в образовании связи, что будет понятно специалисту в данной области техники. Специалисту в данной области техники будет также понятно, что, в принципе, любая реакционноспособная группа может быть предоставлена любым из этих двух фрагмента. Другими словами, первая реакционноспособная группа может быть предоставлена либо первым фрагментом, либо вторым фрагментом, при условии, что вторая реакционноспособная группа предоставлена либо вторым фрагментом, либо первым фрагментом, таким образом, необходимо, чтобы в каждом конкретном случае реакционноспособные группы, имеющиеся или образованные, соответственно, позволяли образовывать связь. Специалисту в данной области техники будет также понятно, что, в зависимости от химической природы первого и второго фрагмента, с одной стороны, и реакционноспособных групп, участвующих в образовании связи между первым и вторым фрагментом, с другой стороны, некоторые виды реакционноспособной группы, предпочтительно, предоставляются первым фрагментом или вторым фрагментом.

Примеры реакционноспособных групп, которые в некоторых вариантах воплощения настоящего изобретения используются при образовании связей, которые могут быть реализованы в вариантах воплощения конъюгата по настоящему изобретению, представлены в таблица 4. Однако, специалисту в данной области должно быть понятно, что ни связи, которые могут быть реализованы в вариантах воплощения конъюгата по настоящему изобретению, ни реакционноспособные группы, образованные такими связями, не ограничиваются теми, которые представлены в таблице 4.

Таблица 4:

первая реакционноспособная группа	вторая реакционноспособная группа	связь (вид)
амино	карбоновая кислота	амид
амино	активированная карбоновая кислота	амид
карбоновая кислота	амино	амид
сульфгидрил	акцептор Михаэля (например, малеимид)	простой тиоэфир
бром	сульфгидрил	простой тиоэфир
аминоокси	альдегид	оксим
изотиоцианат	амино	тиомочевина
гидроксил	карбоновая кислота	сложный эфир
азид	алкин	триазол
сульфгидрил	сульфгидрил	дисульфид
сульфгидрил	2-пиридин-дисульфид	дисульфид
амино	альдегид	алкиламин

TM1

Конъюгат по настоящему изобретению содержит, по меньшей мере, одно соединение формулы (2)

где

R¹ выбран из группы, включающей водород, метил и циклопропилметил;

AA-COOH представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей 2-амино-2-адамантанкарбоновую кислоту, циклогексилглицин и 9-амино-бицикло[3.3.1]нонан-9-карбоновую кислоту;

R² выбран из группы, включающей (C₁-C₆)алкил, (C₃-C₈)циклоалкил, (C₃C₈)циклоалкилметил, галоген, нитро и трифторметил;

ALK представляет собой (C₂-C₅)алкилиден;

R³, R⁴ и R⁵, каждый и независимо, выбраны из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил, при условии, что один из R³, R⁴ и R⁵ представлен следующей формулой (3)

где

ALK̓ представляет собой (C₂-C₅)алкилиден;

R⁶ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил; и

R⁷ представляет собой связь, в различных их вариантах, описанных в настоящем документе.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению соединение (2), в любом из вариантов его воплощения, присутствует в конъюгате по настоящему изобретению в качестве адресующей части TM1. В еще одном варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению соединение формулы (2), в любом из вариантов его воплощения, присутствует в конъюгате по настоящему изобретению в качестве адресующей части TM2. В еще одном варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению соединение формулы (2), в любом из вариантов его воплощения, присутствует в конъюгате по настоящему изобретению в качестве адресующей части TM1 и в качестве адресующей части TM2. В связи с последним вариантом воплощения конъюгата по настоящему изобретению вариант соединения формулы (2), присутствующий в конъюгате по настоящему изобретению в качестве TM1, отличается от варианта соединения формулы (2), присутствующего в конъюгате по настоящему изобретению в качестве TM2; альтернативно, вариант соединения формулы (2), присутствующий в конъюгате по настоящему изобретению в качестве TM1, идентичен варианту соединения формулы (2), присутствующего в конъюгате по настоящему изобретению в качестве TM2.

В настоящее изобретение включено, что конъюгат по настоящему изобретению содержит дополнительную адресующую часть, при условии, что, либо первая адресующая часть TM1, либо вторая адресующая часть TM2 представляет собой соединение формулы (2), в любом из вариантов его воплощения. Такая дополнительная адресующая часть представляет собой вторую адресующую часть TM2 в таких вариантах конъюгата по настоящему изобретению, где соединение формулы (2), в любом из вариантов его воплощения, присутствует в конъюгате по настоящему изобретению в качестве адресующей части TM1, и такая дополнительная адресующая часть представляет собой первую адресующую часть TM1 в таких вариантах конъюгата по настоящему изобретению, где соединение формулы (2), в любом из вариантов его воплощения, присутствует в конъюгате по настоящему изобретению в качестве адресующей части TM2.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению дополнительная адресующая часть, предпочтительно, выбрана из группы, включающей антитело (книга: Immunochemistry, edited by Carel J. van Oss and Marc H. V. van Regenmortel, Marcel Dekker, New York 1994), связывающий антиген фрагмент антитела (Moran, Nat Biotechnol, 2011, 29, 5-6), (Peer et al., Nat Nanotechnol, 2007, 2, 751-760), (Hong et al., Biomark Insights, 2008, 3, 435-451), (Holliger et al., Nat Biotechnol, 2005, 23, 1126-1136), тяжелую цепь верблюжьего IgG (hcIgG) (Unciti-Broceta et al., Ther Deliv, 2013, 4, 1321-1336), (De Vos et al., Expert Opin Biol Ther, 2013, 13, 1149-1160), (Vincke et al., Methods Mol Biol, 2012, 907, 145-176), (Vincke et al., Methods Mol Biol, 2012, 911, 15-26), антитело IgNAR хрящевых рыб (например, акулы) (Dooley et al., Dev Comp Immunol, 2006, 30, 43-56), белковый каркас (Skerra, J Mol Recognit, 2000, 13, 167-187), (Zoller et al., Molecules, 2011, 16, 2467-2485), (Gebauer et al., Curr Opin Chem Biol, 2009, 13, 245-255), (Hosse et al., Protein Sci, 2006, 15, 14-27), мишень-связывающий пептид (Zhou et al., Curr Med Chem, 2013, 20, 1985-1996), (Boohaker et al., Curr Med Chem, 2012, 19, 3794-3804), (Aoki et al., Adv Drug Deliv Rev, 2012, 64, 1220-1238), (Pirogova et al., Curr Pharm Biotechnol, 2011, 12, 1117-1127), (Kliger, Biopolymers, 2010, 94, 701-710), пептидомиметик (Avan et al., Chem Soc Rev, 2014, 43, 3575-3594), (Akram et al., Mol Cancer Res, 2014), (Hruby et al., Annu Rev Pharmacol Toxicol, 2013, 53, 557-580), (Tomasini et al., Chem Soc Rev, 2013, 42, 156-172), (Oishi et al., Org Biomol Chem, 2012, 10, 5720-5731), (Dietrich et al., Curr Pharm Biotechnol, 2013, 14, 501-512), (Wetzler et al., Biopolymers, 2011, 96, 556-560), (Chongsiriwatana et al., Antimicrob Agents Chemother, 2011, 55, 5399-5402), (Liskamp et al., Chembiochem, 2011, 12, 1626-1653), пептидную нуклеиновую кислоту (PNA) (Gambari, Expert Opin Ther Pat, 2014, 24, 267-294), (Sforza et al., Methods Mol Biol, 2014, 1050, 143-157), (Corradini et al., Curr Top Med Chem, 2011, 11, 1535-1554), (Nielsen, Artif DNA PNA XNA, 2010, 1, 1), (Nielsen, Chem Biodivers, 2010, 7, 786-804), (Pensato et al., Expert Opin Biol Ther, 2007, 7, 1219-1232), (Lundin et al., Adv Genet, 2006, 56, 1-51), мишень-связывающий полипептид или белок, мишень-связывающую молекулу нуклеиновой кислоты, углевод (Balan et al., Cancers (Basel), 2010, 2, 592-610), липид (Helms et al., Traffic, 2004, 5, 247-254), (Resh, Subcell Biochem, 2004, 37, 217-232), (Kohli et al., J Control Release, 2014) и мишень-связывающую малую молекулу (книга: Drug Discovery and Development Volumes 1 and 2, edited by Mukund S. Chorghade, John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, New Jersey, 2006), (книга: Optimization in Drug Discovery - In vitro Methods, edited by Zhengyin Yan and Gary W. Caldwell, Humana Press, Totowa, New Jersey, 2004), (книга: The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action, Richard B. Silverman, Academic Press Ltd., London, 1992). Специалисту в данной области техники следует принять во внимание, что любое из перечисленных выше и далее соединений, образующее конъюгат или входящее в состав конъюгата по настоящему изобретению, известно в данной области техники, также как и способы получения и идентификации, соответственно, таких соединений.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению антитело является поликлональным или моноклональным антителом. В еще одном варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению антителом является антитело человека, гуманизированное антитело, химерное антитело, антитело низшего примата, мышиное антитело или антитело от других видов, то есть видов, отличных от человека и мыши.

В еще одном варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению антигенсвязывающий фрагмент антитела выбран из группы, включающей Fab, Fab₂, scFv, биспецифический scFv, scFv-Fc, минитело, диатело, триатело и тетратело.

В еще одном варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению антигенсвязывающее антитело выбрано из группы, включающей IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgD, IgE, IgA, IgA1, IgA2.

В еще одном варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению тяжелая цепь верблюжьего IgG (hcIgG) может быть представлена как полноленточная тяжелая цепь IgG или в виде ее фрагмента; таким фрагментом может быть нанотело, которое известно также в данной области техники как VHH.

В еще одном варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению антитело IFNAR хрящевых рыб может быть представлено как полноленточное IgNAR или в виде его фрагмента; таким фрагментом может быть vNAR. В одном варианте осуществления изобретения хрящевой рыбой является акула.

В еще одном варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению белковый каркас выбран из группы, включающей белковый каркас для молекулярного распознавания; белковый каркас, полученный на основе белковых доменов; белковый каркас, полученный от ядовитого животного, предпочтительно, такое ядовитое животное выбрано из группы, включающей паука, скорпиона, морскую анемону, насекомое, лягушку, улитку, змею и рыбу; белковый каркас, созданный методами генетической инженерии; аффитело, где аффитело, предпочтительно, основано на Z-домене белка A стафилококков (Nord et al., Protein Eng, 1995, 8, 601-608), (Nord et al., Nat Biotechnol, 1997, 15, 772-777), (Gunneriusson et al., Protein Eng, 1999, 12, 873-878), (Wikman et al., Protein Eng Des Sel, 2004, 17, 455-462); каркас на основе иммунного белка ImmE7 (Chak et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 1996, 93, 6437-6442); каркас на основе цитохрома b562 (Ku et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 1995, 92, 6552-6556); каркас на основе пептида α2p8 (Barthe et al., Protein Sci, 2000, 9, 942-955); каркас на основе белка с анкириновым повтором (Mosavi et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 2002, 99, 16029-16034), (Binz et al., Nat Biotechnol, 2004, 22, 575-582), (Amstutz et al., J Biol Chem, 2005, 280, 24715-24722); каркас на основе дефенсинов насекомых, таких как дефенсин насекомых A (1ICA29) (Zhao et al., Peptides, 2004, 25, 629-635); каркас на основе доменов Куница, предпочтительно, BPTI/APPI (Roberts et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 1992, 89, 2429-2433), (Roberts et al., Gene, 1992, 121, 9-15), (Dennis et al., J Biol Chem, 1994, 269, 22129-22136), (Dennis et al., J Biol Chem, 1994, 269, 22137-22144), (Stoop et al., Nat Biotechnol, 2003, 21, 1063-1068); каркас на основе PDZ доменов, предпочтительно, Ras связывающий белок AF-6 (Schneider et al., Nat Biotechnol, 1999, 17, 170-175); каркас на основе токсинов скорпиона, таких как харибдотоксин (Vita et al., Biopolymers, 1998, 47, 93-100); каркас на основе домена фибронектина III типа (Koide et al., J Mol Biol, 1998, 284, 1141-1151), (Xu et al., Chem Biol, 2002, 9, 933-942); каркас на основе экстрацеллюлярного домена CTLA-4 (Nuttall et al., Proteins, 1999, 36, 217-227), (Irving et al., J Immunol Methods, 2001, 248, 31-45); каркас на основе ноттинсов, таких как MiN-23 (Souriau et al., Biochemistry, 2005, 44, 7143-7155); каркас на основе связывающего целлюлозу домена (Lehtio et al., Proteins, 2000, 41, 316-322); каркас на основе неокарциностатина (Heyd et al., Biochemistry, 2003, 42, 5674-5683); каркас на основе CBM4-2 (Cicortas et al., Protein Eng Des Sel, 2004, 17, 213-221); каркас на основе тендамистата (McConnell et al., J Mol Biol, 1995, 250, 460-470), (Li et al., Protein Eng, 2003, 16, 65-72); антикалин, предпочтительно, на основе аполипопротеина D (Gebauer et al., Methods Enzymol, 2012, 503, 157-188), (Gebauer et al., J Mol Biol, 2013, 425, 780-802), (Vogt et al., Chembiochem, 2004, 5, 191-199); каркас на основе билин-связывающего белка (Beste et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 1999, 96, 1898-1903); каркас на основе FABP (Lamla et al., Protein Expr Purif, 2004, 33, 39-47), (Lamla et al., J Mol Biol, 2003, 329, 381-388); DARPin (Weidle et al., Cancer Genomics Proteomics, 2013, 10, 155-168), (Stumpp et al., Drug Discov Today, 2008, 13, 695-701), (Boersma et al., Curr Opin Biotechnol, 2011, 22, 849-857); и аднектин (Lipovsek, Protein Eng Des Sel, 2011, 24, 3-9).

В еще одном варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению мишень-связывающий пептид представляет собой пептид, выбранный из группы, включающей пептид длиной от 2 до 50 аминокислот, пептид длиной от 3 до 40 аминокислот (Manfredi et al., Curr Med Chem, 2006, 13, 2369-2384), пептид длиной от 5 до 30 аминокислот (Harmar et al., Br J Pharmacol, 2012, 166, 4-17), пептид длиной от 5 до 20 аминокислот (Dockal et al., J Biol Chem, 2014, 289, 1732-1741), (Heckmann et al., Methods Enzymol, 2007, 426, 463-503), (Schmid, Mol Cell Endocrinol, 2008, 286, 69-74); линейный пептид (Dockal et al., J Biol Chem, 2014, 289, 1732-1741), (Doehn et al., IDrugs, 2006, 9, 565-572), циклический пептид (Heckmann et al., Methods Enzymol, 2007, 426, 463-503), (Fliri et al., Ann N Y Acad Sci, 1993, 696, 47-53), (Schmid, Mol Cell Endocrinol, 2008, 286, 69-74); циклический пептид (содержащий, по меньшей мере, одну связь дисульфида, амида, сложного эфира, углеводорода, простого тиоэфира и триазола с циклической частью) (Roxin et al., Future Med Chem, 2012, 4, 1601-1618), (Cemazar et al., Curr Top Med Chem, 2012, 12, 1534-1545), (Tam et al., J Biol Chem, 2012, 287, 27020-27025), (White et al., Org Lett, 2012, 14, 2898-2901), (White et al., Nat Chem, 2011, 3, 509-524), (Gentilucci et al., Curr Pharm Des, 2010, 16, 3185-3203), (Ovadia et al., Expert Opin Drug Discov, 2010, 5, 655-671), (Nestor, Curr Med Chem, 2009, 16, 4399-4418), (Kopp et al., Nat Prod Rep, 2007, 24, 735-749), бициклический пептид, трициклический пептид, тетрациклический пептид, пентациклический пептид (MacLachlan et al., Methods Mol Biol, 1997, 60, 337-362), (Cemazar et al., Curr Top Med Chem, 2012, 12, 1534-1545), (Heinis et al., Nat Chem Biol, 2009, 5, 502-507), (Baeriswyl et al., ChemMedChem, 2012, 7, 1173-1176), пептид, состоящий из генетически кодируемых аминокислот (Bernstein et al., Expert Rev Clin Immunol, 2010, 6, 29-39), (Dockal et al., J Biol Chem, 2014, 289, 1732-1741), пептид, состоящий из искусственно синтезированных, предпочтительно, не встречающихся в природе аминокислот (Wei et al., Mol Pharm, 2014); пептид, состоящий из генетически кодируемых и из искусственно синтезированных, предпочтительно, не встречающихся в природе аминокислот (Rhaleb et al., Eur J Pharmacol, 1992, 210, 115-120), (Hock et al., Br J Pharmacol, 1991, 102, 769-773), (Wirth et al., Br J Pharmacol, 1991, 102, 774-777), (Dockal et al., J Biol Chem, 2014, 289, 1732-1741), пептид, конъюгированный с непротеиногенным фрагментом (Guskey et al., Pharmacotherapy, 2010, 30, 80-94), липопептид (Grossman, Pharmacotherapy, 2009, 29, 25S-32S) и гликопептид (Maschauer et al., Mol Pharm, 2014, 11, 505-515).

В еще одном варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению мишень-связывающая молекула нуклеиновой кислоты выбрана из группы, включающей аптамер (Kang et al., Adv Biochem Eng Biotechnol, 2013, 131, 153-169), (Zhou et al., Front Genet, 2012, 3, 234), (Jeong et al., Biochem Biophys Res Commun, 2001, 281, 237-243), (Santulli-Marotto et al., Cancer Res, 2003, 63, 7483-7489), (Roth et al., Cancer Res, 2012, 72, 1373-1383), (Chen et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 2003, 100, 9226-9231), (Bell et al., In Vitro Cell Dev Biol Anim, 1999, 35, 533-542), (Esposito et al., PLoS One, 2011, 6, e24071), шпигельмер (Vater et al., Curr Opin Drug Discov Devel, 2003, 6, 253-261), (Darisipudi et al., Am J Pathol, 2011, 179, 116-124), (Hoellenriegel et al., Blood, 2014, 123, 1032-1039), (Schwoebel et al., Blood, 2013, 121, 2311-2315), рибозим (Mulhbacher et al., Curr Opin Pharmacol, 2010, 10, 551-556), (Balke et al., Appl Microbiol Biotechnol, 2014, 98, 3389-3399) и spiegelzym (Wyszko et al., PLoS One, 2014, 9, e86673), (Wyszko et al., PLoS One, 2013, 8, e54741).

В еще одном варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению мишень-связывающая углеводная молекула выбрана из группы, включающей природный углеводный лиганд для рецепторов, связывающих углевод (Yang et al., Expert Rev Mol Med, 2008, 10, e17), и искусственно синтезированный углеводный лиганд (Ramstrom et al., Chembiochem, 2000, 1, 41-48), (Liang et al., Science, 1996, 274, 1520-1522).

В еще одном варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению мишень-связывающая малая молекула выбрана из группы, включающей мишень-связывающую малую молекулу, удовлетворяющую «правилу пяти» (Lipinski, J Pharmacol Toxicol Methods, 2000, 44, 235-249), (Lipinski et al., Adv Drug Deliv Rev, 2001, 46, 3-26), (Lipinski, Drug Discov Today, 2003, 8, 12-16), и мишень-связывающую малую молекулу, не удовлетворяющую «правилу пяти».

Специалисту в данной области техники следует принять во внимание, что мишень, распознаваемая дополнительной адресующей частью, независимо от того, является ли она в конъюгате по настоящему изобретению первой адресующей частью TM1 или второй адресующей частью TM2, в принципе, может являться любым объектом, при условии, что дополнительная адресующая часть способна связываться с такой мишенью. Специалисту в данной области техники следует принять во внимание, что, в частности, антитело, связывающий антиген фрагмент антитела, тяжелая цепь верблюжьего IgG (hcIgG), антитело IgNAR хрящевых рыб (например, акулы), белковый каркас, мишень-связывающий пептид, пептидная нуклеиновая кислота (PNA), мишень-связывающий полипептид или белок и мишень-связывающая молекула нуклеиновой кислоты могут, в принципе, быть идентифицированы и генерированы, соответственно, против какой-либо мишени с помощью стандартных способов, известных в данной области.

В настоящее изобретение включено, что мишень, с которой способна связываться адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, является мишенью, которая выявляется при индикации онкологии, предпочтительно, при любой индикации, имеющей отношение к онкологии, более предпочтительно, опухолевого и/или ракового заболевания, и, еще более предпочтительно, такой клетки, как больная клетка, участвующая в такой индикации.

В настоящее изобретение включено, что мишень, с которой способна связываться адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, является мишенью, которая выявляется при NTR-положительной индикации, предпочтительно, при заболевании, когда клетки, участвующие в этом заболевании, и/или больные клетки экспрессируют NTR. В предпочтительном варианте осуществления изобретения NTR-положительная индикация представляет собой NTR1-положительную индикацию, предпочтительно, при заболевании, когда клетки, участвующие в этом заболевании, и/или больные клетки экспрессируют NTR1. В предпочтительном варианте осуществления изобретения NTR-положительная индикация представляет собой NTR2-положительную индикацию, предпочтительно, при заболевании, когда клетки, участвующие в этом заболевании, и/или больные клетки экспрессируют NTR2. В следующем предпочтительном варианте осуществления изобретения NTR-положительная индикация представляет собой NTR1 и NTR2-положительную индикацию, предпочтительно, при заболевании, когда клетки, участвующие в этом заболевании, и/или больные клетки экспрессируют как NTR1, так и NTR2.

В настоящем изобретении мишень, с которой затем способна связываться адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению далее, представляет собой мишень, которая указывается в виде обозначения, предпочтительно, обозначения опухоли, в результате чего такие мишени могут быть идентифицированы с помощью методов, известных в данной области техники. Такие методы включают, но этим не ограничиваются, рецепторную авторадиографию (Reubi et al., Int J Cancer, 1999, 81, 376-386; Waser et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging, 2014, 41, 1166-1171), иммуногистохимию (Schmidt et al., Anticancer Res, 2008, 28, 1719-1724; Patsenker et al., J Hepatol, 2010, 52, 362-369; Korner et al., Am J Surg Pathol, 2012, 36, 242-252), иммуноцитохимию (Chekhun et al., Exp Oncol, 2013, 35, 174-179; Ghosh et al., J Cytol, 2013, 30, 151-155; Seymour et al., Am J Clin Pathol, 1990, 94, S35-40), RT-PCR (Bernard et al., Clin Chem, 2002, 48, 1178-1185; Chang et al., Clin Cancer Res, 1999, 5, 2674-2681; Kang et al., Cancer Genet Cytogenet, 2006, 164, 32-38; Patel et al., Clin Cancer Res, 2004, 10, 7511-7519), гибридизацию in situ (Chang et al., Clin Cancer Res, 1999, 5, 2674-2681; Kang et al., Cancer Genet Cytogenet, 2006, 164, 32-38; Heinrich et al., Int J Gynecol Cancer, 2004, 14, 1078-1085), проточную цитометрию (Chekhun et al., Exp Oncol, 2013, 35, 174-179; Forster et al., Cytometry A, 2007, 71, 945-950; Goodman et al., Biol Open, 2012, 1, 329-340) и вестерн-блоттинг (Schmidt et al., Anticancer Res, 2008, 28, 1719-1724; Goodman et al., Biol Open, 2012, 1, 329-340; Kusagawa et al., Br J Cancer, 1998, 77, 98-102). Образцы для анализа с помощью описанных выше методов могут быть получены при проведении биопсии, из хирургически удаленных образцов, циркулирующих опухолевых клеток, крови, мочи или образцов фекалий, из посевов и мазков, мокроты; предпочтительно, такой образец получают из при проведении биопсии, из хирургически удаленных образцов, циркулирующих опухолевых клеток. Указанные методы подходят также для обнаружения и определения, соответственно, гомогенности и/или гетерогенности экспрессии мишени, включая экспрессию рецепторов, таких как NTR1 и NTR2, в клетке, ткани, органе, опухоли и/или объекте индикации.

В настоящее изобретение включено, что мишень, с которой способна связываться адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, является мишенью, которая экспрессируется при индикации, предпочтительно, индикации опухоли, у больше чем, по меньшей мере, 75% или более, по меньшей мере, 50% или более, по меньшей мере, 25% или более, или, по меньшей мере, 10% или более пациентов, и, предпочтительно, больная клетка, ткань, орган и/или объект индикации экспрессируют NTR. В одном варианте осуществления изобретения NTR представляет собой NTR1. В еще одном варианте осуществления изобретения NTR представляет собой NTR2. В еще одном варианте осуществления изобретения NTR представляет собой NTR1 и NTR2, то есть у пациентов и, предпочтительно, больной клеткой, тканью, органом и/или объектом индикация экспрессируются как NTR1, так и NTR2.

В настоящее изобретение включено, что мишень, с которой способна связываться адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, является мишенью, которая выявляется при индикации, предпочтительно, индикации опухоли, в которой только небольшая часть опухолей, предпочтительно, при индикации опухоли, когда только небольшая часть объектов исследования, подвергающихся индикации опухоли, экспрессируют NTR1. Предпочтительно, небольшая часть опухолей составляет примерно 10% или менее опухолей. Предпочтительно также, что небольшая часть объектов исследования составляет примерно 10% или менее объектов исследования.

В настоящее изобретение включено, что мишень, с которой способна связываться адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, является мишенью, которая однородно выявляется при индикации, предпочтительно, индикации онкологии, более предпочтительно, при любой индикации, имеющей отношение к онкологии. В одном варианте осуществления изобретения объектом индикации является опухоль и/или раковое заболевание. В одном варианте осуществления изобретения мишень однородно экспрессируется клеткой в таком объекте индикации, предпочтительно, в такой индикации участвует клетка и, более предпочтительно, клетка является больной клеткой.

В настоящее изобретение включено, что мишень, с которой способна связываться адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, является мишенью, которая неоднородно выявляется при индикации, предпочтительно, при индикации онкологии, более предпочтительно, при любой индикации, имеющей отношение к онкологии. В одном варианте осуществления изобретения объектом индикации является опухоль и/или раковое заболевание. В одном варианте осуществления изобретения мишень неоднородно экспрессируется клеткой в таком объекте индикации, предпочтительно, в такой индикации участвует клетка и, более предпочтительно, клетка является больной клеткой.

В настоящее изобретение включено, что мишень, с которой способна связываться адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, является мишенью, которая выявляется при индикации, предпочтительно, при индикации онкологии, более предпочтительно, при любой индикации, имеющей отношение к онкологии, где NTR экспрессируется с низкой плотностью. В одном варианте осуществления изобретения объектом индикации является опухоль и/или раковое заболевание. В одном варианте осуществления изобретения в таком объекте индикации мишень экспрессируется клеткой неоднородно, предпочтительно, в такой индикации участвует клетка и, более предпочтительно, клетка является больной клеткой. Как предпочтительно используется в настоящем документе низкая плотность означает, что экспрессируется менее 5000 копий NTR на клетку. Подходящие способы идентификации таких индикаций представлены выше. Предпочтительными способами являются рецептор авторадиография (Reubi et al., выше; Waser et al., выше) и исследования по связыванию клеток (Kitabgi et al., выше).

В настоящее изобретение включено, что мишень, с которой способна связываться адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, является мишенью, которая выявляется при индикации, предпочтительно, при индикации онкологии, более предпочтительно, при любой индикации, имеющей отношение к онкологии, где NTR экспрессируется в первичную опухоль, в метастазы, предпочтительно, метастазы первичной опухоли, или как в первичную опухоль, так и в метастазы, предпочтительно, метастазы первичной опухоли. В одном варианте осуществления изобретения NTR представляет собой NTR1, NTR2 или как NTR1, так и NTR2.

В настоящее изобретение включено, что мишень, с которой способна связываться адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, является мишенью, которая выявляется при индикации, предпочтительно, при индикации онкологии, более предпочтительно, при любой индикации, имеющей отношение к онкологии, где NTR не экспрессируется. В одном варианте осуществления изобретения NTR представляет собой NTR1. В другом варианте осуществления изобретения NTR представляет собой NTR2. В еще одном варианте осуществления изобретения NTR представляет собой NTR1 и NTR2, то есть, объект индикации не экспрессирует ни NTR1, ни NTR2. В одном варианте осуществления изобретения NTR не экспрессируется клеткой, участвующей в такой индикации, и, более предпочтительно, не экспрессируется больной клеткой, участвующей в такой индикации.

В настоящее изобретение включено, что мишень, с которой способна связываться адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, является мишенью, которая выявляется при индикации, предпочтительно, при индикации онкологии, более предпочтительно, при любой индикации, имеющей отношение к онкологии, где экспрессируется, по меньшей мере, 20000 или более копий NTR, или, по меньшей мере, 10000 или более копий NTR, или, по меньшей мере, 5000 или более копий NTR, или, по меньшей мере, 1000 или более копий NTR на клетку. В одном варианте осуществления изобретения в такой индикации участвует клетка и, более предпочтительно, клетка является больной клеткой. В одном варианте осуществления изобретения NTR представляет собой NTR1, NTR2 или как NTR1, так и NTR2. Соответственно, приведенные выше числа копий могут относиться к числу копий NTR1 или числу копий NTR2 или общему числу взятых вместе копий NTR1 и NTR2.

В настоящее изобретение включено, что мишень, с которой способна связываться адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, является мишенью, которая выявляется при индикации, предпочтительно, при индикации онкологии, более предпочтительно, при любой индикации, имеющей отношение к онкологии, где гематоэнцефалический барьер является поврежденным.

В настоящее изобретение включено, что мишень, с которой способна связываться адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, является мишенью, которая выявляется при индикации группы A, как это определено в настоящем документе.

Предпочтительно, индикация группы A, как это определено в настоящем документе, является индикацией, которую проводят в органе и/или ткани, где орган и/или ткань выбраны из группы C, где группа C включает внешнюю часть верхней губы, внешнюю часть нижней губы, внешнюю часть губы, слизистую оболочку верхней губы, слизистую оболочку нижней губы, слизистую оболочку губы, спайку губ, поражение губы, выходящее за пределы локализаций, корень языка, дорсальную поверхность языка, край языка, вентральную поверхности языка, передние 2/3 языка, язычную миндалину, поражение языка, выходящее за пределы локализаций, язык, верхнюю десну, нижнюю десну, десну, передний отдел полости рта, боковой отдел полости рта, поражение полости рта, выходящее за пределы локализаций, полость рта, твердое небо, мягкое небо, язычок, поражение неба, выходящее за пределы локализаций, небо, слизистую оболочку щеки, преддверие полости рта, ретромолярную область, поражение других и неуточненных частей рта, выходящее за пределы локализаций, рот, околоушную железу, подчелюстную железу, сублингвальную железу, поражение крупных слюнных желез, выходящее за пределы локализаций, большую слюнную железу, миндаликовую пазуху, тонзиллярную дужку, поражение миндалины, выходящее за пределы локализаций, миндалину, долинку надгортанника, переднюю поверхность надгортанника, боковую стенку ротоглотки, заднюю стенку ротоглотки, жаберную щель, поражение ротоглотки, выходящее за пределы локализаций, ротоглотку, верхнюю стенку носоглотки, заднюю стенку носоглотки, боковую стенку носоглотки, переднюю стенку носоглотки, поражение носоглотки, выходящее за пределы локализаций, носоглотку, грушевидные ямки, заперстневидную область, гипофарингеальную зону черпалонадгортанной складки, заднюю стенку гортаноглотки, поражение гортаноглотки, выходящее за пределы локализаций, гортаноглотку, глотку, гортанно-глоточное пространство, кольцо Вальдейера, поражение губного отдела преддверия полости рта и глотки, выходящее за пределы локализаций, шейный отдел пищевода, грудной отдел пищевода, отдел пищевода в брюшной полости, верхнюю треть пищевода, среднюю треть пищевода, нижнюю треть пищевода, поражение пищевода, выходящее за пределы локализаций, пищевод, кардию, дно желудка, тело желудка, антральный отдел желудка, привратник желудка, малую кривизну желудка, большую кривизну желудка, поражение желудка, выходящее за пределы локализаций, желудок, двенадцатиперстную кишку, тощую кишку, подвздошную кишку, дивертикул Меккеля, поражение тонкой кишки, выходящее за пределы локализаций, тонкую кишку, слепую кишку, аппендикс, восходящую кишку, печеночный изгиб толстой кишки, поперечно-ободочную кишку, селезеночный изгиб толстой кишки, нисходящую ободочную кишку, сигмовидную кишку, поражение толстой кишки, выходящее за пределы локализаций, толстую кишку, ректосигмоидное соединение, прямую кишку, анус, анальный канал, клоакогенную зону, поражение прямой кишки, ануса, анального канала, выходящее за пределы локализаций, печень, внутрипеченочные желчные протоки, желчный пузырь, внепеченочные желчные протоки, фатерову ампулу, поражение желчных путей, выходящее за пределы локализаций, желчный путь, головку поджелудочной железы, тело поджелудочной железы, хвост поджелудочной железы, поджелудочную железу, островки Лангерганса, шейку поджелудочной железы, поражение поджелудочной железы, выходящее за пределы локализаций, поджелудочную железу, кишечный тракт, поражение пищеварительной системы, выходящее за пределы локализаций, желудочно-кишечный тракт, носовую полость, среднее ухо, верхнечелюстную пазуху, решетчатую пазуху, лобную пазуху, клиновидную пазуху, поражение придаточных пазух, выходящее за пределы локализаций, придаточную пазуху, голосовая щель, преддверие полости гортани, подголосовая полость, хрящ гортани, поражение гортани, выходящее за пределы локализаций, гортань, трахею, главный бронх, верхнюю долю легкого, среднюю долю легкого, нижнюю долю легкого, поражение легкого, выходящее за пределы локализаций, легкое, тимус, сердце, переднее средостение, заднее средостение, средостение, плевру, поражение сердца, средостения и плевры, выходящее за пределы локализаций, верхние дыхательные пути, поражение системы органов дыхания и органов грудной полости, выходящее за пределы локализаций, дыхательный путь, суставы длинных костей верхних конечностей, суставы коротких костей верхних конечностей, суставы длинных костей нижних конечностей, суставы коротких костей нижних конечностей, поражение костей, суставов и суставных хрящей конечностей, выходящее за пределы локализаций, кости конечностей, кости черепа и лица, нижнюю челюсть, позвоночный столб, ребро грудину ключицу, тазовую кость, поражение костных суставов и суставного хряща, выходящее за пределы локализаций, кость, кровь, костный мозг, селезенку, ретикулоэндотелиальную систему, кроветворную систему, кожу губ, веко, наружное ухо, кожу лица, кожу волосистой части головы и шеи, кожу туловища, кожу верхних конечностей, кожу нижних конечностей, периферические нервы головы и шеи, периферические нервы плеча и руки, периферические нервы ног, периферические нервы грудной клетки, периферические нервы брюшной полости, периферические нервы таза, периферические нервы туловища, поражение периферических нервов и вегетативной нервной системы, выходящее за пределы локализаций, вегетативную нервную систему, забрюшинное пространство, брюшину, поражение забрюшинного пространства и брюшины, выходящее за пределы локализаций, соединительную ткань головы, соединительную ткань плеча, соединительную ткань ноги, соединительную ткань грудной клетки, соединительную ткань брюшной полости, соединительную ткань таза, соединительную ткань туловища, поражение подкожной соединительной ткани и других мягких тканей, выходящее за пределы локализаций, соединительную ткань, сосок, центральную часть молочной железы, верхний внутренний квадрант молочной железы, нижний внутренний квадрант молочной железы, верхний наружный квадрант молочной железы, нижний наружный квадрант молочной железы, подмышечный хвост груди, поражение молочной железы, выходящее за пределы локализаций, молочную железу, большие половые губы, малые половые губы, клитор, поражение вульвы, выходящее за пределы локализаций, вульву, вагину, эндоцервикс, эктоцервикс, поражение шейки матки, выходящее за пределы локализаций, шейку матки, перешеек матки, эндометрий, миометрий, дно матки, поражение тела матки, выходящее за пределы локализаций, тело матки, матку, яичники, фаллопиеву трубу, широкую связку, круглую связку, параметрий, придатки матки, вольфово тело, поражение женских половых органов, выходящее за пределы локализаций, женские половые пути, крайнюю плоть, головку полового члена, тело полового члена, поражение полового члена, выходящее за пределы локализаций, половой член, предстательную железу, неопустившееся яичко, опустившееся яичко, семенник, эпидидимис, семенной канатик, мошонку, влагалищную оболочку семенного канатика, поражение мужских половых органов, выходящее за пределы локализаций, мужские половые органы, почку, почечную лоханку, мочевой пузырь, треугольник мочевого пузыря, купол мочевого пузыря, боковую стенку мочевого пузыря, заднюю стенку мочевого пузыря, мочеточниковое отверстие, мочевой проток, поражение мочевого пузыря, выходящее за пределы локализаций, мочевой пузырь, мочеиспускательный канал, парауретральные железы, поражение органов мочевой системы, выходящее за пределы локализаций, мочевую систему, конъюнктиву, роговицу, сетчатку, сосудистую оболочку, цилиарное тело, слезную железу, глазную впадину, поражение глаза и придатков, выходящее за пределы локализаций, глаз, оболочки головного мозга, оболочки спинного мозга, мозговые оболочки, головной мозг, лобную долю, височную долю, теменную долю, затылочную долю, желудочек, мозжечок, ствол мозга, поражение головного мозга, выходящее за пределы локализаций, головной мозг, спинной мозг, «конский хвост», обонятельный нерв, зрительный нерв, слуховой нерв, черепно-мозговой нерв, поражение мозга и центральной нервной системы, выходящее за пределы локализаций, нервную систему, щитовидную железу, кору надпочечников, мозговое вещество надпочечника, надпочечник, паращитовидную железу, гипофизарную железу, краниофарингеальный проток, шишковидную железу, сонный гломус, пояснично-аортальный параганглий, поражение эндокринных желез и связанных структур, выходящее за пределы локализаций, эндокринные железы, лицо или шею, грудную клетку, брюшную полость, таз, верхнюю конечность, нижнюю конечность, другие плохо определяемые участки, поражение плохо определяемых участков, выходящее за пределы локализаций, лимфатические узлы лица головы шеи, внутригрудные лимфатические узлы, внутрибрюшные лимфатические узлы, подмышечные лимфатические узлы, лимфатические узлы в паховой области, лимфатические узлы таза, лимфатические узлы во многих местах тела, лимфатические узлы из неизвестных мест тела.

В настоящее изобретение включено, что мишень, с которой способна связываться адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, является мишенью, которая выявляется при индикации объекта, относящегося к следующей группе D, группе E, группе F, группе G, группе H, группе I, группе J, группе K и/или группе L:

группа D: острая лимфобластическая лейкемия (ОЛЛ), острая миелоидная лейкемия (ОМЛ), адренокортикальная карцинома, рак анального канала, астроцитомы, базальноклеточная карцинома, рак мочевого пузыря, рак кости, глиома ствола головного мозга, опухоль головного мозга, рак молочной железы, лимфома Беркитта, карциноидная опухоль, карцинома неизвестной первичной локализации, цервикальный рак, хроническая лимфоцитарная лейкемия (ХЛЛ), хроническая миелоцитарная лейкемия (ХМЛ), рак толстой кишки, колоректальный рак, протоковая карцинома in situ (DCIS), эмбриональные опухоли, эндометриальный рак, эзофагеальный рак, саркома Юинга, рак желчного пузыря, рак желудка, глиома, волосатоклеточный лейкоз, рак головы и шеи, гепатоцеллюлярный рак, лимфома Ходжкина, лимфома Ходжкина, внутриглазная меланома, рак гортани, лейкемия, рак печени, дольковая карцинома in situ (LCIS), рак легких, лимфома, меланома, рак ротовой полости, множественная миелома, миелодиспластические синдромы, рак носовой полости и околоносовых пазух, назофарингеальный рак, нейробластома, неходжкинская лимфома, немелкоклеточный рак легких, оральный рак, остеосаркома, рак яичника, рак поджелудочной железы, нейроэндокринные опухоли поджелудочной железы, параганглиома, рак паращитовидной железы, рак полового члена, фарингеальный рак, феохромоцитома, опухоль гипофиза, первичная лимфома, рак простаты, ректальный рак, почечно-клеточный рак, ретинобластома, рак слюнной железы, саркома, синдром Сезари, рак кожи, мелкоклеточный рак легких, рак тонкой кишки, плоскоклеточная карцинома, тестикулярный рак, тимома и карцинома тимуса, рак щитовидной железы, рак уретры, саркома матки, вагинальный рак, рак вульвы, опухоль Вильмса;

группа E: острая лимфобластическая лейкемия (ОЛЛ), острая миелоидная лейкемия (ОМЛ), рак анального канала, астроцитомы, базальноклеточная карцинома, рак мочевого пузыря, рак кости, опухоль головного мозга, рак молочной железы, лимфома Беркитта, цервикальный рак, хроническая лимфоцитарная лейкемия (ХЛЛ), хроническая миелоцитарная лейкемия (ХМЛ), рак толстой кишки, колоректальный рак, эндометриальный рак, эзофагеальный рак, саркома Юинга, рак желчного пузыря, рак желудка, глиома, волосатоклеточный лейкоз, рак головы и шеи, гепатоцеллюлярный рак, лимфома Ходжкина, лейкемия, рак печени, рак легких, лимфома, меланома, множественные миелома, назофарингеальный рак, нейробластома, неходжкинская лимфома, немелкоклеточный рак легких, оральный рак, остеосаркома, рак яичника, рак поджелудочной железы, нейроэндокринные опухоли поджелудочной железы, параганглиома, рак паращитовидной железы, фарингеальный рак, феохромоцитома, первичная лимфома, рак простаты, ректальный рак, почечно-клеточный рак, саркома, рак кожи, мелкоклеточный рак легких, плоскоклеточная карцинома, тестикулярный рак, рак щитовидной железы, саркома матки, вагинальный рак, рак вульвы;

группа F: острая лимфобластическая лейкемия (ОЛЛ), острая миелоидная лейкемия (ОМЛ), рак анального канала, рак мочевого пузыря, рак кости, опухоль головного мозга, рак молочной железы, цервикальный рак, хроническая лимфоцитарный лейкемия (ХЛЛ), хроническая миелоцитарная лейкемия (ХМЛ), рак толстой кишки, колоректальный рак, эндометриальный рак, эзофагеальный рак, саркома Юинга, рак желудка, глиома, волосатоклеточный лейкоз, рак головы и шеи, гепатоцеллюлярный рак, лимфома Ходжкина, лейкемия, рак легких, лимфома, меланома, неходжкинская лимфома, немелкоклеточный рак легких, остеосаркома, рак яичника, рак поджелудочной железы, нейроэндокринные опухоли поджелудочной железы, первичная лимфома, рак простаты, ректальный рак, почечно-клеточный рак, саркома, рак кожи, мелкоклеточный рак легких, плоскоклеточная карцинома, рак щитовидной железы, вагинальный рак, рак вульвы;

группа G: рак мочевого пузыря, рак кости, рак молочной железы, цервикальный рак, рак толстой кишки, колоректальный рак, эндометриальный рак, саркома Юинга, рак желудка, гепатоцеллюлярный рак, лимфома Ходжкина, лейкемия, рак легких, лимфома, меланома, неходжкинская лимфома, немелкоклеточный рак легких, рак яичника, рак поджелудочной железы, рак простаты, ректальный рак, почечно клеточный рак, саркома, мелкоклеточный рак легких, плоскоклеточная карцинома, рак щитовидной железы;

группа H: рак поджелудочной железы (Ehlers et al., Ann Surg, 2000, 231, 838-848; Reubi et al., Gut, 1998, 42, 546-550), мелкоклеточный рак легких (Moody, Panminerva Med, 2006, 48, 19-26; Ocejo-Garcia et al., рак легких, 2001, 33, 1-9), немелкоклеточный рак легких (Alifano et al., Clin Cancer Res, 2010, 16, 4401-4410; Moody et al., Life Sci, 2014, 100, 25-34), рак простаты (Amorino et al., Oncogene, 2007, 26, 745-756; Taylor et al., Prostate, 2012, 72, 523-532; Valerie et al., Cancer Res, 2011, 71, 6817-6826; Swift et al., Cancer Res, 2010, 70, 347-356), колоректальный рак (Chao et al., J Surg Res, 2005, 129, 313-321; Gui et al., Peptides, 2008, 29, 1609-1615; Bossard et al., Peptides, 2007, 28, 2030-2035), саркома Юинга (Reubi et al., Int J Cancer, 1999, 82, 213-218), менингиома (Reubi et al., Int J Cancer, 1999, 82, 213-218), рак молочной железы (Dupouy et al., PLoS One, 2009, 4, e4223; Souaze et al., Cancer Res, 2006, 66, 6243-6249), рак желудка (Schulz et al., J Endocrinol, 2006, 191, 121-128; Thomas et al., Endocr Rev, 2003, 24, 571-599), мезотелиома (Alifano et al., Biochimie, 2009), рак головы и шеи (Shimizu et al., Int J Cancer, 2008, 123, 1816-1823), стромальные опухоли желудочно-кишечного тракта (GIST) (Gromova et al., PLoS One, 2011, 6, e14710), нейробластома Tavares, меланома (Zhang et al., Mol Cell Biochem, 2014, 389, 1-8), хронический В-клеточный лейкоз (Saada et al., J Immunol, 2012, 189, 5293-5303), лейомиосаркома (Rodriguez et al., Int J Gynecol Pathol, 2011, 30, 354-363; Rodriguez et al., Biol Reprod, 2010, 83, 641-647) и Т-клеточная лимфома кожи Ramez;

группа I: рак поджелудочной железы (Ehlers et al., Ann Surg, 2000, 231, 838-848; Reubi et al., Gut, 1998, 42, 546-550), мелкоклеточный рак легких (Moody, Panminerva Med, 2006, 48, 19-26; Ocejo-Garcia et al., Lung Cancer, 2001, 33, 1-9), немелкоклеточный рак легких (Alifano et al., Clin Cancer Res, 2010, 16, 4401-4410; Moody et al., Life Sci, 2014, 100, 25-34), рак простаты (Amorino et al., Oncogene, 2007, 26, 745-756; Taylor et al., Prostate, 2012, 72, 523-532; Valerie et al., Cancer Res, 2011, 71, 6817-6826; Swift et al., Cancer Res, 2010, 70, 347-356), колоректальный рак (Chao et al., J Surg Res, 2005, 129, 313-321; Gui et al., Peptides, 2008, 29, 1609-1615; Bossard et al., Peptides, 2007, 28, 2030-2035), саркома Юинга (Reubi et al., Int J Cancer, 1999, 82, 213-218), менингиома (Reubi et al., Int J Cancer, 1999, 82, 213-218), рак молочной железы (Dupouy et al., PLoS One, 2009, 4, e4223; Souaze et al., Cancer Res, 2006, 66, 6243-6249), рак желудка (Schulz et al., J Endocrinol, 2006, 191, 121-128; Thomas et al., Endocr Rev, 2003, 24, 571-599), мезотелиома (Alifano et al., Biochimie, 2009);

группа J: рак поджелудочной железы (Ehlers et al., Ann Surg, 2000, 231, 838-848; Reubi et al., Gut, 1998, 42, 546-550), мелкоклеточный рак легких (Moody, Panminerva Med, 2006, 48, 19-26; Ocejo-Garcia et al., Lung Cancer, 2001, 33, 1-9), немелкоклеточный рак легких (Alifano et al., Clin Cancer Res, 2010, 16, 4401-4410; Moody et al., Life Sci, 2014, 100, 25-34), рак простаты (Amorino et al., Oncogene, 2007, 26, 745-756; Taylor et al., Prostate, 2012, 72, 523-532; Valerie et al., Cancer Res, 2011, 71, 6817-6826; Swift et al., Cancer Res, 2010, 70, 347-356), колоректальный рак (Chao et al., J Surg Res, 2005, 129, 313-321; Gui et al., Peptides, 2008, 29, 1609-1615; Bossard et al., Peptides, 2007, 28, 2030-2035), рак молочной железы (Dupouy et al., PLoS One, 2009, 4, e4223; Souaze et al., Cancer Res, 2006, 66, 6243-6249), саркома Юинга (Reubi et al., Int J Cancer, 1999, 82, 213-218);

группа K: рак поджелудочной железы (Ehlers et al., Ann Surg, 2000, 231, 838-848; Reubi et al., Gut, 1998, 42, 546-550), рак простаты (Amorino et al., Oncogene, 2007, 26, 745-756; Taylor et al., Prostate, 2012, 72, 523-532; Valerie et al., Cancer Res, 2011, 71, 6817-6826; Swift et al., Cancer Res, 2010, 70, 347-356), мелкоклеточный рак легких (Moody, Panminerva Med, 2006, 48, 19-26; Ocejo-Garcia et al., Lung Cancer, 2001, 33, 1-9), рак молочной железы (Dupouy et al., PLoS One, 2009, 4, e4223; Souaze et al., Cancer Res, 2006, 66, 6243-6249), колоректальный рак (Chao et al., J Surg Res, 2005, 129, 313-321; Gui et al., Peptides, 2008, 29, 1609-1615; Bossard et al., Peptides, 2007, 28, 2030-2035); и

группа L: рак поджелудочной железы (Ehlers et al., Ann Surg, 2000, 231, 838-848; Reubi et al., Gut, 1998, 42, 546-550), рак простаты (Amorino et al., Oncogene, 2007, 26, 745-756; Taylor et al., Prostate, 2012, 72, 523-532; Valerie et al., Cancer Res, 2011, 71, 6817-6826; Swift et al., Cancer Res, 2010, 70, 347-356), мелкоклеточный рак легких (Moody, Panminerva Med, 2006, 48, 19-26; Ocejo-Garcia et al., рак легких, 2001, 33, 1-9).

В настоящее изобретение включено, что мишень, с которой способна связываться адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, представляет собой мишень, выбранную из классов мишеней, содержащих GPCR, ионный канал, адгезионную молекулу, рецептор суперсемейства иммуноглобулинов, рецептор тирозинкиназы, рецептор тирозинфосфатазы, член семейства рецепторов фактора некроза опухоли, внеклеточную протеиновую матрицу, транспорт, матриксную металлопротеиназу и CD молекулы.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению GPCR, с которым способна связываться дополнительная адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, выбран из группы, включающей GPCR класса A, GPCR класса B, GPCR класса C, GPCR адгезионного класса, GPCR связанного с ожогом белка класса и другие 7TM белки.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению ионный канал, с которым способна связываться дополнительная адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, выбран из группы, включающей потенциалзависимый ионный канал, лигандзависимый ионный канал и другие ионные каналы.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению адгезионная молекула, с которой способна связываться дополнительная адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению способен, выбрана из группы, включающей интегрин, молекулу клеточной адгезии (CAM), селектин, кадгерин, лектин и клаудин.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению рецептор суперсемейства иммуноглобулинов, с которым способна связываться дополнительная адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, выбран из группы, включающей цитокиновый рецептор, рецептор фактора роста и Ig связывающий рецептор.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению экстрацеллюлярный матриксный белок, с которым способна связываться дополнительная адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, выбран из группы, включающей протеогликаны, гиалуроновую кислоту, коллаген, эластин, фибронектин, ламинин, фибриллин и нидоген.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению транспортер, с которым способна связываться дополнительная адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, выбран из группы, включающей семейство ATP-связывающих кассетных транспортеров, АТФазу F-типа, АТФазу V-типа, АТФазу P-типа, член суперсемейства мембранных транспортеров (MFS) транспортеров, и член суперсемейства SLC переносчиков растворенных веществ.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению мишень, с которой способна связываться дополнительная адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, выбрана из группы B, определенной в настоящем документе.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению мишень, с которой способна связываться дополнительная адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, выбрана из группы, включающей рецепторы CCK (Mailleux et al., Neurosci Lett, 1990, 117, 243-247; Reubi et al., Cancer Res, 1997, 57, 1377-1386) (Upp et al., Cancer Res, 1989, 49, 488-492; Jensen, Pharmacol Toxicol, 2002, 91, 333-350), рецепторы секретина (Korner et al., Am J Pathol, 2005, 167, 959-968), нейротензиновые рецепторы (Ehlers et al., Ann Surg, 2000, 231, 838-848; Reubi et al., Gut, 1998; Reubi et al., Int J Cancer, 1999, 82, 213-218), рецепторы NPY (Reubi et al., Cancer Res, 2001, 61, 4636-4641; Magni et al., Ann Oncol, 2001, 12 Suppl 2, S27-29), фибронектин ED-B (Menrad et al., Expert Opin Ther Targets, 2005, 9, 491-500), фибронектин ED-A (Xiang et al., PLoS One, 2012, 7, e35378), рецепторы соматостатина (de Herder et al., Endocr Relat Cancer, 2003, 10, 451-458; Reubi et al., Int J Cancer, 1999, 81, 376-386; Reubi et al., J Clin Endocrinol Metab, 2000, 85, 3882-3891), рецепторы бомбезина (Reubi et al., Clin Cancer Res, 2002, 8, 1139-1146; Fathi et al., J Cell Biochem Suppl, 1996, 24, 237-246), тенасцин (Kusagawa et al., Br J Cancer, 1998, 77, 98-102; Brack et al., Clin Cancer Res, 2006), интегрин avb6 (Bandyopadhyay et al., Curr Drug Targets, 2009, Hausner et al., Cancer Res, 2007), интегрин a5b1 (Roman et al., Am J Respir Cell Mol Biol, 2010, 43, 684-691), интегрин avb3 (Kumar, Curr Drug Targets, 2003, 4, 123-131; Danhier et al., Mol Pharm, 2012, 9, 2961-2973), желудочная слизь (Singh et al., Cancer Biol Ther, 2007, 6, 481-486), глипикан 3 (Baumhoer et al., Am J Clin Pathol, 2008, 129, 899-906), гепсин (Klezovitch et al., Cancer Cell, 2004, 6, 185-195), Robo1 (Wang et al., Cancer Cell, 2003, 4, 19-29), Robo4 (Grone et al., Oncol Rep, 2006, 15, 1437-1443), CD3, CD19 (Raufi et al., Cancer Manag Res, 2013, 5, 225-233), CD20 (Davis et al., Clin Cancer Res, 1999, 5, 611-615; Kosmas et al., Leukemia, 2002, 16, 2004-2015), CD22 (Tu et al., J Exp Ther Oncol, 2011, 9, 241-248), CD25 (Rech et al., Ann N Y Acad Sci, 2009, 1174, 99-106), CD30 (Mechtersheimer et al., Cancer, 1990, 66, 1732-1737; Engert, Haematologica, 2013, 98, 1165-1168), CD33 (Linenberger, Leukemia, 2005, 19, 176-182), CD40 (Vonderheide et al., Clin Cancer Res, 2013, 19, 1035-1043), CD44 (сплайс-варианты, например, v6), CD77 (гликосфинголипид Gb3) (Distler et al., PLoS One, 2009, 4, e6813), CD96 (Hosen et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 2007, 104, 11008-11013), CD123 (Jin et al., Cell Stem Cell, 2009, 5, 31-42), MCT1 (Sonveaux et al., PLoS One, 2012, 7, e33418), MCT4 (Gotanda et al., Anticancer Res, 2013, 33, 2941-2947), EMMPRIN (CD147) (Nabeshima et al., Pathol Int, 2006, 56, 359-367), PKN3 (протеинкиназа N3) (Unsal-Kacmaz et al., Mol Oncol, 2012, 6, 284-298; Aleku et al., Cancer Res, 2008, 68, 9788-9798), мезотелин (Ho et al., Clin Cancer Res, 2007, 13, 1571-1575), EpCAM (адгезивная молекула эпителиальных клеток) (Munz et al., Cancer Res, 2009, 69, 5627-5629) (=HEA, человеческий эпителиальный антиген α), молекула адгезии сосудистого эндотелия 1 типа (VCAM-1) (Chen et al., Clin Cancer Res, 2012, 18, 5520-5525), эндоглин (EDG) (Fonsatti et al., Cardiovasc Res, 2010, 86, 12-19), gpA33 (Rageul et al., Int J Cancer, 2009, 125, 2802-2809), VEGF-R (Smith et al., Clin Cancer Res, 2010, 16, 3548-3561), трансферриновый рецептор (Daniels et al., Biochim Biophys Acta, 2012, 1820, 291-317), простатический специфический мембранный антиген (PSMA) (Chang et al., Cancer Res, 1999, Ren et al., Med Oncol, 2014), антиген стволовых клеток предстательной железы (PSCA) (Reiter et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 1998, 95, 1735-1740), карциноэмбриональный антиген (CEA) (Hong et al., Biomark Insights, 2008, 3, 435-451), TEM1 (Nanda et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 2006, 103, 3351-3356), TEM5 (Vallon et al., J Biol Chem, 2006, 281, 34179-34188), TEM8 (Frankel et al., Anticancer Agents Med Chem, 2011, 11, 983-992), EGF-R (Nicholson et al., Eur J Cancer, 2001, 37 Suppl 4, S9-15), ErbB2 (English et al., Mol Diagn Ther, 2013, 17, 85-99; Gravalos et al., Ann Oncol, 2008, 19, 1523-1529), EphA2 (Biao-Xue et al., Curr Cancer Drug Targets, 2011; Cai et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging, 2007), клаудин-6/-18 (Sahin et al., Clin Cancer Res, 2008, 14, 7624-7634; Morin, Cancer Res, 2005, 65, 9603-9606; Kominsky, Expert Rev Mol Med, 2006, 8, 1-11), CD52 (Rawstron et al., Haematologica, 2006, 91, 1577-1578; Piccaluga et al., Haematologica, 2007, 92, 566-567), HLA-DR10 (Epstein et al., Cancer Res, 1987, 47, 830-840; Balhorn et al., Clin Cancer Res, 2007, 13, 5621s-5628s), EGP-1 (эпителиальный гликопротеин-1) (Muhlmann et al., J Clin Pathol, 2009, 62, 152-158; Cubas et al., Biochim Biophys Acta, 2009, 1796, 309-314), CEACAM5 (связанная с карциноэмбриональным антигеном молекула клеточной адгезии 5) (Beauchemin et al., Cancer Metastasis Rev, 2013, 32, 643-671), E-кадгерин (Kowalski et al., Breast Cancer Res, 2003, 5, R217-222; Chan, World J Gastroenterol, 2006, 12, 199-203), CXCR4 (Furusato et al., Pathol Int, 2010, 60, 497-505), LRRC15 (Schuetz et al., Cancer Res, 2006, 66, 5278-5286; O'Prey et al., J Virol, 2008, 82, 5933-5939), MMP (Mitra et al., J Environ Pathol Toxicol Oncol, 2003, 22, 93-100; Davidson et al., Arkh Patol, 2002, 64, 47-53), TFPI (Sierko et al., Thromb Haemost, 2010, 103, 198-204), секретируемая форма кластерина sCLU (Trougakos et al., Int J Biochem Cell Biol, 2002, 34, 1430-1448; Rizzi et al., Endocr Relat Cancer, 2010, 17, R1-17), Siglec-15 (Takamiya et al., Glycobiology, 2013, 23, 178-187), CAAG-1, HММ-MAA (меланома ассоциированный антиген с высоким молекулярным весом) (Kageshita et al., Pigment Cell Res, 1992, Suppl 2, 132-135; Buraggi, Nuklearmedizin, 1986, 25, 220-224), TAG-72 (Qi et al., J Surg Oncol, 1995, 59, 3-9; Muxi et al., Nucl Med Commun, 1999, 20, 123-130), hsp70 (Murphy, Carcinogenesis, 2013, 34, 1181-1188; Guzhova et al., Int J Hyperthermia, 2013, 29, 399-408), эмбриональный антиген-2 (Hakkinen, Transplant Rev, 1974, 20, 61-76; Cheung et al., World J Surg Oncol, 2010, 8, 38), коллаген XXIII (Banyard et al., J Biol Chem, 2003, 278, 20989-20994; Banyard et al., Clin Cancer Res, 2007, 13, 2634-2642), нуклеолин (Joo et al., Glycobiology, 2005, 15, 1-9; Destouches et al., PLoS One, 2008, 3, e2518), TENB2 (Glynne-Jones et al., Int J Cancer, 2001, 94, 178-184), рецептор фактора ткани (Schaffner et al., Semin Thromb Hemost, 2008, 34, 147-153), ASC2 транспортер аминокислот (Shimizu et al., Br J Cancer, 2014, 110, 2030-2039), FAP-альфа (Lee et al., BMC Cancer, 2011, 11, 245), рецептор фолиевой кислоты (Serpe et al., Pharmgenomics Pers Med, 2014, 7, 31-42; Walters et al., Gynecol Oncol, 2013, 131, 493-498), CA19.9 (Haglund et al., Br J Cancer, 1991, 63, 386-389), рецептор ангиопоэтина-/-2 (Holopainen et al., Cancer Res, 2009, 69, 4656-4664; Martin et al., Histol Histopathol, 2008, 23, 773-780), GIP.

В одном варианте конъюгата по изобретению мишень, с которой способна связываться дополнительная адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, выбрана из группы, включающей альфа(v)бета(3) интегрин, альфа(5)бета(1), альфа(v)бета(6) интегрин, транспортер аминокислот ASC, транспортер аминокислот L, аминопептидазу N (ANP, CD13), рецептор ангиопоэтина-1, рецептор предсердного натрийуретического пептида 1, рецептор предсердного натрийуретического пептида 2, транспортер аминокислот A-типа, авидин, тирозинкиназу Bcr-Abl, рецептор бомбензина, рецептор бомбезина подтипа 3, антиген CA 125, CA19.9, кадгерин 2, рецептор кальцитонина, карбоангидразу IX, карциноэмбриональный антиген, рецептор CCK-1, CD105 (эндоглин, EDG), антиген CD137, CD19, CD20, CD21, CD22, CD25, CD27, CD3, CD30, CD33, CD37, CD40, CD44 (сплайс-варианты, например, v6), CD44 рецептор, CD52, молекулу клеточной адгезии CEACAM, Cell поверхностный нуклеолин, хемокиновый рецептор 4 (CXCR4), рецептор холецистокинина подтипа 2 (CCK-2), рецептор холецистокинина типа A (CCK-A), рецептор клаудина 4, клаудин-6, коллаген XXIII, рецептор колониестимулирующего фактора-1 (CSF-1R), рецептор кортикотропин-рилизинг фактора 1 (CRFR1), рецептор кортикотропин-рилизинг фактора 2 (CRFR2), CTLA4, дисиалоганглиозиды, белок DKK2, DPPIV, E-кадгерин, фибронектин ED-A, фибронектин ED-B, рецептор EGF HER2, EGFR (HER1), EGFR тирозинкиназу, EGFR2, EGP-1 (эпителиальный гликопротеин-1), EMMPRIN (CD147), рецептор эндотелина A (ETA), рецептор эндотелина B, EpCAM (адгезивная молекула эпителиальных клеток), рецептор EphA2, рецептор EphrinB4, рецептор эпидермального фактора роста 3, E-селектин, рецептор FGF, белок активации фибробластов-альфа (FAPα), фолат-рецептор, рецептор гастрин высвобождающего пептида (ГВП), рецептор гастрин/холецистокинин-2 (CCK-2, CCK-B), рецептор глюкагон-подобного пептида 1, глюкозный транспортер, транспортерную систему GLUT, транспортеры глутамата, транспортер глутамина, рецептор гликобелка IIb/IIIa (рецептор GPIIb/IIIa), глипикан 3, рецептор гонадотропин-рилизинг гормона, gpA33, рецептор GPR54, гепсин, HLA-DR антиген, интегрины αvβ5, молекулу межклеточной адгезии 1 (ICAM-1), L1-CAM антиген, рецептор лактоферрина, L-транспортер аминокислот (LAT), рецептор гормона, высвобождающего лютеинизирующий гормон, матриксную металлопротеиназу-12, матриксную металлопротеиназу-9, матриксные металлопротеиназы (мембранный тип-1), рецептор меланокортина 1 (MC1R), фактор мезенхимально-эпителиального перехода (c-Met), MIF, MUC1, муцин MUC2, рецептор нейрокинина 1 (NK1), рецептор 1 нейропептида Y (NPY1-R), рецептор 2 нейропептида Y (NPY2-R), рецептор нейропептида Y типа 4 (NPY4-R), рецептор нейротензина, рецептор нейротензина 1 (NTSR1), рецептор нейротензина 2 (NTSR2), PDGFR, рецептор пролактина, простато-специфичный антиген, простатический специфический мембранный антиген (PSMA), антиген стволовых клеток предстательной железы (PSCA), RANKL, Robo1, Robo4, соматостатиновый рецептор, соматостатиновый рецептор 1 (SSTR1), соматостатиновый рецептор 2 (SSTR2), соматостатиновый рецептор 3 (SSTR3), соматостатиновый рецептор подтипа 4, соматостатиновый рецептор типа 5, рецептор вещества P (NK-1R), рецептор вещества K (NK-2R), TAG 72, тенасцин-C, тканевый фактор, трансферриновый рецептор (TfR), эндотелиальный маркер опухоли 1 (TEM1), рецептор фактора некроза опухоли, индуцирующий апоптоз рецептор 1 лиганда, связанного с фактором некроза опухоли (TRAIL-R1), индуцирующий апоптоз рецептор 2 лиганда, связанного с фактором некроза опухоли (TRAILR2), активатор плазминогена урокиназного типа, рецептор активатора плазминогена урокиназного типа (uPAR), молекулу адгезии сосудистого эндотелия 1 (VCAM-1), рецептор сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGFR), рецептор сосудистого эндотелиального фактора роста 2 (VEGFR2), рецептор сосудистого эндотелиального фактора роста 3, рецептор вазоактивного кишечного пептида, рецептор вазоактивного кишечного полипептида 2 (VPAC2).

В одном варианте конъюгата по изобретению мишень, с которой способна связываться дополнительная адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, выбрана из группы, включающей альфа(5)бета(1), альфа(v)бета(3) интегрин, альфа(v)бета(6) интегрин, ангиопоэтин-1 рецептор, рецептор бомбензина, антиген CA 125, CA19.9, карбоангидразу IX, карциноэмбриональный антиген, рецептор CCK-1, CD137 антиген, CD20, CD30, CD40, молекулу клеточной адгезии CEACAM, хемокиновый рецептор 4 (CXCR4), рецептор холецистокинина подтипа 2 (CCK-2), рецептор колониестимулирующего фактора-1 (CSF-1R), рецептор кортикотропин-рилизинг фактора 1 (CRFR1), рецептор кортикотропин-рилизинг фактора 2 (CRFR2), CTLA4, E-кадгерин, фибронектин ED-A, фибронектин ED-B, рецептор EGF HER2, EGFR (HER1), EMMPRIN (CD147), EpCAM (адгезивная молекула эпителиальных клеток), рецептор EphA2, рецептор EphrinB4, эпидермальный фактор роста рецептор 3, E-селектин, рецептор FGF, фолат-рецептор, рецептор гастрин высвобождающего пептида (ГВП), рецептор глюкагон-подобного пептида 1, транспортерную систему GLUT, рецептор гликобелка IIb/IIIa (GPIIb/IIIa рецептор), глипикан 3, рецептор гонадотропин-рилизинг гормона, интегрины αvβ5, молекулу межклеточной адгезии 1 (ICAM-1), антиген L1-CAM, рецептор гормона, высвобождающего лютеинизирующий гормон, матриксные металлопротеиназы (мембранный тип-1), рецептор меланокортина 1 (MC1R), фактор мезенхимально-эпителиального перехода (c-Met), MIF, MUC1, муцин MUC2, рецептор 1 нейропептида Y (NPY1-R), рецептор 2 нейропептида Y (NPY2-R), рецептор нейропептида Y типа 4 (NPY4-R), рецептор нейротензина, рецептор нейротензина 1 (NTSR1), рецептор нейротензина 2 (NTSR2), PDGFR, рецептор пролактина, простата-специфичный антиген, антиген стволовых клеток предстательной железы (PSCA), простатический специфический мембранный антиген (PSMA), RANKL, Robo1, Robo4, соматостатиновый рецептор, рецептор вещества P (NK-1R), рецептор вещества K (NK-2R), тенасцин-C, трансферриновый рецептор (TfR), индуцирующий апоптоз рецептор 1 лиганда, связанного с фактором некроза опухоли (TRAIL-R1), индуцирующий апоптоз рецептор 2 лиганда, связанного с фактором некроза опухоли (TRAILR2), молекулу адгезии сосудистого эндотелия 1 (VCAM-1), рецептор сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGFR), рецептор сосудистого эндотелиального фактора роста 2 (VEGFR2), рецептор сосудистого эндотелиального фактора роста 3, рецептор вазоактивного кишечного пептида, рецептор вазоактивного кишечного полипептида 2 (VPAC2).

В одном варианте конъюгата по изобретению мишень, с которой способна связываться дополнительная адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, выбрана из группы, включающей транспортер аминокислот L, рецептор ангиопоэтина-1, рецептор предсердного натрийуретического пептида 1, рецептор предсердного натрийуретического пептида 2, транспортер аминокислот A-типа, авидин, тирозинкиназу Bcr-Abl, рецептор бомбензина, рецептор бомбезина подтипа 3, кадгерин 2, рецептор кальцитонина, рецептор CCK-1, CD20, CD21, CD27, CD30, CD37, хемокиновый рецептор 4 (CXCR4), рецептор холецистокинина подтипа 2 (CCK-2), рецептор холецистокинина типа A (CCK-A), рецептор клаудина 4, рецептор колониестимулирующего фактора-1 (CSF-1R), белок DKK2, E-кадгерин, рецептор EGF HER2, EGFR (HER1), тирозинкиназу EGFR, EGFR2, рецептор эндотелина A (ETA), рецептор эндотелина B, EpCAM (адгезивная молекула эпителиальных клеток), рецептор EphA2, рецептор EphrinB4, рецептор FGF, рецептор гастрин высвобождающего пептида (ГВП), рецептор гастрина/холецистокинина-2 (CCK-2, CCK-B), рецептор гонадотропин-рилизинг гормона, рецептор GPR54, рецептор лактоферрина, рецептор гормона, высвобождающего лютеинизирующий гормон, матриксную металлопротеиназу-12, рецептор меланокортина 1 (MC1R), рецептор 1 нейропептида Y (NPY1-R), рецептор 2 нейропептида Y (NPY2-R), рецептор нейротензина, соматостатиновый рецептор, рецептор вещества P (NK-1R), рецептор фактора некроза опухоли, активатор плазминогена урокиназного типа, рецептор сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGFR), рецептор вазоактивного кишечного пептида.

В одном варианте конъюгата по изобретению мишень, с которой способна связываться дополнительная адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, выбрана из группы, включающей альфа(v)бета(3) интегрин, альфа(v)бета(6) интегрин, транспортер аминокислот ASC, транспортер аминокислот L, аминопептидазу N (ANP, CD13), рецептор ангиопоэтина-1, рецептор предсердного натрийуретического пептида 1, рецептор предсердного натрийуретического пептида 2, рецептор бомбензина, рецептор бомбезина подтипа 3, антиген CA 125, CA19.9, кадгерин 2, рецептор кальцитонина, карбоангидразу IX, карциноэмбриональный антиген, рецептор CCK-1, CD105 (эндоглин, EDG), CD19, CD20, CD22, CD25, CD3, CD30, CD33, CD40, CD44 (сплайс-варианты, например, v6), рецептор CD44, CD52, молекулу клеточной адгезии CEACAM, нуклеолин клеточной поверхности, рецептор холецистокинина подтипа 2 (CCK-2), клаудин-6, коллаген XXIII, рецептор кортикотропин-рилизинг фактора 1 (CRFR1), рецептор кортикотропин-рилизинг фактора 2 (CRFR2), дисиалоганглиозиды, DPPIV, E-кадгерин, фибронектин ED-A, фибронектин ED-B, рецептор EGF HER2, EGP-1 (эпителиальный гликопротеин-1), EMMPRIN (CD147), рецептор EphA2, белок активации фибробластов-альфа (FAP?), рецептор гастрин высвобождающего пептида (ГВП), глюкозный транспортер, транспортеры глутамата, транспортер глутамина, gpA33, рецептор GPR54, гепсин, HLA-DR антиген, L-транспортер аминокислот (LAT), рецептор лактоферрина, матриксную металлопротеиназу-9, MUC1, рецептор нейрокинина 1 (NK1), рецептор 1 нейропептида Y (NPY1-R), рецептор 2 нейропептида Y (NPY2-R), рецептор нейропептида Y типа 4 (NPY4-R), рецептор нейротензина, рецептор нейротензина 1 (NTSR1), рецептор нейротензина 2 (NTSR2), антиген стволовых клеток предстательной железы (PSCA), простатический специфический мембранный антиген (PSMA), Robo1, соматостатиновый рецептор 1 (SSTR1), соматостатиновый рецептор 2 (SSTR2), соматостатиновый рецептор 3 (SSTR3), соматостатиновый рецептор подтипа 4, соматостатиновый рецептор типа 5, TAG 72, тенасцин-C, рецептор фактора некроза опухоли, рецептор активатор плазминогена урокиназного типа (uPAR), эндотелиальный маркер опухоли 1 (TEM1), тканевый фактор и трансферриновый рецептор (TfR).

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению мишень, с которой способна связываться дополнительная адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, выбрана из группы, включающей рецептор предсердного натрийуретического пептида 1 (Wang et al., моль Cancer, 2011, 10, 56; Kong et al., Cancer Res, 2008, 68, 249-256), рецептор предсердного натрийуретического пептида 2 (Zhao et al., World J Surg Oncol, 2014, 12, 154), рецептор бомбезина подтипа 3 (Reubi et al., Clin Cancer Res, 2002, 8, 1139-1146; Moody et al., Peptides, 2011, 32, 1677-1684), рецептор кальцитонина (Wang et al., Breast Cancer Res Treat, 2004, 83, 109-117), рецептор кортикотропин-рилизинг фактора 1 (CRFR1) (Wangetal.,BiochemBiophysResCommun,2007,362,785-788), рецептор кортикотропин-рилизинг фактора 2 (CRFR2) (Wangetal.,BiochemBiophysResCommun,2007,362,785-788), рецептор эндотелина A (ETA) (Bagnato et al., J Трансl Med, 2004, 2, 16), рецептор эндотелина B (Kandalaft et al., Clin Cancer Res, 2009, 15, 4521-4528), рецептор гастрин высвобождающего пептида (ГВП) (Sun et al., Prostate, 2000, 42, 295-303), рецептор глюкагон-подобного пептида 1 (Korner et al., J Nucl Med, 2007, 48, 736-743), рецептор гонадотропин-рилизинг гормона (Grundker et al., Mol Cancer Ther, 2005, 4, 225-231), рецептор меланоцитстимулирующего гормона (Cheng et al., J Nucl Med, 2007, 48, 987-994), рецептор нейромедина-B (NMBR) (Park et al., Cancer Lett, 2011, 312, 117-127), рецептор нейрокинина-3 (NK-3R) (Rameshwar et al., Blood, 1995, 86, 482-490), рецептор нейропептида Y типа 1 (NPY1-R) (Reubi et al., Cancer Res, 2001, 61, 4636-4641; Magni et al., Ann Oncol, 2001, 12 Suppl 2, S27-29), рецептор нейропептида Y типа 2 (NPY2-R) (Medeiros et al., Int J Cancer, 2012, 131, 276-286; Korner et al., Peptides, 2007, 28, 419-425), рецептор нейропептида Y типа 4 (NPY4-R) (Cox et al., Br J Pharmacol, 2001, 132, 345-353), рецептор нейротензина типа 1 (NTSR1) (Ehlers et al., Ann Surg, 2000, 231, 838-848; Reubi et al., Gut, 1998), рецептор нейротензина типа 2 (NTSR2) (Reubi et al., Int J Cancer, 1999, 82, 213-218), рецептор окситоцина (Bussolati et al., Am J Pathol, 1996, 148, 1895-1903), рецептор активирующего гипофизарную аденилатциклазу полипептида типа I (Reubi et al., Cancer Res, 2000, 60, 3105-3112), рецептор соматостатина 1 (SSTR1) (Fujita et al., Life Sci, 1994, 55, 1797-1806), рецептор соматостатина 2 (SSTR2) (Reubi et al., J Clin Endocrinol Metab, 2000, 85, 3882-3891), рецептор соматостатина 3 (SSTR3) (Reubi et al., Int J Cancer, 1999, 81, 376-386), рецептор соматостатина подтипа 4 (Plockinger et al., Eur J Endocrinol, 2012, 166, 223-234), рецептор соматостатина типа 5 (de Herder et al., Endocr Relat Cancer, 2003, 10, 451-458), сортилин (NTSR3) (Hemmati et al., Avicenna J Med Biotechnol, 2009, 1, 125-131), рецептор вещества P (NK-1R) (Hennig et al., Int J Cancer, 1995, 61, 786-792), рецептор вещества K (NK-2R) (Bigioni et al., Anticancer Drugs, 2005, 16, 1083-1089), рецептор вазоактивного кишечного пептида (VPAC1) (Virgolini et al., N Engl J Med, 1994, 331, 1116-1121), рецептор вазоактивного кишечного полипептида 2 (VPAC2) (Reubi et al., Cancer Res, 2000, 60, 3105-3112), BB4 (Reubi et al., Clin Cancer Res, 2002, 8, 1139-1146).

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению мишень, с которой способна связываться дополнительная адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, выбрана из группы, включающей альфа(v)бета(3) интегрин (Kumar, Curr Drug Targets, 2003, 4, 123-131; Danhier et al., Mol Pharm, 2012, 9, 2961-2973), альфа(v)бета(6) интегрин (Bandyopadhyay et al., Curr Drug Targets, 2009, Hausner et al., Cancer Res, 2007), транспортер аминокислот L (Haase et al., J Nucl Med, 2007, 48, 2063-2071; Imai et al., Anticancer Res, 2010, 30, 4819-4828), рецептор предсердного натрийуретического пептида 1 (Wang et al., моль Cancer, 2011, 10, 56; Kong et al., Cancer Res, 2008, 68, 249-256), рецептор предсердного натрийуретического пептида 2 (Zhao et al., World J Surg Oncol, 2014, 12, 154), рецептор бомбезина подтипа 3 (Reubi et al., Clin Cancer Res, 2002, 8, 1139-1146; Moody et al., Peptides, 2011, 32, 1677-1684), антиген CA 125 (Devan et al., Asian Pac J Cancer Prev, 2013, 14, 4545-4548; Seelenmeyer et al., J Cell Sci, 2003, 116, 1305-1318), CA19.9 (Haglund et al., Br J Cancer, 1991, 63, 386-389), кадгерин 2 (Nakajima et al., Clin Cancer Res, 2004, 10, 4125-4133), рецептор кальцитонина (Wang et al., Breast Cancer Res Treat, 2004, 83, 109-117), карбоангидразу IX (McDonald et al., Oncotarget, 2012, 3, 84-97), карциноэмбриональный антиген (Hong et al., Biomark Insights, 2008, 3, 435-451), CD40 (Vonderheide et al., Clin Cancer Res, 2013, 19, 1035-1043), молекулу клеточной адгезии CEACAM (Beauchemin et al., Cancer Metastasis Rev, 2013, 32, 643-671), хемокиновый рецептор 4 (CXCR4) (Furusato et al., Pathol Int, 2010, 60, 497-505), рецептор колониестимулирующего фактора-1 (CSF-1R) (Kacinski, Ann Med, 1995, 27, 79-85), рецептор кортикотропин-рилизинг фактора 1 (CRFR1) (Wang et al., Biochem Biophys Res Commun, 2007, 362, 785-788), рецептор кортикотропин-рилизинг фактора 2 (CRFR2) (Wang et al., Biochem Biophys Res Commun, 2007, 362, 785-788), фибронектин ED-A (Xiang et al., PLoS One, 2012, 7, e35378), фибронектин ED-B (Menrad et al., Expert Opin Ther Targets, 2005, 9, 491-500), EGFR (HER1) (Nicholson et al., Eur J Cancer, 2001, 37 Suppl 4, S9-15), EMMPRIN (CD147) (Nabeshima et al., Pathol Int, 2006, 56, 359-367), EpCAM (адгезивная молекула эпителиальных клеток) (Munz et al., Cancer Res, 2009, 69, 5627-5629), рецептор эрфина B4 (Li et al., Mol Pharm, 2013, 10, 329-336), рецептор FGF (Katoh et al., Med Res Rev, 2014, 34, 280-300), рецептор гонадотропин-рилизинг гормона (Grundker et al., Mol Cancer Ther, 2005, 4, 225-231), рецептор GPR54 (Cho et al., Cancer Metastasis Rev, 2012, 31, 585-591), рецептор лактоферрина (Wrba et al., Verh Dtsch Ges Pathol, 1986, 70, 247-250), рецептор гормона, высвобождающего лютеинизирующий гормон (Buchholz et al., Int J Oncol, 2009, 35, 789-796), рецептор меланокортина 1 (MC1R) (Cheng et al., J Nucl Med, 2007, 48, 987-994), MUC1 (Singh et al., Cancer Biol Ther, 2007, 6, 481-486), рецептор нейропептида Y типа 4 (NPY4-R) (Cox et al., Br J Pharmacol, 2001, 132, 345-353), рецептор нейротензина 1 (NTSR1) (Ehlers et al., Ann Surg, 2000, 231, 838-848; Reubi et al., Gut, 1998), рецептор нейротензина 2 (NTSR2) (Reubi et al., Int J Cancer, 1999, 82, 213-218), антиген стволовых клеток предстательной железы (PSCA) (Reiter et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 1998, 95, 1735-1740), простатический специфический мембранный антиген (PSMA) (Chang et al., Cancer Res, 1999, Ren et al., Med Oncol, 2014), Robo1 (Wang et al., Cancer Cell, 2003, 4, 19-29), рецептор соматостатина (Reubi et al., Int J Cancer, 1999, 81, 376-386), рецептор вещества P (NK-1R) (Hennig et al., Int J Cancer, 1995, 61, 786-792), тенасцин-C (Kusagawa et al., Br J Cancer, 1998, 77, 98-102; Brack et al., Clin Cancer Res, 2006), трансферриновый рецептор (TfR) (Daniels et al., Biochim Biophys Acta, 2012, 1820, 291-317), рецептор фактора некроза опухоли (Szlosarek et al., Mol Cancer Ther, 2006, 5, 382-390), рецептор сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGFR) (Smith et al., Clin Cancer Res, 2010, 16, 3548-3561), рецептор вазоактивного кишечного пептида (Reubi, J Nucl Med, 1995, 36, 1846-1853).

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению мишень, с которой способна связываться дополнительная адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, выбрана из группы, включающей ангиопоэтин-1 рецептор (Tie-2) (Holopainen et al., Cancer Res, 2009, 69, 4656-4664; Martin et al., 1846-18531846-1853, 2008, 23, 773-780), рецептор бомбензина (Reubi et al., Clin Cancer Res, 2002, 8, 1139-1146; Fathi et al., J Cell Biochem Suppl, 1996, 24, 237-246), рецептор CCK-1 (Mailleux et al., Neurosci Lett, 1990, 117, 243-247; Reubi et al., Cancer Res, 1997, 57, 1377-1386), CD20 (Davis et al., Clin Cancer Res, 1999, 5, 611-615; Kosmas et al., Leukemia, 2002, 16, 2004-2015), CD30 (Mechtersheimer et al., Cancer, 1990, 66, 1732-1737; Engert, Haematologica, 2013, 98, 1165-1168), рецептор холецистокинина подтипа 2 (CCK-2) (Upp et al., Cancer Res, 1989, 49, 488-492; Jensen, Pharmacol Toxicol, 2002, 91, 333-350), E-кадгерин (Kowalski et al., Breast Cancer Res, 2003, 5, R217-222; Chan, World J Gastroenterol, 2006, 12, 199-203), рецептор EGF HER2 (English et al., Mol Diagn Ther, 2013, 17, 85-99; Gravalos et al., Ann Oncol, 2008, 19, 1523-1529), рецептор EphA2 (Biao-Xue et al., Curr Cancer Drug Targets, 2011; Cai et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging, 2007), рецептор гастрин высвобождающего пептида (ГВП) (Carroll et al., Peptides, 1999, 20, 229-237; Saurin et al., Eur J Cancer, 1999, 35, 125-132), рецептор 1 нейропептида Y (NPY1-R) (Reubi et al., Cancer Res, 2001, 61, 4636-4641; Magni et al., Ann Oncol, 2001, 12 Suppl 2, S27-29), рецептор 2 нейропептида Y (NPY2-R) (Medeiros et al., Int J Cancer, 2012, 131, 276-286; Korner et al., Peptides, 2007, 28, 419-425), рецептор нейротензина (Ehlers et al., Ann Surg, 2000, 231, 838-848; Reubi et al., Gut, 1998).

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению мишень, с которой способна связываться дополнительная адресующая часть конъюгата по настоящему изобретению, выбрана из группы, включающей альфа(v)бета(6) интегрин (Bandyopadhyay et al., Curr Drug Targets, 2009, 10, 645-652; Bates, Future Oncol, 2005, 1, 821-828; Eberlein et al., Oncogene, 2013, 32, 4406-4416; Hausner et al., Cancer Res, 2007, 67, 7833-7840; Hecht et al., Appl Immunohistochem Mol Morphol, 2008, 16, 543-547; Kogelberg et al., PLoS One, 2013, 8, e73260; Li et al., Bioorg Med Chem, 2011, 19, 5480-5489; Liu et al., J Nucl Med, 2014; Schittenhelm et al., Int J Clin Exp Pathol, 2013, 6, 2719-2732; Vogetseder et al., Int J Cancer, 2013, 133, 2362-2371), рецептор брадикинина B1 (Chee et al., Biol Chem, 2008, 389, 1225-1233; Esseghir et al., J Pathol, 2006, 210, 420-430; Figueroa et al., Expert Opin Ther Targets, 2012, 16, 299-312; Molina et al., Breast Cancer Res Treat, 2009, 118, 499-510; Moodley et al., Biol Chem, 2005, 386, 375-382; Sgnaolin et al., Invest New Drugs, 2012; Taub et al., Cancer Res, 2003, 63, 2037-2041), EphA2 (Biao-Xue et al., Curr Cancer Drug Targets, 2011; Cai et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging, 2007, 34, 2024-2036; Castano et al., Histol Histopathol, 2008, 23, 1011-1023; Herath et al., Int J Cancer, 2010, 126, 2003-2011; Jackson et al., Cancer Res, 2008, 68, 9367-9374; Kinch et al., Clin Exp Metastasis, 2003, 20, 59-68; Pasquale, Nat Rev Cancer, 2010, 10, 165-180; Tandon et al., Expert Opin Ther Targets, 2011, 15, 31-51; Wang et al., J Med Chem, 2012; Wykosky et al., Mol Cancer Res, 2008, 6, 1795-1806), тенасцин C (Kusagawa et al., Br J Cancer, 1998, 77, 98-102; Brack et al., Clin Cancer Res, 2006, 12, 3200-3208; Brunner et al., J Clin Pathol, 2004, 57, 927-931; Hancox et al., Breast Cancer Res, 2009, 11, R24; Juuti et al., J Clin Pathol, 2004, 57, 1151-1155; Leins et al., Cancer, 2003, 98, 2430-2439; Parekh et al., Lung Cancer, 2005, 47, 17-29; Silacci et al., Protein Eng Des Sel, 2006, 19, 471-478; Tsunoda et al., Am J Pathol, 2003, 162, 1857-1867).

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению дополнительная адресующая часть, предпочтительно, представляет собой адресующую часть, обладающую аффинностью к мишеневой молекуле, с которой способна связываться дополнительная адресующая часть, которая составляет <100 пМ, которая составляет <1 нМ, которая составляет <10 нМ, которая составляет <100 нМ, которая составляет <1 мкМ или которая составляет <10 мкМ. В настоящее изобретение включено, что такая аффинность дополнительной адресующей части показана с помощью варианта воплощения такой дополнительной адресующей части. В частности, такая аффинность дополнительной адресующей части также может быть реализована в таких вариантах воплощения конъюгата по настоящему изобретению, где дополнительная адресующая часть, предпочтительно, выбрана из группы, включающей антитело, связывающие антиген фрагменты антитела, тяжелую цепь верблюжьего IgG (hcIgG), антитело IgNAR хрящевых рыб (например, акулы), белковый каркас, мишень-связывающий пептид, пептидную нуклеиновую кислоту (PNA), мишень-связывающий полипептид или белок, мишень-связывающую молекулу нуклеиновой кислоты, углевод, липид и мишень-связывающую малую молекулу. Способы определения аффинности соединения, такого как дополнительная адресующая часть или мишень, известны специалистам в данной области техники и, например, описаны (Schier et al., Hum Antibodies Hybridomas, 1996, 7, 97-105).

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению дополнительная адресующая часть, предпочтительно, представляет собой адресующую часть, обладающую стабильностью, составляющей 100%, по меньшей мере, 80%, по меньшей мере, 50%, по меньшей мере, 30% или, по меньшей мере, 10% через 24 ч, 12 ч, 8 ч, 4 ч, 2 ч, 1 ч или 30 мин в плазме, сыворотке крови, гомогенате ткани любого происхождения, ферментном коктейле, растворе изолированного фермента, смеси протеаз или в растворе изолированной протеазы. Предпочтительно, дополнительная адресующая часть обладает стабильностью, составляющей 100% через 24 часа при температуре 37°C при указанных выше заданных условиях проведения реакции, предпочтительно, если стабильность исследуют в плазме, сыворотке крови или гомогенате ткани, более предпочтительно, в ткани, которая содержит или экспрессирует мишень, на которую нацелена дополнительная адресующая часть. Однако, также в настоящее изобретение включено, что дополнительная адресующая часть обладает стабильностью, по меньшей мере, 10% через 30 минут при температуре 37°C при указанных выше заданных условиях проведения реакции, предпочтительно, если стабильность исследуют в плазме, сыворотке крови или гомогенате ткани, более предпочтительно, в ткани, которая содержит или экспрессирует мишень, на которую нацелена дополнительная адресующая часть. В настоящее изобретение включено, что такая стабильность дополнительной адресующей части показана с помощью варианта воплощения такой дополнительной адресующей части. Более конкретно, такая стабильность дополнительной адресующей части также может быть реализована в таких вариантах конъюгата по настоящему изобретению, где дополнительная адресующая часть, предпочтительно, выбрана из группы, включающей антитело, связывающие антиген фрагменты антител, тяжелую цепь верблюжьего IgG (hcIgG), антитело IgNAR хрящевых рыб (например, акулы), белковый каркас, мишень-связывающий пептид, пептидную нуклеиновую кислоту (PNA), мишень-связывающий полипептид или белок, мишень-связывающую молекулу нуклеиновой кислоты, углевод, липид и мишень-связывающую малую молекулу.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению дополнительная адресующая часть представляет собой, предпочтительно, адресующую часть, имеющую фактор селективности, равный или более 10000; равный или более чем 1000; равный или более чем 100; равный или более чем 50; равный или более чем 10; равный или более чем 5 или равный или более чем 2 по отношению к анти-мишени. Фактор селективности представляет собой частное от деления константы диссоциации мишени и константы диссоциации анти-мишени. Константу диссоциации обычно используют для описания аффинности между лигандом () (таким как лекарство) и белком (), то есть как плотно лиганд связывается с конкретным белком. Образование комплекса лиганд-белок () может быть описано двухстадийным процессом

.

Соответствующую константу диссоциации определяют как

где [], [] и [] обозначают концентрации белка, лиганда и комплекса, соответственно. Анти-мишень с точки зрения фактора селективности представляет собой, предпочтительно, мишень, на которую должна или не должна быть нацелена дополнительная адресующая часть. В настоящее изобретение включено, что такая селективность дополнительной адресующей части показана любым вариантом воплощения такой дополнительной адресующей части. Более конкретно, такая селективность дополнительной адресующей части может быть реализована в таких вариантах воплощения конъюгата по настоящему изобретению, где дополнительная адресующая часть, предпочтительно, выбрана из группы, включающей антитело, связывающие антиген фрагменты антитела, тяжелую цепь верблюжьего IgG (hcIgG), антитело IgNAR хрящевых рыб (например, акулы), белковый каркас, мишень-связывающий пептид, пептидную нуклеиновую кислоту (PNA), мишень-связывающий полипептид или белок, мишень-связывающую молекулу нуклеиновой кислоты, углевод, липид и мишень-связывающую малую молекулу. Способы определения фактора селективности соединения, такого как дополнительная адресующая часть или мишень, известны специалистам в данной области техники и, например, описаны (Neubauer et al., J Med Chem, 2014, 57, 3410-3417).

В настоящее изобретение включено, что первая адресующая часть TM1 и вторая адресующая часть TM2 связаны или соединены друг с другом с помощью связи. Такая связь может быть прямой, так что оба, ТМ1 и ТМ2, напрямую связаны друг с другом таким образом, как реализовано в варианте воплощения (4) конъюгата изобретения, описанного выше, то есть ([TM1]-[TM2], или с помощью одного или нескольких фрагментов, введенных между указанной первой адресующей частью и указанной второй адресующей частью TM2, таким или более фрагментами, которые представляют собой первый соединительный фрагмент AD1, линкерный фрагмент LM и второй соединительный фрагмент Ad2, или любую их комбинацию, предпочтительно, любую их комбинацию, как описано в настоящем документе. Такая связь обеспечивает то, что первая адресующая часть TM1 и вторая адресующая часть TM2 отделены друг от друга. Такие отделение может быть выражено числом ковалентных связей, реализованных между первой адресующей частью TM1 и второй адресующей частью TM2. В предпочтительном варианте осуществления изобретения ковалентные связи представлены первым соединительным фрагментом AD1, линкерным фрагментом LM и вторым соединительным фрагментом AD2, или любой их комбинацией. В одном варианте осуществления изобретения число ковалентных связей между первой адресующей частью TM1 и второй адресующей частью TM2 составляет 1. В альтернативном варианте осуществления изобретения число ковалентных связей между первой адресующей частью TM1 и второй адресующей частью TM2 составляет примерно от 4 до 1000, предпочтительно, примерно от 5 до 150, и, более предпочтительно, примерно от 6 до 40.

Соединительные фрагменты

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению конъюгат содержит, что касается соединительного фрагмента, только первый соединительный фрагмент AD1. В другом варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению конъюгат содержит, что касается соединительного фрагмента, только второй соединительный фрагмент AD2. В другом варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению конъюгат содержит, что касается соединительного фрагмента, только третий соединительный фрагмент AD3. В другом варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению конъюгат содержит, что касается соединительного фрагмента, только первый соединительный фрагмент AD1 и второй соединительный фрагмент AD2. В другом варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению конъюгат содержит, что касается соединительного фрагмента, только первый соединительный фрагмент AD1 и третий соединительный фрагмент AD3. В другом варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению конъюгат содержит, что касается соединительного фрагмента, только первый соединительный фрагмент AD2 и третий соединительный фрагмент AD3. В другом варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению конъюгат содержит, что касается соединительного фрагмента, первый соединительный фрагмент AD1, второй соединительный фрагмент AD2 и третий соединительный фрагмент AD3.

Нижеследующее, в принципе, применимо к каждому и любому из соединительных фрагментов, которые могут быть реализованы в различных вариантах конъюгата по настоящему изобретению, то есть первый соединительный фрагмент, второй соединительный фрагмент и третий соединительный фрагмент.

Соединительные фрагменты опосредуют связь между двумя различными фрагментами. Основная цель состоит в том, чтобы избирательно генерировать связь между этими двумя фрагментами, которые обычно не имеют дополнительных реакционноспособных групп для осуществления селективной связи. Соответственно, соединительный фрагмент присутствует в конъюгате по настоящему изобретению в случаях, когда два фрагмента конъюгата по настоящему изобретению не предоставляют реакционноспособные группы, более конкретно, две доступные группы, то есть по одной на каждом из двух фрагментов, которые не являются дополнительными, предпочтительно, которые не позволяют образовывать связи между указанными двумя различными фрагментами. Ввиду этого в предпочтительном варианте осуществления изобретения соединительный фрагмент предоставляет две реакционноспособные группы, где первая из указанных двух реакционноспособных групп является подходящей для создания связи с первым из двух фрагментов, и где вторая из указанных двух реакционноспособных групп является подходящей для создания связи со вторым из двух фрагментов. В предпочтительном варианте осуществления изобретения две реакционноспособные группы, предоставляющие соединительный фрагмент, являются различными. В альтернативном варианте осуществления изобретения две реакционноспособные группы, предоставляющие соединительный фрагмент, являются одинаковыми.

В соответствии с функцией соединительного фрагмента в конъюгате по настоящему изобретению, скелет такого соединительного фрагмента, в принципе, может быть весьма разнообразным до той степени, пока такой скелет соединительного фрагмента не оказывает вредного влияния на синтез и применение, соответственно, конъюгата по настоящему изобретению.

Соединительные фрагменты в некоторых вариантах воплощения являются бифункциональными фрагментами, которые известны в настоящей области техники. Смотри, например, работу Bioconjugate Techniques, G. T. Hermanson (Academic Press, San Diego, CA, 1996), которая включена в качестве ссылки во всей ее полноте.

Также, в соответствии с функцией соединительного фрагмента в конъюгате по настоящему изобретению реакционноспособные группы, несущие или предоставляющие соединительный фрагмент, имеют важное значение. Специалисту в данной области техники следует принять во внимание, что, в зависимости от класса структур и происхождения адресующей части, молекулой-мишенью предоставляются различные типы реакционноспособных групп. В зависимости от типа реакционноспособной группы, предоставленной адресующей частью, соединительный фрагмент предоставляет реакционноспособную группу, которая является дополнительной к такой реакционноспособной группе, предоставленной адресующей частью. Если, например, адресующей частью является белок, такой как антитело или фрагмент антитела, предпочтительными реакционноспособными группами для образования связи с другим фрагментом и, в частности, с соединительным фрагментом, являются сульфгидрильные группы и аминогруппы. Сульфгидрильные группы могут быть образованы путем восстановления внутримолекулярной дисульфидной связи адресующей части. Альтернативно, сульфгидрильные группы могут быть образованы путем реакции аминогруппы лизинового фрагмента адресующей части с использованием 2-иминотиолана (реагент Трота) или другого образующего сульфгидрил реагента. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, соединительный фрагмент образует тиоэфирную связь с атомом серы адресующей частью.

Далее изложены различные принципы разработки и принципы взаимодействия соединительного фрагмента, подходящие для использования в конъюгате по настоящему изобретению.

Предпочтительные связи, устанавливаемые между двумя фрагментами посредством соединительного фрагмента, являются связями, указанными в таблице 3 данного документа.

Предпочтительно, связи, устанавливаемые между двумя фрагментами посредством соединительного фрагмента, выбраны из группы, включающей амидную связь, уреидную связь, тиоэфирную связь, алкиламинную связь, триазольную связь, оксимную связь, гидразоновую связь, гидразидную связь, простую эфирную связь, карбаматную связь, аминную связь, дисульфидную связь, пиразиновую связь и дигидропиразиновую связь. Кроме того, любые связи, представленные в таблице 4 в данном документе, могут быть реализованы посредством соединительного фрагмента, предпочтительно, первого соединительного фрагмента.

Общая формула предпочтительного варианта соединительного фрагмента является следующей:

RG3-R8-RG4 (10),

где RG3 представляет собой реакционноспособную группу, как описано в настоящем документе, предпочтительно, реакционноспособную группу, указанную в таблице 4 или выбранную из группы, включающей амино, карбоновую кислоту, активированную карбоновую кислоту, хлор, бром, йод, сульфгидрил, гидроксил, сульфоновую кислоту, активированную сульфоновую кислоту, сложные эфиры сульфоновой кислоты, такие как мезилат или тозилат, акцепторы Михаэля, напряженные алкены, такие как транс-циклооктен, изоцианат, изотиоцианат, альдегид, кетон, аминоокси, гидразид, гидразин, азид, алкин и тетразин;

где RG4 представляет собой реакционноспособную группу, как описано в настоящем документе, предпочтительно, реакционноспособную группу, указанную в таблице 4 или выбранную из группы, включающей амино, карбоновую кислоту, активированную карбоновую кислоту, хлор, бром, йод, сульфгидрил, гидроксил, сульфоновую кислоту, активированную сульфоновую кислоту, сложные эфиры сульфоновой кислоты, такие как мезилат или тозилат, акцепторы Михаэля, напряженные алкены, такие как транс-циклооктен, изоцианат, изотиоцианат, альдегид, кетон, аминоокси, гидразид, гидразин, азид, алкин и тетразин; и

где R8 выбран из

-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₃-C₈)карбоцикло-, -O-(C₁-C₈)алкила-, -арилена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-арилена-, -арилен-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)карбоцикло, -(C₃-C₈)карбоцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₃-C₈)гетероцикло-, (C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)гетероцикло-, -(C₃-C₈)гетероцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(CH₂CH₂O)_r- и -(CH₂CH₂O)_r-CH₂-;

и r обозначает любое целое число из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10.

В одном варианте осуществления изобретения R8 представляет собой -(C₁-C₁₀)алкилиден-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)карбоцикло, -(C₃-C₈)гетероцикло-, -(CH₂CH₂O)_r- и -(CH₂CH₂O)_r-CH₂-].

В предпочтительном варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению R8 соединительного фрагмента представляет собой -(CH₂)_N-, и n обозначает любое целое число из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10, предпочтительно, n обозначает 5.

В предпочтительном варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению R8 соединительного фрагмента представляет собой -(CH₂-CH₂-O)_r-CH₂-, где r обозначает целое число из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10, предпочтительно, r обозначает 2.

Встроенный в конъюгат по настоящему изобретению соединительный фрагмент, как предпочтительно используется в конъюгате по настоящему изобретению, является таким, который указан в следующих формулах, при этом понятно, что в тех случаях, когда соединительный фрагмент представлен в формулах, встроенным между связывающим фрагментом LM и адресующей частью TM2, таким образом являясь вторым соединительным фрагментом, это сделано только с целью иллюстрации, и соединительный фрагмент, как таковой, представляет собой структуру, содержащуюся в квадратных скобках. Сама же структура, изображенная как второй соединительный фрагмент, может, в соответствии с настоящим изобретением, в равной степени быть применима в качестве первой адресующую части:

где Lin1 выбран из группы, включающей -CO-, -S-, -NR¹⁰-, -CO-NR¹⁰-, -CS-NR¹⁰-, -O-, -CH₂-, -SO₂-, -сукцинимид-, -CH₂-CO-NR¹⁰-, -C=C- (в случае, например, триазола), =N-O-, =N-N-, =N-N-CO-, -N=N-N- (в случае, например, триазола), -HC= и -R³C= (оксим и гидразон);

где

«-сукцинимид-» означает

и R¹⁰ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил;

где Lin1 выбран из группы, включающей -CO-, -S-, -NR¹⁰-, -CO-NR¹⁰-, -CS-NR¹⁰-, -O-, -CH₂-, -SO₂-, -сукцинимид-, -CH₂-CO-NR¹⁰-, -C=C- (в случае, например, триазола), =N-O-, =N-N-, =N-N-CO-, -N=N-N- (в случае, например, триазола), -HC= и -R³C= (оксим и гидразон), и R¹⁰ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил; и

где второй целевой фрагмент представляет собой сульфгидрильную группу;

где Lin1 выбран из группы, включающей -CO-, -S-, -NR¹⁰-, -CO-NR¹⁰-, -CS-NR¹⁰-, -O-, -CH₂-, -SO₂-, -сукцинимид-, -CH₂-CO-NR¹⁰-, -C=C- (в случае, например, триазола), =N-O-, =N-N-, =N-N-CO-, -N=N-N- (в случае, например, триазола), -HC= и -R³C= (оксим и гидразон), и R¹⁰ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил; и

где второй целевой фрагмент представляет собой нуклеофильную группу, такую как аминогруппу;

где Lin1 выбран из группы, включающей -CO-, -S-, -NR¹⁰-, -CO-NR¹⁰-, -CS-NR¹⁰-, -O-, -CH₂-, -SO₂-, -сукцинимид-, -CH₂-CO-NR¹⁰-, -C=C- (в случае, например, триазола), =N-O-, =N-N-, =N-N-CO-, -N=N-N- (в случае, например, триазола), -HC= и -R³C= (оксим и гидразон), и R¹⁰ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил; и

где второй целевой фрагмент представляет собой нуклеофильную группу, подобную амино или гидроксильной группе;

где Lin1 выбран из группы, включающей -CO-, -S-, -NR¹⁰-, -CO-NR¹⁰-, -CS-NR¹⁰-, -O-, -CH₂-, -SO₂-, -сукцинимид-, -CH₂-CO-NR¹⁰-, -C=C- (в случае, например, триазола), =N-O-, =N-N-, =N-N-CO-, -N=N-N- (в случае, например, триазола), -HC= и -R³C= (оксим и гидразон), и R¹⁰ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил; и

где второй целевой фрагмент представляет собой кетон или альдегидную группу;

где Lin1 выбран из группы, включающей -CO-, -S-, -NR¹⁰-, -CO-NR¹⁰-, -CS-NR¹⁰-, -O-, -CH₂-, -SO₂-, -сукцинимид-, -CH₂-CO-NR¹⁰-, -C=C- (в случае, например, триазола), =N-O-, =N-N-, =N-N-CO-, -N=N-N- (в случае, например, триазола), -HC= и -R³C= (оксим и гидразон), и R¹⁰ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил; и

где второй целевой фрагмент представляет собой кетон или альдегидную группу; и

где Lin1 выбран из группы, включающей -CO-, -S-, -NR¹⁰-, -CO-NR¹⁰-, -CS-NR¹⁰-, -O-, -CH₂-, -SO₂-, -сукцинимид-, -CH₂-CO-NR¹⁰-, -C=C- (в случае, например, триазола), =N-O-, =N-N-, =N-N-CO-, -N=N-N- (в случае, например, триазола), -HC= и -R³C= (оксим и гидразон), и R¹⁰ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил; и

где второй целевой фрагмент представляет собой кетон или альдегидную группу; и

где Lin1 выбран из группы, включающей -CO-, -S-, -NR¹⁰-, -CO-NR¹⁰-, -CS-NR¹⁰-, -O-, -CH₂-, -SO₂-, -сукцинимид-, -CH₂-CO-NR¹⁰-, -C=C- (в случае, например, триазола), =N-O-, =N-N-, =N-N-CO-, -N=N-N- (в случае, например, триазола), -HC= и -R³C= (оксим и гидразон), и R¹⁰ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил; и

где второй целевой фрагмент представляет собой азидную группу.

Специалисту в данной области техники следует принять во внимание, что соединительный фрагмент, подпадающий под формулы (38) и (39), и указанные в них связи являются, предпочтительно, производным, с одной стороны, первичной или вторичной аминогруппы, предпочтительно, представленной адресующей частью, и, с другой стороны, реакционноспособной группы, выбранной из группы, включающей карбоновую кислоту, активированную карбоновую кислоту, сульфоновую кислоту, активированную сульфоновую кислоту, изоцианаты и изотиоцианаты, где реакционноспособная группа, предпочтительно, представлена соединительным фрагментом.

Специалисту в данной области техники следует принять во внимание, что соединительный фрагмент, подпадающий под формулы от (34) до (37), и указанные в них связи являются, предпочтительно, производным, с одной стороны, сульфгидрильной группы, предпочтительно, представленной адресующей частью, и, с другой стороны, реакционноспособной группы, выбранной из группы, включающей акцептор Михаэля, галоген и сульфгидрил, где реакционноспособная группа, предпочтительно, представлена соединительным фрагментом.

Специалисту в данной области техники следует принять во внимание, что соединительный фрагмент, подпадающий под формулы от (40) до (42), и указанные в них связи являются, предпочтительно, производным, с одной стороны, углевода, предпочтительно, представленного адресующей частью, где углевод является, предпочтительно, мягко окисленным с использованием реагента, такого как, например, перйодат натрия, и полученное звено (-CHO) окисленного углевода может быть конденсировано с реакционноспособной группой, выбранной из группы, включающей гидразид, аминоокси, первичный или вторичный амино или гидразин, такие как описанные в работе Kaneko, T. et al. Bioconjugate Chem 1991, 2, 133-141, где группа, предпочтительно, представлена соединительным фрагментом.

В еще одном варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению соединительным фрагментом является один из

Если в варианте осуществления изобретения должна быть установлена связь между фрагментом A, содержащим первичную аминогруппу (A-NH₂), и фрагментом B, содержащим сульфгидрильную группу (B-SH), в варианте осуществления изобретения используется соединительный фрагмент, который способен образовывать первую связь с аминогруппой фрагмента A и вторую связью с сульфгидрильным фрагментом B. Отдельные синтетические предшественники для соединительных фрагментов по этому применению либо коммерчески доступны, а также упоминаются как перекрестносшивающие агенты, либо могут быть получены специалистом в данной области обычным образом.

В этом примере первая связь с аминогруппой фрагмента A, предпочтительно, выбрана из группы, включающей амидную, мочевинную, тиомочевинную, алкиламиновую и сульфонамидную, и соответствующая третья реакционноспособная группа RG³, как это предусматривается соединительным фрагментом, выбрана из группы, включающей карбоновую кислоту, активированную карбоновую кислоту, сульфоновую кислоту, активированную сульфоновую кислоту, альдегид, кетон, изоцианат и изотиоцианат. Вторая связь с сульфгидрильной группой фрагмента B, предпочтительно, выбрана из группы, включающей простой тиоэфир и дисульфид, и соответствующая четвертая реакционноспособная группа RG⁴, как это предусматривается соединительным фрагментом, выбрана из группы, включающей галоген, акцепторы Михаэля, таких как малеимид или винилсульфон, и активированные смешанные дисульфиды, подобные 2-пиридиндисульфиду.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению соединительный фрагмент, реализующий вышеуказанные принципы, и который опосредует связывание аминосодержащего фрагмента и сульфогидрилсодержащих фрагментов выбран из группы, включающей

где n является целым числом, выбранным из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 и 9, предпочтительно, целым числом является 2 или 3;

где m является целым числом из 0, 1, 2 и 3, предпочтительно, целым числом является X;

где в вышеуказанных формулах соединительный фрагмент изображен в квадратных скобках.

В варианте воплощения конъюгата по изобретению соединительный фрагмент, реализующий вышеуказанные принципы, и который опосредует связь аминосодержащего фрагмента и аминосодержащего фрагмента, образует связи с этими фрагментами, которые независимо выбраны из группы, включающей амидную, мочевинную, тиомочевинную, алкиламиновую и сульфонамидную, и соответствующие реакционноспособные группы, как это предусматривается соединительным фрагментом, независимо выбраны из группы, включающей карбоновую кислоту, активированную карбоновую кислоту, сульфоновую кислоту, активированную сульфоновую кислоту, альдегид, кетон, изоцианат и изотиоцианат. Предпочтительным видом соединительных фрагментов в одном варианте осуществления изобретения являются дикарбоновые кислоты или их активированные формы.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению соединительный фрагмент, реализующий вышеуказанные принципы, и который опосредует связь аминосодержащего фрагмента и содержащего карбоновую кислоту фрагмента, образует связи с этими фрагментами, где первая связь с аминогруппой выбрана из группы, включающей амидную, мочевинную, тиомочевинную, алкиламиновую и сульфонамидную, и соответствующая реакционноспособная группа, как это предусматривается соединительным фрагментом, независимо выбрана из группы, включающей карбоновую кислоту, активированную карбоновую кислоту, сульфоновую кислоту, активированную сульфоновую кислоту, альдегид, кетон, изоцианат и изотиоцианат. Вторая связь с группой карбоновой кислоты является амидной связью, и соответствующая реакционноспособная группа, как это предусматривается соединительным фрагментом, представляет собой первичную или вторичную аминогруппу. Предпочтительным видом соединительных фрагментов в одном варианте осуществления изобретения являются аминокислоты или их активированные формы.

В соответствии с настоящим изобретением конъюгат по настоящему изобретению содержит в качестве первой адресующей части TM1 и/или в качестве второй адресующей части TM2 соединение формулы (2); в связи с таким соединением формулы (2) точкой присоединения к какой-либо другой части молекулы, содержащейся в конъюгате по настоящему изобретению, является R⁷, и, таким образом, в точке присоединения в качестве реакционноспособной группы предоставляется первичная или вторичная аминогруппа.

Как описано более подробно далее и в части «Примеры» соединения по изобретению обычно получают либо жидкофазными, либо твердофазными методами синтеза.

Вполне понятно, что со своей стороны синтез промежуточных продуктов, которые содержат указанное соединение формулы (2) в качестве адресующей части вместе с некоторыми другими фрагментами, содержащимися в конъюгате по настоящему изобретению в активированной форме для последующего конъюгирования, имеет особое значение. В конкретном варианте осуществления изобретения предварительно активированные фрагменты могут быть объединены непосредственно перед использованием или даже после или в процессе in vivo применения.

Далее описаны адресующие части, либо отдельно, либо связанные с соединительным фрагментом, которые реализованы в вариантах воплощения конъюгата по настоящему изобретению.

Характерный пример адресующей части на основе соединения формулы (2) представлен формулой (56):

Получение (56) описано в примере 5A. Данное соединение хорошо подходит для образования амидной, мочевинной или тиоуреидной связей с другими фрагментами, особенно для добавления соединительного фрагмента. Одним примером этого является присоединение содержащего малеимид соединительного фрагмента, описанное в примере 5B:

Данный соединительный фрагмент способен к конъюгации с сульфгидрилсодержащими фрагментами, как показано в примере 19. Соединение (57) также хорошо подходит для конъюгации с белками или модифицированными олигонуклеотидами.

Больше химических возможностей открывается, если в синтезе используют tBu замещенную форму аминокислоты (56), которая описана в примере 3:

Данная адресующая часть может быть использована в разнообразных целях. Прежде всего, ее амидная связь может быть образована с фрагментом, содержащим группу карбоновой кислоты, в растворе (пример 8 и 9), без необходимости выделения активированных карбоксильных групп. Во-вторых, она проще модифицируется с соединительным фрагментом, как показано в примере 4:

Промежуточное соединение (59) было использовано во многих примерах. Он очень хорошо подходит для образования связи с аминосодержащими фрагментами, присоединенными к твердофазной смоле.

Если в одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению в качестве адресующей части имеется объемная структура или она должна быть конъюгирована в качестве адресующей части с адресующей частью формулы (2), часто является желательным иметь более длинный линкерный фрагмент, отделяющий две адресующие части, поскольку это бы гарантировало, что их индивидуальные функции не нарушены. Два соответствующих примера промежуточных соединений описаны более подробно в примерах 6 и 7:

(60),

(61).

Как раскрыто в настоящем документе, конъюгат по настоящему изобретению в одном варианте осуществления изобретения может состоять из первой адресующей части, линкерного фрагмента и второй адресующей части. Такой вариант осуществления изобретения представлен в формуле (28) и подробно описан в примере 24:

Связь адресующей части биотина, мишеневого авидина или стрептавидина с адресующей частью (4) опосредована единственной аминокислотой Ttds в качестве линкерного фрагмента без использования каких-либо соединительных фрагментов.

Линкерный фрагмент

В настоящее изобретение включено, что конъюгат по настоящему изобретению содержит линкерный фрагмент. Однако, в настоящее изобретение включено также, что конъюгат по настоящему изобретению не содержит линкерный фрагмент.

В одном варианте осуществления изобретения линкерный фрагмент LM конъюгата по настоящему изобретению представлен следующей общей формулой:

-[X]_a- [Y]- [Z]_b-,

где

[X]_a представляет собой фрагмент структурного элемента, образованный количеством «a» структурных элементов X,

[Y] представляет собой разветвленный фрагмент или отсутствует,

[Z]_b представляет собой фрагмент структурного элемента, образованный количеством «b» структурных элементов Z, и

где «a» и «b», индивидуально и независимо друг от друга, обозначают любое целое число 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и 20, при условии, что a+b обозначает 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 или 0. В одном варианте осуществления изобретения «a» и «b» самостоятельно обозначают любое целое число 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10. В предпочтительном варианте осуществления изобретения «a» и «b» самостоятельно обозначают любое целое число 1, 2, 3, 4 и 5.

В соответствии с настоящим изобретением в конъюгате по настоящему изобретению фрагмент структурного элемента [X]_a может отсутствовать или может присутствовать в форме единственного структурного элемента X, либо может присутствовать в виде полимера, где полимер состоит из ряда структурных элементов X, где число структурных элементов X, образующих такой полимер, составляет «a», то есть любое целое число из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и 20.

В соответствии с настоящим изобретением в конъюгате по настоящему изобретению фрагмент структурного элемента [Z]_b может отсутствовать или может присутствовать в форме единственного структурного элемента Z, либо может присутствовать в виде полимера, где полимер состоит из ряда структурных элементов Z, где число структурных элементов Z, образующих такой полимер, составляет «b», то есть любое целое число из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и 20.

В соответствии с настоящим изобретением в конъюгате по настоящему изобретению разветвленный фрагмент [Y] либо присутствует, либо отсутствует.

Фрагмент структурного элемента [X]_a, если он присутствует, связан с обоими своими соседними звеньями связью, где связь выбрана из группы, включающей амидную связь, уреидную связь, карбаматную связь, сложноэфирную связь, простую эфирную связь, тиоэфирную связь и дисульфидную связь. Одно из указанных двух звеньев представляет собой либо фрагмент первого адаптора AD1, либо, если конъюгат по настоящему изобретению не содержит первый соединительный фрагмент AD1, первую адресующую часть TM1. Второе из этих двух звеньев представляет собой разветвленный фрагмент Y, если такой разветвленный фрагмент Y присутствует в конъюгате по настоящему изобретению; представляет собой фрагмент структурного элемента [Z]_b, если такой фрагмент структурного элемента [Z]_b присутствует, а разветвленный фрагмент Y отсутствует; представляет собой второй соединительный фрагмент AD2, если такой второй соединительный фрагмент AD2 присутствует, а оба, разветвленный фрагмент Y и фрагмент структурного элемента [Z]_b отсутствуют; и представляет собой вторую адресующую часть TM2, если разветвленный фрагмент Y, фрагмент структурного элемента [Z]_b и второй соединительный фрагмент AD2 отсутствуют.

Фрагмент структурного элемента [X]_a предпочтительно, содержит, по меньшей мере, две реакционноспособные группы. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, по меньшей мере, каждая из двух реакционноспособных групп, независимо и индивидуально, выбрана из группы, включающей первичную аминогруппу, вторичную аминогруппу, группу карбоновой кислоты, активированную карбоновую кислоту, такую как хлорангидрид кислоты, бромангидрид кислоты, сукцинимидный эфир, сложный эфир пентафторфенола, сложный эфир нитрофенола, сложный эфир бензотриазола, сложный эфир азабензотриазола, сложный тиоэфир, симметричный ангидрид, несимметричный ангидрид, хлор, бром, йод, сульфгидрильную группу и гидроксильную группу.

Структурный элемент X, предпочтительно, содержит также, по меньшей мере, две группы. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, по меньшей мере, каждая из двух реакционноспособных групп, независимо и индивидуально, выбрана из группы, включающей первичную аминогруппу, вторичную аминогруппу, группу карбоновой кислоты, активированную карбоновую кислоту, такую как хлорангидрид кислоты, бромангидрид кислоты, сукцинимидный эфир, сложный эфир пентафторфенола, сложный эфир нитрофенола, сложный эфир бензотриазола, сложный эфир азабензотриазола, сложный тиоэфир, симметричный ангидрид, несимметричный ангидрид. Если два или более структурных элементов X ковалентно связаны друг с другом, связь между такими двумя или более структурными элементами X выбрана из группы, включающей амидную связь, уреидную связь, карбаматную связь, сложноэфирную связь, простую эфирную связь, тиоэфирную связь и дисульфидную связь. Предпочтительно, связь является амидной связью.

В одном варианте осуществления изобретения структурный элемент X представлен общей формулой

где

Lin², если присутствует, и Lin³, если присутствует, каждый и независимо выбраны из группы, включающей -CO-, -NR¹⁰-, -S-, -CO-NR¹⁰-, -CS-NR¹⁰-, -O-, -сукцинимид- и -CH₂-CO-NR¹⁰-;

где R¹⁰ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил;

и азот во всех фрагментах, содержащих азот, связан с R⁹;

и где R⁹ выбран из -(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₃-C₈)карбоцикло-, -арилена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-арилена-, -арилен-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-арилен-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)карбоцикло-, -(C₃-C₈)карбоцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)карбоцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена, -(C₃-C₈)гетероцикло-, (C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)гетероцикло-, -(C₃-C₈)гетероцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)гетероцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(CH₂CH₂O)_r- и -(CH₂)_s-(CH₂CH₂O)_r-(CH₂)_t-;

и где

r обозначает любое целое число из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10;

s обозначает любое целое число из 0, 1, 2, 3 и 4; и

t обозначает любое целое число из 0, 1, 2, 3 и 4.

В одном варианте осуществления изобретения структурный элемент X выбран из группы, включающей аминокислоту, дикарбоновую кислоту и диамин. В одном варианте осуществления изобретения аминокислота представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей природные и неприродные аминокислоты. В одном варианте осуществления изобретения аминокислота является кислотой, выбранной из группы, включающей β-аминокислоты, γ-аминокислоты, δ-аминокислоты, ε-аминокислоты и ω-аминокислоты. В еще одном варианте осуществления изобретения аминокислота представляет собой циклическую аминокислоту или линейную аминокислоту. Специалисту в данной области техники следует принять во внимание, что в случае, когда аминокислота имеет стереогенные центры, в структурном элементе X могут быть использованы все стереомерные формы.

В одном варианте осуществления изобретения структурный элемент X представляет собой аминокислоту, где аминокислота выбрана из группы, включающей аминокислоты, которые отличаются интервалом, отделяющим аминогруппу от карбоксильной группы. Такой вид аминокислоты обычно может быть представлен следующим образом:

Настоящим изобретением охватывается, что такая аминокислота дополнительно не замещена. Однако настоящим изобретением охватывается также, что такая аминокислота дополнительно замещена; предпочтительно, таким замещением является CO-NH₂ и/или Ac-NH-.

Представителями такого вида аминокислот, которые могут быть использованы в качестве структурного элемента X, являются глицин (Gly), β-аланин, γ-аминобутановая кислота (GABA), аминопентановая кислота, аминогексановая кислота и гомологи, содержащие вплоть до 10 групп CH₂.

В еще одном варианте осуществления изобретения аминокислота является ароматической аминокислотой; предпочтительно, аминокислота является кислотой, структурная жесткость и ориентация которой могут быть модифицированы. Такой вид аминокислоты обычно может быть представлен следующим образом:

Специалистам в данной области техники будет понятно, что два заместителя, указанные в приведенной выше общей формуле в мета-положении, также могут находиться в любом, пара-положении или в орто-положении. Соответственно, в одном варианте осуществления изобретения ароматическая аминокислота может быть аминокислотой, где два заместителя, указанные в приведенной выше общей формуле в мета-положении, могут быть либо в пара-положении, либо в орто-положении.

Представителями такого вида аминокислот, которые могут быть, предпочтительно, использованы в качестве структурного элемента X, являются 3-аминометилбензойная кислота, 4-аминометилбензойная кислота, антраниловая кислота, 3-аминобензойная кислота и 4-аминобензойная кислота.

В еще одном варианте осуществления изобретения аминокислота является аминокислотой, которая содержит, предпочтительно, в виде скелета, полиэфир. Предпочтительно, такой полиэфир представляет собой полиэтиленгликоль и состоит из 20 мономерных звеньев. Предпочтительно, аминокислота, содержащая такой полиэфир, демонстрирует увеличение гидрофильности по сравнению с аминокислотой, не содержащий такого простого полиэфира. При включении в структурный элемент X и, в конечном счете, во фрагмент структурного элемента [X]_a и линкерный фрагмент LM, соответственно, такой фрагмент структурного элемента [X]_a и линкерный фрагмент LM, соответственно, обычно также показывают увеличение гидрофильности. Предпочтительный вариант осуществления изобретения такого вида аминокислоты изображен далее, где будет понятно, что такая аминокислота может содержать 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 фрагментов этиленоксида:

Предпочтительной аминокислотой является Ttds (N-(3-{2-[2-(3-амино-пропокси)-этокси]-этокси}-пропил)-сукцинамовая кислота), формула которой следующая:

В одном варианте осуществления изобретения структурным элементом X является диамин. Таким диамином является, предпочтительно, диамин, выбранный из группы, включающей

- соединение следующей формулы

где диамин может содержать цепь длиной в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 атомов C;

- соединение следующей формулы

где длина обеих цепей из атомов C, связывающих группу NH₂ с фенильной группой, индивидуально и независимо составляет 1, 2, 3 или 4 атомов C; и где, как будет понятно специалисту в данной области, два заместителя, указанные в вышеприведенной общей формуле в мета-положении, могут также находиться либо в пара-положении, либо в орто-положении; таким образом, в одном варианте осуществления изобретения диамин может быть таким, где два заместителя, указанные в вышеприведенной общей формуле в мета-положении, находятся либо в пара-положении, либо в орто-положении;

- соединение следующей формулы

где длина обеих цепей из атомов C, несущих группу NH₂, присоединенную к каждому из двух концевых атомов O этиленоксидного скелета, имеющихся в диамине, индивидуально и независимо составляет 2, 3 или 4 атомов C; и где этиленоксидный скелет будет содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 мономерных этиленоксидных звеньев.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения диамин представляет собой замещенный диамин, предпочтительно, следующей общей формулы:

где такой замещенный диамин содержит 1, 2, 3, 4, 5 или 6 групп CH₂, предпочтительно, 4 группы CH₂. Как используется в настоящем документе, аббревиатурой для этого вида замещенного диамина, имеющего 4 указанные CH₂ группы, если он представлен в S-конфигурации, является ε-Lys-NH₂, и остаток в его присоединенной форме указывается в виде аббревиатуры -(ε-Lys-NH₂)-, где дефис с левой стороны аббревиатуры символически изображает присоединение к α-амино группе, и дефис с правой стороны изображает присоединение к ε-амино группе данного остатка.

В одном варианте осуществления изобретения структурным элементом X является дикарбоновая кислота. Такая дикарбоновая кислота является, предпочтительно, кислотой, выбранной из группы, включающей:

- соединение следующей формулы

где n обозначает любое целое число из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10;

- соединение следующей формулы

где m и n, индивидуально и независимо друг от друга, обозначают любое целое число 1, 2, 3 и 4; и где, как будет понятно специалисту в данной области, два заместителя, указанные в вышеприведенной общей формуле в мета-положении, могут также находиться либо в пара-положении, либо в орто-положении; таким образом, в одном варианте осуществления изобретения дикарбоновая кислота может быть такой, где два заместителя, указанные в вышеприведенной общей формуле в мета-положении, находятся либо в пара-положении, либо в орто-положении;

- соединение следующей формулы

где целые числа m и o могут индивидуально и независимо быть любыми в диапазоне от 0 до 4; и где целое число n может быть в диапазоне от 1 до 10.

Представителями такого вида дикарбоновых кислот, которые могут быть использованы в качестве структурного элемента X, являются дикарбоновые кислоты, которые, предпочтительно, связаны с подходящими коммерчески доступными циклическими ангидридами. Такие дикарбоновые кислоты включают глутаровую кислоту, янтарную кислоту, фталевую кислоту, 1,2-циклогександикарбоновую кислоту и малеиновую кислоту.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения дикарбоновая кислота представляет собой замещенную дикарбоновую кислоту, предпочтительно, следующей общей формулы:

где целое число n в таких замещенных дикарбоновых кислотах может быть любым в диапазоне от 0 до 6, предпочтительно, n=1 и n=2.

В одном варианте осуществления изобретения структурным элементом X является аминотиол, где аминотиол выбран из группы, включающей аминотиолы, которые отличаются пространственным удалением аминогруппы от сульфгидрильной группы:

где целое число может быть любым в диапазоне 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9.

Представителями такого вида аминотиолов, которые могут быть использованы в качестве структурного элемента X, являются 2-амино-этантиол, 3-амино-пропан-1-тиол, 4-амино-бутан-1-тиол, 5-амино-пентан-1-тиол и 6-амино-гексан-1-тиол.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения аминотиол представляет собой замещенный аминотиол, предпочтительно, следующей общей формулы:

где целое число может быть любым в диапазоне 1, 2, 3, 4, 5 или 6, предпочтительно, n=1 и n=2. Как используется в настоящем документе, аббревиатурой для этого вида замещенных аминотиолов, где n=1, если они представлены в S-конфигурации, является β-Cys-NH₂, и остаток в их присоединенной форме изображается в виде аббревиатуры -(β-Cys-NH₂)-, где дефис с левой стороны сокращения символически изображает присоединение к α-аминогруппе, и дефис с правой стороны изображает присоединение к β-тиоловой группе данного остатка.

В одном варианте осуществления изобретения структурным элементом X является содержащая тиоловую группу карбоновая кислота, где содержащая тиоловую группу карбоновая кислота выбрана из группы, включающей содержащие тиоловую группу карбоновые кислоты, которые отличаются пространственным удалением карбоксильной группа от сульфгидрильной группы:

где целое число может быть любым в диапазоне 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9.

Представителями такого вида содержащих тиоловую группу карбоновых кислот, которые могут быть использованы в качестве структурного элемента X, являются меркаптоуксусная кислота, 3-меркаптопропионовая кислота, 4-меркаптобутановая кислота, 5-меркаптопентановая кислота и 6-меркаптогексановая кислота.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения содержащая тиоловую группу карбоновая кислота представляет собой замещенный аминотиол, предпочтительно, следующей общей формулы:

где целое число может быть любым в диапазоне 1, 2, 3, 4, 5 или 6, предпочтительно, n=1 и n= 2.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению фрагмент структурного элемента [X]_a представляет собой пептид, причем такой пептид образован множеством структурных элементов X, предпочтительно, структурных элементов X, как это определено в настоящем документе. В данном варианте осуществления изобретения связями, соединяющими структурные элементы, являются амидные связи. В настоящее изобретение включено, что структурные элементы X, образующие фрагмент структурного элемента [X]_a, являются одинаковыми или различными. Соответственно, образующий пептид фрагмент структурного элемента [X]_a может быть гомополимером или гетерополимером.

В еще одном варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению фрагмент структурного элемента [X]_a представляет собой полимер, где мономеры, образующий полимер, связаны друг с другом простой эфирной связью. В данном варианте осуществления изобретения структурные элементы X представляют собой соединения, имеющие, предпочтительно, по меньшей мере, две реакционноспособные группы, где, по меньшей мере, одна, по меньшей мере, две реакционноспособные группы выбраны из группы, включающей гидроксильную группу и галоген группу.

В еще одном варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению фрагмент структурного элемента [X]_a представляет собой полимер, где мономеры, то есть структурные элементы X, образующие полимер, связаны друг с другом простой эфирной связью и амидной связью, при условии, что полимер содержит, по меньшей мере, три структурных элемента X, обеспечивая таким образом, по меньшей мере, две связи.

Как было раскрыто в настоящем документе, в качестве фрагмента структурного элемента [X]_a одинаково применим фрагмент структурного элемента [Z]_b, и он включен, таким образом, в настоящее описание в виде ссылки.

Независимо от вышесказанного, следует принять во внимание, что структурный элемент [Z]_b, если он присутствует, связан с обоими своими соседними звеньями с помощью связи, где указанная связь выбрана из группы, включающей амидную связь, уреидную связь, карбаматную связь, сложноэфирную связь, простую эфирную связь, тиоэфирную связь и дисульфидную связь. Одним из двух указанных звеньев является либо второй соединительный фрагмент AD2, либо, если конъюгат по настоящему изобретению не содержит второго соединительного фрагмента AD2, вторая адресующая часть TM1. Другим из двух указанных звеньев является разветвленный фрагмент Y, если такой разветвленный фрагмент Y присутствует в конъюгате по настоящему изобретению; является фрагмент структурного элемента [X]_a, если такой фрагмент структурного элемента [X]_a присутствует, а разветвленный фрагмент Y отсутствует; является первый соединительный фрагмент AD1, если такой первый соединительный фрагмент AD1 присутствует, а оба, разветвленный фрагмент Y и фрагмент структурного элемента [X]_a отсутствуют; и является первой адресующей частью TM1, если разветвленный фрагмент Y, фрагмент структурного элемента [X]_a и первый соединительный фрагмент AD1 отсутствуют.

Разветвленный фрагмент Y

В одном варианте осуществления изобретения конъюгат по настоящему изобретению содержит разветвленный фрагмент Y.

Разветвленный фрагмент Y, если он присутствует, соединен с обоими своими соседними звеньями связью, где связь выбрана из группы, включающей амидную связь, уреидную связь, карбаматную связь, сложноэфирную связь, простую эфирную связь, тиоэфирную связь и дисульфидную связь. Предпочтительной связью является амидная связь. Одно из указанных звеньев представляет собой фрагмент структурного элемента [X]_a, если такой фрагмент структурного элемента [X]_a присутствует, представляет собой первый соединительный фрагмент AD1, если такой соединительный фрагмент AD1 присутствует, а фрагмент структурного элемента [X]_a отсутствует; или представляет собой первую адресующую часть TM1 такой первой адресующей части TM1, если такая первая адресующая часть TM1 присутствует, а оба, фрагмент структурного элемента [X]_a и первый соединительный фрагмент AD1, отсутствуют. Другое из указанных звеньев представляет собой фрагмент структурного элемента [Z]_b, если такой фрагмент структурного элемента [Z]_b присутствует, представляет собой второй соединительный фрагмент AD2, если такой соединительный фрагмент AD2 присутствует, а фрагмент структурного элемента [Z]_b отсутствует; или представляет собой вторую адресующую часть TM2, если такой вторая адресующая часть TM2 присутствует, а оба, фрагмент структурного элемента [Z]_b и второй соединительный фрагмент AD2, отсутствуют.

Предпочтительно, разветвленный фрагмент обеспечивает точку присоединения к конъюгату по настоящему изобретению. Такая точка присоединения дает возможность для установления дополнительной связи между конъюгатом по настоящему изобретению формулы (1) и дополнительным фрагментом. В одном варианте осуществления изобретения дополнительный фрагмент представляет собой третий соединительный фрагмент AD3 или эффекторный фрагмент EM. В одном варианте осуществления изобретения дополнительная связь между конъюгатом по настоящему изобретению формулы (1) и дополнительным фрагментом выбрана из группы, включающей амидную связь, уреидную связь, тиомочевинную связь и аминную связь. Предпочтительная дополнительная связь между конъюгатом по настоящему изобретению формулы (1) и дополнительным фрагментом представляет собой амидную связь.

В одном варианте осуществления изобретения структура разветвленного фрагмента Y основана на структуре структурного элемента X в его различных вариантах, как раскрыто в настоящем документе, таким образом, разветвленный фрагмент Y содержит, по меньшей мере, одну дополнительную реакционноспособную группу. В одном из вариантов осуществления изобретения разветвленный фрагмент содержит, по меньшей мере, три реакционноспособные группы. Предпочтительно, по меньшей мере, одна дополнительная реакционноспособная группа является такой, которая позволяет получить содержащую амидную связь, уреидную связь, тиомочевинную связь и аминную связь, предпочтительно, при условии, что дополнительный фрагмент обеспечивает соответствующую добавочную реакционноспособную группу. Более предпочтительно, по меньшей мере, одна дополнительная реакционноспособная группа выбрана из группы, включающей аминогруппу и карбоксильную группу.

В одном из вариантов осуществления изобретения разветвленный фрагмент Y в дополнение, по меньшей мере, к трем реакционноспособным группам содержит полностью aциклическую структуру. В другом варианте осуществления изобретения разветвленный фрагмент Y в дополнение, по меньшей мере, к трем реакционноспособным группам содержит циклическую структуру. В еще одном варианте осуществления изобретения разветвленный фрагмент Y в дополнение, по меньшей мере, к трем реакционноспособным группам содержит ароматическую структуру.

В одном из вариантов осуществления изобретения разветвленный фрагмент Y представляет собой аминокислоту, где аминокислота содержит дополнительную аминогруппу. Предпочтительно, аминокислота выбрана из группы, включающей α-аминокислоту, β- аминокислоту, γ-аминокислоту и циклическую аминокислоту; более предпочтительно, аминокислота выбрана из группы, включающей α-аминокислоту, β-аминокислоту и циклическую аминокислоту. Особенно предпочтительный разветвленный фрагмент Y представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей 2,3-диаминопропионовую кислоту, 2,4-диаминобутановую кислоту, лизин, гомолизин и орнитин.

В одном из вариантов осуществления изобретения разветвленный фрагмент Y представляет собой аминокислоту, где аминокислота содержит дополнительную карбоксильную группу. Предпочтительно, аминокислота выбрана из группы, включающей α-аминокислоту, β- аминокислоту, γ-аминокислоту, циклическую аминокислоту; более предпочтительно, аминокислота выбрана из группы, включающей α-аминокислоту, β-аминокислоту и циклическую аминокислоту. Особенно предпочтительный разветвленный фрагмент Y представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, 2-аминоадипиновую кислоту и α-аминосубериновую кислоту.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения разветвленный фрагмент Y выбран из группы, включающей описанные далее соединения.

В одном из вариантов осуществления изобретения разветвленный фрагмент Y представляет собой иминокислоту, где иминокислота содержит дополнительную аминогруппу. Такой вид аминокислоты обычно может быть представлен следующим образом:

Предпочтительно, иминокислота выбрана из группы, включающей α-иминокислоту, β-иминокислоту, γ-иминокислоту и циклическую иминокислоту; более предпочтительно, иминокислота выбрана из группы, включающей α-иминокислоту, β-иминокислоту и циклическую иминокислоту. Особенно предпочтительный разветвленный фрагмент Y представляет собой иминокислоту, выбранную из группы, включающей иминоуксусную кислоту, N-карбоксиметил-β-аланин, 3-(2-карбоксиэтиламино)пропановую кислоту, 4,4-бис(N,N-дибутановую кислоту).

В одном из вариантов осуществления изобретения разветвленный фрагмент Y представляет собой иминокислоту, где иминокислота содержит дополнительную карбоксильную группу. Такой вид аминокислоты обычно может быть представлен следующим образом

Предпочтительно, иминокислота выбрана из группы, включающей α-иминокислоту, β-иминокислоту, γ-иминокислоту и циклическую иминокислоту; более предпочтительно, иминокислота выбрана из группы, включающей α-иминокислоту, β-иминокислоту и циклическую иминокислоту. Особенно предпочтительный разветвленный фрагмент Y представляет собой иминокислоту, выбранную из группы, включающей N-(2-аминоэтил)глицин, N-(5-аминопентил)-глицин.

В одном из вариантов осуществления изобретения разветвленный фрагмент Y представляет собой циклическую иминокислоту, где иминокислота содержит дополнительную аминогруппу. Такой вид аминокислоты обычно может быть представлен следующим образом:

Предпочтительно, иминокислота выбрана из группы, включающей α-иминокислоту, β-иминокислоту, γ-иминокислоту и циклическую иминокислоту; более предпочтительно, иминокислота выбрана из группы, включающей α-иминокислоту, β-иминокислоту и циклическую иминокислоту. Особенно предпочтительный разветвленный фрагмент Y представляет собой иминокислоту, выбранный из группы, включающей 4-амино-3-пирролидинкарбоновую кислоту, 3-амино-пролин и 4-амино-пролин.

В одном из вариантов осуществления изобретения разветвленный фрагмент Y представляет собой циклическую иминокислоту, где иминокислота содержит дополнительную аминогруппу. Такой вид аминокислоты обычно может быть представлен следующим образом:

Предпочтительно, иминокислота выбрана из группы, включающей α-иминокислоту, β-иминокислоту, γ-иминокислоту и циклическую иминокислоту; более предпочтительно, иминокислота выбрана из группы, включающей α-иминокислоту, β-иминокислоту и циклическую иминокислоту. Особенно предпочтительный разветвленный фрагмент Y представляет собой иминокислоту, выбранную из группы, включающей 2,3-дикарбоксипирролидин и пирролидин-2,4-дикарбоксилат.

В еще одном варианте осуществления изобретения разветвленный фрагмент Y является ароматической аминокислотой, где аминокислота содержит дополнительную аминогруппу; предпочтительно, где структурная жесткость и ориентация этой аминокислоты могут быть модифицированы. Такой вид аминокислоты обычно может быть представлен следующим образом:

Как будет понятно специалисту в данной области, два заместителя, указанные в вышеприведенной общей формуле в мета-положении, могут также находиться либо в пара-положении, либо в орто-положении. Соответственно, в одном варианте осуществления изобретения ароматическая аминокислота может быть такой, где два заместителя, указанные в вышеприведенной общей формуле в мета-положении, находятся либо в пара-положении, либо в орто-положении. Особенно предпочтительный разветвленный фрагмент Y является ароматической аминокислотой, выбранной из группы, включающей 3,5-диаминобензойную кислоту и 3,5-бис-аминометил-бензойную кислоту.

В еще одном варианте осуществления изобретения разветвленный фрагмент Y является ароматической аминокислотой, где аминокислота содержит дополнительную карбокси группу; предпочтительно, где структурная жесткость и ориентация этой аминокислоты могут быть модифицированы. Такой вид аминокислоты обычно может быть представлен следующим образом

Как будет понятно специалисту в данной области, два заместителя, указанные в вышеприведенной общей формуле в мета-положении, могут также находиться либо в пара-положении, либо в орто-положении. Соответственно, в одном варианте осуществления изобретения ароматическая аминокислота может быть такой, где два заместителя, указанные в вышеприведенной общей формуле в мета-положении, находятся либо в пара-положении, либо в орто-положении. Особенно предпочтительный разветвленный фрагмент Y является ароматической аминокислотой, такой как 5-аминоизофталевая кислота.

В одном из вариантов осуществления изобретения разветвленный фрагмент Y представляет собой триамин. Предпочтительно, триамин выбран из группы, включающей 1,3,5-триазинан, пропан-1,2,3-триамин, 1,3,5-триаминобензол, диэтилентриамин, 3,3̓-диаминопропиламин и бис(гексаметилен)триамин.

В одном из вариантов осуществления изобретения разветвленный фрагмент Y представляет собой трикарбоновую кислоту. Предпочтительно, трикарбоновая кислота выбрана из группы, включающей 1,3,5-бензолтрикарбоновую кислоту, 1,2,3-бензолтрикарбоновую кислоту и 1,2,4-бензолтрикарбоновую кислоту, 1,3,5-бензолтриуксусную кислоту и лимонную кислоту.

Третий соединительный фрагмент AD3

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению конъюгат содержит третий соединительный фрагмент AD3. Предпочтительно, третий соединительный фрагмент AD3 опосредует связь, или устанавливает связь, между разветвленным фрагментом Y и эффекторным фрагментом. Альтернативно, третий соединительный фрагмент AD3 опосредует связь, или устанавливает связь, между второй адресующей частью TM2 и эффекторным фрагментом EM. Связь также упоминается здесь как связь AD3. В одном варианте осуществления изобретения связь AD3 является связью, выбранной из группы, включающей амидную связь, сульфонамидную связь, уреидную связь, тиоуреидную связь, тиоэфирную связь, простую эфирную связь, карбаматную связь, аминную связь, триазольную связь, оксимную связь, гидразоновую связь, дисульфидную связь, пиразиновую связь и дигидро-пиразиновую связь. Предпочтительно, связь AD3 представляет собой связь, выбранную из группы, включающей амидную связь, уреидную связь, тиоуреидную связь и аминную связь.

Для установления связи AD3 третий соединительный фрагмент AD3 содержит первую реакционноспособную группу, и разветвленный фрагмент Y содержит реакционноспособную группу, где реакционноспособная группа разветвленного фрагмента Y является дополнительной к первой реакционноспособной группе третьего соединительного фрагмента AD3, что позволяет образовывать связь AD3. Альтернативно, для установления связи AD3 третий соединительный фрагмент AD3 содержит первую реакционноспособную группу, и вторая адресующая часть TM2 содержит реакционноспособную группу, где реакционноспособная группа второй адресующей части TM2 является дополнительной к первой реакционноспособной группе третьего соединительного фрагмента AD3.

В одном варианте осуществления изобретения реакционноспособная группа разветвленного фрагмента Y, участвующая в образовании связи AD3, выбрана из группы, включающей амино, карбоновую кислоту, активированную карбоновую кислоту, хлор, бром, йод, сульфгидрил, гидроксил, сульфоновую кислоту, активированную сульфоновую кислоту, сложные эфиры сульфоновой кислоты, такие как мезилат или тозилат, акцепторы Михаэля, напряженные алкены, такие как транс-циклооктен, изоцианат, изотиоцианат, альдегид, кетон, аминоокси, гидразид, гидразин, азид, алкин и тетразин.

В одном варианте осуществления изобретения реакционноспособная группа второй адресующей части TM2, участвующая в образовании связи AD3, выбрана из группы, включающей амино, карбоновую кислоту, активированную карбоновую кислоту, хлор, бром, йод, сульфгидрил, гидроксил, сульфоновую кислоту, активированную сульфоновую кислоту, сложные эфиры сульфоновой кислоты, такие как мезилат или тозилат, акцепторы Михаэля, напряженные алкены, такие как транс-циклооктен, изоцианат, изотиоцианат, альдегид, кетон, аминоокси, гидразид, гидразин, азид, алкин и тетразин.

В одном варианте осуществления изобретения третий соединительный фрагмент AD3 является таким, который показан в квадратных скобках формулы (84):

где

Y и EM и R⁹ имеют значения, определенные в настоящем документе; Lin⁴ выбран из группы, включающей -CO-, -NR¹⁰-, -CO-NR¹⁰-, -CS-NR¹⁰-, CH₂- и прямую связь;

где R¹⁰ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил;

и

Lin⁵ выбран из группы, включающей -CO-, -S-, -NR¹⁰-, -CO-NR¹⁰-, -CS-NR¹⁰-, -O-, -CH₂-, -SO₂-, -сукцинимид-, -CH₂-CO-NR¹⁰-, -C=C- (в случае, например, триазола), =N-O-, =N-N-, =N-N-CO-, -N=N-N-(в случае, например, триазола), -HC= и -R³C= (оксим и гидразон);

где R¹⁰ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил.

В зависимости от структурного класса и происхождения эффекторной части молекулы ЕМ, обычно предпочтительными являются различные типы реакционноактивных групп. Если эффекторный фрагмент представляет собой белок, предпочтительные реакционноспособные группы являются сульфгидрильной и амино.

В еще одном варианте осуществления изобретения те же самые принципы и предпочтительные структуры, что и для первого и второго соединительных фрагментов, применимы и к третьему соединительному фрагменту AD3.

В еще одном варианте осуществления изобретения третий соединительный фрагмент AD3 содержит дополнительный фрагмент структурного элемента [W]_c, как раскрыто в настоящем документе. Этот фрагмент структурного элемента может обеспечить оптимальное расстояние между двумя объектами или может дополнительно предоставить лабильную связь, которая позволяет отделить два объекта друг от друга. Лабильные связи включают гидролизуемые группы, разрушаемые под действием света группы, кислотно-неустойчивые фрагменты, основно-неустойчивые фрагменты и группы, расщепляемые ферментом.

В одном варианте осуществления изобретения этот фрагмент структурного элемента [W]_c представляет собой аминокислоту или пептид, содержащий от 2 до 10 аминокислот, при этом аминокислоты независимо выбраны из группы природных и неприродных аминокислот. Аминокислоты, как они используются во фрагменте структурного элемента [W]_c и, таким образом, в варианте воплощения третьего соединительного фрагмента AD3, включают, но этим не ограничиваются, α- аминокислоты и аминокислоты, где амино и карбоксильная группы отнесены подальше друг от друга, такие как β-аминокислоты, γ-аминокислоты , δ-аминокислоты , ε-аминокислоты и ω-аминокислоты. В любом случае аминокислоты могут быть циклическими или линейными. В случае, когда аминокислота имеет стереогенные центры, могут быть использованы все стереомерные формы. Иллюстративный пример этого соединительного фрагмента показан в квадратных скобках формулы (85):

где Y, EM, R9 и Lin⁵ имеют значения, определенные в настоящем документе, и

[W]_c представляет собой аминокислоту или пептид, состоящий из до 10 аминокислот, которые независимо выбраны из группы, включающей природные аминокислоты, неприродные аминокислоты, α- аминокислоты и аминокислоты, где амино и карбоксильная группа отнесены подальше друг от друга, такие как β-аминокислоты, γ-аминокислоты , δ-аминокислоты , ε-аминокислоты и ω-аминокислоты, и c обозначает целое число из 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10, и

связь с разветвленным фрагментом Y представляет собой амид.

В некоторых вариантах осуществления изобретения фрагмент [W]_c конъюгатов по настоящему изобретению может быть ферментно отщеплен одним или несколькими ферментами, включая опухоль-ассоциированную протеазу, для высвобождения эффекторного фрагмента (-EM).

Фрагмент структурного элемента [W]_c содержит иллюстративные ферментативно расщепляемые последовательности, как показано ниже:

a) липептиды: -Phe-Lys-, -Ala-Lys-, -Val-Lys-, -Val-Cit-, -Phe-Cit-, -Ile-Cit-, -Leu-Cit-, -Trp-Cit-, -Phe-Ala- и-Phe-Arg-; и

b) трипептиды: -Phe-Phe-Lys-, -Val-Phe-Lys- и -Gly-Phe-Lys-; и

c) тетрапептиды: -Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID №: 22) и -Ala-Leu-Ala-Leu- (SEQ ID №: 23).

Фрагмент [W]_c по настоящему изобретению может быть разработан и оптимизирован на основе его селективности по отношению к ферментативному отщеплению конкретными ферментами, например, опухоль-ассоциированной протеазой. В одном варианте осуществления изобретения [W]_c является таким, отщепление которого катализируется катепсином B, C и D, или плазминовой протеазой.

В одном варианте осуществления изобретения [W]_c представляет собой дипептид, трипептид или пентапептид.

В еще одном варианте осуществления изобретения предпочтительный фрагмент [W]_c содержит Gly на C-концевом конце.

В еще одном варианте осуществления изобретения предпочтительный фрагмент [W]_c содержит дипептид Gly-Gly на C-концевом конце.

Эффекторный фрагмент EM

Как раскрыто в настоящем документе более подробно, эффекторным фрагментом является фрагмент, который содержит или способен содержать эффектор, при этом эффектор, предпочтительно, выбран из группы, включающей диагностически активный агент, терапевтически активный агент, агент, который подходит в качестве как диагностически активного агента, так и терапевтически активного агента, и комбинацию диагностически активного агента и терапевтически активного агента. Другими словами, эффекторный фрагмент может представлять собой эффектор, который уже образовал комплекс или ковалентно связан с конъюгатом по настоящему изобретению, для которого такое комплексообразование или связывание в предпочтительном варианте осуществления изобретения реализовано структурой [акцептор-эффектор]. Альтернативно, конъюгат по настоящему изобретению способен легко вступать в реакцию с эффектором. Соответственно, в вариантах воплощения настоящего изобретения эффекторный фрагмент представляет собой эффектор, акцептор или -[акцептор-эффектор].

В еще одном варианте осуществления изобретения ковалентная связь между третьим соединительным фрагментом AD3 и акцептором выбрана из группы, включающей амид (называемый также амид связью), алкиламин (называемый также алкиламинной связью), мочевину (называемую также уреидной связью), простой эфир (называемый также эфирной связью), простой тиоэфир (называемый также тиоэфирной связью), тиомочевину (называемую также тиоуреидной связью) и карбамат (называемый также карбаматной связью).

Акцептор, который предпочтительно используется в настоящем документе, представляет собой фрагмент, который используется или присутствует в конъюгате по настоящему изобретению, и который опосредует связывание эффектора с конъюгатом по настоящему изобретению, предпочтительно, конъюгатом по настоящему изобретению формулы (1).

В еще одном варианте осуществления изобретения акцептор содержит фунциональную группу, которая способна образовывать ковалентную связь либо с третьим соединительным фрагментом AD3, если он присутствует, либо с разветвленным фрагментом Y, если он присутствует, без нарушения акцепторной функции, то есть связывания или образования комплекса с эффектором. Такая фунциональная группа, предпочтительно, выбрана из группы, включающей амино, карбоновую кислоту, активированную карбоновую кислоту, хлор, бром, йод, сульфгидрил, гидроксил, сложные эфиры сульфоновой кислоты, такие как мезилат или тозилат, акцепторы Михаэля, изоцианат, изотиоцианат, альдегид и кетон.

В настоящее изобретение включено, что эффектор либо напрямую связывается с третьим соединительным фрагментом AD3 или с разветвленным фрагментом Y, либо связывается с третьим соединительным фрагментом AD3 или с разветвленным фрагментом Y посредством акцептора, если такой акцептор присутствует. Таким акцептором является, среди прочих, хелатор. В одном варианте осуществления изобретения, соединение по изобретению содержит атом металла, предпочтительно, атом радиоактивного переходного металла, который образует хелатное соединение с помощью хелатора. В другом варианте осуществления изобретения соединение по изобретению содержит хелатор, в котором нет металла, хелатированного с помощью хелатора.

В следующей таблице 10 представлены иллюстративные примеры конъюгата по настоящему изобретению. В настоящее изобретение включено, что каждый из любых фрагментов, указанных в данной таблице, может быть, по отдельности и независимо друг от друга, находиться в сочетании с любым из других фрагментов, указанных в данной таблице. Таким образом, любая перестановка, следующая из такого объединения, представляет собой вариант воплощения конъюгата по изобретению, описанного в данном документе в отдельной самостоятельной форме.

Таблица 10:

Соединение/SEQ ID №:	[TM1]	[AD1]	[X]a	[Y]	[AD3]	[EM]	[Z]b	[AD2]	[TM2]
(12)/4	1206	Glutar	Ttds	Lys	-	DOTA	Ttds	GABA	1206
(13)/5	1206	Glutar	-	Lys	-	DOTA	-	GABA	1206
(14)/6	1206	Glutar	Ahx	Lys	-	DOTA	(ε-Lys-NH2)	Glutar	1206
(15)/7	1206	Glutar	(Ttds)3	Lys	-	DOTA	(Ttds)3-(ε-Lys-NH2)	Glutar	1206
(16)/8	1206	Glutar	Ttds	Lys	-	DOTA	Ttds	GABA	RRPY-Tle-L-OH
(17)/9	1206	Glutar	Ttds	Lys	-	DOTA	Ttds	GABA	rRPY-Tle-L-OH
(18)/10	1206	Glutar	(Ttds)3	Lys	-	DOTA	(Ttds)3	GABA	rRPY-Tle-L-OH
(19)/11	1206	Glutar	Ttds	Lys	-	FITC	(Ttds)-(ε-Lys-NH2)	Glutar	1206
(20)/12	1206	Glutar	Ttds	Lys	Сукцинил	Таксол	(Ttds)-(ε-Lys-NH2)	Glutar	1206
(21)/13	1206	Glutar	Ttds	Lys	-	DOTA	Ttds	GABA	AsN-Ala-Val-Pro-AsN-Leu-Arg-Gly-Asp-Leu-GlN-Val-Leu-Ala-GlN-Lys-Val-Ala-Arg-Thr-NH2
(22)/14	Ac-AsN-Ala-Val-Pro-AsN-Leu-Arg-Gly-Asp-Leu-GlN-Val-Leu-Ala-GlN-Lys-Val-Ala-Arg-Thr	GABA	(Ttds)3	Lys	-	DOTA	(Ttds)3-(ε-Lys-NH2)	Glutar	1206
(23)/15	Ac-AsN-Ala-Val-Pro-AsN-Leu-Arg-Gly-Asp-Leu-GlN-Val-Leu-Ala-GlN-Lys-Val-Ala-Arg-Thr	GABA	(Ttds)3	Lys	-	DOTA	(Ttds)3-(β-Cys-NH2)	Mic	1206
(24)/16	1206	Glutar	(Ttds)3	-	(ε-Lys-NH2)	DOTA	-	-	AsN-Ala-Val-Pro-AsN-Leu-Arg-Gly-Asp-Leu-GlN-Val-Leu-Ala-GlN-Lys-Val-Ala-Arg-Thr-GABA-Ttds-*
(25)#/17	1206	Glutar	Ttds-Lys(1206-Glutar-Ttds)	-	(ε-Lys-NH2)	DOTA	Ttds	-	AsN-Ala-Val-Pro-AsN-Leu-Arg-Gly-Asp-Leu-GlN-Val-Leu-Ala-GlN-Lys-Val-Ala-Arg-Thr-GABA-Ttds-*
(29)/20	1206	Glutar	Ttds	-	-	-	(ε-Lys-NH2)	Glutar	Anti EphA2 (Mab 3035)
(30)/21	1206	Glutar	Ttds	-	-	-	(ε-Lys-NH2)	Glutar	Anti TNC (Mab 1909)
(26)/18	1206	Glutar	Ttds	Lys	-	DOTA	Ttds	GABA	KRP-Hyp-G-Cha-SPL-OH
(27)/19	1206	Glutar	Ttds	Lys	-	DOTA	Ttds	GABA	OrN-R-Oic-PG-Amf-S-nal-Ile-OH
(28)	Биотин	-	Ttds	-	-	-	-	-	1206

* AD3-EM [-(ε-Lys-NH₂)-DOTA] связан по С-концу TM2

# Соединение (25) содержит конъюгат по настоящему изобретению и содержит второй TM1-фрагмент (1206-Glutar-Ttds)

Возможные формы хелатного взаимодействия, которое позволяет на практике осуществить настоящее изобретение, между хелатором и эффектором, которым, предпочтительно, является переходный металл, известны специалисту в данной области техники и соответствующие примеры, структуры и применение описаны, например, Wadas et al. (Wadas et al., Chem. Rev., 2010, 110, 2858-2902) и в цитированной в данной работе литературе.

В другом варианте осуществления акцептор представляет собой или содержит ароматическое соединение, предпочтительно электронно-обогащенное ароматическое соединение, такое как индолы или бензолы, необязательно замещенные атомами кислорода, серы, азота.

В одном варианте осуществления изобретения, соединение по изобретению содержит галоген, предпочтительно, радиоактивный галоген, который является заместителем указанного ароматического фрагмента. В другом варианте осуществления изобретения, соединение по изобретению содержит ароматический фрагмент, в котором отсутствует галоген, связанный с этим ароматическим фрагментом.

Специалисту в данной области будет понятно, что конкретный эффектор, который является или который должен быть присоединенным к соединению по изобретению, выбирают с учетом заболевания, подлежащего лечению, и заболевания, которое должно быть диагностировано, соответственно, и специфических особенностей пациента и группы пациентов, соответственно, которых необходимо лечить, и которых необходимо диагностировать, соответственно.

В одном варианте осуществления изобретения эффектор представляет собой радиоактивный нуклид, которое упоминается также как радионуклид. Радиоактивный распад - это процесс, с помощью которого атомное ядро неустойчивого атома теряет энергию, испуская ионизирующие частицы (ионизирующее излучение). Существуют различные виды радиоактивного распада. Распад, или потеря энергии, происходит, когда атом с одним типом ядра, называемый материнским радионуклидом, превращается в атом с ядром в другом состоянии, или в другое ядро, содержащее другое число протонов и нейтронов. И тот, и другой указанные продукты называются дочерними нуклидами. В некоторых случаях распада материнские и дочерние являются различными химическими элементами, и, таким образом, процесс распада приводит к ядерной трансмутации (создание атома нового элемента). Например, радиоактивный распад может являться альфа-распадом, бета-распадом и гамма-распадом. Альфа-распад происходит, когда ядро испускает альфа частицу (ядро гелия). Это наиболее распространенный процесс испускания нуклонов, но и при более редких видах распада ядра могут испускать протоны или специфические ядра других элементов (в процессе, называемом кластерный распад). Бета-распад происходит, когда ядро испускает электрон (β^--распад) или позитрон (β⁺-распад) и тип нейтрино в процессе, при котором протон преобразуется в нейтрон или наоборот. В противоположность этому, существуют радиоактивные процессы распада, которые не приводят к трансмутации. Энергия возбужденного ядра может выделяться в виде гамма-излучения при гамма-распаде, или может быть использована для извлечения орбитального электрона при взаимодействии с возбужденным ядром в процессе, называемом внутренней конверсией.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения радионуклид может быть использован для стабильного мечения соединения по изобретению.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения радионуклид обладает таким периодом полураспада, который дает возможность диагностического или терапевтического медицинского применения. Конкретно, период полураспада составляет между 30 мин и 7 днями. Более конкретно, период полураспада составляет между 2 ч и 3 днями.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения радионуклид обладает такой энергией распада и диапазоном излучения, которые дают возможность диагностического или терапевтического медицинского применения.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения радионуклид для использования в медицинских целях получают промышленным способом. В частности, радионуклид доступен в виде GMP.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения дочерние нуклиды после радиоактивного распада радионуклида являются совместимыми с диагностическим или терапевтическим медицинским применением. В частности, дочерние нуклиды остаются химически связаны или образуют комплексы с соединением по изобретению и не токсичны. Кроме того, дочерние нуклиды являются либо стабильными, либо распадаются далее таким образом, что не мешают или даже способствуют диагностическому медицинскому терапевтическому использованию.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, радионуклид, который, предпочтительно, является металлом и, более предпочтительно, переходным металлом, пригоден для комплексообразования с металлохелатом и приводит к получению радиоактивного металлохелата для визуализации. Однако, специалистами в данной области техники понятно, что радионуклид может также быть непосредственно связан с соединением по изобретению. Предпочтительно, радиоактивный изотоп выбран из группы, включающей ¹⁸F, ¹¹⁰In, ^113mIn, ^114mIn, ^99mTc, ⁶⁷Ga, ⁵²Fe, ⁵⁹Fe, ⁶⁸Ga, ¹¹¹In, ⁹⁷Ru, ²⁰³Pb, ⁶²Cu, ⁶⁴Cu, ⁶⁷Cu, ⁵¹Cr, ⁵¹Mn, ^52mMn, ⁵⁵Co, ⁵⁷Co, ⁵⁸Co, ⁷²As, ⁷⁵Se, ¹⁵⁷Gd, ¹²⁰I, ¹²³I, ¹²⁴I, ¹²⁵I, ¹³¹I, ⁷⁵Br, ⁷⁶Br, ⁷⁷Br, ⁸⁹Zr, ^82mRb, ⁸³Sr, ⁸⁶Y, ^94mTc, ¹⁶⁹Yb, ¹⁹⁷Hg, ²⁰¹Tl и ⁸²Br. Более предпочтительно, радиоактивный металл выбран из группы, включающей ^99mTc, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ¹¹¹In, ⁸⁹Zr и ¹²³I. Еще более предпочтительно, радиоактивным металлом является ¹¹¹In и ⁸⁹Zr. Однако специалистами в данной области техники понятно также, что использование указанных радиоактивных металлов не ограничивается задачами визуализации, но охватывает их применение в диагностике, терапии и терагностике.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, радионуклид, который, предпочтительно, является металлом и, более предпочтительно, переходным металлом, пригоден для комплексообразования с металлохелатом и приводит к получению радиоактивного металлохелата для лучевой терапии. Однако, специалистами в данной области техники понятно, что радионуклид может также быть непосредственно связан с соединением по изобретению. Предпочтительно, радиоактивный изотоп выбран из группы, включающей ³²P, ³³P, ⁴⁷Sc, ⁵⁸Co, ⁵⁹Fe, ⁶⁴Cu, ⁶⁷Cu, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ⁷⁵Se, ⁷⁷As, ^80mBr, ⁸⁹Sr, ⁸⁹Zr, ⁹⁰Y, ⁹⁹Mo, ^103mRh, ¹⁰⁵Rh, ¹⁰⁹Pd, ¹⁰⁹Pt, ¹¹¹Ag, ¹¹¹In, ¹¹⁹Sb, ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹²⁵I, ¹²³I, ¹²⁹I, ¹³¹I, ¹⁴²Pr, ¹⁴³Pr, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁵²Dy, ¹⁵³Sm, ¹⁵⁹Gd, ¹⁶¹Tb, ¹⁶¹Ho, ¹⁶⁶Ho, ¹⁶⁶Dy, ¹⁶⁹Er, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷²Tm, ¹⁷⁷Lu, ^177mSn, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹⁸⁹Re, ¹⁸⁸Rd, ^189mOs, ¹⁹²Ir, ¹⁹⁴Ir, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ²¹¹At, ²¹¹Pb, ²¹²Pb, ²¹¹Bi, ²¹²Bi, ²¹³Bi, ²¹⁵Po, ²¹⁷At, ²¹⁹Rn, ²²¹Fr, ²²³Ra, ²²⁵Ac, ²²⁷Th, ²⁵⁵Fm. Более предпочтительно, радиоактивный изотоп выбран из группы, включающей ¹¹¹In, ¹⁷⁷Lu, ⁸⁹Zr, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ⁶⁷Cu, ⁶⁴Cu и ⁹⁰Y. Более предпочтительно, радиоактивный металл выбран из группы, включающей ¹¹¹In, ⁹⁰Y и ¹⁷⁷Lu. Однако специалистами в данной области техники понятно также, что использование указанных радиоактивных металлов не ограничивается задачами визуализации, но охватывает их применение в диагностике, терапии и терагностике.

В еще одном варианте осуществления изобретения эффектор представляет собой радиоактивный галоген, такой как изотопы йода и брома, которые, когда они присоединены к соединению по изобретению, могут быть использованы для терапии, диагностики и/или терагностики. В предпочтительном варианте осуществления изобретения радиоактивный галоген непосредственно присоединен к соединению по изобретению.

Предпочтительные радионуклиды, используемые для диагностики, такие как ⁶⁸Ga, ¹¹¹In и ⁸⁹Zr, и предпочтительные радионуклиды, используемые для терапии, такие как ⁹⁰Y, ¹⁵³Sm и ¹⁷⁷Lu, являются трехвалентными катионами класса элементов, известных как лантаноиды. Типичные радиоактивный металлы этого класса включают следующие изотопы: ⁹⁰иттрий, ¹¹¹индий, ¹⁴⁹прометий, ¹⁵³самарий, ¹⁶⁶диспрозий, ¹⁶⁶гольмий, ¹⁷⁵иттербий и ¹⁷⁷лютеций. Все эти металлы и другие из класса лантаноидов имеют очень сходные химические свойства, в том смысле, что они остаются в +3 окисленном состоянии и предпочитают образовывать хелаты с лигандами, которые несут тяжелые донорные атомы, такие как донорные атомы кислорода/азота.

Как видно из вышеизложенного, радионуклид, в принципе, может быть использован при лечении и/или диагностике заболевания, когда он конъюгирован с соединением по изобретению.

В одном варианте воплощения соединения по изобретению соединение по изобретению содержит хелатор. Предпочтительно, хелатор представляет собой часть акцепторного соединения по изобретению, где хелатор либо непосредственно, либо косвенно, например, с помощью линкера, прикреплен к соединению по изобретению. Предпочтительный хелатор представляет собой металлохелат, где металлохелат, предпочтительно, содержит, по меньшей мере, один радиоактивный металл. По меньшей мере, один радиоактивный металл, предпочтительно, может быть использован или является подходящим для диагностического и/или терапевтического применения и, более предпочтительно, может быть использован или является подходящим для визуализации и/или лучевого облучения.

В принципе, хелаторы, используемые и/или подходящие для практического осуществления настоящего изобретения, включая диагностику и/или терапию заболевания, известны специалисту в данной области техники. Доступно широкое разнообразие соответствующих хелаторов, и они были рассмотрены, например, в работах Banerjee et al. (Banerjee et al., Nucl. Med. Biol., 2005, 32, 1-20, и приведенные ссылки, Wadas et al., Chem. Rev., 2010, 110, 2858-2902 и приведенные ссылки), которые включены в настоящий документ в виде ссылки. Такие хелаторы включают, но этим не ограничиваются, линейные, макроциклические, тетрапиридиновые и N₃S, N₂S₂ и N₄ хелаторы, описанные в US 5367080 A, US 5364613 A, US 5021556 A, US 5075099 A, US 5886142 A; хелаторы на основе HYNIC, DTPA, EDTA, DOTA, TETA, бисамино бистиол (BAT), описанные в US 5720934; десферриоксамин (DFO), описанный (Doulias et al., Free Radic. Biol. Med., 2003, 35, 719-728), при этом все ссылки включены в настоящий документ в виде ссылки во всей своей полноте.

Диагностическое и/или терапевтическое применение некоторых из вышеуказанных хелаторов раскрыто в предшествующем уровне техники. Например, 2-гидразиноникотинамид (HYNIC) широко использовался в присутствии солиганда для включения ^99mTc и ^186,188Re (Schwartz et al., Bioconj. Chem., 1991, 2, 333-336; Babich et al., J. Nucl. Med., 1993, 34, 1964-1970; Babich et al., Nucl. Med. Biol., 1995, 22, 25-30); DTPA использовался в препарате остеоскан®, который продается компанией Covidien, для связывания в комплекс ¹¹¹In, и некоторые модификации описаны в литературе (Brechbiel et al., Bioconj. Chem., 1991, 2, 187-194; Li et al., Nucl Med. Biol., 2001, 28, 145-154); хелаторы типа DOTA для радиотерапевтического применения описаны Tweedle et al. (патент US 4885363); другие полиаза макроциклы для хелатообразования с изотопами трехвалентных металлов описаны Maecke et al., Bioconj. Chem., 2002, 13, 530-541; и N₄-хелаторы, такие как ^99mTc-N₄-хелатор, использовались для мечения пептидов в случае минигастрина для нацеливания на ССК-2 рецепторы (Nock et al., J. Nucl Med., 2005, 46, 1727-1736).

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения металлохелат представляет собой металлохелат для трехвалентных металлов или для пентавалентных металлов и их близких аналогов. Многие металлохелаты этого типа описаны в WO2009/109332 A1.

В одном варианте осуществления изобретения металлохелат для трехвалентных металлов выбран из группы, включающей хелаторы на основе DOTA, NOTA, DTPA, TETA, EDTA, NODAGA, NODASA, TRITA, CDTA, BAT, DFO и HYNIC и их близких аналогов, где

DOTA означает 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусную кислоту,

NOTA означает 1,4,7-триазациклононантриуксусную кислоту,

DTPA означает диэтилентриаминпентауксусную кислоту,

TETA означает 1,4,8,11-тетраазациклододекан-1,4,8,11-тетрауксусную кислоту,

EDTA означает этилендиамин-N,N̓-тетрауксусную кислоту,

NODAGA означает 1,4,7-триазациклононан-N-глутаровую кислоту-N̓,Nʺ-диуксусную кислоту,

NODASA означает 1,4,7-триазациклононан-1-янтарную кислоту-4,7-диуксусную кислоту,

TRITA означает 1,4,7,10-тетраазациклотридекан-l,4,7,10-тетрауксусную кислоту,

CDTA означает транс-1,2-диаминоциклогексан-N,N,N′,N′-тетрауксусную кислоту,

DFO означает группу хелаторов типа десферала или десферриоксамина, химическим названием неограничивающего примера является N-[5-({3-[5-(ацетил-гидрокси-амино)-пентилкарбамоил]-пропионил}-гидрокси-амино)-пентил]-N̓-(5-амино-пентил)-N̓-гидрокси-сукцинамид,

BAT означает бисамино-бистиоловую группу хелаторов, химическим названием неограничивающего примера является 1-[2-(2-меркапто-2-метил-пропиламино)-этиламино]-2-метил-пропан-2-тиол,

HYNIC означает 6-гидразино-никотиновую кислоту,

и имеющие химические структуры, являющиеся следующими:

В предпочтительном варианте осуществления изобретения металлохелат выбран из группы, включающей хелаторы на основе DOTA-, NOTA-, DTPA-, TETA-DFO и HYNIC и их близких аналогов.

Соединения по изобретению, которые представляют собой комплексы металла с хелатором, четко и точно называются с помощью следующих сокращенных обозначений:

В термине «^xxxметалл-(YY)» после указания в верхнем индексе возможного массового числа атомов конкретных изотопов (xxx) непосредственно следует символ атома металла (металл), отделенный дефисом от номера формулы исходного некомплексного соединения, указанного в скобках (YY); Lu-(12), например, обозначает комплекс лютеция с хелаторным соединением формулы (12), и ¹¹¹In-(12), например, обозначает комплекс ¹¹¹индия с хелаторным соединением формулы (12).

В более предпочтительном варианте осуществления изобретения металлохелат для трехвалентных металлов выбран из группы, включающей DTPA (диэтилентриаминпентауксусная кислота) и полиаза-поликарбоксилат макроциклы, такие как DOTA (1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусная кислота) и их близкие аналоги.

В одном предпочтительном варианте осуществления изобретения металлохелат для ⁸⁹Zr представляет собой DFO, DTPA, DOTA или EDTA.

Специалистами в данной области техники понятно, что хелатор, в принципе, может быть использован, независимо от того, используется или является походящим для диагностики или терапии соединение по изобретению. Такие принципы, среди прочих, изложены в международной патентной заявке WO 2009/109332 A1.

В еще одном варианте осуществления изобретения конъюгат по настоящему изобретению конъюгирован с терапевтически активным или терапевтически эффективным агентом, который в настоящем документе указывается как терапевтический эффекторный фрагмент. Терапевтические эффекторные фрагменты могут представлять собой антипролиферативные, антимиграционные, антиангиогенные, цитостатические, цитотоксические, антитромботические, противовоспалительные, антифлогистонные, антикоагулянтные, антибактериальные, противовирусные и/или противогрибковые агенты, где антипролиферативные, антимиграционные, антиангиогенные, цитостатические и/или цитотоксические вещества, при этом предпочтительными являются нуклеиновые кислоты, малые молекулы, аминокислоты, пептиды, белки, углеводы, липиды, гликобелки, гликаны или липобелки, обладающие антипролиферативными, антимиграционными, антиангиогенными, цитостатическими и/или цитотоксическими свойствами.

Кроме того, такие вещества также могут представлять собой радиосенсибилизаторы или сенсибилизаторы или усилители других обычных способов комбинированного лечения злокачественных новообразований, либо могут содержать такие сенсибилизаторы.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является цитотоксический и/или цитостатический агент.

Цитотоксиновый или цитотоксический агент включает агент, который причиняет вред клеткам (например, убивает клетки). Цитостатический агент включает агент, который ингибирует или подавляет клеточный рост и размножение. В качестве цитотоксических и/или цитостатических соединений, то есть химических соединений, обладающих цитотоксическими и/или цитостатическими свойствами, могут быть использованы: алкалоиды (Moudi et al., Int J Prev Med, 2013, 4, 1231-1235; Walczak et al., J Am Acad Orthop Surg, 2013, 21, 480-491), алкилирующие агенты (Begleiter, Front Biosci, 2000, 5, E153-171; Rockwell et al., Cancer Metastasis Rev, 1993, 12, 165-176; Spiro et al., Forum (Genova), 2000, 10, 274-285; Walczak et al., выше), ингибиторы ангиогенеза (Cesca et al., Front Oncol, 2013, 3, 259; Wang et al., Mar Drugs, 2013, 11, 903-933; Zaki et al., Curr Top Med Chem, 2012, 12, 32-49), антибиотики, обладающие цитостатическими свойства (Abraham et al., Drug Saf, 1996, 15, 406-429; Gewirtz, Biochem Pharmacol, 1999, 57, 727-741; Oki, Biotechnol Bioeng, 1980, 22 Suppl 1, 83-97; Walczak et al., выше), антрациклины (Shah, Recent Pat Anticancer Drug Discov, 2009, 4, 241-245; Gewirtz et al. выше; Walczak et al., выше), антифолаты (Purcell et al., Curr Oncol Rep, 2003, 5, 114-125; Rollins et al., Clin Ther, 2005, 27, 1343-1382; Wright et al., Expert Opin Ther Pat, 2011, 21, 1293-1308), антимитотические токсины (Antignani et al., Toxins (Basel), 2013, 5, 1486-1502; Engedal et al., Microb Biotechnol, 2011, 4, 32-46; Potala et al., Drug Discov Today, 2008, 13, 807-815), ингибиторы митотические (Casaluce et al., Expert Opin Emerg Drugs, 2013, 18, 97-107; Gabrielli et al., Adv Cancer Res, 2012, 116, 1-37; Jiang et al., Mini Rev Med Chem, 2006, 6, 885-895), антиметаболиты (Budde et al., Curr Treat Options Oncol, 2005, 6, 83-93; Peters et al., Pharmacol Ther, 2000, 87, 227-253; Tiwari, J Cancer Res Ther, 2012, 8, 510-519; Walczak et al., выше), антипролиферативные вещества (Mader, Curr Opin Drug Discov Devel, 2005, 8, 613-618; Rajak et al., Curr Med Chem, 2013, 20, 1887-1903; Stadler, Invest New Drugs, 2002, 20, 201-208), кортикостероиды (Dietrich et al., Expert Rev Clin Pharmacol, 2011, 4, 233-242; Wooldridge et al., Oncology (Williston Park), 2001, 15, 225-234; обсуждение 234-226), дуокармицины (Ghosh et al., Curr Top Med Chem, 2009, 9, 1494-1524; Tietze et al., Anticancer Agents Med Chem, 2009, 9, 304-325), ингибиторы HDAC (Khan et al., Immunol Cell Biol, 2012, 90, 85-94; Sharma et al., BJU Int, 2013, 111, 537-542; West et al., J Clin Invest, 2014, 124, 30-39; Gabrielli et al., выше; Rajak et al., выше), гормоны (Siegfried et al., Semin Oncol, 2014, 41, 5-16; Vesely, Endocr Relat Cancer, 2013, 20, R113-125; Vesely, Anticancer Res, 2012, 32, 2515-2521), иммунотоксины (Choudhary et al., Drug Discov Today, 2011, 16, 495-503; Madhumathi et al., Curr Opin Microbiol, 2012, 15, 300-309; Pastan et al., Curr Opin Investig Drugs, 2002, 3, 1089-1091), ингибиторы киназы (Akin et al., J BUON, 2014, 19, 42-46; Eigentler et al., Expert Opin Pharmacother, 2013, 14, 2195-2201; Sun, Cancer Lett, 2013, 340, 1-8), ингибиторы микротрубочек (Higa et al., Expert Rev Anticancer Ther, 2008, 8, 671-681; Mareel et al., Int Rev Cytol, 1984, 90, 125-168; Rothermel et al., Semin Oncol, 2003, 30, 51-55) и ингибиторы топоизомеразы (Minagawa et al., Hum Cell, 2001, 14, 237-243; Munster et al., Expert Opin Investig Drugs, 2011, 20, 1565-1574; Takagi et al., Leuk Lymphoma, 2001, 42, 577-586; Walczak et al., выше), соединения, содержащие платину (Bonanno et al., Anticancer Res, 2014, 34, 493-501; Poveda et al., Cancer Treat Rev, 2014, 40, 366-375; Puisset et al., Anticancer Res, 2014, 34, 465-470), ретиноиды (Garattini et al., Cancer Treat Rev, 2014, 40, 739-749; Pasquali et al., Curr Pharm Des, 2006, 12, 1923-1929; Tang et al., Annu Rev Pathol, 2011, 6, 345-364), таксаны (Binder, Clin J Oncol Nurs, 2013, 17 Suppl, 9-14; Fauzee, Asian Pac J Cancer Prev, 2011, 12, 837-851; Schutz et al., Crit Rev Oncol Hematol, 2014), токсины (Ansiaux et al., Expert Opin Investig Drugs, 2007, 16, 209-218; Bergan et al., Toxicon, 2012, 60, 1085-1107; Li et al., Toxins (Basel), 2010, 2, 2645-2662), ауристатины (Gerber et al., Blood, 2009, 113, 4352-4361; Li et al., Mol Cancer Ther, 2013, 12, 1255-1265; Oflazoglu et al., Clin Cancer Res, 2008, 14, 6171-6180) и другие цитостатики, такие как, например, аспарагиназа (Covini et al., Recent Pat Anticancer Drug Discov, 2012, 7, 4-13; Rizzari et al., Curr Opin Oncol, 2013, 25 Suppl 1, S1-9; Verma et al., Crit Rev Biotechnol, 2007, 27, 45-62), третиноин (Gillis et al., Drugs, 1995, 50, 897-923; Makishima et al., Leuk Lymphoma, 1997, 26, 43-48; Wong, Cancer Pract, 1996, 4, 220-223), подофиллотоксины (D'Incalci et al., Cancer Chemother Biol Response Modif, 1992, 13, 75-82; Gordaliza et al., Curr Pharm Des, 2000, 6, 1811-1839; Hartmann et al., Drug Saf, 2006, 29, 209-230), таксаны и милтефозин® (Clive et al., Cancer Chemother Pharmacol, 1999, 44 Suppl, S29-30; Clive et al., Lancet, 1997, 349, 621-622; Terwogt et al., Br J Cancer, 1999, 79, 1158-1161), иммуномодуляторы (Rogalski et al., J Eur Acad Dermatol Venereol, 1999, 13, 83-90; Thotathil et al., Expert Opin Investig Drugs, 2007, 16, 1391-1403; Villa et al., J Drugs Dermatol, 2004, 3, 533-539), моноклональные антитела (Glassman et al., Cancer Biol Med, 2014, 11, 20-33; Vacchelli et al., Oncoimmunology, 2014, 3, e27048; Jarboe et al., Methods Mol Biol, 2014, 1060, 61-77), сигнальные трансдукторы (молекулы для сигнальной трансдукции) (Koptyra et al., Int J Biochem Cell Biol, 2011, 43, 1417-1421; Masciocchi et al., Future Med Chem, 2011, 3, 567-597; Catlett-Falcone et al., Curr Opin Oncol, 1999, 11, 490-496) и цитокины (Kontermann, Arch Biochem Biophys, 2012, 526, 194-205; Matsuo et al., Curr Pharm Des, 2012, 18, 2416-2419). Цитотоксические и/или цитостатические агенты могут относиться только к одному или к нескольким из этих категорий.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является алкалоид.

Примеры алкалоидов включают, но этим не ограничиваются, эметин, лидокаин, новокаин и тетракаин.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является алкилирующий агент.

Примеры алкилирующих агентов включают, но этим не ограничиваются, бендамустин, ифосфамид, L-сарколизин, мелфалан, карбоплатин, цисплатин, оксалиплатин, кармустин (или BCNU, бис-хлорэтилнитрозомочевина), алкилсульфонат, алтретамин, аналоги или производные CC-1065, бусульфан, карбоквон, кармустин, CC-1055 (известный также как рахелмицин), хлорамбуцил, хлоретамин, циклофосфамид, дакарбазин, дибромманнит, дуокармицин A, дуокармицин SA, эстрамустин, фотемустин, ломустин, манносульфан, меклоретамин, мелфалан, нумистин, ранимустин, семустин, стрептозоцин, стрептозотоцин, темозоломид, тетраэтиленпентамин (тиотепа), треосульфан, триазен, триазиквон и трофосфамид.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является ингибитор ангиогенеза.

Примеры ингибиторов ангиогенеза включают, но этим не ограничиваются, эверолимус, талидомид, 2-метоксиэстрадиол, ангиостатические стероиды+гепарин, карбоксиамидотриазол, хрящ-производное ингибитора фактора ангиогенеза, CM101, эндостатин, IFn-α, интраконазол, линомид, тромбоцитарный фактор-4, пролактин, ранибизумаб, SU5416, сурамин, тасхинимод, текогалан, тетратиомолибдат, TNP-470 (аналог фумагиллина), антагонисты VEGFR, ингибиторы αVβ3, 2C3, ABT-510, AEE788, AMG706, ангиостатин, AS1404, AVE8062A, BAY 43-9006, BMS 275291, CDP-791, комбретастатин, EMD12194 (циленгитид), EP-7055, G013736, GW786034, IMC-1121B, маримастат, ингибиторы матриксной металлопротеиназы, Medi-522, неовастат, P-547,632, приномастат, PTK-787, SU11248 (сунитиниб), VEGF-Trap, ZD6126 и ZD6474.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является антрациклин.

Примеры антрациклинов включают, но этим не ограничиваются, доксорубицин и валрубицин.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является антибиотик.

Примеры антибиотиков включают, но этим не ограничиваются, блеомицин, актиномицин D, амсакрин, антрамицин (AMC), калихеамицин γ1, дактиномицин (ранее актиномицин), эсперамицин, грамицидин D, митрамицин, митомицин C, пликамицин, пуромицин, неокарциностатин, даунорубицин, эпирубицин и идаруцибин.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является антифолат.

Примеры антифолатов включают, но этим не ограничиваются, пралатрексат.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является антиметаболит.

Примеры антиметаболитов включают, но этим не ограничиваются, арабинозилцистеин, азацитидин, капецитабин, кладрибин, цитарабин, децитабин, гемцитабин, лейковорин, меркаптопурин, метотрексат, неларабин, пеметрексед, пентостатин, прокарбазин, ралтитрексид, тиогуанин, 5-фторурацил, декарбазин, 6-меркаптопурин, 6-тиуогуанин, арабинозид, азатиоприн, цитозин, флударабин, фторурацил, тегафур и тиогуанин.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является антимитотический токсин.

Примеры антимитотических токсинов включают, но этим не ограничиваются, абрин A цепь, белки алевритов fordii, алорин, альфа-сарцин, C3 токсин, холерный токсин, кротин, курцин, диантиновые белки, токсин дифтерии, токсин эномицин, гелонин, LT-токсин, митогеллин, модекцин, цепь модекцина, ингибитор момордика харанция, токсин коклюша, феномицин, белки лаконос американского (PAPI, PAPII и PAP-S), эндотоксин Pseudomonas, экзотоксин Pseudomonas, рестриктоцин, рибонуклеазу (РНКазу), токсин рицин (такой как, токсин рицин A или A цепи дегликозилированного рицина), ингибитор мыльнянки лекарственной, сапорин, шига токсин, шигаподобный токсин (SLT-I, SLT-II, SLT-IIV), соевый ингибитор протеаз Баумана-Бирка, стафилококковый энтеротоксин-A и токсин столбняка.

Примеры иммуномодуляторов, цитокинов, антител и сигнальных трансдукторов включают, но этим не ограничиваются, анцестим TNFα, CD40L, лиганд Flt3, G-CSF, GM-CSF, IFNa, IFNb, IFNg, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18, IL-2, IL-23, IL24, IL-27, IL-28a, IL-28b, IL-29, IL-4, IL-6, IL-7, KGF, левамизол, фактор стволовых клеток и альдеслейкин.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является иммунотоксин.

Примеры иммунотоксинов включают, но этим не ограничиваются, противовирусный белок лаконоса.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является ингибитор киназы.

Примеры ингибиторов киназ включают, но этим не ограничиваются, бортезомиб, кризотиниб, дазатиниб, эрлотиниб, гефитиниб, иматиниб, лапатиниб, нилотиниб, темсиролимус, gdc-0068, кобиметиниб, gdc-0973, пиктилисиб, gdc-0032, пазопаниб, сорафениб, акситиниб (инлита) и пазопаниб (вотриент).

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является ингибитор микротрубочек.

Примеры ингибиторов микротрубочек включают, но этим не ограничиваются, галихондрин b, эпотилон A, эпотилон, эпотилон D, DJ-927, колхицин, цитохалазин B, винбластин, паклитаксел, производные подофиллотоксина, Asammitocin, CLIP, производные паклитаксела, майтанзин, мертанзин, нокодазол, ризоксин, винбластин сульфат, доластатин, винорелбин, винкристин и виндезин.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является моноклональное антитело.

Примеры моноклональных антител включают, но этим не ограничиваются, цетуксимаб, алемтузумаб (MabCampath®), бевацизумаб, брентуксимаб ведотин, гемтузумаб озогамицин, ибритумомаб, офатумумаб, панитумумаб, ритуксимаб, тозитумомаб и трастузумаб.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является цитотоксическое или цитостатическое вещество.

Примеры других цитостатических или цитотоксических веществ включают, но этим не ограничиваются, оксид мышьяка, аспарагиназу, денилейкин дифтитокс, филграстим, L-аспарагиназу, леналидомид, пэгаспаргазу, пэгфилграстим, дигидрокси антрацин дион, ДНКазу I, бромистый этидий, магаинин 2, Р18, пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепины, GDC-0199/АВТ-199, 5̓-дезокси-5-фторуридин, 9-аминокамптотецин, аметантрон, бендамустин, биолимус А9, калихеамицины, гидроксикарбамид (гидроксимочевина), мейтансиноиды, милтефозин®, митоподозид, оксазафосфорин, пропранолол, рапамицин (сиролимус), родомицин D, топотекан (ингибитор топоизомеразы-I), алкалоиды барвинка и тенипозид.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является ретиноид. Примеры ретиноидов включают, но этим не ограничиваются, бексаротин, изотретиноин, третинонин и алитретиноин.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является таксан.

Примеры таксанов включают, но этим не ограничиваются, кабазитаксел, паклитаксел, доцетаксел и их производные.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является ингибитор топоизомеразы.

Примеры ингибиторов топоизомеразы включают, но этим не ограничиваются, этопозид, иринотекан, митоксантрон, топотекан, камптотецин и тенипозид.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является токсин.

Примеры токсинов включают, но этим не ограничиваются, меллитин.

В еще одном варианте осуществления изобретения конъюгат по настоящему изобретению конъюгирован с определяемым фрагментом красителя. Обнаруживаемыми красителями могут быть эндогенные флуорофоры (Thekkek et al., World J Gastroenterol, 2011, 17, 53-62; Paoli et al., Semin Cutan Med Surg, 2009, 28, 190-195; Monici, Biotechnol Annu Rev, 2005, 11, 227-256; Prosst et al., Int J Colorectal Dis, 2002, 17, 1-10), полициклические ароматические соединения (Vineis et al., Cancer Causes Control, 1997, 8, 346-355; Zhang et al., Cancer Res, 1994, 54, 1976s-1981s), кумарины (Sakuma et al., Curr Drug Discov Technol, 2011, 8, 367-378; Musa et al., Curr Med Chem, 2008, 15, 2664-2679), хинолины (Lacroix et al., Electrophoresis, 2005, 26, 2608-2621; Bates, Future Oncol, 2005, 1, 821-828), индолы (Schaafsma et al., J Surg Oncol, 2011, 104, 323-332; Oyama, Dig Endosc, 2013, 25 Suppl 1, 7-12; Gonzalez, Gastrointest Endosc Clin N Am, 2013, 23, 581-595), имидазолы (Cox et al., Cancer Treat Rev, 1977, 4, 119-134; Ojima, Acc Chem Res, 2008, 41, 108-119), УФ-возбужденные флуорофоры (Monici, Biotechnol Annu Rev, 2005, 11, 227-256; Toms et al., Technol Cancer Res Treat, 2006, 5, 231-238), флуоресцеины (Fukumura et al., APMIS, 2008, 116, 695-715; Haimovitz-Friedman et al., Radiat Res, 2012, 177, 467-482; Roberts et al., J Invest Surg, 2013, 26, 283-293), родамины (Gluckman et al., Cancer Treat Res, 1990, 52, 95-113; Kessel, J Photochem Photobiol B, 1992, 12, 203-204; Villeneuve, Biotechnol Appl Biochem, 1999, 30 ( Pt 1), 1-17; Makale, Methods Enzymol, 2007, 426, 375-401), нафтоксантеновые красители (Eguchi et al., J Org Chem, 1999, 64, 5371-5376; Kudo et al., J Antibiot (Tokyo), 2011, 64, 123-132), фенантридины (Hoberman, Cancer Res, 1975, 35, 3332-3335; Damjanovich et al., Antibiot Chemother (1971), 1980, 28, 142-146; Ormerod, Methods Mol Biol, 1997, 75, 357-365), красители BODIPY (Banappagari et al., Eur J Med Chem, 2013, 65, 60-69; Yang et al., Chem Commun (Camb), 2013, 49, 3940-3942; Yan et al., Drug Dev Ind Pharm, 2014), цианины (Ballou et al., Biotechnol Prog, 1997, 13, 649-658; Choy et al., моль Imaging, 2003, 2, 303-312; Leijon et al., Mol Aspects Med, 2006, 27, 160-175), фталоцианины (Carcenac et al., Bull Cancer, 2000, 87, 804-812; Wainwright, Anticancer Agents Med Chem, 2008, 8, 280-291; Sekkat et al., Molecules, 2012, 17, 98-144), ксантены (Roberts et al., J Invest Surg, 2013, 26, 283-293; Kudo et al., J Antibiot (Tokyo), 2011, 64, 123-132; Paiva et al., Curr Med Chem, 2013, 20, 2438-2457), акридины (Dethlefsen et al., Cytometry, 1980, 1, 89-108; Sebestik et al., Curr Белок Pept Sci, 2007, 8, 471-483), оксазины (Motohashi et al., Med Res Rev, 1991, 11, 239-294; Thorlacius et al., Inflamm Bowel Dis, 2007, 13, 911-917; Hruban, J Toxicol Environ Health, 1979, 5, 403-433), полиены (Sakuma et al., Curr Drug Discov Technol, 2011, 8, 367-378; Regelson, J Med, 1974, 5, 50-68), оксонолы (Kessel et al., Cancer Res, 1991, 51, 4665-4670; Whiteaker et al., Curr Protoc Pharmacol, 2001, Chapter 9, Unit 9 2; Saar et al., Anal Biochem, 2005, 345, 55-65), бензимидазолы (Nawrocka et al., Farmaco, 2004, 59, 83-91; Yang et al., Eur J Med Chem, 2009, 44, 1808-1812; Woo et al., Bioorg Med Chem Lett, 2012, 22, 933-936), азаметины (Kawakami et al., J Med Chem, 1998, 41, 130-142; Xin et al., Bioconjug Chem, 2013, 24, 1134-1143), стирилы (Ding et al., Adv Healthc Mater, 2013, 2, 500-507; Kessel et al., выше), тиазолы (Yung, Neurosurg Rev, 1989, 12, 197-203; Jorgensen et al., Biochem Soc Транс, 2007, 35, 1347-1351; Smith et al., Br J Biomed Sci, 2011, 68, 158-166), антрахиноны (Limtrakul, Adv Exp Med Biol, 2007, 595, 269-300; Braumann et al., Mini Rev Med Chem, 2008, 8, 421-428), нафталимиды (Lee et al., J Am Chem Soc, 2012, 134, 12668-12674; Scutaru et al., Bioconjug Chem, 2010, 21, 2222-2226; Seliga et al., Mol Biol Rep, 2013, 40, 4129-4137), аза[18]аннулены (Tanpure et al., Bioorg Med Chem, 2013, 21, 8019-8032; Zhang, Molecular Imaging and Contrast Agent Database (MICAD), 2004), порфины (Berg et al., Biochim Biophys Acta, 1993, 1158, 300-306; Malik et al., Photochem Photobiol, 1997, 65, 389-396; Takemura et al., Photochem Photobiol, 1994, 59, 366-370), металл-лиганд-комплексы (Brancaleon et al., Lasers Med Sci, 2002, 17, 173-186; Gupta et al., Nat Prod Rep, 2011, 28, 1937-1955; Munaron et al., Technol Cancer Res Treat, 2008, 7, 335-339), скварены (Avirah et al., Org Biomol Chem, 2012, 10, 911-920; Gao et al., Biomaterials, 2014, 35, 1004-1014; Gayathri Devi et al., J Photochem Photobiol B, 2008, 92, 153-159), 8-гидроксихинолин-производные (Lin et al., Photochem Photobiol, 1995, 62, 528-534), полиметины (James et al., Theranostics, 2013, 3, 692-702; James et al., Theranostics, 2013, 3, 703-718; Toutchkine et al., Org Lett, 2007, 9, 2775-2777), нанокристаллы (Young et al., Ann Biomed Eng, 2012, 40, 438-459; Cheng et al., Curr Med Chem, 2012, 19, 4767-4785; Arap et al., Curr Med Chem, 2013, 20, 2195-2211), флуоресцентные белки (Weiss et al., Theranostics, 2013, 3, 76-84; Weigert et al., J Cell Biol, 2013, 201, 969-979; Wang et al., J моль Med (Berl), 2013, 91, 917-927), белки (Fukase et al., Curr Opin Chem Biol, 2012, 16, 614-621; Hoffman, Prog Mol Biol Transl Sci, 2013, 113, 389-402; Gandia-Herrero et al., Trends Plant Sci, 2013, 18, 334-343), перилены (Saw et al., Cancer Lett, 2006, 241, 23-30; Schmidbauer et al., Curr Opin Urol, 2007, 17, 347-351), фталоцианины (Carcenac et al., Bull Cancer, 2000, 87, 804-812; van Lier et al., Ciba Found Symp, 1989, 146, 17-26; обсуждение 26-32; Selbo et al., Tumour Biol, 2002, 23, 103-112; Jia et al., Curr Drug Metab, 2012, 13, 1119-1122), апконверсионные красители (Xu et al., Biomaterials, 2011, 32, 9364-9373; Jiang et al., J R Soc Interface, 2010, 7, 3-18; Wang et al., Analyst, 2010, 135, 1839-1854) и дикетопиролопиролы (Shinohara et al., Anticancer Drugs, 2010, 21, 228-242; Dervan et al., Curr Opin Struct Biol, 2003, 13, 284-299; Bailly, Curr Med Chem Anticancer Agents, 2004, 4, 363-378).

В еще одном варианте осуществления изобретения конъюгат по настоящему изобретению конъюгирован с определяемым фрагментом красителя. Обнаруживаемыми красителями могут быть эндогенные флуорофоры (Thekkek et al., World J Gastroenterol, 2011, 17, 53-62; Paoli et al., Semin Cutan Med Surg, 2009, 28, 190-195; Monici, Biotechnol Annu Rev, 2005, 11, 227-256; Prosst et al., Int J Colorectal Dis, 2002, 17, 1-10), полициклические ароматические соединения (Vineis et al., Cancer Causes Control, 1997, 8, 346-355; Zhang et al., Cancer Res, 1994, 54, 1976s-1981s), кумарины (Sakuma et al., Curr Drug Discov Technol, 2011, 8, 367-378; Musa et al., Curr Med Chem, 2008, 15, 2664-2679), хинолины (Lacroix et al., Electrophoresis, 2005, 26, 2608-2621; Bates, Future Oncol, 2005, 1, 821-828), индолы (Schaafsma et al., J Surg Oncol, 2011, 104, 323-332; Oyama, Dig Endosc, 2013, 25 Suppl 1, 7-12; Gonzalez, Gastrointest Endosc Clin N Am, 2013, 23, 581-595), имидазолы (Cox et al., Cancer Treat Rev, 1977, 4, 119-134; Ojima, Acc Chem Res, 2008, 41, 108-119), УФ-возбужденные флуорофоры (Monici, Biotechnol Annu Rev, 2005, 11, 227-256; Toms et al., Technol Cancer Res Treat, 2006, 5, 231-238), флуоресцеины (Fukumura et al., APMIS, 2008, 116, 695-715; Haimovitz-Friedman et al., Radiat Res, 2012, 177, 467-482; Roberts et al., J Invest Surg, 2013, 26, 283-293), родамины (Gluckman et al., Cancer Treat Res, 1990, 52, 95-113; Kessel, J Photochem Photobiol B, 1992, 12, 203-204; Villeneuve, Biotechnol Appl Biochem, 1999, 30 (Pt 1), 1-17; Makale, Methods Enzymol, 2007, 426, 375-401), нафтоксантеновые красители (Eguchi et al., J Org Chem, 1999, 64, 5371-5376; Kudo et al., J Antibiot (Tokyo), 2011, 64, 123-132), фенантридины (Hoberman, Cancer Res, 1975, 35, 3332-3335; Damjanovich et al., Antibiot Chemother (1971), 1980, 28, 142-146; Ormerod, Methods Mol Biol, 1997, 75, 357-365), красители BODIPY (Banappagari et al., Eur J Med Chem, 2013, 65, 60-69; Yang et al., Chem Commun (Camb), 2013, 49, 3940-3942; Yan et al., Drug Dev Ind Pharm, 2014), цианины (Ballou et al., Biotechnol Prog, 1997, 13, 649-658; Choy et al., моль Imaging, 2003, 2, 303-312; Leijon et al., Mol Aspects Med, 2006, 27, 160-175), фталоцианины (Carcenac et al., Bull Cancer, 2000, 87, 804-812; Wainwright, Anticancer Agents Med Chem, 2008, 8, 280-291; Sekkat et al., Molecules, 2012, 17, 98-144), ксантены (Roberts et al., J Invest Surg, 2013, 26, 283-293; Kudo et al., J Antibiot (Tokyo), 2011, 64, 123-132; Paiva et al., Curr Med Chem, 2013, 20, 2438-2457), акридины (Dethlefsen et al., Cytometry, 1980, 1, 89-108; Sebestik et al., Curr Белок Pept Sci, 2007, 8, 471-483), оксазины (Motohashi et al., Med Res Rev, 1991, 11, 239-294; Thorlacius et al., Inflamm Bowel Dis, 2007, 13, 911-917; Hruban, J Toxicol Environ Health, 1979, 5, 403-433), полиены (Sakuma et al., Curr Drug Discov Technol, 2011, 8, 367-378; Regelson, J Med, 1974, 5, 50-68), оксонолы (Kessel et al., Cancer Res, 1991, 51, 4665-4670; Whiteaker et al., Curr Protoc Pharmacol, 2001, Chapter 9, Unit 9 2; Saar et al., Anal Biochem, 2005, 345, 55-65), бензимидазолы (Nawrocka et al., Farmaco, 2004, 59, 83-91; Yang et al., Eur J Med Chem, 2009, 44, 1808-1812; Woo et al., Bioorg Med Chem Lett, 2012, 22, 933-936), азаметины (Kawakami et al., J Med Chem, 1998, 41, 130-142; Xin et al., Bioconjug Chem, 2013, 24, 1134-1143), стирилы (Ding et al., Adv Healthc Mater, 2013, 2, 500-507; Kessel et al., выше), тиазолы (Yung, Neurosurg Rev, 1989, 12, 197-203; Jorgensen et al., Biochem Soc Транс, 2007, 35, 1347-1351; Smith et al., Br J Biomed Sci, 2011, 68, 158-166), антрахиноны (Limtrakul, Adv Exp Med Biol, 2007, 595, 269-300; Braumann et al., Mini Rev Med Chem, 2008, 8, 421-428), нафталимиды (Lee et al., J Am Chem Soc, 2012, 134, 12668-12674; Scutaru et al., Bioconjug Chem, 2010, 21, 2222-2226; Seliga et al., Mol Biol Rep, 2013, 40, 4129-4137), аза[18]аннулены (Tanpure et al., Bioorg Med Chem, 2013, 21, 8019-8032; Zhang, Molecular Imaging and Contrast Agent Database (MICAD), 2004), порфины (Berg et al., Biochim Biophys Acta, 1993, 1158, 300-306; Malik et al., Photochem Photobiol, 1997, 65, 389-396; Takemura et al., Photochem Photobiol, 1994, 59, 366-370), металл-лиганд-комплексы (Brancaleon et al., Lasers Med Sci, 2002, 17, 173-186; Gupta et al., Nat Prod Rep, 2011, 28, 1937-1955; Munaron et al., Technol Cancer Res Treat, 2008, 7, 335-339), скварены (Avirah et al., Org Biomol Chem, 2012, 10, 911-920; Gao et al., Biomaterials, 2014, 35, 1004-1014; Gayathri Devi et al., J Photochem Photobiol B, 2008, 92, 153-159), 8-гидроксихинолин-производные (Lin et al., Photochem Photobiol, 1995, 62, 528-534), полиметины (James et al., Theranostics, 2013, 3, 692-702; James et al., Theranostics, 2013, 3, 703-718; Toutchkine et al., Org Lett, 2007, 9, 2775-2777), нанокристаллы (Young et al., Ann Biomed Eng, 2012, 40, 438-459; Cheng et al., Curr Med Chem, 2012, 19, 4767-4785; Arap et al., Curr Med Chem, 2013, 20, 2195-2211), флуоресцентные белки (Weiss et al., Theranostics, 2013, 3, 76-84; Weigert et al., J Cell Biol, 2013, 201, 969-979; Wang et al., J моль Med (Berl), 2013, 91, 917-927), белки (Fukase et al., Curr Opin Chem Biol, 2012, 16, 614-621; Hoffman, Prog Mol Biol Transl Sci, 2013, 113, 389-402; Gandia-Herrero et al., Trends Plant Sci, 2013, 18, 334-343), перилены (Saw et al., Cancer Lett, 2006, 241, 23-30; Schmidbauer et al., Curr Opin Urol, 2007, 17, 347-351), фталоцианины (Carcenac et al., Bull Cancer, 2000, 87, 804-812; van Lier et al., Ciba Found Symp, 1989, 146, 17-26; обсуждение 26-32; Selbo et al., Tumour Biol, 2002, 23, 103-112; Jia et al., Curr Drug Metab, 2012, 13, 1119-1122), апконверсионные красители (Xu et al., Biomaterials, 2011, 32, 9364-9373; Jiang et al., J R Soc Interface, 2010, 7, 3-18; Wang et al., Analyst, 2010, 135, 1839-1854) и дикетопиролопиролы (Shinohara et al., Anticancer Drugs, 2010, 21, 228-242; Dervan et al., Curr Opin Struct Biol, 2003, 13, 284-299; Bailly, Curr Med Chem Anticancer Agents, 2004, 4, 363-378).

Кроме того, такими веществами могут быть также фотосенсибилизаторы или сенсибилизаторы, или усилители других обычных способов комбинированного лечения рака, или они содержат такие сенсибилизаторы.

Примеры поддающихся обнаружению красителей включают, но этим не ограничиваются, (CS)2Ir(μ-Cl)2Ir(CS)2, (E)-стильбен, (Z)-стильбен, йодид 1,1-диэтил-4,4-карбоцианина, 1,2-дифенилацетилен, 1,4-дифенилбутадиен, 1,6-дифенилгексатриен, 1-анилинонафталин-8-сульфоновая кислота, 1-хлор-9,10-бис(фенилэтинил)антрацен, 2,7-дихлорфлуоресцеин, 2,3-диаминонафталин, 2,5-дифенилоксазол, 2-хлор-9,10-бис(фенилэтинил)антрацен, 2-хлор-9,10-дифенилантрацен, 2-ди-1-ASP, 2-додецилрезоруфин, 2-метилбензоксазол, 3,3-диэтилтиадикарбоцианин йодид, 4-диметиламинофенилазофенил, 4-диметиламино-4-нитростильбен, 5(6)-карбоксифлуоресцеин, 5(6)-карбоксинафтофлуоресцеин, 5(6)-карбокситетраметилродамин B, 5-(и-6)-карбокси-2',7'-дихлорфлуоресцеин, 5-(и-6)-карбокси-2,7-дихлорфлуоресцеин, 5-(N-гексадеканоил)аминоэозин, 5,12-бис(фенилэтинил)нафтацен, 5-хлорметилфлуоресцеин, 5-FAM, 5-ROX, 5-TAMRA, 6,8-дифтор-7-гидрокси-4-метилкумарин, 6-карбоксиродамин 6G, 6-HEX, 6-JOE, 6-JOE, 6-TET, 7-AAD, 7-аминоактиномицин D, 7-бензиламино-4-нитробенз-2-окса-1,3-диазол, 7-метоксикумарин-4-уксусная кислота, 8-анилинонафталин-1-сульфоновая кислота, 8-бензилокси-5,7-дифенилхинолин, 9,10-бис(фенилэтинил)антрацен, 9,10-дифенилантрацен, 9-метилкарбазол, AAA, Abberior STAR 440SX, Abberior STAR 470SX, Abberior STAR 488, Abberior STAR 512, Abberior STAR 580, Abberior STAR 635, Abberior STAR 635P, AcGFP1, акридин оранжевый, акридин желтый, акридон, Adams Apple Red (красное яблоко) 680, Adirondack Green 520, Alexa Fluor 350, Alexa Fluor 405, Alexa Fluor 430, Alexa Fluor 480, Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 500, Alexa Fluor 514, Alexa Fluor 532, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 555, Alexa Fluor 568, Alexa Fluor 594, Alexa Fluor 610, Alexa Fluor 610-R-PE, Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 635, Alexa Fluor 647, Alexa Fluor 660, Alexa Fluor 680, Alexa Fluor 680-APC, Alexa Fluor 680-R-PE, Alexa Fluor 700, Alexa Fluor 750, Alexa Fluor 790, аллофикоцианин (APC), AMCA, AMCA-X, AMCA-X, AmCyan1, аминокумарин, аминометилкумарин, Amplex Gold (продукт), Amplex Red Reagent, Amplex UltraRed, анилинонафталин, антрацен, конъюгаты APC-Cy7, APC-Seta-750, AsRed2, Atto 390, Atto 425, ATTO 430LS, Atto 465, Atto 488, ATTO 490LS, Atto 495, Atto 514, Atto 520, Atto 532, Atto 540Q, Atto 550, Atto 565, Atto 580Q, Atto 590, Atto 594, Atto 610, Atto 612Q, Atto 620, Atto 633, ATTO 635, Atto 647, ATTO 647, ATTO 647N, Atto 647-N, Atto 655, Atto 665, Atto 680, Atto 700, Atto 725, Atto 740, Atto MB2, Atto Oxa12, Atto Rho101, Atto Rho11, Atto Rho12, Atto Rho13, Atto Rho14, Atto Rho3B, Atto Rho6G, Atto Тио12, аурамин O, аурамин-родамин пятно, Azami Green, Azurite, BBQ 650, BCECF, бензантрон, бензол, бензофенон, Bex1, BHQ-0, BHQ-1, BHQ-2, BHQ-3, Bimane, Biphenyl, Birch Yellow 580, бисбензимид, Blacklight paint, BOBO-1, BOBO-3, BODIPY 493/503, BODIPY 499/508, BODIPY 507/545, BODIPY 530/550, BODIPY 558/568, BODIPY 564/570, BODIPY 576/589, BODIPY 577/618, BODIPY 581/591, BODIPY 630 650-X, BODIPY 630/650, BODIPY 630/650-X †, BODIPY 650/655-X †, BODIPY 650/665-X, BODIPY FL, BODIPY R6G, BODIPY TMR, BODIPY TMR-X, BODIPY TR, BODIPY TR-X, BODIPY TR-X Ph 7.0, BODIPY TR-X фаллацидин, BODIPY-диMe, BODIPY-Фенил, BODIPY-TMSCC, BO-PRO-1, BO-PRO-3, B-фикоэритрин (BPE), Brainbow (радуга мозга), C3-индоцианин, C3-оксацианин, C3-тиацианиновый краситель (EtOH), C3-тиацианиновый краситель (PrOH), C545T, C5-индоцианин, C5-оксацианин, C5-тиацианин, C7-индоцианин, C7-оксацианин, кальцеин, кальцеин красно-оранжевый, Calcium Crimson, Calcium Green-1, Calcium Orange, калькофлуор белый 2MR, Carboxy SNARF-1 pH 6.0, Carboxy SNARF-1 pH 9.0, карбоксифлуоресцеин, карбоксифлуоресцеин диацетат сукцинимидиловый эфир, карбоксифлуоресцеин сукцинимидиловый эфир, карбоксинафтофлуоресцеин, карбокси-родамин 6G, 5-изомер, карбокси-родамин 6G, 6-изомер, карбокси-X-родамин, 5-изомер, карбокси-X-родамин, 6-изомер, Cascade Blue, Cascade Yellow, Catskill Green 540, CBQCA, CellMask Orange, метиловый эфир CellTrace BODIPY TR, CellTrace кальцеин фиолетовый, CellTrace™ Far Red, CellTracker Blue, CellTracker Red CMTPX, CellTracker Violet BMQC, церулеан, CF405M, CF405S, CF488A, CF543, CF555, CFP (Campbell Tsien 2003), CFSE, CF™ 350, хлорофилл A, хлорофилл B, CHOxAsH-CCXXCC, Chromeo 488, Chromeo 494, Chromeo 505, Chromeo 546, Chromeo 642, хромомицин A3, хромомицин A3, цитрин, CM-H2DCFDA, кумарин, кумарин 1, кумарин 30, кумарин 314, кумарин 334, кумарин 343, кумарин 6, кумарин 545T, C-фикоцианин, Крезил-виолет перхлорат, CryptoLight CF1, CryptoLight CF2, CryptoLight CF3, CryptoLight CF4, CryptoLight CF5, CryptoLight CF6, кристалл-виолет, кумарин 1, кумарин 102, кумарин 120, кумарин 152, кумарин 153, кумарин 307, кумарин 6, Cy2, Cy3, Cy3, Cy3.5, Cy3B, Cy3Cy5 ET, Cy5, Cy5.5, Cy5.5® амидит, Cy5.5® NHS, Cy7, Cy7® NHS, Cyanine5 карбоновая кислота, CyPet, CypHeR⁵, CypHeR⁵ pH 9.15, CyQUANT GR, CyTRAK Orange, дабцил, дабцил SE, DAF-FM, DAMC (Weiss), D-AMCA, дансил, дансилкадаверин, дансил-глицин (диоксан), дансил-X, DAPI, дапоксил, дапоксил (2-аминоэтил)сульфонамид, гаситель флуоресценции «черный», DCFH, DCI, DCM, DDAO, темно-пурпуровый, DHR, DHR, ди-8-ANEPPS, DiA, диалкиламинокумарин, дибромбиман, хлорид дихлортрис(1,10-фенантролин)рутения(II), DiD, диэтиламинокумарин, DiI, DiIC18(3), диметоксибензол, диметиламинокумарин, диметиламинонафталин, DiO, DiOC6, DiR, Diversa Cyan-FP, Diversa Green-FP, dKeima-Red, DM-NERF pH 4.0, ДНФ-биотин, DOCI, доксорубицин, DPP pH-Probe 590-11.0, DPP pH-Probe 590-7.5, DPP pH-Probe 590-9.0, Dragon Green, DRAQ5, DRAQ7, Dronpa-Green, мономер DsRed, DsRed2 («RFP»), DsRed-Express, DsRed-Express T1, DsRed-Express2, dTomato, Dy 350, Dy 405, Dy 415, Dy 480 XL, Dy 481 XL, Dy 485 XL, Dy 490, Dy 495, Dy 505, Dy 505-X, Dy 510 XL, Dy 520 XL, Dy 521 XL, Dy 530, Dy 547, Dy 548, Dy 549, Dy 549P1, Dy 550, Dy 554, Dy 555, Dy 556, Dy 560, Dy 590, Dy 591, Dy 594, Dy 605, Dy 610, Dy 615, Dy 630, Dy 631, Dy 632, Dy 633, Dy 634, Dy 635, Dy 636, Dy 647, Dy 648, Dy 649, Dy 649P1, Dy 650, Dy 651, Dy 652, Dy 654, Dy 675, Dy 676, Dy 677, Dy 678, Dy 679, Dy 679P1, Dy 680, Dy 681, Dy 682, Dy 700, Dy 701, Dy 703, Dy 704, Dy 730, Dy 731, Dy 732, Dy 734, Dy 749P1, Dy 750, Dy 751, Dy 752, Dy 754, Dy 776, Dy 777, Dy 778, Dy 780, Dy 781, Dy 782, Dy 831, DY-350XL, DY-480, DY-480XL MegaStokes, DY-485, DY-485×L MegaStokes, DY-490, DY-490XL MegaStokes, DY-500, DY-500XL MegaStokes, DY-520, DY-520XL MegaStokes, DY-547, DY-549P1, DY-549P1, DY-554, DY-555, DY-590, DY-590, DY-615, DY-630, DY-631, DY-633, DY-635, DY-636, DY-647, DY-649P1, DY-650, DY-651, DY-656, DY-673, DY-675, DY-676, DY-680, DY-681, DY-700, DY-701, DY-730, DY-731, DY-750, DY-751, DY-776, DY-782, Dye-1041, Dye-28, Dye-304, Dye-33, Dye-45, DyLight 350, DyLight 405, DyLight 488, DyLight 549, DyLight 594, DyLight 633, DyLight 649, DyLight 680, DyLight 750, DyLight 800, DyLight Fluor, DyQ 1, DyQ 2, DyQ 3, DyQ 4, DyQ 425, DyQ 505, DyQ 660, DyQ 661, DyQ 700, E2-Crimson, E2-Orange, E2-Red/Green, EBFP, EBFP2, ECF, ECFP, ECL Plus, EGFP, eGFP (Tsien), ELF 97, Emerald, красный флуоресцентный белок из Entacmaea quadricolor, Envy Green, эозин, эозин Y, эпикокконон, EqFP611, ER-Tracke сине-белый DPX, эритрозин-5-изотиоцианат, Eterneon™ 350/430, Eterneon™ 350/455, Eterneon™ 384/480, Eterneon™ 393/523, Eterneon™ 394/507, Eterneon™ 480/635, бромид этидия, этидия гомодимер-1, этил-эозин, этил-нильский голубой A, этил-п-диметиламинобензоат, Eu (Soini), Eu(tta)3DEADIT, Eu2O3 наночастицы, EvaGreen, EVOblue-30, EVOblue™ 30, EYFP, EYFP, EYFP, FAD, FAM, 5-изомер, FAM, 6-изомер, FITC, FlAsH (Adams), Flash Red EX, FlAsH-CCPGCC, FlAsH-CCXXCC, FlAsH-EDT2, Fluo-3, Fluo-3, Fluo-4, Fluo-5F, FluoProbes, флуоресцеин, флуоресцеин изотиоцианат, флуоресцеин-5-EX, флуоресцеин-двухосновный, флуоресцеин-EX, хирургия с наведением флуоресцентного изображения, фтор-изумруд, Фтор-Джейд пятно, флуорол 5G, FluorX, FluoSpheres blue, FluoSpheres crimson, FluoSpheres dark red, FluoSpheres Orange, FluoSpheres red, FluoSpheres yellow-green, FM 1-43, FM 4-64, FM4-64 в ЦТХ (цианотолил тетразолий хлорид), FM4-64 в НДС (додецилсульфат натрия), Fort Orange 600, Fura Red, Fura Red без Ca, Fura-2, Fura-2 без Ca, Fura-2-ацетоксиметиловый эфир, GelGreen, GelRed, GFPuv, зеленый флуоресцентный белок, H9-40, HcRed1, HCS CellMask Red, HCS LipidTOX Deep Red, LipidTOX Green для пятен нейтральных липидов HCS, HCS LipidTOX Green для определения фосфолипидoв, HCS LipidTOX Red для пятен нейтральных липидов, HCS LipidTOX Red для определения фосфолипидов, Hemo Red 720, гептаметиновые красители, Heteractis magnifica GFP, HEX, HiLyte Fluor 488, HiLyte Fluor 555, HiLyte Fluor 647, HiLyte Fluor 680, HiLyte Fluor 750, HiLyte Plus 555, HiLyte Plus 647, HiLyte Plus 750, HmGFP, Hoechst 33258, Hoechst 33342, Hops Yellow 560, HPTS, гидроксикумарин, HyPer, IBApy 493/503, IBApy 530/550, IBApy FL, IBApy R6G, IBApyTMR-X, иминокумарин, Indian Yellow, Indo-1, Indo-1 Ca free, Ir(Cn)2(acac), IR-775 хлорид, IR-806, IRDye® 700 фосфорамид, IRDye® 700DX, IRDye® 800 фосфорамидит, IRDye® 800CW, IRDye® 800RS, Ir-OEP-CO-Cl, JC-1, JOE (520/548), JOE, 6-изомер, JOJO-1, Jonamac Evitag T2 Red, J-Red, Kaede Green, Kaede Red, Katusha, Kusabira Orange, Lake Placid 490, Laurdan, LDS 751, лиссамин-родамин B, LIVE DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain, LIVE DEAD Fixable Far Red Dead Cell Stain, LIVE DEAD Fixable Green Dead Cell Stain, LIVE DEAD Fixable Near-IR Dead Cell Stain, LIVE DEAD Fixable Red Dead Cell Stain, LIVE DEAD Fixable Violet Dead Cell Stainn, LIVEDEAD Fixable Blue Dead Cell Stain, LOLO-1, Lucifer Yellow, lucifer Yellow CH, Lucifer Yellow CH дилитиевая соль, люциферин, Lumio Green, Lumio Red, Lumogen F Orange, Lumogen Red F300, LysoSensor Blue DND-192, LysoSensor Green DND-153, LysoSensor YellowBlue DND-160, LysoTracker Blue DND-22, LysoTracker Green DND-26, LysoTracker Red DND-99, LysoTracker Yellow HCK-123, Macoun Red Evitag T2, Macrolex Fluorescence Red G, Macrolex Fluorescence Yellow 10GN, магний зеленый, магния октаэтилпорфирин, магний оранжевый, фталоцианин магния, тетрамезитилпорфирин магния, зеленый малахит, зеленый малахит изотиоцианат, Maple Red-Orange 620, Marina Blue, mBanana, mBBr, mCFP, MCherry, mCitrine, мероцианин, мероцианин 540, метоксикумарин, метилен голубой, mHoneyDew, Midoriishi Cyan, митрамицин, MitoTracker Deep Red 633, MitoTracker Green FM, MitoTracker CMTMRos Orange, MitoTracker CMXRos Red, mKate (TagFP635), mKate2, mKeima-Red, mKO, mNeptune, Monobromobimane, mOrange, mOrange2, mOrange2, mPlum, mRaspberry, mRFP, mRFP1, mStrawberry, mTangerine (Shaner), mTFP1, N,N-Бис(2,4,6-триметилфенил)-3,4:9,10-..., NADH, нафталин, нафтофлуоресцеин, NBD, NBD-X, NeuroTrace 500525, Nilblau перхлорат, нильский голубой, Nileblue A, NIR1, NIR2, NIR3, NIR4, NIR820, октаэтилпорфирин, оптический отбеливатель, оранжевый флуоресцентный белок, Oregon Green 488, Oregon Green 488 DHPE, Oregon Green 514, оксазин 750, оксазин 1, оксазин 170, Oyster 488, Oyster 550, Oyster 555, Oyster 647, Oyster 650, Oyster 680, Oyster® 405, Oyster® 568, Oyster® 594, Oyster® 750, P3, P4-3, Pacific Blue, Pacific Orange, PA-GFP (пост активация), PA-GFP (предварительная активация), мезо-тетрафенил-тетрабензопорфирин палладий (II), PdOEPK, PdTFPP, PE-Cy5 конъюгаты, PE-Cy7 конъюгаты, PerCP, PerCP-Cy5.5, перидинин хлорофилл (PerCP), перилен, перилен бисимид pH-Probe 550-5.0, перилен бисимид pH-Probe 550-5.5, перилен бисимид pH-Probe 550-6.5, перилен зеленый pH-Probe 720-5.5, перилен зеленый Tag pH-Probe 720-6.0, перилен оранжевый pH-Probe 550-2.0, перилен оранжевый Tag 550, перилен красный pH-Probe 600-5.5, перилендиимид, перилен зеленый pH-Probe 740-5.5, фенантролин, фенол, фнилаланин, PhiYFP, PhiYFP-m, флоксин, pHrodo Green, pHrodo Red, pHrodo, сукцинимидиловый эфир, фталоцианин, фикобилин, фикоэритрин, фикоэритробилин, PicoGreen dsDNA количественный реагент, пинацианол йодид, пироксикам, тетрафенилтетрабензопорфирин платины(II), Plum Purple, диаминовый прочный алый 4B, POPO-1, POPO-3, POPOP, PO-PRO-1, PO-PRO-3, порфин, PPO, P-кватерфенил, профлавин, PromoFluor-350, PromoFluor-405, PromoFluor-415, PromoFluor-488, PromoFluor-488 премиум, PromoFluor-488LSS, PromoFluor-500LSS, PromoFluor-505, PromoFluor-510LSS, PromoFluor-514LSS, PromoFluor-520LSS, PromoFluor-532, PromoFluor-546, PromoFluor-555, PromoFluor-590, PromoFluor-610, PromoFluor-633, PromoFluor-647, PromoFluor-670, PromoFluor-680, PromoFluor-700, PromoFluor-750, PromoFluor-770, PromoFluor-780, PromoFluor-840, пропидий йодид, пропидий йодид (PI), Pro-Q Diamond, краситель фосфопротеинов в геле Pro-Q Diamond, Pro-Q Emerald, реагент Pro-Q Emerald 300, протопорфирин IX, P-терфенил, PTIR475/UF, PtOEP, PtOEPK, PtTFPP, PyMPO, пиранин, пирен, QD PbS 950, QD525, QD565, QD585, QD605, QD655, QD705, QD800, QD903, QDot 525, QDot 545, QDot 565, Qdot 585, Qdot 605, Qdot 625, Qdot 655, Qdot 705, Qdot 800, QpyMe2, QSY 21, QSY 35, QSY 7, QSY 9, QSY 9, Quasar 570, Quasar 670, хинин, хинин сульфат, ReAsH-CCPGCC, ReAsH-CCXXCC, Red 613, Red Beads (Weiss), Redmond Red, Резоруфин, rhod-2, родамин 700 перхлорат, родамин, родамин (TMR), родамин 101, родамин 110, родамин 110X, родамин 123, родамин 6G, родамин B, родамин зеленый (502/527), родамин фаллоидин, родамин pH-Probe 585-7.0, родамин pH-Probe 585-7.5, родамин красный, родамин красный-X (580/590), родамин Tag pH-Probe 585-7.0, Rhodol Green, рибофлавин, RiboGreen, RoGFP, бенгальская роза, R-фикоэритрин (PE), R-фикоэритрин (RPE), рубрен, S65A, S65C, S65L, S65T, Sapphire, SBFI, SBFI Zero Na, SensiLight PBXL-1, SensiLight PBXL-3, Seta 633-NHS, SeTau-380-NHS, SeTau-647, Snake-Eye красный 900, SNARF, SNIR1, SNIR2, SNIR3, SNIR4, натрий зеленый, солофенил флавин 7GFE 500, Spectrum Aqua, Spectrum Blue, Spectrum FRed, Spectrum Gold, Spectrum Green, Spectrum Orange, Spectrum Red, краситель скварилий III, универсальный краситель, производное стильбена, стильбен, Стирил8 перхлорат, сульфонродамин, сульфородамин 101, сульфородамин B, сульфородамин G, Suncoast Yellow, SuperGlo BFP, SuperGlo GFP, Surf Green EX, краситель нуклеиновых кислот в геле SYBR Gold, SYBR Green I, SYBR safe, краситель ДНК в геле SYBR Safe, Synapto-pHluorin, SYPRO Ruby, SYTO 11, SYTO 13, SYTO 16, SYTO 17, SYTO 45, SYTO 59, SYTO 60, SYTO 61, SYTO 62, SYTO 82, SYTO 9, SYTO RNASelect, SYTOX Blue, SYTOX Green, SYTOX Orange, SYTOX Red, TagBFP, TagCFP, TagGFP, TagGFP2, TagRFP, TagYFP, TAMRA, 5-изомер, TAMRA, 6-изомер, Tb (Soini), tCO, tdTomato, террилен, террилендиимид, testdye, TET, тетрацен, тетракис(o-аминофенил)порфирин, тетрамезитилпорфирин, тетраметилродамин, тетрафенилбутадиен, тетрафенилпорфирин, тетранатрий трис(батофенантролин дисульфонат)рутения(II), тетра-трет-бутилазапорфин, тетра-трет-бутилнафталоцианин, Texas Red, Texas Red DHPE, Texas Red-X, тиазол оранжевый, ThiolTracker Violet, тионин ацетат, Titan yellow, TMRE, Toluene, Topaz, Topaz (Tsien1998), TO-PRO: цианин мономер, TO-PRO-1, TO-PRO-3, TOTO-1, TO-PRO-1, TOTO-1, TO-PRO-1, TOTO-3, TO-PRO-3, TOTO-3, TO-PRO-3, трис(2,2-бБипиридил)рутения(II) хлорид, трис(4,4-дифенил-2,2-бипиридин)рутения(II) хлорид, тис(4,7-дифенил-1,10-фенантролин)рутения(II) хлорид, TRITC, TruRed, триптофан, T-Sapphire, TSQ, TurboFP602, TurboFP635, TurboGFP, TurboRFP, TurboYFP, тирозин, умбеллиферон, Venus, Vex1, виолантрон, Vybrant DyeCycle Green stain, Vybrant DyeCycle Orange stain, Vybrant DyeCycle Violet stain, WEGFP (пост активация), WellRED D2, WellRED D3, WellRED D4, GFP дикого типа, X-rhod-1, X-родамин, Y66F, Y66H, Y66W, Yakima Yellow, желтый флуоресцентные белок, YFP, YO-PRO-1, YO-PRO-3, YOYO-1, YOYO-3, YPet, цинк-октаэтилпорфирин, цинк-фталоцианин, цинк-тетрамезитилпорфирин, ZsGreen1 и ZsYellow1.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является ксантен.

Примеры ксантеновых красителей включают, но этим не ограничиваются, 5(6)-карбоксинафтофлуоресцеин, 5-(N-гексадеканоил)аминоэозин, 5-(N-гексадеканоил), эозин Y, флуоресцеин, флуоресцеин, флуоресцеин двухосновный, флуорол 5G, нафтофлуоресцеин, нафтофлуоресцеин, родамин 6G, родамин 123, родамин B, родамин pH-Probe 585-7.0, родамин pH-Probe 585-7.5, родамин Tag pH-Probe 585-7.0, бенгальский розовый и сульфородамин 101.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является акридин.

Примеры акридиновых красителей включают, но этим не ограничиваются, акридин оранжевый, акридин желтый, DDAO и профлавин.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является оксазин.

Примеры оксазиновых красителей включают, но этим не ограничиваются, крезил-виолет перхлорат, нильский голубой, нильский голубой (EtOH), нильский красный, оксазин 1, оксазин 750 и оксазин 1.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является цианин.

Примеры цианиновых красителей включают, но этим не ограничиваются, 1,1-диэтил-4,4-карбоцианин йодид, C3-оксацианин, C3-тиацианиновый краситель (EtOH), C3-тиацианиновый краситель (PrOH), C5-индоцианин, C5-оксацианин, C5-тиацианин, C7-индоцианин, C7-оксацианин, CBQCA, Cy2, Cy3, Cy3.5, Cy3B, Cy3Cy5 ET, Cy5, Cy5.5, Cy7, Cyanine5 карбоновая кислота, CypHeR5, Dye-33, Dye-304, Dye-1041, ECF, ECL Plus, IR-775 хлорид, IR-806, IRDye® 700 фосфорамидит, IRDye® 800 фосфорамидит, IRDye® 800CW, IRDye® 800RS, мероцианин 540, NIR1, NIR2, NIR3, NIR4, NIR820, пинацианол йодид, SNIR1, SNIR2, SNIR4 и универсальный краситель.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является стирил.

Примеры стирильных красителей включают, но этим не ограничиваются, Dye-28 и Dye-45.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является кумарин.

Примеры кумариновых красителей включают, но этим не ограничиваются, 7-метоксикумарин-4-уксусную кислоту, Alexa Fluor 350, C545T, кумарин 1, кумарин 6, кумарин 6, кумарин 30, кумарин 314, кумарин 334, кумарин 343, кумарин 545T, кумарин 153, Macrolex Fluorescence Red G, и Macrolex Fluorescence Yellow 10GN.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является нафталимид.

Примеры нафталимидных красителей включают, но этим не ограничиваются, нафталин.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является порфин.

Примеры порфиновых красителей включают, но этим не ограничиваются, хлорофилл A и хлорофилл B.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является комплекс металл-лиганд.

Примеры красителей комплекса металл-лиганд включают, но этим не ограничиваются, (CS)2Ir(μ-Cl)2Ir(CS)2, Eu(tta)3DEADIT, Ir(Cn)2(acac), Ir(Cs)2(acac), Ir-OEP-CO-Cl, мезо-тетрафенил-тетрабензопорфирин палладия(II), PdOEPK, тетрафенилтетрабензопорфирин платины(II), PtOEP, PtOEPK и хлорид трис(2,2-бипиридил)рутения(II).

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является скварен.

Примеры сквареновых красителей включают, но этим не ограничиваются, Seta 633-NHS, Seta-633-NHS и SeTau-647-NHS.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является a полиметин.

Примеры полиметиновых красителей включают, но этим не ограничиваются, DY-350XL.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является нанокристалл.

Примеры нанокристаллических красителей включают, но этим не ограничиваются, Adams Apple Red 680, Adirondack Green 520, Birch Yellow 580, Catskill Green 540, Fort Orange 600, Hemo Red 720, Lake Placid 490, Maple Red-Orange 620, QD525, QD565, QD585, QD605, QD655, QD705, QD800 и Snake-Eye Red 900.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является флуоресцентный белок.

Примеры флуоресцентных белков включают, но этим не ограничиваются, аллофикоцианин, AmCyan1, APC, APC-Seta-750, AsRed2, Azami Green, мономерный Azami Green, Bex1, C-фикоцианин, CFP (Campbell Tsien 2003), цитрин (Campbell Tsien 2003), CryptoLight CF1, CryptoLight CF2, CryptoLight CF3, CryptoLight CF5, CryptoLight CF6, DsRed, DsRed, DsRed-Express T1, EBFP (Patterson 2001), EGFP (Campbell Tsien 2003), EGFP (Patterson 2001), Kaede Green, mBanana, mCherry, mHoneyDew, mOrange, mPlum, mRaspberry, mRFP1.2 (Wang), mStrawberry (Shaner), mTangerine (Shaner), PA-GFP (пост активация), PA-GFP (предварительная активация), R-фикоэритрин, SensiLight PBXL-1, SensiLight PBXL-3, SuperGlo BFP, SuperGlo GFP, Vex1 и WEGFP (пост активация).

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является перилен.

Примеры периленовых красителей включают, но этим не ограничиваются, Lumogen F Orange, Lumogen Red F300, Lumogen Red F300, перилен бисимид pH-Probe 550-5.0, перилен бисимид pH-Probe 550-5.5, перилен бисимид pH-Probe 550-6.5, перилен Green pH-Probe 720-5.5, перилен Green Tag pH-Probe 720-6.0, перилен Orange pH-Probe 550-2.0, перилен Orange Tag 550, перилен Red pH-Probe 600-5.5 и перилен Green pH-Probe 740-5.5.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является фталоцианин.

Примеры фталоцианиновых красителей включают, но этим не ограничиваются, IRDye® 700DX.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению терапевтически активным агентом является дикетопиролопирол.

Примеры дикетопиролопироловых красителей включают, но этим не ограничиваются, DPP pH-Probe 590-7.5, DPP pH-Probe 590-9.0 и DPP pH-Probe 590-11.0.

В еще одном варианте осуществления изобретения конъюгат по настоящему изобретению конъюгирован с фрагментом сенсибилизатора (Allison et al., Photodiagnosis and Photodynamic Therapy, 2004, 1, 27-42). Фрагментами сенсибилизатора могут быть молекулы семейства порфиринов, включая, но этим не ограничиваясь, производные гематопорфиринов и молекулы, основанные на производных гематопорфиринов (Mironov et al., J Photochem Photobiol B, 1990, 4, 297-306; Bonnett et al., Adv Exp Med Biol, 1983, 160, 241-250; Dougherty, Photochem Photobiol, 1987, 46, 569-573), производные бензопорфирина (Levy, Semin Oncol, 1994, 21, 4-10; Richter et al., J Natl Cancer Inst, 1987, 79, 1327-1332), 5-аминолевулиновую кислоту (Loh et al., Br J Cancer, 1993, 68, 41-51; Peng et al., Photochem Photobiol, 1997, 65, 235-251) и тексапирины (Sessler et al., Biochem Pharmacol, 2000, 59, 733-739; Young et al., Photochem Photobiol, 1996, 63, 892-897); молекулы семейства хлорофиллов, включая, но этим не ограничиваясь, хлорины (Berenbaum et al., Lasers in Medical Science, 1993, 8, 235-243; Glanzmann et al., Photochem Photobiol, 1998, 67, 596-602), пурпурины (Mang et al., Cancer J Sci Am, 1998, 4, 378-384; Kaplan et al., J Surg Oncol, 1998, 67, 121-125) и бактериохлорины (Moser, SPIE Conf Proc, 1993, 1881, 116-125); и красители, включая, но этим не ограничиваясь, фталоцианин и нафталоцианин (BeN-Hur et al., Int J Radiat Biol Relat Stud Phys Chem Med, 1985, 47, 145-147).

Примеры фотосенсибилизаторов включают, но этим не ограничиваются, Allumera, аминолевулиновую кислоту, Amphinex, антрин, азадипиррометены, BF-200 ALA, BODIPY, Cevira, Cysview, форсан, гексвикс, лазерфирин, Litx, левулан, LS11, Lumacan, лутрин, метвикс, метвиксиа, моно-L-аспартил хлорин e6 (NPe6), оптрин, фотохлор, фотофрин, фотосенс, Photrex, псорален, пуртилин, силикон фталоцианин Pc 4, стакел, темопорфин, тоокад, Visonac, визудин (Visudine) и визудин (Visudyne).

В еще одном варианте осуществления изобретения конъюгат по настоящему изобретению конъюгирован с контрастным фрагментом для MRI (магнитно-резонансная томография). MRI контрастные фрагменты могут представлять собой низкомолекулярные одноядерные или многоядерные парамагнитные хелаты, металлoпорфирины, полимерные или макромолекулярные носители (ковалентно или нековалентно меченные парамагнитными хелатами), дисперсные CA (включая фторированные или нефторированные парамагнитные мицеллы или липосомы) и парамагнитные или супермагнитные частицы (например, оксиды железа, Gd3+-меченные цеолиты), диамагнитные полимеры CEST; диамагнитные зонды гиперполяризации (газы и аэрозоли), и 13C-меченные соединения или ионы (например, 6Li⁺) (Zhang, Molecular Imaging and Contrast Agent Database (MICAD), 2004; Vithanarachchi et al., Curr Mol Imaging, 2012, 1, 12-25; Tóth et al., Contrast Agents I, 2002, 221, 61-101; Muller et al., Advances in Inorganic Chemistry, 2005, Volume 57, 239-292; Laurent et al., Contrast Media Mol Imaging, 2006, 1, 128-137; Jacques et al., Contrast Agents I, 2002, 221, 123-164; Geraldes et al., Contrast Media Mol Imaging, 2009, 4, 1-23; Choy et al., Mol Imaging, 2003, 2, 303-312; Chan et al., Coordination Chemistry Reviews, 2007, 251, 2428-2451; Caravan et al., Chem Rev, 1999, 99, 2293-2352; Aime et al., Coordination Chemistry Reviews, 2006, 250, 1562-1579; Aime et al., Advances in Inorganic Chemistry, 2005, Volume 57, 173-237).

Примеры MRI контрастных фрагментов включают, но этим не ограничиваются, B-19036, B22956, эритроциты, меченные изотопом хрома, кларискан™, CMC 001, код 7228, Cr-HIDA, DAB-Am64-(1B4M-Gd)64, диамид, Dy-DOTA-4AmCE, Dy-тетрафенил-порфирин сульфонат, ECIII-60, ECIV-7, EP-2104R, Fe O-BPA, Fe-EHPD, Fe-EHPG (железо(III)), Fe-HBED, феридекс в.в., двойная соль лимоннокислого железа и лимоннокислого аммония, фериоксамин, ферристен, ферриксан, ферумоксид, ферумоксил, ферумокстран, гадобенат димеглумин, гадобутрол, гадодиамид, гадофлуорин, гадолиний цеолит, гадомер-17, гадопентетат димеглумин, гадопентетат гастроинтестинальный, гадотерат меглумин, гадотеридол, гадоверсетамид, гадоксетат динатрий, гадоксетовая кислота, Gd меченный альбумин, Gd-2,5-BPA-DO3A, Gd-DTPA, Gd-DTPA меченный альбумин, Gd-DTPA меченный декстран, Gd-DTPA мезопорфирин, Gd-DTPA-PEG, Gd-DTPA-полилизин, Gd-тетрафенил-порфирин сульфонат, Gn-1140, наночастицы золота, H₈OHEC, йопромид, липосомы, Ln-PK-11195, магнитные микросферы крахмала, мангафодипир тринатрий, хлорид магния, гидроксилапатит марганца, металлoфуллерены, металлoпорфирины, Mn(III)TPPS4, Mn(III)TPPS4 (марганец(III) тетра-[4-сульфанатофенил]порфирин), наночастицы монокристаллического оксида железа, MP 2269, MS-325, MS-325, Nanoglobular MRI CAs (G3), наночастицу, инъекционный NC100150, нитроксиды, пероральные магнитные частицы, P717, P760, P792, PAMAM-G4, PEG-ферон, перфторхимические реактивы, перфтороктилбромид, наночастицы поликристаллического оксида железа, ProCA1, ProCA1.affi, ProCA1.GRP, резовист, SHU 555 C, синерем, наночастицы суперпарамагнитного поликристаллического оксида железа (SPION), агенты для исследования вентиляции, VSOP-C184 и WIN 22181.

В еще одном варианте осуществления изобретения конъюгат по настоящему изобретению конъюгирован с компонентом, усиливающим ультразвуковой контраст. Компоненты, усиливающие ультразвуковой контраст, содержат оболочку и ядро. Оболочка может состоять из вещества, выбранного из группы, включающей, но этим не ограничивающейся, фосфолипиды (Cassano et al., Cancer Imaging, 2006, 6, 4-6; Jaquotot-Herranz et al., Rev Esp Enferm Dig, 2012, 104, 279-280; Kuenen et al., Ultrasound Med Biol, 2013, 39, 1631-1641), поли(D,L-лактид-со-гликолид) (PLGA) (Huang et al., Biomaterials, 2010, 31, 1278-1286; Sun et al., Biomaterials, 2012, 33, 5854-5864; Xu et al., J Biomed Opt, 2009, 14, 034020), сывороточный альбумин (Li et al., BJU Int, 2009, 104, 1063-1067; Lin et al., J Clin Gastroenterol, 1991, 13, 108-110), полимеры (Eggen et al., J Control Release, 2014; Ninomiya et al., Ultrason Sonochem, 2014, 21, 1482-1488; Suzuki et al., J Control Release, 2009, 133, 198-205), перфлутрен (Barua et al., J Ultrasound Med, 2011, 30, 333-345; McCarville et al., Pediatr Radiol, 2012, 42, 824-833; Schmillevitch et al., Arq Gastroenterol, 2011, 48, 119-123), коллоид на основе углерода для определения смещения фаз (Kripfgans et al., Ultrasound Med Biol, 2000, 26, 1177-1189; Zhang et al., Ultrasound Med Biol, 2010, 36, 1856-1866; Kopechek et al., J Healthc Eng, 2013, 4, 109-126), перфлексан (Mattrey et al., Acad Radiol, 2002, 9 Suppl 1, S231-235; Kono et al., J Vasc Interv Radiol, 2007, 18, 57-65; Zhou et al., Adv Mater, 2013, 25, 4123-4130), липид/галактозу (Catalano et al., Cardiovasc Intervent Radiol, 1999, 22, 486-492; Isozaki et al., Radiology, 2003, 229, 798-805; Numata et al., World J Gastroenterol, 2006, 12, 6290-6298), гексафторид серы (Jaquotot-Herranz et al., Rev Esp Enferm Dig, 2012, 104, 279-280; Kuenen et al., Ultrasound Med Biol, 2013, 39, 1631-1641; Szabo et al., Eur Radiol, 2013, 23, 3228-3236), перфтороктил бромид, поверхностно-активное вещество (Eggen et al., J Control Release, 2014; Suzuki et al., J Control Release, 2009, 133, 198-205), олигопептиды (Pinault et al., Urology, 1992, 39, 254-261; Chang et al., Ultrason Sonochem, 2013, 20, 171-179; Borden et al., Mol Imaging, 2013, 12, 357-363) и галактозу (Maurer et al., Invest Radiol, 1997, 32, 441-446; Tsai et al., Langmuir, 2014, 30, 5510-5517; Wei et al., PLoS One, 2013, 8, e58133). Ядро может состоять из вещества, выбранного из группы, включающей, но этим не ограничивающейся, воздух (Kuo et al., Chest, 2007, 132, 922-929; Malich et al., Clin Radiol, 2001, 56, 278-283; Wang et al., Eur J Radiol, 2014, 83, 117-122), перфторуглерод (Ke et al., Small, 2014, 10, 1220-1227; Williams et al., Ultrasound Med Biol, 2013, 39, 475-489), декафторбутан (Bzyl et al., Eur Radiol, 2011, 21, 1988-1995), октафторпропан (Suzuki et al., J Control Release, 2009, 133, 198-205; Hoyt et al., J Ultrasound Med, 2010, 29, 577-585), додекафторпентан (Williams et al., Ultrasound Med Biol, 2013, 39, 475-489) и перфторбутан (Bzyl et al., Eur Radiol, 2011, 21, 1988-1995).

Примеры компонентов, усиливающих ультразвуковой контраст, включают, но этим не ограничиваются, аэрозомы, AI-700, альбунекс, Bisphere, дефинити, эхоген, эховист, Filmix, имаген, левовист, MP1950, оптизон, квантизонс, соназоид, соновью, миомап, перфлуброн, SonoGen, соновист, BR14, BY963, MP1550, MP1950, MP2211, MRX-408, SH U616A, и полимерные сульфо-Льюис-x.

В еще одном варианте воплощения конъюгата по настоящему изобретению конъюгирован с компонентом наночастицы. Наночастицы обычно характеризуют их размером, морфологией и поверхностным зарядом, используя методы микроскопии, такие как сканирующая электронная микроскопия (СЭМ) и трансмиссионная электронная микроскопия (ПЭМ) и атомно-силовая микроскопия (АСМ). Эти способы известны специалисту в данной области техники и описаны, например, в работах Liv et al., Ultramicroscopy, 2014, 143, 93-99; Baumgardner et al., ACS Nano, 2014, 8, 5315-5322; Baalousha et al., Environ Sci Process Impacts, 2014, 16, 1338-1347. Компоненты наночастиц могут принадлежать к классу, выбранному из группы, включающей, но этим не ограничиваясь, тонкие пленки и монослои (Pal et al., J Appl Pharmaceut Sci, 2011, 1, 228-234), углеродные нанотрубки, включая, но этим не ограничиваясь, однослойные углеродные нанотрубки и многослойные углеродные нанотрубки (Pal et al., выше), фуллерены (Li et al., J Nanosci Nanotechnol, 2014, 14, 4513-4518; Lin et al., Recent Pat Nanotechnol, 2012, 6, 105-113; Meng et al., Integr Biol (Camb), 2013, 5, 43-47), дендримеры (Baker, Hematology Am Soc Hematol Educ Program, 2009, 708-719; Li et al., Int J Nanomedicine, 2013, 8, 2589-2600; Shi et al., Analyst, 2009, 134, 1373-1379), квантовые точки (Al-Jamal et al., Small, 2008, 4, 1406-1415; Zhang et al., Nanotechnology, 2014, 25, 255102), липосомы (Northfelt et al., J Clin Oncol, 1998, 16, 2445-2451; Sapra et al., Cancer Res, 2002, 62, 7190-7194; Torchilin, Nat Rev Drug Discov, 2005, 4, 145-160), кремниевые наночастицы (Capeletti et al., Langmuir, 2014; Chen et al., Sci Rep, 2014, 4, 5080; Gonzalez et al., Nanotoxicology, 2010, 4, 382-395), магнитные наночастицы (Hua et al., Biomaterials, 2011, 32, 516-527; Hua et al., Biomaterials, 2010, 31, 7355-7363; Tong et al., J Nanosci Nanotechnol, 2011, 11, 3651-3658), липидные наночастицы, включая, но этим не ограничиваясь, наноэмульсии (Aznar et al., Mol Pharm, 2014; Han et al., Int J Mol Med, 2014, 34, 191-196; Mohammadi Ghalaei et al., J Drug Deliv, 2014, 2014, 746325), полимерные наночастицы (Bilensoy et al., Int J Pharm, 2009, 371, 170-176; Park et al., Nanomedicine, 2009, 5, 410-418; Rejinold et al., Int J Biol Macromol, 2011, 49, 161-172), наночастицы на основе альбумина (Fu et al., Recent Pat Anticancer Drug Discov, 2009, 4, 262-272; Lluch et al., Crit Rev Oncol Hematol, 2014, 89, 62-72; Sasaki et al., Cancer Sci, 2014), и нанокристаллы (Harrison et al., Invest New Drugs, 2011, 29, 1465-1474; Li et al., Biomaterials, 2013, 34, 7873-7883; Zhang et al., Autophagy, 2009, 5, 1107-1117).

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению наночастицей является липосома. Примеры липосом включают, но этим не ограничиваются, липосомальный амфотерицин B, липосомальный цитарабин, липосомальный даунорубицин, липосомальный доксорубицин, липосомальная вакцина IRIV, морфин липосомальный, липосомальный вертепорфин, липосомы, содержащие белки SP-B и SP-C, ПЭГ-липосомальный доксорубицин, мицеллярный эстрадиол и липосомальный винкристин.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению наночастицей является кремниевая наночастица.

Примеры кремниевых наночастиц включают, но этим не ограничиваются, ксерогели и мезопористые кремниевые наночастицы (MCM-41; SBA-15).

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению наночастицей является магнитные наночастицы. Примеры магнитных наночастиц включают, но этим не ограничиваются, наночастицы с оболочкой, выбранной из группы, включающий, но этим не ограничиваясь кобальт+сплавы и оксиды, никель+сплавы и оксиды, магний+сплавы и оксиды и железо+сплавы и оксиды, и ядром, выбранным из группы, включающий, но этим не ограничиваясь золото, полимеры, дендримеры и силан.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению наночастицей является липидная наночастица. Примеры липидных наночастиц включают, но этим не ограничиваются, твердые липидные наночастицы, наноструктурированные липидные носители и липидные лекарственные конъюгаты.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению наночастицей является полимерная наночастица. Примеры полимерных наночастиц включают, но этим не ограничиваются, поли-e-капролактон, полиакриламид, полиакрилат, альбумин, ДНК, хитозан, желатин, поли(L-лактид) (PLA), поли-гликолид (PGA) и полиуретан.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению наночастицей является дендример. Примеры дендримеров включают, но этим не ограничиваются, гликоген, амилопектин, протеогликаны, и поли(амидоамид) (PAMAM).

В одном варианте осуществления изобретения конъюгат по настоящему изобретению представлен в виде фармацевтически приемлемой соли.

«Фармацевтически приемлемой солью» конъюгата по настоящему изобретению является, предпочтительно, соль кислоты или соль основания, которая, как правило, рассматривается в данной области техники как подходящая для использования в контакте с тканями человека или животных без чрезмерной токсичности или канцерогенности, и, предпочтительно, без раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения. Такие соли включают соли минеральных и органических кислот и основных остатков, таких как амины, а также щелочные или органические соли с кислотными остатками, такими как карбоновые кислоты. Конъюгаты по изобретению способны образовывать внутренние соли, которые также являются фармацевтически приемлемыми солями.

Подходящие фармацевтически приемлемые соли включают, но этим не ограничиваются, соли кислот, таких как хлористоводородная, фосфорная, бромистоводородная, яблочная, гликолевая, фумаровая, серная, сульфаминовая, сульфаниловая, муравьиная, толуолсульфокислота, метансульфоновая, бензолсульфоновая, этандисульфоновая, 2-гидроксиэтилсульфоновая, азотная, бензойная, 2-ацетоксибензойная, лимонная, винная, молочная, стеариновая, салициловая, глутаминовая, аскорбиновая, памовая, янтарная, фумаровая, малеиновая, пропионовая, гидроксималеиновая, йодистоводородная, фенилуксусная, алкановые, такие как уксусная, HOOC-(CH₂)_n-COOH, где n обозначает любое целое число из от 0 до 4, то есть, 0, 1, 2, 3 или 4 и тому подобное. Аналогично, фармацевтически приемлемые катионы включают, но этим не ограничиваются, катионы натрия, калия, кальция, алюминия, лития и аммония. Обычным специалистам в данной области будут понятны также фармацевтически приемлемые соли соединений, предложенные в настоящем документе. Обычно фармацевтически приемлемая соль кислоты или основания может быть синтезирована из исходного соединения, которое содержит основную или кислотную часть, обычным химическим способом. Вкратце, такие соли могут быть получены путем взаимодействия свободных кислотной или основной форм этих соединений со стехиометрическим количеством соответствующего основания или кислоты в воде или в органическом растворителе, или в смеси обоих. Как правило, предпочтительным является использование неводной среды, такой как простой эфир, этилацетат, этанол, изопропанол или ацетонитрил.

«Фармацевтически приемлемый сольват» конъюгата по настоящему изобретению, предпочтительно, представляет собой сольват конъюгата по настоящему изобретению, образованный путем ассоциации одной или нескольких молекул растворителя с одной или несколькими молекулами конъюгата по настоящему изобретению. Предпочтительно, растворителем является такой, который обычно рассматривается в данной области техники как подходящий для использования в контакте с тканями человека или животных без чрезмерной токсичности или канцерогенности, и, предпочтительно, без раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения. Такой растворитель включает органический растворитель, такой как спирты, простые эфиры, сложные эфиры и амины.

«Гидрат» конъюгата по настоящему изобретению образован путем ассоциации одной или нескольких молекул воды с одной или несколькими молекулами конъюгата по настоящему изобретению. Такой гидрат включает, но этим не ограничивается гемигидрат, моногидрат, дигидрат, тригидрат и тетрагидрат. Независимо от состава гидратов все гидраты обычно считаются фармацевтически приемлемыми.

Конъюгат по настоящему изобретению обладает высокой аффинностью связывания с первой мишенью, на которую нацелена первая адресующая часть TM1 конъюгата по настоящему изобретению. Помимо этого, конъюгат по настоящему изобретению обладает высокой аффинностью связывания со второй мишенью, на которую нацелена вторая адресующая часть TM2. В соответствии с этим, конъюгат по настоящему изобретению подходит для применения при лечении, и/или предупреждении, и/или диагностике любого заболевания, в котором, в самом широком смысле, включает, предпочтительно, экспрессируется первая мишень, на которую нацелена первая адресующая часть, и/или вторая мишень, на которую нацелена вторая адресующая часть.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению, где первая адресующая часть TM1 и/или вторая адресующая часть TM2 является соединением формулы (2), медицинские индикации, которые можно лечить, и/или предотвратить, и/или диагностировать с помощью или посредством конъюгата по настоящему изобретению, являются следующими:

- любая индикация опухоли или онкологии;

- любая NTR-положительная индикация, предпочтительно, любого заболевания, где клетки, участвующие в заболевании, и/или больные клетки экспрессируют NTR. В предпочтительном варианте осуществления изобретения NTR-положительная индикация является NTR1-положительной индикацией, предпочтительно, при заболевании, когда клетки, участвующие в этом заболевании, и/или больные клетки экспрессируют NTR1. В предпочтительном варианте осуществления изобретения NTR-положительная индикация является NTR2-положительной индикацией, предпочтительно, при заболевании, когда клетки, участвующие в этом заболевании, и/или больные клетки экспрессируют NTR2. В следующем предпочтительном варианте осуществления изобретения NTR-положительная индикация является NTR1 и NTR2-положительной индикацией, предпочтительно, при заболевании, когда клетки, участвующие в этом заболевании, и/или больные клетки экспрессируют как NTR1, так и NTR2;

- любая индикация, предпочтительно, любая индикация опухоли, где мишень, на которую нацелена соединение формулы (2), может быть идентифицирована с помощью методов, известных в данной области техники; такие методы включают, но этим не ограничиваются, рецепторную авторадиографию (Reubi et al., Int J рак, 1999, 81, 376-386; Waser et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging, 2014, 41, 1166-1171), иммуногистохимию (Schmidt et al., Anticancer Res, 2008, 28, 1719-1724; Patsenker et al., J Hepatol, 2010, 52, 362-369; Korner et al., Am J Surg Pathol, 2012, 36, 242-252), иммуноцитохимию (Chekhun et al., Exp Oncol, 2013, 35, 174-179; Ghosh et al., J Cytol, 2013, 30, 151-155; Seymour et al., Am J Clin Pathol, 1990, 94, S35-40), RT-PCR (Bernard et al., Clin Chem, 2002, 48, 1178-1185; Chang et al., Clin Cancer Res 1999, 5, 2674-2681; Kang et al., Cancer Genet Cytogenet, 2006, 164, 32-38; Patel et al., Clin Cancer Res 2004, 10, 7511-7519), гибридизацию in situ (Chang et al., Clin Cancer Res 1999, 5, 2674-2681; Kang et al., Cancer Genet Cytogenet, 2006, 164, 32-38; Heinrich et al., Int J Gynecol Cancer, 2004, 14, 1078-1085), проточную цитометрию (Chekhun et al., Exp Oncol, 2013, 35, 174-179; Forster et al., Cytometry A, 2007, 71, 945-950; Goodman et al., Biol Open, 2012, 1, 329-340) и вестерн-блоттинг (Schmidt et al., Anticancer Res, 2008, 28, 1719-1724; Goodman et al., Biol Open, 2012, 1, 329-340; Kusagawa et al., Br J Cancer, 1998, 77, 98-102); образцы для анализа с помощью описанных выше методов могут быть отобраны из биопсий, хирургически удаленных образцов, циркулирующих опухолевых клеток, крови, мочи или фекальных образцов, смывов и мазков, мокроты; предпочтительно, такой образец получают из биопсий, хирургически удаленных образцов, циркулирующих опухолевых клеток; указанные методы подходят также для обнаружения и определения, соответственно, гомогенности и/или гетерогенности экспрессии из мишени, включая экспрессию рецепторов, таких как NTR1 и NTR2, клеткой, тканью, органом, опухолью и/или индикатором; указанные методы подходят также для обнаружения и определения, соответственно, плотность мишени, включая экспрессию рецепторов, таких как NTR1 и NTR2, клеткой, тканью, органом, опухолью и/или индикатором;

- любая индикация, предпочтительно, любая индикация опухоли, в которой более чем, по меньшей мере, 75% или более, по меньшей мере, 50% или более, по меньшей мере, 25% или более, или, по меньшей мере, 10% или более объектов исследования, предпочтительно, больных клеток, ткани, органа и/или индикатора экспрессируют NTR. В одном варианте осуществления изобретения NTR представляет собой NTR1. В еще одном варианте осуществления изобретения NTR1 представляет собой NTR2. В еще одном варианте осуществления изобретения NTR представляет собой NTR1 и NTR2, то есть, у пациентов, предпочтительно, больная клетка, ткань, орган и/или индикатор экспрессируют как NTR1, так и NTR2;

- любая индикация, предпочтительно, любая индикация опухоли, в которой только небольшая часть опухоли, предпочтительно, такая индикация опухоли, где только небольшая часть объектов исследования, подвергающихся индикации опухоли, экспрессирует NTR1. Предпочтительно, небольшая часть опухолей составляет примерно 10% или менее опухолей. Предпочтительно также небольшая часть объектов исследования составляет примерно 10% или менее объектов исследования;

- любая индикация, предпочтительно, любая индикация опухоли которая однородно экспрессирует NTR, предпочтительно, NTR1 и/или NTR2, более предпочтительно, NTR1, предпочтительно, однородно экспрессируется клеткой в таком объекте индикации, предпочтительно, в такой индикации участвует клетка и, более предпочтительно, клеткой является больная клетка;

- любая индикация, предпочтительно, любая индикация опухоли где NTR, предпочтительно, NTR1 и/или NTR2, более предпочтительно, NTR1, неоднородно экспрессируется, предпочтительно, неоднородно экспрессируется клеткой в таком объекте индикации, предпочтительно, в такой индикации участвует клетка и, более предпочтительно, клеткой является больная клетка;

- любая индикация, предпочтительно, любая индикация онкологии, более предпочтительно, любая индикация, имеющая отношение к онкологии, где NTR экспрессируется с низкой плотностью. В одном варианте осуществления изобретения объектом индикации является опухоль и/или раковое заболевание. В одном варианте осуществления изобретения в таком объекте индикации мишень экспрессируется клеткой неоднородно, предпочтительно, в такой индикации участвует клетка и, более предпочтительно, клетка является больной клеткой. Как предпочтительно используется в настоящем документе, низкая плотность означает, что экспрессируется менее 5000 копий NTR на клетку. Подходящие способы идентификации такие индикации перечислены выше. Предпочтительными способами являются рецептор авторадиография (Reubi et al., выше; Waser et al., выше) и исследования по связыванию клеток (Kitabgi et al., выше);

- любая индикация, предпочтительно, любая индикация онкологии, более предпочтительно, в любом объекте индикации, имеющем отношение к онкологии, где NTR экспрессируется в первичную опухоль, в метастазы, предпочтительно, метастазы первичной опухоли, или как в первичную опухоль, так и в метастазы, предпочтительно, метастазы первичной опухоли. В одном варианте осуществления изобретения NTR представляет собой NTR1, NTR2 или как NTR1, так и NTR2;

- любая индикация, предпочтительно, любая индикация онкологии, более предпочтительно, в любом объекте индикации, имеющем отношение к онкологии, где NTR не экспрессируется. В одном варианте осуществления изобретения NTR представляет собой NTR1. В другом варианте осуществления изобретения NTR представляет собой NTR2. В еще одном варианте осуществления изобретения NTR представляет собой NTR1 и NTR2, то есть объект индикации не экспрессирует ни NTR1, ни NTR2. В одном варианте осуществления изобретения NTR не экспрессируется клеткой, участвующей в таком объекте индикации, и, более предпочтительно, не экспрессируется больной клеткой, участвующей в таком объекте индикации;

- любая индикация, предпочтительно, любая индикация онкологии, более предпочтительно, в любом объекте индикации, имеющем отношение к онкологии, где, по меньшей мере, 20000 или более копий NTR или, по меньшей мере, 10000 или более копий NTR или, по меньшей мере, 5000 или более копий NTR или, по меньшей мере, 1000 или более копий NTR экспрессируются на клетку. В одном варианте осуществления изобретения клетка участвует в таком объекте индикации и, более предпочтительно, клетка является больной клеткой. В одном варианте осуществления изобретения NTR представляет собой NTR1, NTR2 или как NTR1, так и NTR2. Соответственно, приведенные выше числа копий могут относиться к числу копий NTR1, или числу копий NTR2, или к общему числу копий NTR1 и NTR2, взятых вместе;

- любая индикация, предпочтительно, любая индикация онкологии, более предпочтительно, в любом объекте индикации, имеющем отношение к онкологии, где гематоэнцефалический барьер является поврежденным;

- любая индикация группы A, как это определено в настоящем документе; предпочтительно, индикация группы A, как это определено в настоящем документе, является индикацией, которую проводят в органе и/или ткани, где орган и/или ткань выбрана из группы C, как это определено в настоящем документе; и

- любая индикация группы H, группы I, группы J, группы K и/или группы L, где каждая определена в настоящем документе.

Соединение по изобретению обладает высокой связывающей аффинностью к рецепторам нейротензина и, в частности, к NTR1. Благодаря этой высокой связывающей аффинности, соединение по изобретению является эффективным, может использоваться и/или подходит в качестве адресующего агента и, если конъюгировано с другим фрагментом, в качестве адресующей части. Как предпочтительно используется в настоящем документе, адресующий агент представляет собой агент, который взаимодействует с молекулой-мишенью, которая в данном случае являются указанными рецепторами нейротензина. С точки зрения клеток и тканей, таким образом, на которые нацелено соединение по изобретению, объектом нацеливания являются любые клетка и ткань, соответственно, экспрессирующие такие рецепторы нейротензина и, в частности, NTR1. Как известно из предшествующего уровня техники, за исключением центральной нервной системы и кишечника, NTR1 экспрессируется на высоком уровне в организме млекопитающего и в организме человека, в частности, некоторыми неопластическими плазматическими клетками в некоторых объектах индикации опухоли, тогда как экспрессия NTR1 в других тканях организма млекопитающего и человека является низкой. Эти NTR1-экспрессирующие объекты индикации опухоли включают, но этим не ограничиваются, протоковую аденокарциному поджелудочной железы (Reubi et al., Gut, 1998, 42, 546-550; Ehlers et al., Ann. Surg., 2000, 231, 838-848), мелкоклеточный рак легких (Reubi et al., Int. J. Cancer, 1999, 82, 213-218), рак простаты (Taylor et al., Prostate, 2012, 72, 523-532), колоректальный рак (Chao et al., J. Surg. Res., 2005, 129, 313-321; Gui et al., Peptides, 2008, 29, 1609-1615), рак молочной железы (Souaze et al., Cancer Res., 2006, 66, 6243-6249), менингиому (Reubi et al., Int. J. Cancer, 1999, 82, 213-218), саркому Юинга (Reubi et al., Int. J. Cancer, 1999, 82, 213-218), мезотелиому плевры (Alifano et al., Biochimie, 2010, 92, 164-170), рак головы и шеи (Shimizu et al., Int. J. Cancer, 2008, 123, 1816-1823), немелкоклеточный рак легких (Alifano et al., Clin. Cancer Res., 2010, 16, 4401-4410; Moody et al., Panminerva Med., 2006, 48, 19-26; Ocejo-Garcia et al., Lung Cancer, 2001, 33, 1-9), стромальные опухоли желудочно-кишечного тракта (Gromova et al., PLoS One, 2011, 6, e14710), лейомиому матки (Rodriguez et al., Biol. Reprod., 2010, 83, 641-647; Rodriguez et al., Int. J. Gynecol. Pathol., 2011, 30, 354-363) и Т-клеточную лимфому кожи (Ramez et al., J. Invest. Dermatol., 2001, 117, 687-693). Соответственно, соединение по изобретению является особенно подходящим и может быть использовано в диагностике и лечении, соответственно, указанных заболеваний. Таким образом, вышеуказанные объекты индикации являются такими объектами индикации, которые могут быть подвергнуты лечению соединением по настоящему изобретению. Специалистам в данной области техники также должно быть понятно, что метастазы и, в частности, метастазы вышеупомянутого объекта индикации могут быть подвергнуты лечению и диагностированы с помощью соединения по настоящему изобретению и способов диагностики и способов лечения, в которых используются соединения по настоящему изобретению.

Следующим объектом индикации, в связи с которым может быть использовано соединение по изобретению, либо для терапевтических целей, либо для диагностических целей, являются гемобластозы, что представляется возможным с точки зрения экспрессии NTR1 в клетках крови и клетках T-клеточной лимфомы, в частности, как сообщалось Ramez et al. В одном варианте осуществления изобретения заболеванием является T-клеточная лимфома.

В одном из вариантов воплощения конъюгата по настоящему изобретению, когда первая адресующая часть TM1 представляет собой соединение формулы (2), и вторая адресующая часть TM2 нацелена на мишень, которая отличается от мишени, на которую нацелена первая адресующая часть, медицинскими объектами индикации, которые могут быть подвергнуты лечению, и/или предотвращены, и/или диагностированы посредством конъюгата, являются следующие:

- любая NTR-положительная индикация, предпочтительно, любое заболевание, где клетки, участвующие в заболевании, и/или больные клетки экспрессируют мишень, как описано в настоящем документе, предпочтительно, мишень отличается от NTR, предпочтительно, отличается от NTR1 и/или NTR1, более предпочтительно, отличается от NTR1,

- любая индикация, предпочтительно, любая индикация опухоли, где мишень является мишенью, описанной в настоящем документе, но отличается от NTR, предпочтительно, отличается от NTR1 и/или NTR1, более предпочтительно, отличается от NTR1, и на которую нацелена первая или вторая адресующая часть, и которая может быть идентифицирована с помощью методов, известных в данной области техники; такие методы включают, но этим не ограничиваются, рецепторную авторадиографию (Reubi et al., Int J рак, 1999, 81, 376-386; Waser et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging, 2014, 41, 1166-1171), иммуногистохимию (Schmidt et al., Anticancer Res, 2008, 28, 1719-1724; Patsenker et al., J Hepatol, 2010, 52, 362-369; Korner et al., Am J Surg Pathol, 2012, 36, 242-252), иммуноцитохимию (Chekhun et al., Exp Oncol, 2013, 35, 174-179; Ghosh et al., J Cytol, 2013, 30, 151-155; Seymour et al., Am J Clin Pathol, 1990, 94, S35-40), RT-PCR (Bernard et al., Clin Chem, 2002, 48, 1178-1185; Chang et al., Clin Cancer Res 1999, 5, 2674-2681; Kang et al., Cancer Genet Cytogenet, 2006, 164, 32-38; Patel et al., Clin Cancer Res 2004, 10, 7511-7519), гибридизацию in situ (Chang et al., Clin Cancer Res 1999, 5, 2674-2681; Kang et al., Cancer Genet Cytogenet, 2006, 164, 32-38; Heinrich et al., Int J Gynecol Cancer, 2004, 14, 1078-1085), проточную цитометрию (Chekhun et al., Exp Oncol, 2013, 35, 174-179; Forster et al., Cytometry A, 2007, 71, 945-950; Goodman et al., Biol Open, 2012, 1, 329-340) и вестерн-блоттинг (Schmidt et al., Anticancer Res, 2008, 28, 1719-1724; Goodman et al., Biol Open, 2012, 1, 329-340; Kusagawa et al., Br J Cancer, 1998, 77, 98-102); образцы для анализа с помощью описанных выше методов могут быть получены при проведении биопсии, из хирургически удаленных образцов, циркулирующих опухолевых клеток, крови, мочи или образцов фекалий, из посевов и мазков, мокроты; предпочтительно, такой образец получают из при проведении биопсии, из хирургически удаленных образцов, циркулирующих опухолевых клеток. Указанные методы подходят также для обнаружения и определения, соответственно, гомогенности и/или гетерогенности экспрессии мишени, включая экспрессию рецепторов, таких как NTR1 и NTR2, в клетке, ткани, органе, опухоли и/или индикаторе; указанные методы подходят также для обнаружения и определения, соответственно, плотности мишени, включая экспрессию рецепторов, таких как NTR1 и NTR2, клеткой, тканью, органом, опухолью и/или индикатором;

- любая индикация, предпочтительно, любая индикация опухоли, в которой более чем, по меньшей мере, 75% или более, по меньшей мере, 50% или более, по меньшей мере, 25% или более, или, по меньшей мере, 10% или более объектов исследования, предпочтительно, больных клеток, ткани, органа и/или индикатора экспрессируют предпочтительно, мишень, как описано в настоящем документе, но которая отличается от NTR, предпочтительно, отличается от NTR1 и/или NTR1, более предпочтительно, отличается от NTR1. Предпочтительно, больная клетка, ткань, орган и/или индикатор экспрессируют как NTR1, так и NTR2;

- любая индикация, предпочтительно, любая индикация опухоли, в которой только небольшая часть опухолей, предпочтительно, при индикации опухоли, когда только небольшая часть объектов исследования, подвергающихся индикации опухоли, экспрессируют мишень, описанную в настоящем документе, где мишень отличается от NTR, предпочтительно, отличается от NTR1 и/или NTR1, более предпочтительно, отличается от NTR1. Предпочтительно, небольшая часть опухолей составляет примерно 10% или менее опухолей. Предпочтительно также, что небольшая часть объектов исследования составляет примерно 10% или менее объектов исследования;

- любая индикация, предпочтительно, любая индикация опухоли, где мишень, описанная в настоящем документе, но отличающаяся от NTR, предпочтительно, отличающаяся от NTR1 и/или NTR1, более предпочтительно, отличающаяся от NTR1, однородно экспрессирована, предпочтительно, однородно экспрессирована клеткой в таком объекте индикации, предпочтительно, клетка участвует в таком объекте индикации и, более предпочтительно, клеткой является больная клетка;

- любая индикация, предпочтительно, любая индикация опухоли где мишень, описанная в настоящем документе, но отличающаяся от NTR, предпочтительно, отличающаяся от NTR1 и/или NTR1, более предпочтительно, отличающаяся от NTR1, неоднородно экспрессирована, предпочтительно, неоднородно экспрессирована клеткой в таком объекте индикации, предпочтительно, клетка участвует в таком объекте индикации и, более предпочтительно, клеткой является больная клетка;

- любая индикация, предпочтительно, любая индикация онкологии, более предпочтительно, в любом объекте индикации, имеющем отношение к онкологии, где мишень, описанная в настоящем документе, но отличающаяся от NTR, предпочтительно, отличающаяся от NTR1 и/или NTR1, более предпочтительно, отличающаяся от NTR1 экспрессирована в первичную опухоль, в метастазы, предпочтительно, метастазы первичной опухоли, или как в первичную опухоль, так и в метастазы, предпочтительно, метастазы первичной опухоли;

- любая индикация, предпочтительно, любая индикация онкологии, более предпочтительно, в любом объекте индикации, имеющем отношение к онкологии, где NTR не экспрессируется. В одном варианте осуществления изобретения NTR представляет собой NTR1. В другом варианте осуществления изобретения NTR представляет собой NTR2. В еще одном варианте осуществления изобретения NTR представляет собой NTR1 и NTR2, то есть объект индикации не экспрессирует ни NTR1, ни NTR2. В одном варианте осуществления изобретения NTR не экспрессируется клеткой, участвующей в таком объекте индикации и, более предпочтительно, не экспрессируется больной клеткой, участвующей в таком объекте индикации;

- любая индикация, предпочтительно, любая индикация онкологии, более предпочтительно, в любом объекте индикации, имеющем отношение к онкологии, где, по меньшей мере, 20000 или более копий мишени, описанной в настоящем документе, но отличающейся от NTR, предпочтительно, отличающейся от NTR1 и/или NTR1, более предпочтительно, отличающейся от NTR1, по меньшей мере, 10000 или более копий такой мишени или, по меньшей мере, 5000 или более копий такой мишени или, по меньшей мере, 1000 или более копий такой мишени экспрессируются на клетку. В одном варианте осуществления изобретения клетка участвует в таком объекте индикации и, более предпочтительно, клетка является больной клеткой;

- любая индикация, предпочтительно, любая индикация онкологии, более предпочтительно, в любом объекте индикации, имеющем отношение к онкологии, где гематоэнцефалический барьер является поврежденным;

- любая индикация группы A, группы D, группы E, группы F, группы G, группы H, группы I, группы J, группы K и/или группы L, каждая из которых определены в настоящем документе; и

- любая индикация группы A, определенной в настоящем документе, имеющей отношение или встречающейся в органах и/или тканях группы C, определенной в настоящем документе.

В настоящее изобретение включено, что конъюгат по настоящему изобретению может использоваться в способе лечения заболевания, как раскрыто в настоящем документе. Такой способ, предпочтительно, включает стадию введения пациенту, при необходимости этого, терапевтически эффективного количества конъюгата по настоящему изобретению. Такой способ включает, но этим не ограничивается, радикальное лечение злокачественного новообразования или лечение вспомогательными лекарственными средствами. Он используется в качестве паллиативного лечения, где излечение невозможно, и целью является локальный контроль заболевания или облегчение симптомов, или в качестве терапевтического лечения, где терапия оказывает благоприятное изменение показателя выживаемости, и это может быть целительным.

Способ лечения заболевания, описанный в настоящем документе, включает лечение злокачественных опухолей и рака, и может быть использован либо в качестве первичной терапии, либо в качестве второй, третьей, четвертой или последней линии терапии. В объем настоящего изобретения входит также комбинированная радиотерапия в соответствии с настоящим изобретением с другими видами лечения, включая хирургию, химиотерапию, лучевую терапия, целевую терапию, антиангиогенную терапию и гормональную терапию, которые хорошо известны в данной области техники. Специалисту в данной области техники хорошо известно, что точным предназначением лечения, включая радикальное, адъювантное, неоадъювантное, терапевтическое или паллиативное лечение, которое будет зависеть от типа опухоли, ее локации и стадии, а также общего состояния здоровья пациента.

Способ лечения заболевания, описанного в настоящем документе, также может быть нацелен на дренирующие лимфатические узлы, если они клинически связаны с опухолью.

Предпочтительно, в радионуклидной терапии используется, или она основана на различных видах излучения, испускаемых радионуклидом. Такое излучение может представлять собой, например, излучение фотонов, излучение электронов, включая, но этим не ограничиваясь, β^--частицы и оже-электроны, излучение протонов, излучение нейтронов, излучение позитронов, излучение α-частиц или ионно-лучевое. В зависимости от вида частиц или испускаемого излучения указанным радионуклидом, радионуклидная терапия может быть подразделена, например, на фотонную радионуклидную терапию, электронную радионуклидную терапию, протонную радионуклидную терапию, нейтронную радионуклидную терапию, позитронную радионуклидную терапию, радионуклидную терапию α-частиц или ионно-лучевую радионуклидную терапию. Все эти виды радионуклидной терапии охватываются настоящим изобретением, и все эти виды радионуклидной терапии могут быть реализованы с помощью соединения по настоящему изобретению, предпочтительно, при условии, что для этого вида излучения предоставляется радионуклид, связанный с соединением по настоящему изобретению, более предпочтительно, в качестве эффектора.

Радионуклидная терапии предпочтительно работает, повреждая ДНК клеток. Поражение вызывается фотоном, электроном, протоном, нейтроном, позитроном, α-частицей или ионным пучком, напрямую или ненапрямую ионизируя атомы, которые составляют цепь ДНК. Непрямая ионизация происходит в результате ионизации воды, образуя свободные радикалы, в частности, гидроксильные радикалы, которые затем повреждают ДНК.

При наиболее распространенных видах радионуклидной терапии большая часть излучения осуществляется посредством свободных радикалов. Поскольку клетки обладают механизмами для устранения повреждений ДНК, разрыв обеих нитей ДНК оказывается наиболее важным методом в модификации характеристик клеток. Поскольку раковые клетки обычно являются недифференцированными и подобны стволовым клеткам, они больше воспроизводятся и имеют пониженную способность восстанавливать сублетальное повреждение по сравнению с большинством здоровых дифференцированных клеток. Повреждение ДНК наследуется через клеточное деление, накапливая повреждения раковых клеток, в результате чего они умирают или воспроизводятся более медленно.

Кислород является мощным радиосенсибилизатором, повышая эффективность данной дозы радиации путем формирования ДНК-повреждения свободными радикалами. Таким образом, может быть применено использование кислородных баллонов высокого давления, кровезаменителей, которые переносят кислород, радиосенсибилизаторов гипоксических клеток, таких как мизонидазол и метронидазол, и гипоксических цитотоксинов, таких как тирапазамин.

Другие факторы, которые учитываются при выборе радиоактивной дозы, включают сведения, проходил ли пациент курс химиотерапии, применялась ли лучевая терапия до или после операции, и степень успеха операции.

Суммарная радиоактивная доза может быть фракционирована, т.е. распределена во времени на один или несколько сеансов по нескольким важным причинам. Фракционирование предоставляет нормальным клеткам время для восстановления, в то время как опухолевые клетки, как правило, менее эффективны к восстановлению между сеансами. Фракционирование позволяет также опухолевым клеткам, которые находились в относительно радиоактивно резистентной фазе клеточного цикла в процессе одного сеанса, вернуться в чувствительную фазу цикла перед проведением следующего сеанса. Подобным образом, опухолевые клетки, которые были хронически или остро гипоксическими и, следовательно, более радиорезистентными, могут вновь обогатиться кислородом между сеансами, улучшая гибель опухолевых клеток.

Общеизвестно, что различные виды злокачественного новообразования по-разному реагируют на лучевую терапию. Реакция злокачественного новообразования на излучение описывается его радиочувствительностью. Высоко радиочувствительные раковые клетки быстро погибают от малых доз радиации. К ним относятся лейкозы, большинство лимфом и герминогенные опухоли.

В реальной клинической практике важно различать радиочувствительность конкретной опухоли, которая в некоторой степени является лабораторным показателем, от «излечимости» рака с помощью внутренне поставляемой радиоактивной дозы. Например, лейкозы, как правило, не излечимы лучевой терапией, потому что они распространяются по всему телу. Лимфома может быть радикально излечима, если она локализована в одной области тела. Точно так же, многие из общих умеренно радиочувствительных опухолей можно лечить лечебными дозами радиации, если они находятся на ранней стадии. Это относится, например, к немеланомному раку кожи, раку головы и шеи, немелкоклеточному раку легких, цервикальному раку, раку анального канала, раку простаты.

Реакция опухоли на лучевую терапию также связана с ее размером. По сложным причинам очень большие опухоли менее хорошо реагируют на излучение, чем меньшие опухоли или микроскопическое заболевание. Для преодоления этого эффекта используются различные стратегии. Наиболее распространенным методом является хирургическое удаление перед лучевой терапией. Чаще всего это наблюдается при лечении рака молочной железы с широким местным иссечением или мастэктомией с последующей адъювантной лучевой терапией. Другой метод заключается в уменьшении опухоли с помощью неоадъювантной химиотерапии перед радикальной радионуклидной терапией. Третий метод заключается в повышении радиочувствительности рака, прописывая определенные лекарства во время курса лучевой терапии. Примеры радиочувствительных лекарственных средств включают, но ими не ограничиваются, цисплатин, ниморазол и цетуксимаб.

Интраоперационная лучевая терапия представляет собой особый тип лучевой терапии, которая осуществляется непосредственно после хирургического удаления злокачественного новообразования. Этот метод использовался при раке молочной железы (TARGeted Introperative radioTherapy), опухолей мозга и рака прямой кишки.

Радионуклидная терапия сама по себе безболезненна. Многие паллиативные лечения низкими дозами вызывают минимальные или отсутствие побочных эффектов. Лечение более высокими дозами может вызвать в процессе лечения различные побочные эффекты (острые побочные эффектов) в течение нескольких месяцев или лет после лечения (долгосрочные побочные эффекты) или после повторного лечения (кумулятивные побочные эффекты). Характер, тяжесть и продолжительность побочных эффектов зависит от органов, которые получают излучение, самого лечения (тип радионуклида, доза, фракционирование, сопутствующая химиотерапия) и от пациента.

В настоящее изобретение включено, что способ лечения заболевания по настоящему изобретению может реализоваться путем каждой и любой из вышеперечисленных стратегий, которые сами по себе известны в данной области, и которые являются, таким образом, дополнительными вариантами осуществления настоящего изобретения.

В объем настоящего изобретения включено также, что конъюгат по настоящему изобретению может быть использован в способе диагностики заболевания, как раскрыто в настоящем документе. Такой способ, предпочтительно, включает стадию введения пациенту, при необходимости этого, диагностически эффективного количества соединения по изобретению.

В соответствии с настоящим изобретением, метод визуализации выбран из группы, включающей сцинтиграфию, однофотонную эмиссионную компьютерную томографию (ОФЭКТ) и позитронно-эмиссионную томографию (ПЭТ).

Сцинтиграфия представляет собой вид диагностического исследования или способ, используемый в ядерной медицине, в котором радиофармпрепараты интернализируются клетками, тканями и/или органами, предпочтительно интернализируются in vivo, и излучение, испускаемое этими интернализированными радиофармпрепаратами, улавливается внешними детекторами (гамма-камеры) с получением и отображением двумерных изображений. В отличие от этого, при ОФЭКТ и ПЭТ получаются и отображаются трехмерные изображения. Виду этого, ОФЭКТ и ПЭТ классифицируются как отдельные от сцинтиграфии методы, хотя в них также используются гамма-камеры для обнаружения внутреннего излучения. Сцинтиграфия отличается от рентгенодиагностики, где внешнее излучение проходит через тело, чтобы получить изображение.

Сканограммы однофотонной эмиссионной компьютерной томографии (ОФЭКТ) являются разновидностью метода ядерной визуализации с использованием гамма-лучей. Они очень похожи на обычную медицинскую радионуклидую топограмму с использованием гамма-камеры. Перед получением сканограммы ОФЭКТ пациенту вводят меченное радиоактивным изотопом химическое вещество, испускающее гамма-лучи, которые могут быть обнаружены с помощью сканера. Компьютер собирает информацию из гамма-камеры и транслирует ее в виде двумерных изображений срезов. Эти изображения срезов могут быть собраны вместе, чтобы сформировать трехмерное изображение органа или ткани. ОФЭКТ включает в себя обнаружение гамма-лучей, излучаемых отдельно и последовательно радионуклидом, предоставленным меченным радиоактивным изотопом химическим веществом. Для получения ОФЭКТ изображения гамма-камера поворачивается вокруг пациента. Изображения получают в определенные моменты времени во время вращения, как правило, на каждые 3-6 градусов. В большинстве случаев используется вращение на 360 градусов для получения оптимального воссоздания картины. Время, необходимое для получения каждого изображения также может меняться, но обычным являются 15-20 секунд. Это дает общее время сканирования 15-20 минут. Гаммы-камеры с несколькими детекторами являются более быстрыми. Поскольку получение ОФЭКТ очень похоже на планарное сцинтиграфическое исследование, могут быть использованы те же радиофармпрепараты.

Позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ) представляет собой неинвазивный диагностический метод визуализации для определения биохимического статуса или метаболической активности клеток в организме человека. ПЭТ является уникальным методом, поскольку она позволяет получить изображения для исследования главных биохимических процессов или функций организма. Традиционные методы диагностики, такие как рентгеновские лучи, КТ или МРТ, дают изображения анатомии или структур органов тела. Исходным условием для этих методов является то, что можно увидеть любые изменения в структуре или анатомии, связанные с заболеванием. Биохимические процессы также меняются при заболевании, и могут произойти до каких-либо больших изменений в анатомии. ПЭТ представляет собой метод визуализации, который позволяет визуализировать некоторые из этих ранних биохимических изменений. ПЭТ-сканеры полагаются на излучение, испускаемое телом пациента для создания изображения. Каждый пациент получает незначительное количество радиоактивного фармацевтического препарата, который либо весьма близок к природному веществу, используемому организмом, либо специфически связывается с рецептором или молекулярной структурой. По мере того, как радиоизотоп подвергается позитронно-эмиссионному распаду (также известному как положительный бета-распад), он испускает позитрон, античастицу - аналог электрона. После прохождения расстояния в несколько миллиметров позитрон встречает электрон и аннигилирует, производя пару аннигиляционных (гамма) фотонов, движущихся в противоположных направлениях. Они обнаруживаются, когда достигают сцинтилляционного материала в сканирующем устройстве, создавая вспышку света, которая фиксируется фотоэлектронными умножителями или кремниевыми лавинными фотодиодами. Метод зависит от одновременного или совпадающего обнаружения пары фотонов. Фотоны, которые не появляются в виде пар, то есть в течение нескольких наносекунд, игнорируются. Все совпадения направляются в блок обработки изображений, в котором конечные данные изображения получают с использованием методик реконструкции изображения.

ОФЭКТ/КТ и ПЭТ/КТ представляют собой сочетание ОФЭКТ и ПЭТ с компьютерной томографией (КТ). Основными преимуществами сочетания этих методов визуализации являются повышение надежности и точности считывающего устройства. При использовании традиционных методов ПЭТ и ОФЭКТ ограниченное число фотонов, испускаемых из зоны анормальности производит очень низкий уровень фона, что делает трудным анатомически локализовать зону. Добавление КТ помогает определить местоположение аномальной зоны с анатомической точки зрения и классифицировать вероятность того, что здесь имеется заболевание.

В настоящее изобретение включено, что способ диагностики заболевания настоящего изобретения может быть реализован путем каждой и любой из вышеперечисленных стратегий, которые сами по себе известны в данной области техники, и которые, таким образом, представляют собой еще один вариант осуществления настоящего изобретения.

Конъюгаты по настоящему изобретению могут быть использованы для распределения пациентов, т.е. для выделения определенных групп в контингенте больных, что обеспечило бы более детальную информацию о том, как пациент будет реагировать на конкретный препарат. Распределение может быть важным компонентом для трансформации клинических испытаний от отрицательного или нейтрального результата до результата с положительным итогом путем определения группы из контингента, которая, вероятно, будет реагировать на новую терапию.

Распределение включает в себя идентификацию группы пациентов с общими «биологическими» характеристиками для выбора оптимальной тактики лечения пациентов и достижения наилучшего результата с точки зрения оценки рисков, предотвращения рисков и достижения оптимального результата лечения.

Конъюгат по настоящему изобретению может быть использован для того, чтобы оценить или обнаружить конкретное заболевание как можно раньше (что является диагностическим применением), риск развития заболевания (что является применением для анализа восприимчивость/риск), эволюцию заболевания, включая индолентный или агрессивный прогноз (что является прогностическим использованием), и может быть использован для прогнозирования ответной реакции и токсичности к данному виду лечения (что является прогностическим использованием).

Также в объем настоящего изобретения входит то, что конъюгат по настоящему изобретению может быть использован в способе тераностики. Принципом тераностики является объединение терапевтического агента с соответствующим диагностическим исследованием, что может улучшить клиническое использование терапевтического лекарственного препарата. Принцип тераностики становится все более привлекательным и повсеместно считается ключом к повышению эффективности лекарственной терапии, помогая врачам выявить пациентов, у которых можно было бы достичь успеха от данной терапии и, следовательно, избежать ненужного лечения.

Принципом тераностики является объединение терапевтического агента с соответствующим диагностическим исследованием, что позволяет врачам выявить тех пациентов, у которых мог бы быть достигнут успех от данной терапии. В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, конъюгат по настоящему изобретению используется для диагностики пациента, т.е. для идентификации и локализации первичного опухолевого образования, а также вероятных местных и отдаленных метастазов. Кроме того, может быть определен объем опухоли, в особенности с использованием трехмерных методов диагностики, таких как ОФЭКТ или ПЭТ. Для конкретной терапии выбираются только те пациенты, у которых имеются нейротензиновый рецептор-позитивные опухолевые образования, и, следовательно, у которых мог бы быть достигнут успех от данной терапии, и, следовательно, возможно избежать ненужного лечения. Предпочтительно, такая терапия является терапией, нацеленной на нейротензиновый рецептор с использованием соединения по настоящему изобретению. В одном конкретном варианте могут быть применены химически идентичные диагностики, нацеленные на опухоль, предпочтительно диагностические визуализации для сцинтиграфии, ПЭТ или ОФЭКТ и лучевой терапии. Такие конъюгаты отличаются только радионуклидом и, следовательно, как правило, имеют очень похожий, если не идентичный, фармакокинетический профиль. Это может быть реализовано с помощью хелатора и диагностического или лечебного радиометалла. Альтернативно, это может быть реализовано с использованием предшественника для введения радиоактивной метки и с использованием введения радиоактивной метки либо с диагностическим, либо с терапевтическим радионуклидом. В одном варианте осуществления изобретения диагностическая визуализации может быть использована, предпочтительно, с помощью количественной оценки излучения диагностического радионуклида и последующей дозиметрии, как это известно специалистам в этой области техники, и прогнозирования концентрации лекарственного средства в опухолевой ткани по сравнению с уязвимыми от побочных эффектов органами. Таким образом, достигается точно индивидуализированное дозирование лекарственной терапии для пациента.

В одном варианте осуществления и предпочтительно, как используется в настоящем документе, терагностический способ реализуется только с одним тераностически активным конъюгатом, таким как конъюгат по настоящему изобретению, меченным радионуклидом, испускающим диагностически обнаруживаемое излучение (например, позитроны или гамма лучи), а также терапевтически эффективное излучение (например, электроны).

Изобретение также относится к интраоперационному способу идентификации/обнаружения больных тканей, экспрессирующих нейротензиновые рецепторы у пациента. В таком способе используется конъюгат по настоящему изобретению, где такой конъюгат по настоящему изобретению, предпочтительно, содержит в качестве эффектора диагностически активное вещество.

В соответствии со следующим вариантом осуществления изобретения настоящего изобретения, конъюгат по настоящему изобретению, в частности, если он связан в комплексе с радионуклидом, может быть использован в качестве вспомогательного средства или вспомогательного лекарственного средства при любом другом лечении опухоли, включая хирургию в качестве основного способа лечения наиболее изолированных злокачественных солидных опухолей, лучевую терапию, связанную с использованием ионизирующего излучения в попытке либо вылечить, либо улучшить симптомы рака с использованием либо герметичных внутренних источников в виде брахитерапии, либо внешних источников, химиотерапию, такую как алкилирующими агентами, антиметаболитами, антрациклинами, растительными алкалоидами, ингибиторами топоизомераз и другими противоопухолевыми агентами, гормональные методы лечения, которые модулируют поведение опухолевых клеток без прямой атаки на указанные клетки, мишеневые агенты, которые нацелены непосредственно на молекулярную анормальность при некоторых типах рака, включая моноклональные антитела и ингибиторы тирозинкиназ, ингибиторы ангиогенеза, иммунотерапию, вакцинацию против рака, паллиативную помощь, включая меры по сокращению физических, эмоциональных, духовных и психо-социальных проблем, чтобы улучшить качество жизни пациента, и альтернативные методы лечения, в том числе различные группы систем здравоохранения, практики и продукты, которые не являются частью традиционной медицины.

В одном варианте осуществления способов настоящего изобретения субъект является пациентом. В одном варианте осуществления пациент является субъектом, которому был поставлен диагноз болеющего, или который подозревается в заболевании или у которого имеется риск заболевания или развития заболевания, при котором заболевание представляет собой заболевание, описанное в настоящем документе, и, предпочтительно, представляет собой заболевание с участием рецептора нейротензина и, более предпочтительно, рецептора нейротензина 1.

Дозы, применяемые при практическом осуществлении способов лечения и диагностики, соответственно, при которых используется радионуклид, и, более конкретно, присоединенный или являющийся частью соединения по настоящему изобретению, будут изменяться в зависимости, например, от конкретного состояния, подлежащего лечению, например, известной радиочувствительности вида опухоли, объема опухоли и желаемой терапии. Обычно доза рассчитывается на основании распределения радиоактивности для каждого органа и наблюдаемой цели поглощения. Для диагностической визуализации γ-излучающий комплекс можно вводить один раз или несколько раз. Для животных указанный диапазон доз может составлять от 0,1 мкг/кг до 5 мг/кг конъюгата по настоящему изобретению, связанного в комплексе, например, с от 1 до 200 МБк ¹¹¹In или ⁸⁹Zr. β-излучающий комплекс соединения по изобретению можно вводить несколькими временными точками, например, в течение периода от 1 до 3 недель или дольше. Для животных указанный диапазон доз может составлять от 0,1 мкг/кг до 5 мг/кг конъюгата по настоящему изобретению, связанного в комплексе, например, с от 1 до 200 МБк ⁹⁰Y или ¹⁷⁷Lu. Для крупных животных, например, людей, указанный диапазон доз составляет от 0,1 до 100 мкг/кг соединения по изобретению, связанного в комплексе, например, с от 10 до 400 МБк ¹¹¹In или ⁸⁹Zr. Для крупных животных, например, людей, указанный диапазон доз составляет от 0,1 до 100 мкг/кг соединения по изобретению, связанного в комплексе, например, с от 10 до 5000 МБк ⁹⁰Y или ¹⁷⁷Lu.

В следующем аспекте настоящее изобретение относится к композиции и, в частности, фармацевтической композиции, содержащей конъюгат по настоящему изобретению.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению содержит, по меньшей мере, один конъюгат по настоящему изобретению и, необязательно, одно или несколько веществ носителей, наполнителей и/или вспомогательных лекарственных средств. Фармацевтическая композиция может, кроме того, содержать, например, одно или несколько из следующих: вода, буферы такие как, например, нейтральный буферный солевой раствор или фосфатный буферный солевой раствор, этанол, минеральное масло, растительное масло, диметилсульфоксид, углеводы, такие как, например, глюкоза, манноза, сахароза или декстраны, маннитол, белки, адъюванты, полипептиды или аминокислоты, такие как глицин, антиоксиданты, хелатирующие агенты, такие EDTA или глутатион и/или консерванты. Кроме того, в фармацевтическую композицию по настоящему изобретению могут, но не обязательно, быть включены один или несколько других активных ингредиентов.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть приготовлена для любого подходящего пути введения, включая, например, местное, такое как, например, чрескожное или введение в глаза, пероральное, трансбуккальное, назальное, вагинальное, ректальное или парентеральное введение. Термин парентеральный, как он используется в настоящем документе, включает подкожную, внутрикожную, внутрисосудистую, такую как, например, внутривенную, внутримышечную, интратекальную и внутрибрюшинную инъекции, а также любые подобные методы инъекции или вливания. Предпочтительным путем введения является внутривенное введение.

В одном варианте осуществления изобретения конъюгат по настоящему изобретению, содержащий радионуклид, вводят любым обычным путем, в частности, внутривенно, например, в виде инъектируемых растворов или суспензий. Конъюгат по настоящему изобретению также может быть введен путем внутривенного вливания, например, путем внутривенного вливания в течение от 30 до 60 мин.

В зависимости от места расположения опухоли, конъюгат по настоящему изобретению может быть введен настолько близко, насколько возможно, к месту расположения опухоли, например, с помощью катетера. Такое введение можно осуществить непосредственно в опухолевую ткань, или в прилегающую ткань, или в афферентные кровеносные сосуды. Конъюгат по настоящему изобретению также может быть введен повторно дозами, предпочтительно, разделенными дозами.

В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления изобретения фармацевтическая композиция по настоящему изобретению содержит стабилизатор, например, улавливатель свободных радикалов, который ингибирует авторадиолиз конъюгата по настоящему изобретению. Подходящие стабилизаторы включают, например, сывороточный альбумин, аскорбиновую кислоту, ретинол, гентизиновую кислоту или ее производное, или раствор аминокислоты для вливания, например, такой который используется для парентерального белкового питания, предпочтительно, не содержащий электролит и глюкозу, например, коммерчески доступное аминокислотный раствор для вливания Proteinsteril® KE Nephro. Предпочтительными являются аскорбиновая кислота и гентизиновая кислота.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может включать дополнительные добавки, например, средство для установления pH в интервале между 7,2 и 7,4, например, ацетат натрия или аммония или Na₂HPO₄. Предпочтительно, стабилизатор добавляют к нерадиоактивному конъюгату по настоящему изобретению, и введение радионуклида, например, путем комплексообразования с радионуклидом, осуществляют в присутствии стабилизатора либо при комнатной температуре, либо, предпочтительно, при температуре от 40 до 120°C. Комплексообразование можно удобно проводить в условиях отсутствия воздуха, например, в атмосфере N₂ или Ar. Помимо того, стабилизатор может быть добавлен к композиция после комплексообразования.

Выведение конъюгата по изобретению, в частности, когда эффектор является радионуклидом, происходит, главным образом, через почки. Дальнейшая защита почек от накопления радиоактивного излучения может быть достигнута путем введения перед инъекцией или одновременно с соединением по изобретению, в частности, когда эффектором является радионуклид, лизина или аргинина или аминокислотного раствора, имеющего высокое содержание лизина и/или аргинина, например, коммерчески доступного аминокислотного раствора, такого как Synthamin®-14 или -10. Защита почек также может быть достигнута путем введения плазмозаменителей, таких как, например, гелофузин, либо вместо, либо в дополнение к аминокислотному вливанию. Защита почек также может быть достигнута путем введения мочегонных средств, обеспечивающих средства принудительного диуреза, которые повышают скорость мочеиспускания. Такие мочегонные средства включают мощные петлевые диуретики, тиазиды, ингибиторы карбоангидразы, калийсберегающие диуретики, кальцийсберегающие диуретики, осмотические диуретики и диуретики с низким потолком. Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может содержать, помимо конъюгата по настоящему изобретению, по меньшей мере, одно из этих упомянутых дополнительных соединений, предназначенных или подходящих для защиты почек, предпочтительно, защиты почек пациента, которому вводят соединение по настоящему изобретению.

Специалисту в данной области техники должно быть понятно, что конъюгат по настоящему изобретению, описанный в настоящем документе, предназначен для использования в различных способах. Специалистам в данной области техники, кроме того, будет понятно, что композиция по настоящему изобретению и фармацевтическая композиция по настоящему изобретению могут быть в равной степени использованы в указанных различных способах. Специалистам в данной области техники будет также понятно, что композиция по настоящему изобретению и фармацевтическая композиция по настоящему изобретению, описанные в настоящем документе, предназначены для использования в различных способах. Специалистам в данной области техники в равной степени будет также понятно, что конъюгат по настоящему изобретению может быть в равной степени использован в указанных различных способах.

Как будет понятно специалисту в данной области техники, композиция по настоящему изобретению и фармацевтическая композиция по настоящему изобретению содержат одно или несколько добавочных соединений в дополнение к конъюгату по настоящему изобретению. В той степени, в которой такие одно или несколько добавочных соединений, описанных в настоящем документе, являются частью композиции по настоящему изобретению и/или фармацевтической композиции по настоящему изобретению, будет понятно, что такие одно или несколько добавочных соединений могут быть введены отдельно от соединения по изобретению, воздействию которого подвергается пациент по способу настоящего изобретения. Такое введение одного или нескольких добавочных соединений может быть осуществлено перед, одновременно или после введения конъюгата по настоящему изобретению. Специалисту в данной области техники будет также понятно, что в способе по настоящему изобретению, помимо соединения по изобретению, пациенту могут быть введены одно или несколько добавочных соединений. Такое введение одного или нескольких добавочных соединений может быть осуществлено перед, одновременно или после введения конъюгата по настоящему изобретению. В той степени, в которой такие одно или несколько добавочных соединений являются частью способа по настоящему изобретению, будет понятно, что такие одно или несколько добавочных соединений являются частью композиции по настоящему изобретению и/или фармацевтической композиции по настоящему изобретению.

В настоящее изобретение включено, что конъюгат по настоящему изобретению и одно или несколько добавочных соединений могут содержаться в одном и том же или разных препаратах. Также в объем настоящего изобретения входит то, что конъюгат по настоящему изобретению и одно или несколько добавочных соединений не содержатся в одном и том же препарате, но содержатся в одной и той же упаковке, включающей первый препарат, содержащий конъюгат по настоящему изобретению, и второй препарат, содержащий одно или несколько добавочных соединений, где вид препаратов может быть одинаковым или может различаться.

В настоящее изобретение включено, что более одного типа конъюгата по настоящему изобретению содержится в композиции по настоящему изобретению и/или фармацевтической композиции по настоящему изобретению. Также в объем настоящего изобретения входит то, что используется более одного типа конъюгата по настоящему изобретению, предпочтительно, вводится по способу настоящего изобретения.

Следует понимать, что композиция по настоящему изобретению и фармацевтическая композиция по настоящему изобретению могут быть получены обычным способом.

В радиофармпрепаратах в результате радиоактивного распада со временем происходит снижение содержания радиоактивности. Физический период полураспада радионуклида часто является коротким для радиофармацевтической диагностики. В этих случаях конечный препарат должен быть приготовлен незадолго до введения пациенту. Это, в частности, справедливо для испускающих позитрон радиофармпрепаратов для томографии (ПЭТ радиофармпрепарат). Это часто приводит к использованию полуобработанных продуктов, таких как генераторы радионуклидов, радиоактивные предшественники и наборы.

Предпочтительно, набор настоящего изобретения обычно содержит, помимо одного или более одного конъюгата по настоящему изобретению, по меньшей мере, одно из следующих: инструкции по применению, итоговый контроль получения и/или контроль качества, одно или несколько из возможных вспомогательных веществ, один или несколько необязательных реагентов для процедуры мечения, необязательно, один или несколько радионуклидов с экранированными контейнерами или без них, и, необязательно, одно или несколько устройств, где устройство выбрано из группы, включающей маркировочное устройство, устройство для очистки, аналитическое устройство, манипулятор, радиопротекторное устройство или устройство для доставки.

Экранированные контейнеры, известные как «свиньи», для общего назначения и транспортировки радиофармацевтических контейнеров выпускаются в виде различных конфигураций для хранения радиофармацевтических контейнеров, таких как бутылки, флаконы, шприцы и т.д. Один вид часто включает съемную крышку, которая позволяет получить доступ к хранящемуся радиофармацевтическому контейнеру. Когда крышка «свиньи» на месте, воздействие радиации является приемлемым.

Маркировочное устройство выбрано из группы, включающей открытые реакторы, закрытые реакторы, микрофлюидальные системы, нанореакторы, картриджи, сосуды под давлением, флаконы, реакторы с контролем температуры, смесительные реакторы или реакторы для встряхивания и их комбинации.

Устройство для очистки, предпочтительно, выбрано из группы, включающей колонки или устройства для ионобменной хроматографии, колонки или устройства для эксклюзионной хроматографии, колонки или устройства для аффинной хроматографии, колонки или устройства для газовой или жидкостной хроматографии, колонки или устройства для твердофазной экстракции, фильтрующие устройства, центрифужные пробирки или устройства.

Аналитическое устройство предпочтительно выбрано из группы, включающей тестовые наборы или тестовые устройства для определения идентичности, радиохимической чистоты, радионуклидной чистоты, содержания радиоактивности и удельной радиоактивности соединения с радиоактивной меткой.

Манипулятор, предпочтительно, выбран из группы, включающей устройство для смешивания, разбавления, дозирования, маркировки, инъекции и введения радиофармпрепаратов пациенту.

Радиопротекторное устройство используется для того, чтобы защитить врачей и другой персонал от радиации при использовании терапевтических или диагностических радионуклидов. Радиопротекторное устройство, предпочтительно, выбрано из группы, включающей устройства с защитными барьерами из поглощающего излучение материала, выбранного из группы, включающей алюминий, пластик, дерево, свинец, железо, свинцовое стекло, воду, резину, пластмассу, сукно, устройства, обеспечивающие надлежащее расстояние от источников излучения, устройства, снижающие время воздействия радионуклида, устройства для ограничения ингаляции, проглатывания или других способов проникновения радиоактивного материала в организм и устройства, обеспечивающие комбинации этих мер.

Устройство для введения, предпочтительно, выбрано из группы, включающей шприцы, экранированные шприцы, иглы, насосы и инфузионные устройства. Экранированные шприцы обычно представляют собой полые цилиндрические структуры, которые характеризуются цилиндрическим корпусом шприца и изготовлены из свинца или вольфрама, со свинцовым стеклом, что позволяет обработчику видеть плунжер шприца и объем жидкости внутри шприца.

Настоящее изобретение далее проиллюстрировано со ссылкой на следующие фигуры и примеры, из которых могут быть ясны дополнительные преимущества, признаки и варианты осуществления, где

на фиг.1 показан твердофазный синтез модифицированной смолы формулы (86);

на фиг.2 представлены колоколообразные кривые ЕС50 (16) (треугольники) и (17) (кружки), показанные как мобилизация Са²⁺ (выражена в единицах флуоресценции [FU]) в зависимости от концентрации соединения (выражены как log нM такой концентрации соединения); сглаженные кривые EC50 показаны как линии; планки погрешностей указывают стандартное отклонение;

на фиг.3 представлены кривые титрования MAB1909 (кружки) и конъюгата (29) (треугольники), показанные как разница в оптической плотности при 450 нм и 620 нм в зависимости от концентрации соединения (выражены как log нМ такой концентрации соединения);

на фиг.4 представлены кривые титрования MAB3035 (кружки) и конъюгата (30) (треугольники), показанные как разница в оптической плотности при 450 нм и 620 нм в зависимости от концентрации соединения (выражена как log нМ такой концентрации соединения);

на фиг.5 показана векторная карта типичной плазмиды pExoIN2-NTR1, использованной для создания стабильных клеточных линий HEK293-NTR1;

на фиг.6 показаны результаты ОФЭКТ ¹¹¹In-(IIIa) во II части примеров (A), ¹¹¹In-(Va) во II части примеров (В) и ¹¹¹In-(IVa) во II части примеров (C) через 12 часов после инъекции;

на фиг.7 показаны результаты ОФЭКТ ¹¹¹In-(IIIa) во II части примеров через 3 ч (A), 6 ч (В), 12 ч (С) и 24 ч (D) после инъекции. Стрелка указывает на опухоль НТ29, указатель стрелки указывает на опухоль Capan-1;

на фиг.8 показаны результаты ОФЭКТ ¹¹¹In-(IIIa) во II части примеров через 3 ч (A), 6 ч (В), 12 ч (С) и 24 ч (D) после инъекции. Стрелка указывает на опухоль HEK293;

на фиг.9 показаны результаты биораспределения ex vivo ¹¹¹In-(IIIa) во II части примеров через 3 ч, 6 ч, 12 ч и 24 ч после инъекции в опухоли НТ29 и Capan-1 и различные другие органы;

на фиг.10 показаны результаты биораспределения ex vivo ¹¹¹In-(IIIa) во II части примеров через 3 ч, 6 ч, 12 ч и 24 ч после инъекции в опухоли HEK293 и различные другие органы;

на фиг.11 показан твердофазный синтез модифицированной смолы формулы (XVIII) во II части примеров;

на фиг.12 показан твердофазный синтез модифицированной смолы формулы (XXIII) и трет-бутилового эфира формулы (XXIV) во II части примеров;

на фиг.13 представлена диаграмма, иллюстрирующая эффект расположения хелатора в соединении формулы (I) во II части примеров на величину IC50 в анализе на мобилизацию Са (IC50 (Са));

на фиг.14А показаны результаты ОФЭКТ ¹¹¹In-(IIIa) (A), ¹¹¹In-(13) (В), ¹¹¹In-(15) (C), ¹¹¹In-(18) (D) и ¹¹¹In-(22) (Е) через 12 ч после инъекции. T обозначает опухоль НТ29, K обозначает почки, а L обозначает печень; и

на фиг.14В показано накопление опухолевой активности в зависимости от времени как процент введенной дозы, нормированной к массе ткани.

Специалисту в данной области будет понятно, что примеры, описанные здесь, сгруппированы в I части примеров и части II примеров. I часть примеров состоит из 30 примеров, которые относятся к конъюгату по изобретению. I часть примеров относится к фиг. от 1 до 4 настоящей заявки. II часть примеров содержит 32 примера, которые относятся к соединению структуры, которая соответствует, за исключением R⁷, соединению формулы (2) конъюгата по настоящему изобретению. Соединение структуры, которая соответствует, за исключением R⁷, соединению формулы (2) конъюгата по настоящему изобретению описано в международной патентной заявке PCT/EP2013/003700, описание которой включено в данный документ с помощью ссылки. II часть примеров относится к фиг. от 5 до 13 настоящей заявки. II часть примеров предоставляет доказательство того, что соединение формулы (2), которое содержится в конъюгате по настоящему изобретению в качестве первой адресующей части TM1 и/или второй адресующей части TM2 демонстрирует, в неконъюгированной форме, удивительные и неожиданные эффекты, такие эффекты в равной степени демонстрируются конъюгатом по изобретению. В тех случаях, когда как в I части примеров, так и во II части примеров используются идентичные номера фигур, номера таблиц, номера соединений, ссылки на заместители, аббревиатуры или любые другие потенциально или фактически противоречащие друг другу показания, следует учесть, что I часть примеров и II часть примеров представлены в настоящей заявке независимо друг от друга, и что I часть примеров связана с конъюгатом по изобретению таким образом, что любые такие указания, например, в части I, обычно соответствуют тем, которые используются в основной части настоящей заявки, и, более конкретно, в общей части настоящего описания.

ПРИМЕРЫ

I ЧАСТЬ ПРИМЕРОВ

Аббревиатуры и сокращения, используемые в настоящей заявке и, в частности, в последующих примерах, являются следующими:

1206- или -1206 обозначает

ACN обозначает ацетонитрил

Ahx обозначает 6-аминогексановую кислоту

Amf обозначает альфа-метил-L-фенилаланин

а.е.м. обозначает атомную единицу массы

водн. обозначает водный

Arg обозначает аргинин

B1 обозначает рецептор брадикинина B1

β-Cys-NH₂ обозначает цистеин амид

-(β-Cys-NH₂)- обозначает

CM обозначает ChemMatrixTM

DCM обозначает дихлорметан

Dde обозначает N-(1-(4,4-диметил-2,6-диоксоциклогексилиден)этил)

DEG обозначает диметиакрилат диэтиленгликоля

DIC обозначает N,N'-диизопропилкарбодиимид

DIPEA обозначает диизопропилэтиламин

DOTA обозначает 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусную кислоту

DOTA(tBu)₃-OH обозначает три-трет-бутил-1,4,7,10-тетраазацикло-додекан-1,4,7,10-тетраацетат

ДМФ обозначает N,N-диметилформамид

EC50 обозначает концентрацию, вызывающую полумаксимальный эффект

ε-Lys-NH₂ обозначает лизин амид

-(ε-Lys-NH₂)- обозначает

Et₂O обозначает диэтиловый эфир

EtOAc обозначает этилацетат

FITC обозначает 5(6)-флуоресцеин изотиоцианат

Fmoc обозначает 9-флуоренилметоксикарбонил

Gab обозначает гамма-амино бутановую кислоту

GABA обозначает гамма-амино бутановую кислоту

Glutar обозначает глутаровую кислоту

-Glutar- обозначает

ч обозначает час(ы)

HATU обозначает O-(7-азабензотриазол-1-ил)-N,N,N′,N′-тетраметилурония гексафторфосфат

HFIP обозначает гексафтор-2-пропанол

HOAc обозначает уксусную кислоту

HOAt обозначает 1-гидрокси-7-азабензотриазол

ЖХВР обозначает жидкостную хроматографию высокого разрешения

IC50 обозначает концентрацию полумаксимального ингибирования

кДа обозначает 1000 Дальтон

LAP обозначает латентно ассоциированный пептид

ЖХ-МС обозначает жидкостную хроматографию с масс-спектрометрией

ЛДГ обозначает лактатдегидрогеназу

LiOH обозначает гидроксид лития

Leu обозначает лейцин

M обозначает молярность или молей на литр

макс. обозначает максимум

MeOH обозначает метанол

Mic обозначает 3-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-пиррол-1-ил)-пропионовую кислоту или 3-(N-малеимидо)пропионовую кислоту

-Mic- обозначает

мин обозначает минуту(минуты)

MTBE обозначает метил-трет-бутиловый эфир

Mtt обозначает метилтритил

MWCO обозначает номинальное отсечение по молекулярной массе

NaHCO₃ обозначает гидрокарбонат натрия

NaCl обозначает хлорид натрия

Na₂SO₄ обозначает сульфат натрия

н.о. обозначает «не определено»

NHS обозначает N-гидроксисукцинимид

NMP обозначает 1-метил-2-пирролидон

БДУ обозначает «без дополнительных уточнений»

NT обозначает нейротензин

NTR1 обозначает рецептор нейротензина 1

Oic обозначает L-октагидроиндол-2-карбоновую кислоту

Pbf обозначает 2,2,4,6,7-пентаметил-2,3-дигидробензофуран-5-сульфонил

PBS обозначает фосфатно-солевой буферный раствор

ПЭТ обозначает позитронно-эмиссионную томографию

преп. обозначает препаративный

Pro обозначает пролин

PS обозначает полистирол

PyBOP обозначает гексафторфосфат бензотриазол-1-ил-окси-трис-пирролидино-фосфония

RLB обозначает анализ радиолигандного связывания

RP обозначает обращенную фазу

RT обозначает комнатную температуру

R_t обозначает время удерживания

насыщ. обозначает «насыщенный»

ОФЭКТ обозначает однофотонную эмиссионную компьютерную томографию

-Сукцинил- обозначает

Таксол или паклитаксел обозначает

tBu обозначает трет-бутил

ТФУ обозначает трифторацетат или трифторуксусную кислоту

TGF обозначает трансформирующий фактор роста

TIPS обозначает триизопропилсилан

ТСХ обозначает тонкослойную хроматографию

Tle обозначает трет-лейцин или трет-бутилглицин

Ttds обозначает N-(3-{2-[2-(3-амино-пропокси)-этокси]-этокси}-пропил)-сукцинамовую кислоту

Tyr обозначает тирозин

как используется в структурных формулах или фигурах, обозначает функционализированный твердый материал (смола твердофазного синтеза)

Пример 1: Материалы и способы

Материалы и способы, а также общие способы дополнительно проиллюстрированы следующими примерами.

Растворители:

Растворители указанной степени чистоты были использованы без дополнительной очистки. Ацетонитрил (градиентная чистота, Sigma-Aldrich); дихлорметан (AnalaR Normapur, VWR); этилацетат (химически чистый реактив, Fisher Scientific); N,N-диметилформамид (степень чистоты для пептидного синтеза, Biosolve); 1-метил-2-пирролидон (биотех. чистоты, Sigma-Aldrich) 1,4-диоксан (Emplura, Merck); метанол (ч.д.а., Merck).

Вода:

Milli-Q Plus, Millipore, деминерализованная.

Химические реагенты:

Химические реагенты были синтезированы в соответствии или по аналогии с литературными методиками, либо приобретены у компаний Sigma-Aldrich-Fluka (Дизенхофен, Германия), Bachem (Бубендорф, Швейцария), VWR (Дармштадт, Германия), Polypeptide (Страсбург, Франция), Novabiochem (Merck Group, Дармштадт, Германия), Acros Organics (дистрибьюторская компания Fisher Scientific GmbH, Шверте, Германия), Iris Biotech (Марктредвиц, Германия), Amatek Chemical (Цзянсу, Китай), Roth (Карлсруэ, Германия), Molecular Devices (Чикаго, США), Biochrom (Берлин, Германия), Peptech (Кембридж, Массачусетс, США), Synthetech (Олбани, Орегон, США), Pharmacore (Хай-Пойнт, Северная Каролина, США), PCAS Biomatrix Inc (Сен-Жан-сюр-Ришелье, Квебек, Канада), Alfa Aesar (Карлсруэ, Германия), Tianjin Nankai Hecheng S&T Co., Ltd (Тяньцзинь, Китай) и Anaspec (Сан-Хосе, Калифорния, США) или у других компаний и использовались по назначению без дополнительной очистки.

SR-142948 представляет собой (2-[(5-(2,6-диметокси-фенил)-1-{4-[(3-диметиламино-пропил)-метил-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-1H-пиразол-3-карбонил)-амино]-адамантан-2-карбоновую кислоту, >97%) и был приобретен у компании Tocris Bioscience (Бристоль, Великобритания).

Метиловый эфир 1-(4-карбокси-2-изопропил-фенил)-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (87) получали в соответствии с литературными методиками, как описано в US 5723483.

Паклитаксел гемисукцинил-NHS сложный эфир (88) получали, как описано в работе Ryppa et al., Int J Pharm, 2009, 368, 89-97.

Биологические препараты:

MAB1909

Клон моноклонального анти-тенасцин антитела α14-B (номер по каталогу MAB1909) был приобретен у компании Merck Millipore (Billerica, MA, США). Это очищенное мышиное IgG1κ антитело распознает эпитоп, содержащийся в домене B тенасцина человека.

MAB3035

Клон моноклонального анти-EphA2 антитела 371805 (Cat-# MAB3035) был приобретен у компании (R&D Systems, MN, США). Это очищенное мышиное IgG2A антитело распознает EphA2 человека (UniProt Accession # P29317).

Анализ ЖХВР/МС осуществляли путем введения 5 мкл раствора образца, используя 2 стадийный градиент для всех хроматограмм (5-50% B за 5 мин, затем 50-100% B за 2 мин, A: 0,05% ТФУ в воде и B: 0,05% ТФУ в ACN). Колонки RP были приобретены у компании Phenomenex (тип Luna C-18, 3 мкМ, 50×2,00 мм, поток 0,5 мл, ЖХВР при комнатной температуре); масс спектрометр: Thermo Finnigan Advantage и/или LCQ Classic (оба ионные ловушки), ESI ионизация, в качестве пробного газа в ионной ловушке служил гелий. В качестве программного обеспечения использовали версию 1.4 Excalibur. УФ-детектирование проводили при λ=230 нм. Время удерживания (R_t) указывали в десятичной системе (например, 1,9 мин=1 мин 54 сек) и учитывалось при детектировании в масс спектрометре. Мертвое время между инъекцией и УФ-детектированием (ВЭЖХ) составляло 0,45 мин, а задержка между УФ-детектированием и масс-детектированием на хроматограмме корректировалась. Точность масс-спектрометра составляла прибл. ± 0,5 а.е.м.

Препаративная ЖХВР:

Разделение с помощью препаративной ЖХВР осуществляли с использованием колонок и градиентов, описанных в отдельных примерах. Для градиента использовались следующие растворители:

A: 0,05% ТФУ в H₂O

B: 0,05% ТФУ в ACN

Во всех разделениях использовали линейный бинарный градиент. Например, если градиент описан как: «от 20 до 60% B за 30 мин», это подразумевает линейный градиент от 20% B (и 80% A) до 60% B (и 40% A) в течение 30 мин. Скорость потока зависела от размера колонки: для колонки диаметром 25 мм она составляла 30 мл/мин, а для колонки диаметром 50 мм она составляла 60 мл/мин, соответственно.

Общие способы автоматического/полуавтоматического твердофазного синтеза:

Автоматический твердофазный синтез пептидов и полиамидов осуществляли в синтезаторе Tetras Peptide Synthesizer (Advanced Chemtec) в шкале 50 мкмоль и в шкале 100 мкмоль. Ручные стадии осуществляли в пластических шприцах, снабженных фриттами (материал PE, Roland Vetter Laborbedarf OHG, Аммербух, Германия). Количества реагентов, описанных в протоколах, соответствуют шкале 100 мкмоль.

Твердофазный синтез осуществляли на полистирольной (поперечносвязанной с 1,4-дивинилбензолом (PS) или ди(этиленгликоль)диметакрилатом (DEG)), ChemMatrix (CM) или TentaGel (TG) смоле. Линкерами смолы являлись тритил, Ванг и Ринк амиды.

Нагрузка смолы:

В случае тритильного линкера присоединение первого структурного элемента (нагрузку смолы) осуществляли следующим образом. Смоле (полистирол (PS) тритил хлорид, начальная нагрузка: 1,8 ммоль/г) давали набухнуть в DCM (5 мл) в течение 30 минут и после этого промывали DCM (3 мл, 1 минута). Затем смолу обрабатывали смесью соответствующего структурного элемента (0,5 ммоль, 5 экв.) и DIPEA (350 мкл, 3,5 ммоль, 35 экв.) в DCM (4 мл) в течение 1 час. После этого смолу промывали метанолом (5 мл, 5 минут) и ДМФ (3 мл, 2×1 минута).

В случае линкера Ванг использовали предварительно нагруженные смолы (полистирол (PS) и TentaGel (TG)).

В случае Ринк амидного линкера присоединение первого остатка к смоле (CM, DEG) осуществляли тем же методом, что и сборку цепи, как описано далее.

Удаление защитной группы Fmoc:

После набухания в ДМФ смолу промывали ДМФ и затем обрабатывали смесью пиперидин/ДМФ (1:4, 3 мл, 2 и 20 минут) и после этого промывали ДМФ (3 мл, 5×1 минута).

Удаление защитной группы Dde:

После набухания в ДМФ смолу промывали ДМФ и затем обрабатывали смесью гидразингидрат/ДМФ (2/98, 3 мл 2×10 минут) и после этого промывали ДМФ (3 мл, 5×1 минута).

Удаление защитной группы Mtt:

После набухания в DCM смолу промывали DCM и затем обрабатывали смесью HFIP/DCM (7/3, 4-6 мл, 4 часа) и далее последовательно промывали DCM (3 мл, 3×1 минута), ДМФ (3 мл, 3×1 мл) и DIPEA (0,9 M в ДМФ, 3 мл, 1 минута) для депротонирования амина с только что удаленной защитной группой.

Растворы реагентов:

Структурные элементы (0,3 M в ДМФ или NMP)

DIPEA (0,9 M в ДМФ)

HATU (0,4 M в ДМФ)

Уксусный ангидрид (0,75 M в ДМФ)

Связывание: Связывание структурных элементов/аминокислот (сборка цепи):

Если не указано иное, связывание структурных элементов осуществляли следующим образом: После последовательного добавления растворов соответствующего структурного элемента (1,7 мл, 5 экв.), раствора DIPEA (1,15 мл, 10 экв.) и раствора HATU (1,25 мл, 5 экв.) смолу встряхивали в течение 45 мин. При необходимости смолу промывали ДМФ (3 мл, 1 минута) и повторяли стадию связывания.

Конечное ацетилирование:

После добавления раствора DIPEA (1,75 мл, 16 экв.) и раствора уксусного ангидрида (1,75 мл, 13 экв.) смолу встряхивали в течение 10 минут. После этого смолу промывали ДМФ (3 мл, 6×1 минута).

Метод расщепления A: Отщепление замещенных фрагментов от гиперацидной неустойчивой смолы:

После завершения сборки последовательности смолу в заключение промывали DCM (3 мл, 4×1 минута). Затем смолу обрабатывали HFIP/DCM (7/1, 4 мл, 4 часа), и собранный раствор упаривали досуха. Остаток очищали с помощью препаративной ЖХВР или использовали без дополнительной очистки.

Метод расщепления B: Отщепление незамещенных фрагментов (полное расщепление смолы):

После завершения сборки последовательности смолу в заключение промывали DCM (3 мл, 4×1 минута), высушивали в вакууме в течение ночи и обрабатывали ТФУ, TIPS и водой (95/2,5/2,5) (если не указано иное). После этого расщепленный раствор выливали в смесь MTBE и циклогексана (1/1, 10-кратный избыток относительно объема расщепляемого раствора), центрифугировали при температуре 4°C в течение 5 минут, и остаток собирали и высушивали в вакууме.

Названия соединениям были даны, если это возможно, с использованием AutoNom, версия 2.2 (Beilstein Informationssysteme Copyright© 1988-1998, Beilstein Institut für Literatur der Organischen Chemie licensed to Beilstein Chemiedaten and Software GmbH).

Получение соединений:

Соединения по настоящему изобретению могут быть синтезированы с использованием способов, описанных далее, а также способами синтеза, известными в области синтетической органической химии, или их вариантами, что должно быть понятно специалистам в данной области. Предпочтительные способы включают, но этим не ограничиваются, такие способы, которые описаны далее. Каждая из ссылок, приведенных ниже, включена в данный документ в качестве ссылки.

Конкретные варианты получения соединений по настоящему изобретению представлены в следующих примерах. Если не указано иное, все исходные материалы и реагенты имеют стандартную продажную степень чистоты и используются без дополнительной очистки, либо легко могут быть получены из таких материалов с помощью стандартных методов. Специалистам в области органического синтеза в свете данного описания будет понятно, что для получения соединений, охватываемых настоящим изобретением, можно варьировать исходные вещества и условия проведения реакции, включая дополнительные стадии.

Пример 2: Синтез трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты, присоединенного к тритиловой смоле (86)

A. Присоединение N,N-бис[3-(метиламино)-пропил]метиламина к хлортритильной полистирольной смоле (фиг.1, стадия a)

Тритилхлоридной полистирольной смоле (начальная загрузка 1,8 ммоль/г, 1,11 г, 2 ммоль, 1,0 экв.) давали набухнуть в DCM в течение 30 мин. Затем к смоле добавляли N,N-бис[3-(метиламино)-пропил]метиламин (1,6 мл, 8 ммоль, 4 экв.) в DCM (6,5 мл), и смесь встряхивали в течение ночи. После этого смолу последовательно промывали ДМФ, DCM и диэтиловым эфиром (5×/3×/1×) и высушивали в вакууме.

B. Присоединение метилового эфира 1-(4-карбокси-2-изопропил-фенил)-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (фиг.1, стадия b)

Нагруженной N,N-бис[3-(метиламино)-пропил]метиламином тритильной смоле (1 г, 1,8 ммоль, 1,0 экв.) давали набухнуть в ДМФ в течение 30 мин. Смолу промывали ДМФ/DIPEA (9/1) (для удаления оставшегося гидрохлорида N,N-бис[3-(метиламино)-пропил]метиламина) и ДМФ (3×/3×).

Метиловый эфир 1-(4-карбокси-2-изопропил-фенил)-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (87) (1,15 г, 2,7 ммоль, 1,5 экв.) [полученный, как описано в US 5723483], HATU (1,03 г, 2,7 ммоль, 1,5 экв.) и DIPEA (937 мкл, 5,4 ммоль, 3 экв.) растворяли в ДМФ (18 мл) и тщательно перемешивали в течение 1 мин. После добавления активированного структурного элемента смолу встряхивали в течение ночи. Смолу промывали (ДМФ пять раз, DCM три раза и диэтиловым эфиром) и высушивали в вакууме. Завершение реакции определяли следующим образом: Образец смолы обрабатывали раствором бензойной кислоты, HATU и DIPEA (1/1/2) в ДМФ в течение 30 мин. После промывки с помощью ДМФ и DCM к смоле добавляли ТФУ. Отсутствие по данным ЖХ-МС N,N-бис[3-(метиламино)-пропил]метиламида бензойной кислоты доказывало отсутствие на смоле свободной функциональной аминогруппы, что, таким образом, свидетельствовало о полном связывании метилового эфира 1-(4-карбокси-2-изопропил-фенил)-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты.

C. Гидролиз сложного метилового эфира (фиг.1, стадия c)

Смолу (1,64 г, 1,75 ммоль, 1,0 экв.) (полученную на стадии B) в течение ночи обрабатывали диоксаном (35 мл) и гидратом LiOH (689 мг, 16 ммоль, 10 экв.) в воде (12 мл). Процедуру повторяли еще один раз, смолу последовательно промывали водой, ДМФ и DCM (3×/3×/3×) и высушивали в вакууме.

D. Присоединение трет-бутилового эфира 2-амино-адамантан-2-карбоновой кислоты (фиг.1, стадия d)

Смоле (0,7 г, 0,75 ммоль, 1,0 экв.) (полученной на стадии C) давали набухнуть в ДМФ в течение 30 мин. Затем в смеси ДМФ и DCM (2:1) (6 мл) растворяли HOAt (153 мг, 1,13 ммоль, 1,5 экв.), DIC (232 мкл, 1,5 ммоль, 2,0 экв.) и трет-бутиловый эфир 2-амино-адамантан-2-карбоновой кислоты (942 мг, 3,75 ммоль, 5,0 экв.) и потом раствор добавляли к смоле. Через 2,5 часа добавляли дополнительное количество DIC (232 мкл, 1,5 ммоль, 2,0 экв.). Смолу оставляли встряхиваться в течение 60 часов, после чего реакция завершалась. После этого смолу промывали ДМФ (3×) и DCM (3×) и высушивали в вакууме.

Пример 3: Синтез трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (58)

Смолу с трет-бутиловым эфиром 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (86) (0,7 г, 0,75 ммоль, 1,0 экв.) обрабатывали четыре раза смесью ТФУ, TIPS и DCM (2/5/93). Чтобы предотвратить преждевременную потерю tBu защитных групп образовавшийся раствор сразу выливали в водный буферный раствор (10 мл, pH=8, 100 мМ NH₄(CO₃)₂). Все DCM-буферные смеси объединяли, и органический слой уменьшали до минимума путем упаривания. К оставшемуся водному раствору добавляли ACN (5 мл), и смесь сушили вымораживанием с получением 800 мг сырого продукта.

Остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 15 до 45% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (210 мг, 26,3 мкмоль, 35,0%). ЖХВР: R_t=5,5 мин. МС: m/z=799,4 ([M+H]⁺, рассчитано 799,5). C₄₆H₆₆N₆O₆ (ММ=799,05).

Пример 4: Синтез трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (59)

Смолу с трет-бутиловым эфиром 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (86) (1,5 ммоль, 1,0 экв.) обрабатывали четыре раза смесью ТФУ, TIPS и DCM (2/5/93). Чтобы предотвратить преждевременную потерю tBu защитной группы, образовавшийся раствор сразу выливали в водный буферный раствор (10 мл, pH=8, 100 мМ NH₄(CO₃)₂). Все DCM-буферные смеси объединяли, и органический слой уменьшали до минимума путем упаривания. К оставшемуся водному раствору добавляли ACN (5 мл), и смесь сушили вымораживанием с получением 900 мг сырого продукта (58). Последний растворяли в ДМФ (18 мл) и значение pH раствора доводили до pH=7,5 путем добавления DIPEA (0,2 мл). Затем к раствору добавляли глутаровый ангидрид (193 мг, 1,7 ммоль, 1,5 экв.). Понижающуюся в результате величину рН до рН=4,5 компенсировали путем добавления DIPEA (0,5 мл), и раствор опять доводили до pH=7,5. Спустя 6 часов и после перемешивания в течение ночи добавляли дополнительное количество глутарового ангидрида (64 мг, 0,85 ммоль, 0,5 экв.). В завершение растворитель удаляли в вакууме. Остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 30 до 60% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 50×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (425 мг, 46,5 мкмоль, 31,0%). ЖХВР: R_t=6,2 мин. МС: m/z=913,32 ([M+H]⁺, рассчитано 913,54). C₅₁H₇₂N₆O₉ (ММ=913,15).

Пример 5: 2-({5-(2,6-Диметокси-фенил)-1-[4-({3-[(3-{[3-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-пиррол-1-ил)-пропионил]-метил-амино}-пропил)-метил-амино]-пропил}-метил-карбамоил)-2-изопропил-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновая кислота/1206-Mic (57)

A. 2-({5-(2,6-Диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновая кислота

Смолу с трет-бутиловым эфиром 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (86) (0,15 г, 0,16 ммоль, 1,0 экв.) обрабатывали смесью ТФУ и DCM (1/4) в течение 2 часов. Затем все летучие вещества упаривали и остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 20 до 50% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (17,6 мг, 23,7 мкмоль, 15%). ЖХВР: R_t=4,6 мин. МС: m/z=743,44 ([M+H]⁺, рассчитано 743,45). C₄₂H₅₈N₆O₆ (ММ=742,95).

B. 2-({5-(2,6-Диметокси-фенил)-1-[4-({3-[(3-{[3-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-пиррол-1-ил)-пропионил]-метил-амино}-пропил)-метил-амино]-пропил}-метил-карбамоил)-2-изопропил-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновая кислота (57)

2-({5-(2,6-Диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновую кислоту (15 мг, 20 мкмоль, 1 экв.) растворяли в ДМФ (300 мкл). К раствору добавляли N-сукцинимидиловый эфир 3-(малеимидо)пропионовой кислоты (5,4 мг, 20 мкмоль, 1 экв.), растворенный в ДМФ (150 мкл) и DIPEA (2 мкл). После перемешивания в течение 6 часов все летучие вещества удаляли в вакууме. Остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 25 до 45% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (6,16 мг, 6,9 мкмоль, 34,0%). ЖХВР: R_t=5,5 мин. МС: m/z=894,35 ([M+H]⁺, рассчитано 894,47). C₄₉H₆₃N₇O₉ (ММ=894,07).

Пример 6: 1206-Glutar-Ttds-(ε-Lys-NH₂)-Glutar-NHS (60)

Начальные стадии синтеза соединения осуществляли в соответствии с общими методиками автоматического/полуавтоматического твердофазного синтеза. Амидную смолу Ринка (DEG, начальная загрузка 0,45 ммоль/г/100 мкмоль) нагружали Fmoc-Lys(Mtt)-OH (нагрузка смолы), и группу Fmoc у последней удаляли, и после этого присоединяли Fmoc-Ttds-OH и удаляли защитную Fmoc. К смоле после предварительной активации в течение 5 минут добавляли смесь трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (59) (109,6 мг, 110 мкмоль, 1,2 экв.), HOAt (16,4 мг, 110 мкмоль, 1,2 экв.), DIPEA (34,4 мкл, 240 мкмоль, 2,4 экв.) и DIC (18,4 мкл,110 мкмоль, 1,2 экв.) в NMF/DCM (1/1, 4 мл). Через 24 часа смолу промывали ДМФ (3 мл, 5×1 мин). Смолу разделяли, и следующие стадии осуществляли с 25 мкмоль смолы, которые подвергали полному расщеплению смолы (метод расщепления A) в течение 75 минут. Расщепленный раствор упаривали досуха, и оставшийся осадок растворяли в ДМФ (1 мл). Добавляли DIPEA (15 мкл) до достижения значения pH, равного pH=7,5. К этому раствору медленно добавляли раствор дисукцинимидил глутарата (12,23 мг, 37,5 мкмоль, 1,5 экв.) в ДМФ (1 мл). После 30 минут все летучие вещества удаляли в вакууме. Остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 20 до 45% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (6,32 мг, 4,2 мкмоль, 16,8%). ЖХВР: R_t=5,1 мин. МС: m/z=749,93 ([M+2H]²⁺, рассчитано 749,89). C₇₆H₁₁₂N₁₂O₁₉ (ММ=1497,77).

Пример 7: 1206-Glutar-Ttds-(ε-Lys-NH₂)-Mic (61)

Начальные стадии синтеза соединения осуществляли в соответствии с общими методиками автоматического/полуавтоматического твердофазного синтеза. Амидную смолу Ринка (DEG, начальная загрузка 0,45 ммоль/г) (100 мкмоль) нагружали Fmoc-Lys(Mtt)-OH (нагрузка смолы) и группу Fmoc у последней удаляли и после этого присоединяли Fmoc-Ttds-OH и удаляли защитную Fmoc. К смоле после предварительной активации в течение 5 минут добавляли смесь трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (59) (109,6 мг, 110 мкмоль, 1,2 экв.), HOAt (16,4 мг, 110 мкмоль, 1,2 экв.), DIPEA (34,4 мкл, 240 мкмоль, 2,4 экв.) и DIC (18,4 мкл,110 мкмоль, 1,2 экв.) в смеси NMP/DCM (1/1, 4 мл). Через 24 часа смолу промывали ДМФ (3 мл, 5×1 мин). Смолу разделяли, и следующие стадии осуществляли с 25 мкмоль смолы, которые подвергали отщеплению Mtt (Mtt-снятие защиты/удаление). К смоле после предварительной активации в течение 5 минут добавляли смесь 3-малеинимидопропионовой кислоты (22 мг, 125 мкмоль, 5 экв.) в ДМФ (425 мкл), раствор HATU (290 мкл, 5 экв.) и раствор DIPEA (313 мкл, 10 экв.). Через 2 часа смолу промывали ДМФ (3 мл, 5×1 мин) и подвергали полному расщеплению смолы (метод расщепления A) в течение 2 часов. Расщепленный раствор упаривали досуха, и остаток лиофилизовали. В заключение полученный твердый продукт подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 25 до 50% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (8,09 мг, 4,2 мкмоль, 16,8%). ЖХВР: R_t=5,0 мин. МС: m/z=719,97 ([M+2H]²⁺, рассчитано 719,86). C₇₄H₁₀₈N₁₂O₁₇ (ММ=1437,72).

Пример 8: 1206-Glutar-Ttds-Lys(DOTA)-Ttds-GABA-1206 (12)

Начальные стадии синтеза соединения осуществляли в соответствии с общими методиками автоматического/полуавтоматического твердофазного синтеза. Тритильную смолу (PS, 100 мкмоль) нагружали Fmoc-GABA-OH, и группу Fmoc у последней удаляли. Два итеративных повторения присоединения (присоединение) и удаления Fmoc (удаление Fmoc-защитных групп) (Fmoc-Ttds-OH, Dde-Lys(Fmoc)-OH) обеспечивали присоединение к смоле Dde-Lys-Ttds-GABA. Затем к боковой цепи лизина присоединяли (4 часа) DOTA(tBu)₃-OH (172 мг, 0,3 ммоль, 3 экв.), напрямую растворенный в растворе HATU (0,75 мл, 3 экв.) и растворе DIPEA (0,7 мл, 6 экв.) для предварительной активации и улучшенной растворимости). Защитную Dde группу удаляли (удаление Dde-защитных групп), затем присоединяли звено Fmoc-Ttds-OH, и группу Fmoc у последнего удаляли. После этого к смоле добавляли глутаровый ангидрид (22,8 мг, 0,2 ммоль, 2 экв.) в ДМФ (3 мл). Через 4 часа смолу промывали DCM (3 мл, 1 минута), и от смолы отщеплялся HO-Glutar-Ttds-Lys(DOTA(tBu)₃)-Ttds-GABA-OH (метод расщепления B). Очистка с помощью ЖХВР (от 15 до 40% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) давала очищенное промежуточное соединение (41,42 мг, 27,5 мкмоль, 27,5%). ЖХВР: R_t=4,1 мин. МС: m/z=753,24 ([M+2H]²⁺, рассчитано 753,42). C₇₁H₁₂₉N₁₁O₂₃ (ММ=1504,84). Очищенный трет-бутиловый эфир HO-Glutar-Ttds-Lys(DOTA(tBu)₃)-Ttds-GABA-OH (20 мг, 14,29 мкмоль, 1 экв.) растворяли в ДМФ (2 мл). К раствору добавляли 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновую кислоту (58) (22,84 мг, 28,6 мкмоль, 2 экв.), HOAt (3,9 мг, 28,6 мкмоль, 2 экв.), DIPEA (7,45 мкл, 42,9 мкмоль, 3 экв.) и DIC (3,3 мкл, 21,4 мкмоль, 1,5 экв.). Добавление DIC (3,3 мкл, 21,4 мкмоль, 1,5 экв.) повторяли после перемешивания в течение ночи. После этого температуру реакции повышали до 40°C в течение 4 часов. Затем все летучие вещества удаляли в вакууме, и остаток обрабатывали смесью ТФУ/TIPS/вода (95/2,5/2,5, 4 часа). Сырой продукт получали из расщепленного раствора путем высаживания осадка с помощью смеси MTBE/циклогексан и центрифугирования. После высушивания в вакууме остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 25 до 50% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (12,96 мг, 4,6 мкмоль, 16,9%). ЖХВР: R_t=5,6 мин. МС: m/z=929,75 ([M+3H]³⁺, рассчитано 929,80). C₁₄₃H₂₁₇N₂₃O₃₃ (ММ=2786,39).

Пример 9: 1206-Glutar-Lys(DOTA)-GABA-1206 (13)

Начальные стадии синтеза соединения осуществляли в соответствии с общими методиками автоматического/полуавтоматического твердофазного синтеза. Тритильную смолу (PS, 100 мкмоль) нагружали Fmoc-GABA-OH (нагрузка смолы), и группу Fmoc у последней удаляли (удаление Fmoc-защитных групп). Присоединяли Dde-Lys(Fmoc)-OH, и группу Fmoc удаляли из боковой цепи лизина. Затем к последней присоединяли DOTA(tBu)₃-OH ((172 мг, 0,3 ммоль, 3 экв.), напрямую растворенный в растворе HATU (0,75 мл, 3 экв.) и растворе DIPEA (0,7 мл, 6 экв.) для предварительной активации и улучшенной растворимости). Защитную Dde группу удаляли (удаление Dde-защитных групп), и к смоле добавляли глутаровый ангидрид (22,8 мг, 0,2 ммоль, 2 экв.) в ДМФ (3 мл). Через 4 часа смолу промывали DCM (3 мл, 1 минута) и HO-Glutar-Lys(DOTA(tBu)₃)-GABA-OH отщепляли от смолы (метод расщепления B). Сырое частично защищенное промежуточное соединение (22 мг, 30 мкмоль, 30%) растворяли в ДМФ (1,5 мл). К раствору добавляли трет-бутиловый эфир 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (58) (36 мг, 45 мкмоль, 1,5 экв.), HOAt (16,3 мг, 120 мкмоль, 4 экв.), DIPEA (31,3 мкл, 180 мкмоль, 6 экв.) и DIC (14 мкл, 90 мкмоль, 3 экв.). Через 4 часа добавляли дополнительное количество (58) (24 мг, 30 мкмоль, 1 экв.), и раствор перемешивали в течение ночи. Затем все летучие вещества удаляли в вакууме, и остаток обрабатывали смесью ТФУ/TIPS/вода (95/2,5/2,5, 4 часа). Сырой продукт получали из расщепленного раствора путем высаживания осадка смесью MTBE/циклогексан и центрифугирования. После высушивания в вакууме остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 25 до 55% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (7,2 мг, 3,3 мкмоль, 11,0%). ЖХВР: R_t=5,8 мин. МС: m/z=728,29 ([M+3H]³⁺, рассчитано 728,22). C₁₁₅H₁₆₅N₁₉O₂₃ (ММ=2181,65).

Пример 10: 1206-Glutar-Ahx-Lys(DOTA)-(ε-Lys-NH₂)-Glutar-1206 (14)

Начальные стадии синтеза соединения осуществляли в соответствии с общими методиками автоматического/полуавтоматического твердофазного синтеза. Амидную смолу Ринка (DEG, начальная загрузка 0,45 ммоль/г/100 мкмоль) нагружали Fmoc-Lys(Mtt)-OH (нагрузка смолы), и группу Fmoc у последней удаляли (удаление Fmoc-защитных групп). Присоединяли Dde-Lys(Fmoc)-OH, и группу Fmoc удаляли из боковой цепи лизина. Затем к последней присоединяли DOTA(tBu)₃-OH ((172 мг, 0,3 ммоль, 3 экв.), напрямую растворенный в растворе HATU (0,75 мл, 3 экв.) и растворе DIPEA (0,7 мл, 6 экв.) для предварительной активации и улучшенной растворимости). Защитную Dde группу удаляли (удаление Dde-защитных групп) и присоединяли Fmoc-Ahx-OH. Из смолы с присоединенным пептидом Fmoc-Ahx-Lys(DOTA(tBu)₃)-Lys(Mtt) удаляли группы Fmoc и Mtt. Смолу разделяли, и следующие стадии осуществляли с 25 мкмоль смолы (100 мг). К смоле после предварительной активации в течение 5 минут добавляли смесь трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (59) (52,2 мг, 55 мкмоль, 2,2 экв.), HOAt (7,5 мг, 55 мкмоль, 2,2 экв.), DIPEA (17,4 мкл, 100 мкмоль, 4 экв.) и DIC (17,4 мкл, 55 мкмоль, 2,2 экв.) в смеси ДМФ/DCM (1/1, 1 мл). Через 3 часа добавляли дополнительное количество DIC (17,4 мкл, 55 мкмоль, 2,2 экв.), и смолу перемешивали в течение 48 часа. Далее добавляли DIC (8,8 мкл, 23 мкмоль, 1,1 экв. через 24 часа), (59) (23,7 мг, 25 мкмоль, 1,0 экв., через 48 часа) и опять DIC (8,8 мкл, 23 мкмоль, 1,1 экв. через 48 часа) и смолу перемешивали в течение еще 24 часов. Смолу промывали ДМФ (3 мл, 5×1 мин) и подвергали полному расщеплению смолы (метод расщепления B) в течение 4 часов. Полученный остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 25 до 55% B за 30 мин, Phenomenex Luna RP-C18 30×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (19,46 мг, 7,9 мкмоль, 31,8%). ЖХВР: R_t=5,7 мин. МС: m/z=817,89 ([M+3H]³⁺, рассчитано 818,00). C₁₂₈H₁₈₈N₂₂O₂₆ (ММ=2450,99).

Пример 11: 1206-Glutar-Ttds₃-Lys(DOTA)-Ttds₃-(ε-Lys-NH₂)-Glutar-1206 (15)

Начальные стадии синтеза соединения осуществляли в соответствии с общими методиками автоматического/полуавтоматического твердофазного синтеза. Амидную смолу Ринка (DEG, начальная загрузка 0,45 ммоль/г/100 мкмоль) нагружали Fmoc-Lys(Mtt)-OH (нагрузка смолы) и группу Fmoc у последней удаляли. Четыре итеративных повторения присоединения (присоединение) и удаления Fmoc (удаление Fmoc-защитных групп) (3×Fmoc-Ttds-OH, Dde-Lys(Fmoc)-OH) обеспечивали присоединение к смоле пептида Dde-Lys-Ttds₃-Lys(Mtt). Затем к боковой цепи лизина присоединяли (4 часа) DOTA(tBu)₃-OH ((172 мг, 0,3 ммоль, 3 экв.), напрямую растворенный в растворе HATU (0,75 мл, 3 экв.) и растворе DIPEA (0,7 мл, 6 экв.) для предварительной активации и улучшенной растворимости). Защитную Dde группу удаляли (удаление Dde-защитных групп). Еще три итеративных повторения присоединения (присоединение) и удаления Fmoc (удаление Fmoc-защитных групп) (3×Fmoc-Ttds-OH) обеспечивали присоединение к смоле H-Ttds₃-Lys(DOTA(tBu)₃)-Ttds₃-Lys(Mtt). Группу Mtt у последнего удаляли (удаление Mtt-защитных групп). Смолу разделяли, и следующие стадии осуществляли с 25 мкмоль смолы (125 мг). К полученному присоединенному к смоле диамину (125 мг, 25 мкмоль), после предварительной активации в течение 5 минут, добавляли смесь трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (59) (52,2 мг, 55 мкмоль, 2,2 экв.), HOAt (7,5 мг, 55 мкмоль, 2,2 экв.), DIPEA (17,4 мкл, 100 мкмоль, 4 экв.) и DIC (17,4 мкл, 55 мкмоль, 2,2 экв.) в смеси ДМФ/DCM (1/1, 1 мл). Далее добавляли DIC (8,8 мкл, 23 мкмоль, 1,1 экв. через 24 часа), (59) (23,7 мг, 25 мкмоль, 1,0 экв., через 48 часа) и опять DIC (8,8 мкл, 23 мкмоль, 1,1 экв. через 48 часа), и смолу перемешивали в течение еще 24 часов. Смолу промывали ДМФ (3 мл, 5×1 мин) и подвергали полному расщеплению смолы (метод расщепления B) в течение 4 часов. Полученный остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 25 до 55% B за 30 мин, Phenomenex Luna RP-C18 30×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (19,43 мг, 4,7 мкмоль, 18,8%). ЖХВР: R_t=5,5 мин. МС: m/z=1038,79 ([M+4H]⁴⁺, рассчитано 1039,01). C₂₀₆H₃₃₃N₃₃O₅₅ (ММ=4152,04).

Пример 12: 1206-Glutar-Ttds-Lys(DOTA)-Ttds-GABA-Arg-Arg-Pro-Tyr-Tle-Leu-OH (16)

Начальные стадии синтеза соединения осуществляли в соответствии с общими методиками автоматического/полуавтоматического твердофазного синтеза. Использовали предварительно нагруженную Fmoc-Leu-PS смолу (начальная загрузка 0,8 ммоль/г/100 мкмоль). 8 итеративных повторений присоединения (присоединение) и удаления Fmoc (удаление Fmoc-защитных групп) (Fmoc-Tle-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Pro-OH, 2×Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-GABA-OH, Fmoc-Ttds-OH, Dde-Lys(Fmoc)) обеспечивали присоединение к смоле пептида Dde-Lys-Ttds-GABA-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Tyr(tBu)-Tle-Leu. Затем к боковой цепи лизина присоединяли (4 часа) DOTA(tBu)₃-OH ((172 мг, 0,3 ммоль, 3 экв.), напрямую растворенный в растворе HATU (0,75 мл, 3 экв.) и растворе DIPEA (0,7 мл, 6 экв.) для предварительной активации и улучшенной растворимости). Защитную Dde группу удаляли (удаление Dde-защитных групп). К структуре присоединяли Fmoc-Ttds-OH, и группу Fmoc удаляли. К полученному связанному со смолой пептиду (50 мг, 20 мкмоль), после предварительной активации в течение 5 минут, добавляли смесь трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (59) (22,8 мг, 24,4 мкмоль, 1,2 экв.), HOAt (3,3 мг, 24,4 мкмоль, 1,2 экв.), DIPEA (8,4 мкл, 48,8 мкмоль, 2 экв.) и DIC (3,8 мкл, 38 мкмоль, 1,2 экв.) в смеси NMP/DCM (1/1, 0,3 мл). Через 1 час добавляли дополнительное количество DIC (10 мкл, 100 мкмоль, 3,2 экв.). Через 48 часа смолу промывали ДМФ (3 мл, 5×1 мин) и подвергали полному расщеплению смолы (метод расщепления B) в течение 4 часов. Полученный остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 15 до 45% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (1,42 мг, 0,5 мкмоль, 2,5%). ЖХВР: R_t=4,7 мин. МС: m/z=954,44 ([M+3H]³⁺, рассчитано 954,47). C₁₃₉H₂₂₃N₂₉O₃₅ (ММ=2860,43).

Пример 13: 1206-Glutar-Ttds-Lys(DOTA)-Ttds-GABA-arg-Arg-Pro-Tyr-Tle-Leu-OH (17)

Начальные стадии синтеза соединения осуществляли в соответствии с общими методиками автоматического/полуавтоматического твердофазного синтеза. Использовали предварительно нагруженную Fmoc-Leu-PS смолу (начальная загрузка 0,8 ммоль/г/100 мкмоль). 8 итеративных повторений присоединения (присоединение) и удаления Fmoc (удаление Fmoc-защитных групп) (Fmoc-Tle-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-GABA-OH, Fmoc-Ttds-OH, Dde-Lys(Fmoc)) обеспечивали присоединение к смоле пептида Dde-Lys-Ttds-GABA-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Tyr(tBu)-Tle-Leu. Затем к боковой цепи лизина присоединяли (4 часа) DOTA(tBu)₃-OH ((172 мг, 0,3 ммоль, 3 экв.), напрямую растворенный в растворе HATU (0,75 мл, 3 экв.) и растворе DIPEA (0,7 мл, 6 экв.) для предварительной активации и улучшенной растворимости). Защитную Dde группу удаляли (удаление Dde-защитных групп). К структуре присоединяли Fmoc-Ttds-OH, и группу Fmoc удаляли. Смолу разделяли, и следующие стадии осуществляли с 25 мкмоль смолы, которые подвергали обработке смесью трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (59) (27,4 мг, 30 мкмоль, 1,2 экв.), HOAt (4,2, 30 мкмоль, 1,2 экв.), DIPEA (10,3 мкл, 60 мкмоль, 2,4 экв.) и DIC (6,2 мкл, 40 мкмоль, 1,6 экв.) в смеси ДМФ/DCM (1/1, 0,35 мл), которую добавляли после предварительной активации в течение 5 минут. Через 48 часа смолу промывали ДМФ (3 мл, 5×1 мин) и подвергали полному расщеплению смолы (метод расщепления B) в течение 3 часов. Полученный остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 25 до 45% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (7,45 мг, 2,6 мкмоль, 10,4%). ЖХВР: R_t=4,6 мин. МС: m/z=954,46 ([M+3H]³⁺, рассчитано 954,47). C₁₃₉H₂₂₃N₂₉O₃₅ (ММ=2860,43).

Пример 14: 1206-Glutar-Ttds₃-Lys(DOTA)-Ttds₃-GABA-arg-Arg-Pro-Tyr-Tle-Leu-OH (18)

Начальные стадии синтеза соединения осуществляли в соответствии с общими методиками автоматического/полуавтоматического твердофазного синтеза. Использовали предварительно нагруженную Fmoc-Leu-TG смолу (начальная загрузка 0,24 ммоль/г/100 мкмоль). 10 итеративных повторений присоединения (присоединение) и удаления Fmoc (удаление Fmoc-защитных групп) (Fmoc-Tle-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-GABA-OH, 3× Fmoc-Ttds-OH, Dde-Lys(Fmoc)) обеспечивали присоединение к смоле пептида Dde-Lys-Ttds-Ttds-Ttds-GABA-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Tyr(tBu)-Tle-Leu. Затем к боковой цепи лизина присоединяли (4 часа) DOTA(tBu)₃-OH ((172 мг, 0,3 ммоль, 3 экв.), напрямую растворенный в растворе HATU (0,75 мл, 3 экв.) и растворе DIPEA (0,7 мл, 6 экв.) для предварительной активации и улучшенной растворимости). Защитную Dde группу удаляли (удаление Dde-защитных групп). 3 итеративных повторения присоединения (присоединение) и удаления Fmoc (удаление Fmoc-защитных групп) (3×Fmoc-Ttds-OH) обеспечивали присоединение к смоле пептида H-Ttds-Ttds-Ttds-Lys(DOTA(tBu)₃)-Ttds-Ttds-Ttds-GABA-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Tyr(tBu)-Tle-Leu. Смолу разделяли, и следующие стадии осуществляли с 25 мкмоль смолы (517 мг), которые подвергали обработке смесью трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (59) (27,4 мг, 30 мкмоль, 1,2 экв.), HOAt (4,2, 30 мкмоль, 1,2 экв.), DIPEA (8,6 мкл, 50 мкмоль, 2 экв.) и DIC (4,6 мкл, 30 мкмоль, 1,2 экв.) в смеси NMP/DCM (1/1, 1 мл), которую добавляли после предварительной активации в течение 5 минут. Через 24 часа добавляли дополнительное количество трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (59) (13,74 мг, 10 мкмоль, 0,4 экв.), HOAt (2,0 мг, 10 мкмоль, 0,4 экв.), DIPEA (1,7 мкл, 10 мкмоль, 0,4 экв.) и DIC (4,6 мкл, 30 мкмоль, 1,2 экв.). Через 24 часа смолу промывали ДМФ (3 мл, 5×1 мин) и подвергали полному расщеплению смолы (4 часа). Полученный остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 25 до 45% B за 30 мин, Phenomenex Luna RP-C18 30×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (16,09 мг, 2,6 мкмоль, 10,4%). ЖХВР: R_t=4,7 мин. МС: m/z=1357,78 ([M+3H]³⁺, рассчитано 1357,63). C₁₉₅H₃₂₇N₃₇O₅₅ (ММ=4069,89).

Пример 15: 1206-Glutar-Ttds-Lys(FITC)-Ttds-(ε-Lys-NH₂)-Glutar-1206 (19)

Начальные стадии синтеза соединения осуществляли в соответствии с общими методиками автоматического/полуавтоматического твердофазного синтеза. Амидную смолу Ринка (CM, начальная загрузка 0,52 ммоль/г/50 мкмоль) нагружали Fmoc-Lys(Mtt)-OH (нагрузка смолы), и группу Fmoc у последней удаляли. Три итеративных повторения присоединения (присоединение) и удаления Fmoc (удаление Fmoc-защитных групп) (Fmoc-Ttds-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Ttds-OH) обеспечивали присоединение к смоле пептида H-Ttds-Lys(Boc)-Ttds-Lys(Mtt). Группу Mtt у последнего удаляли (удаление Mtt-защитных групп). Смолу разделяли, и следующие стадии осуществляли с 25 мкмоль смолы, которые подвергали обработке смесью трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (59) (54,8 мг, 60 мкмоль, 2,4 экв.), HOAt (8,2 мг, 60 мкмоль, 2,4 экв.), DIPEA (17,2 мкл, 100 мкмоль, 4 экв.) и DIC (9,2 мкл, 60 мкмоль, 2,4 экв.) в смеси NMP/DCM (1/1, 2 мл), которую добавляли после предварительной активации в течение 5 минут. Через 24 часа смолу промывали ДМФ (3 мл, 5×1 мин) и в течение 4 часов подвергали полному расщеплению смолы (метод расщепления B). Полученный остаток растворяли в ACN (1 мл) и воде (2 мл) и лиофилизовали. Из полученного твердого вещества (38,9 мг, 15 мкмоль, 60%) отбирали 8 мг (3,1 мкмоль) и растворяли в ДМСО (0,2 мл) и объединяли с раствором 5(6)-флуоресцеин изотиоцианата (2,43 мг, 6,2 мкмоль, 2 экв.) в ДМСО (0,1 мл). К смеси добавляли DIPEA (10 мкл, 60 мкмоль, 20 экв.). Через 48 часа опять добавляли 5(6)-флуоресцеин изотиоцианат (2,43 мг, 6,2 мкмоль, 2 экв.) и DIPEA (5 мкл, 30 мкмоль, 10 экв.). Через 1 час раствор подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 25 до 45% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (3,32 мг, 1,1 мкмоль, 36,4%). ЖХВР: R_t=5,8 мин. МС: m/z=983,05 ([M+3H]³⁺, рассчитано 982,85). C₁₅₅H₂₁₄N₂₂O₃₃S (ММ=2945,55).

Пример 16: 1206-Glutar-Ttds-Lys(Таксол-Сукцинил)-Ttds-(ε-Lys-NH₂)-Glutar-1206 (20)

Начальные стадии синтеза соединения осуществляли в соответствии с общими методиками автоматического/полуавтоматического твердофазного синтеза. Амидную смолу Ринка (CM, начальная загрузка 0,52 ммоль/г/50 мкмоль) нагружали Fmoc-Lys(Mtt)-OH (нагрузка смолы), и группу Fmoc у последней удаляли. Три итеративных повторения присоединения (присоединение) и удаления Fmoc (удаление Fmoc-защитных групп) (Fmoc-Ttds-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Ttds-OH) обеспечивали присоединение к смоле пептида H-Ttds-Lys(Boc)-Ttds-Lys(Mtt). Группу Mtt у последнего удаляли (удаление Mtt-защитных групп). Смолу разделяли, и следующие стадии осуществляли с 25 мкмоль смолы. К полученному присоединенному к смоле диамину (25 мкмоль), после предварительной активации в течение 5 минут, добавляли смесь трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (59) (54,8 мг, 60 мкмоль, 2,4 экв.), HOAt (8,2 мг, 60 мкмоль, 2,4 экв.), DIPEA (17,2 мкл, 100 мкмоль, 4 экв.) и DIC (9,2 мкл, 60 мкмоль, 2,4 экв.) в смеси NMP/DCM (1/1, 2 мл). Через 24 часа смолу промывали ДМФ (3 мл, 5×1 мин) и подвергали полному расщеплению смолы (4 часа). Полученный остаток растворяли в ACN (1 мл) и воде (2 мл) и лиофилизовали. Из полученного твердого вещества (38,9 мг, 15 мкмоль, 60%) отбирали 10,7 мг, (4,2 мкмоль) и растворяли в ДМСО (0,2 мл) и смешивали с активным сложным эфиром паклитаксел-гемисукцинил-NHS (88) (получен, как описано в работе Ryppa et al., Int J Pharm, 2009, 368, 89-97) (11,1 мг, 10,5 мкмоль, 2,5 экв.). К раствору добавляли DIPEA (1 мкл, 5 мкмоль, 1,2 экв.). Через 24 часа раствор подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 25 до 45% B за 30 мин, Phenomenex Luna RP-C18 30×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (1,73 мг, 1,1 мкмоль, 36,4%). ЖХВР: R_t=6,1 мин. МС: m/z=1165,24 ([M+3H]³⁺, рассчитано 1165,04). C₁₈₅H₂₅₆N₂₂O₄₄ (ММ=3492,13).

Пример 17: 1206-Glutar-Ttds-Lys(DOTA)-Ttds-GABA-AsN-Ala-Val-Pro-AsN-Leu-Arg-Gly-Asp-Leu-GlN-Val-Leu-Ala-GlN-Lys-Val-Ala-Arg-Thr-NH₂ (21)

Начальные стадии синтеза соединения осуществляли в соответствии с общими методиками автоматического/полуавтоматического твердофазного синтеза. Амидную смолу Ринка (CM, начальная загрузка 0,52 ммоль/г/100 мкмоль) нагружали Fmoc-Thr(tBu))-OH (нагрузка смолы), и группу Fmoc у последней удаляли. Посредством итеративных повторений присоединения (присоединение) и удаления Fmoc (удаление Fmoc-защитных групп) получали присоединенный к смоле пептид Dde-Lys-Ttds-GABA-Asn(Trt)-Ala-Val-Pro-Asn(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Gly-Asp(tBu)-Leu-Gln(Trt)-Val-Leu-Ala-Gln(Trt)-Lys(Boc)-Val-Ala-Arg(Pbf)-Thr(tBu) (SEQ ID №: 24). Затем к N-концевой боковой цепи лизина с удаленной защитой присоединяли (4 часа) DOTA(tBu)₃-OH ((172 мг, 0,3 ммоль, 3 экв.), напрямую растворенный в растворе HATU (0,75 мл, 3 экв.) и растворе DIPEA (0,7 мл, 6 экв.) для предварительной активации и улучшенной растворимости). Стадию присоединения повторяли один раз. Защитную Dde группу удаляли (удаление Dde-защитных групп), и затем к структуре присоединяли Fmoc-Ttds-OH. Группу Fmoc у последнего удаляли. Смолу разделяли, и следующие стадии осуществляли с 25 мкмоль смолы, которые подвергали обработке смесью трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (59) (27,4 мг, 30 мкмоль, 1,2 экв.), HOAt (4,2, 30 мкмоль, 1,2 экв.), DIPEA (10,3 мкл, 60 мкмоль, 2,4 экв.) и DIC (6,2 мкл, 40 мкмоль, 1,6 экв.) в смеси ДМФ/DCM (1/1, 0,35 мл) (после предварительной активации в течение 5 минут). Через 48 часа смолу промывали ДМФ (3 мл, 5×1 мин) и подвергали полному расщеплению смолы (метод расщепления B) в течение 4 часов. Полученный остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 25 до 45% B за 30 мин, Phenomenex Luna RP-C18 30×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (11,62 мг, 2,8 мкмоль, 11,1%). ЖХВР: R_t=4,7 мин. МС: m/z=1402,78 ([M+3H]³⁺, рассчитано 1402,98). C₁₉₄H₃₂₃N₄₉O₅₄ (ММ=4205,94).

Пример 18: Ac-AsN-Ala-Val-Pro-AsN-Leu-Arg-Gly-Asp-Leu-GlN-Val-Leu-Ala-GlN-Lys-Val-Ala-Arg-Thr-Ttds₃-Lys(DOTA)-Ttds₃-(ε-Lys-NH₂)-Glutar-1206 (22)

Начальные стадии синтеза соединения осуществляли в соответствии с общими методиками автоматического/полуавтоматического твердофазного синтеза. Амидную смолу Ринка (CM, начальная загрузка 0,52 ммоль/г/50 мкмоль) нагружали Dde-Lys(Fmoc)-OH (нагрузка смолы), и группу Fmoc у последнего удаляли. Смолу затем обрабатывали смесью трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (59) (58,8 мг, 60 мкмоль, 1,2 экв.), HOAt (8,4, 60 мкмоль, 1,2 экв.), DIPEA (20,5 мкл, 120 мкмоль, 2,4 экв.) и DIC (12,4 мкл, 80 мкмоль, 1,6 экв.) в смеси ДМФ/DCM (1/1, 0,7 мл) (после предварительной активации в течение 5 минут). Через 48 часа смолу промывали ДМФ (3 мл, 5×1 мин) и группу Dde удаляли (удаление Dde-защитных групп). Посредством итеративных повторений присоединения (присоединение) и удаления Fmoc (удаление Fmoc-защитных групп) получали конструкцию связанной смолы и Dde-Lys-Ttds₃-(ε-Lys-NH₂)-Glutar-1206. Затем к боковой цепи лизина присоединяли (4 часа) DOTA(tBu)₃-OH (86 мг, 0,15 ммоль, 3 экв.) напрямую растворенный в растворе HATU (0,4 мл, 3 экв.) и растворе DIPEA (0,4 мл, 6 экв.) для предварительной активации и улучшенной растворимости). Стадию связывания повторяли один раз. Защитную Dde группу удаляли (удаление Dde-защитных групп). После этого осуществляли итеративное повторение присоединения (присоединение) и удаления Fmoc (удаление Fmoc-защитных групп), и стадия концевого ацетилирования (концевое ацетилирование) завершала полную последовательность. Смолу подвергали полному расщеплению смолы (метод расщепления B) в течение 5 часов. Полученный остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 25 до 45% B за 30 мин, Phenomenex Luna RP-C18 30×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (8,77 мг, 1,6 мкмоль, 3,2%). ЖХВР: R_t=4,8 мин. МС: m/z=798,81 ([M+7H]⁷⁺, рассчитано 798,94). C₂₅₈H₄₄₁N₅₉O₇₆ (ММ=5585,61).

Пример 19: Ac-AsN-Ala-Val-Pro-AsN-Leu-Arg-Gly-Asp-Leu-GlN-Val-Leu-Ala-GlN-Lys-Val-Ala-Arg-Thr-Ttds₃-Lys(DOTA)-Ttds₃-(β-Cys-NH₂)-Mic-1206 (23)

Начальные стадии синтеза соединения осуществляли в соответствии с общими методиками автоматического/полуавтоматического твердофазного синтеза. Амидную смолу Ринка (CM, начальная загрузка 0,52 ммоль/г) (100 мкмоль) нагружали Fmoc-Cys(Trt))-OH (нагрузка смолы), и группу Fmoc у последней удаляли. Посредством итеративных повторений присоединения (присоединение) и удаления Fmoc (удаление Fmoc-защитных групп) получали конструкцию связанной смолы и Dde-Lys-Ttds₃-Cys(Trt). Затем к N-концевой боковой цепи лизина с удаленной защитой присоединяли (4 часа) DOTA(tBu)₃-OH ((172 мг, 0,3 ммоль, 3 экв.), напрямую растворенный в растворе HATU (0,75 мл, 3 экв.) и растворе DIPEA (0,7 мл, 6 экв.) для предварительной активации и улучшенной растворимости). Защитную Dde группу удаляли (удаление Dde-защитных групп), и после этого составление последовательности продолжали путем итеративного повторения присоединения (присоединение) и удаления Fmoc (удаление Fmoc-защитных групп). Стадия концевого ацетилирования (концевое ацетилирование) завершала полную конструкцию. Смолу подвергали полному расщеплению смолы (метод расщепления B) в течение 5 часов с помощью смеси ТФУ/EDT/вода/TIPS (94/2,5/2,5/1, 8 мл). Полученный остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 15 до 45% B за 30 мин, Phenomenex Luna RP-C18 30×150 мм) с получением C-концевого цистеин пептида (43,03 мг, 9,1 мкмоль, 9,1%). 26,4 мг последнего (5,6 мкмоль) и 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[4-({3-[(3-{[3-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-пиррол-1-ил)-пропионил]-метил-амино}-пропил)-метил-амино]-пропил}-метил-карбамоил)-2-изопропил-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновую кислоту (57) (5 мг, 5,6 мкмоль, 1 экв.) растворяли в ДМСО (500 мкл). К этой смеси добавляли следовое количество DIPEA до достижения значения pH, равного 7,5. Через 24 часа раствор направляли на очистку с помощью ЖХВР (от 20 до 45% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (3,25 мг, 0,6 мкмоль, 10,7%). ЖХВР: R_t=4,9 мин. МС: m/z=1404,60 ([M+3H]³⁺, рассчитано 1404,91). C₂₅₇H₄₃₅N₅₉O₇₇S (ММ=5615,62).

Пример 20: 1206-Glutar-Ttds₃-AsN-Ala-Val-Pro-AsN-Leu-Arg-Gly-Asp-Leu-GlN-Val-Leu-Ala-GlN-Lys-Val-Ala-Arg-Thr-GABA-Ttds-(ε-Lys-NH₂)-DOTA (24)

Начальные стадии синтеза соединения осуществляли в соответствии с общими методиками автоматического/полуавтоматического твердофазного синтеза. Амидную смолу Ринка (CM, начальная загрузка 0,24 ммоль/г/100 мкмоль) нагружали Dde-Lys(Fmoc)-OH (нагрузка смолы), и группу Fmoc у последней удаляли. Затем к боковой цепи лизина присоединяли (4 часа) DOTA(tBu)₃-OH ((172 мг, 0,3 ммоль, 3 экв.), напрямую растворенный в растворе HATU (0,75 мл, 3 экв.) и растворе DIPEA (0,7 мл, 6 экв.) для предварительной активации и улучшенной растворимости). Защитную Dde группу удаляли (удаление Dde-защитных групп), и после этого составление последовательности продолжали путем итеративного повторения присоединения (присоединение) и удаления Fmoc (удаление Fmoc-защитных групп). Перед окончательным связыванием смолу разделяли, и последующую стадию осуществляли с 25 мкмоль смолы. К смоле (258 мг, 25 мкмоль), после предварительной активации в течение 5 минут, добавляли смесь трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (59) (34,24 мг, 37,2 мкмоль, 1,5 экв.), HOAt (5,1 мг, 37,2 мкмоль, 1,5 экв.), DIPEA (62,5 мкл, 63 мкмоль, 2,5 экв.) и DIC (5,3 мкл, 34,2 мкмоль, 1,5 экв.) в смеси NMP/DCM (1/1, 3 мл). Через 24 часа смолу промывали ДМФ (3 мл, 5×1 мин) и подвергали полному расщеплению смолы (метод расщепления B) в течение 4 часов. Полученный остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 25 до 45% B за 30 мин, Phenomenex Luna RP-C18 30×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (6,66 мг, 2,8 мкмоль, 11,1%). ЖХВР: R_t=4,8 мин. МС: m/z=1203,59 ([M+4H]⁴⁺, рассчитано 1203,67). C₂₂₂H₃₇₅N₅₃O₆₄ (ММ=4810,67).

Пример 21: 1206-Glutar-Ttds-Lys(1206-Glutar-Ttds)-Ttds-AsN-Ala-Val-Pro-AsN-Leu-Arg-Gly-Asp-Leu-GlN-Val-Leu-Ala-GlN-Lys-Val-Ala-Arg-Thr-GABA-Ttds-(ε-Lys-NH₂)-DOTA (25)

Начальные стадии синтеза соединения осуществляли в соответствии с общими методиками автоматического/полуавтоматического твердофазного синтеза. Амидную смолу Ринка (CM, начальная загрузка 0,24 ммоль/г/100 мкмоль) нагружали Dde-Lys(Fmoc)-OH (нагрузка смолы), и группу Fmoc у последней удаляли. Затем к боковой цепи лизина присоединяли (4 часа) DOTA(tBu)₃-OH ((172 мг, 0,3 ммоль, 3 экв.), напрямую растворенный в растворе HATU (0,75 мл, 3 экв.) и растворе DIPEA (0,7 мл, 6 экв.) для предварительной активации и улучшенной растворимости). Защитную Dde группу удаляли (удаление Dde-защитных групп), и после этого составление последовательности продолжали путем итеративного повторения присоединения (присоединение) и удаления Fmoc (удаление Fmoc-защитных групп) с получением связанного со смолой пептида H-Ttds-Asn(Trt)-Ala-Val-Pro-Asn(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Gly-Asp(tBu)-Leu-Gln(Trt)-Val-Leu-Ala-Gln(Trt)-Lys(Boc)-Val-Ala-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Lys(DOTA(tBu)₃). Осуществляли два последующих итеративных повторения присоединения (присоединение) и удаления Fmoc (удаление Fmoc-защитных групп) (Fmoc-Lys(Fmoc)-OH и Fmoc-Ttds-OH (связывание Fmoc-Ttds-OH повторяли два раза, чтобы обеспечить полное ацилирование как α, так и ε амино функциональных групп N-концевого лизина)). Смолу разделяли, и следующие стадии осуществляли с 25 мкмоль смолы. К смоле (267 мг, 25 мкмоль), после предварительной активации в течение 5 минут, добавляли смесь трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (59) (68,48 мг, 75 мкмоль, 3 экв.), HOAt (10,2 мг, 75 мкмоль, 3 экв.), DIPEA (21,8 мкл, 125 мкмоль, 5 экв.) и DIC (10,6 мкл, 75 мкмоль, 3 экв.) в смеси NMP/DCM (1/1, 3 мл). Через 24 часа смолу промывали ДМФ (3 мл, 5×1 мин) и подвергали полному расщеплению смолы (метод расщепления B) в течение 4 часов. Полученный остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 25 до 45% B за 30 мин, Phenomenex Luna RP-C18 30×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (8,12 мг, 1,4 мкмоль, 5,6%). ЖХВР: R_t=5,2 мин. МС: m/z=1445,40 ([M+4H]⁴⁺, рассчитано 1445,47). C₂₇₅H₄₄₉N₆₁O₇₃ (ММ=5777,87).

Пример 22: 1206-Glutar-Ttds-Lys(DOTA)-Ttds-GABA-Lys-Arg-Pro-Hyp-Gly-Cha-Ser-Pro-Leu-OH (26)

Начальные стадии синтеза соединения осуществляли в соответствии с общими методиками автоматического/полуавтоматического твердофазного синтеза. Использовали предварительно нагруженную Fmoc-Leu-TG смолу (начальная загрузка 0,24 ммоль/г/100 мкмоль). 11 итеративных повторений присоединения (присоединение) и удаления Fmoc (удаление Fmoc-защитных групп) (Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Cha-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Hyp(tBu)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-GABA-OH, Fmoc-Ttds-OH, Dde-Lys(Fmoc)) обеспечивали присоединение к смоле пептида Dde-Lys-Ttds-GABA-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Pro-Hyp(tBu)-Gly-Cha-Ser(tBu)-Pro-Leu. Затем к боковой цепи лизина со свободным N-концом присоединяли (4 часа) DOTA(tBu)₃-OH ((172 мг, 0,3 ммоль, 3 экв.), напрямую растворенный в растворе HATU (0,75 мл, 3 экв.) и растворе DIPEA (0,7 мл, 6 экв.) для предварительной активации и улучшенной растворимости). Защитную Dde группу удаляли (удаление Dde-защитных групп). К структуре присоединяли Fmoc-Ttds-OH, и группу Fmoc удаляли. Смолу разделяли, и следующие стадии осуществляли с 25 мкмоль смолы. К смоле (510 мг, 25 мкмоль), после предварительной активации в течение 5 минут, добавляли смесь трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (59) (27,4 мг, 30 мкмоль, 1,2 экв.), HOAt (4,2, 30 мкмоль, 1,2 экв.), DIPEA (8,6 мкл, 50 мкмоль, 2 экв.) и DIC (4,6 мкл, 30 мкмоль, 1,2 экв.) в смеси NMP/DCM (1/1, 1 мл). Через 24 часа добавляли дополнительное количество трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (59) (13,74 мг, 10 мкмоль, 0,4 экв.), HOAt (2,0 мг, 10 мкмоль, 0,4 экв.), DIPEA (1,7 мкл, 10 мкмоль, 0,4 экв.) и DIC (4,6 мкл, 30 мкмоль, 1,2 экв.). Через 24 часа смолу промывали ДМФ (3 мл, 5×1 мин) и подвергали полному расщеплению смолы (метод расщепления B) в течение 4 часов. Полученный остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 25 до 40% B за 30 мин, Phenomenex Luna RP-C18 30×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (14,59 мг, 4,9 мкмоль, 19,6%). ЖХВР: R_t=4,7 мин. МС: m/z=994,10 ([M+3H]³⁺, рассчитано 993,85). C₁₄₄H₂₃₃N₂₉O₃₈ (ММ=2978,56).

Пример 23: 1206-Glutar-Ttds-Lys(DOTA)-Ttds-GABA-OrN-Arg-Oic-Pro-Gly-Amf-Ser-nal-Ile-OH (27)

Начальные стадии синтеза соединения осуществляли в соответствии с общими методиками автоматического/полуавтоматического твердофазного синтеза. Использовали предварительно нагруженную Fmoc-Ile-TG смолу (начальная загрузка 0,26 ммоль/г/100 мкмоль). 11 итеративных повторения присоединения (присоединение) и удаления Fmoc (удаление Fmoc-защитных групп) (Fmoc-nal-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Amf-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Oic-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-GABA-OH, Fmoc-Ttds-OH, Dde-Lys(Fmoc)) обеспечивали присоединение к смоле пептида Dde-Lys-Ttds-GABA-Orn(Boc)-Arg(Pbf)-Oic-Pro-Gly-Amf-Ser(tBu)-(D-2Ni)-Ile. Затем к боковой цепи лизина присоединяли (4 часа) DOTA(tBu)₃-OH ((172 мг, 0,3 ммоль, 3 экв.), напрямую растворенный в растворе HATU (0,75 мл, 3 экв.) и растворе DIPEA (0,7 мл, 6 экв.) для предварительной активации и улучшенной растворимости). Защитную Dde группу удаляли (удаление Dde-защитных групп). К структуре присоединяли Fmoc-Ttds-OH, и группу Fmoc удаляли. Смолу разделяли, и следующие стадии осуществляли с 25 мкмоль смолы. К смоле (543 мг, 25 мкмоль), после предварительной активации в течение 5 минут, добавляли смесь трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (59) (27,4 мг, 30 мкмоль, 1,2 экв.), HOAt (4,2 мг, 30 мкмоль, 1,2 экв.), DIPEA (8,6 мкл, 50 мкмоль, 2 экв.) и DIC (4,6 мкл, 30 мкмоль, 1,2 экв.) в смеси NMP/DCM (1/1, 1 мл). Через 24 часа добавляли дополнительное количество трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (59) (13,74 мг, 10 мкмоль, 0,4 экв.), HOAt (2,0 мг, 10 мкмоль, 0,4 экв.), DIPEA (1,7 мкл, 10 мкмоль, 0,4 экв.) и DIC (4,6 мкл, 30 мкмоль, 1,2 экв.). Через 24 часа смолу промывали ДМФ (3 мл, 5×1 мин) и в течение 4 часов подвергали полному расщеплению смолы (метод расщепления B). Полученный остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 25 до 45% B за 30 мин, Phenomenex Luna RP-C18 30×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (15,28 мг, 4,9 мкмоль, 19,6%). ЖХВР: R_t=5,3 мин. МС: m/z=1038,1 ([M+3H]³⁺, рассчитано 1037,91). C₁₅₆H₂₃₇N₂₉O₃₇ (ММ=3110,72).

Пример 24: 1206-Ttds-Biotin (28)

Начальные стадии синтеза соединения осуществляли в соответствии с общими методиками автоматического/полуавтоматического твердофазного синтеза. Тритильную смолу (PS, 100 мкмоль) нагружали Fmoc-Ttds-OH (нагрузка смолы), и группу Fmoc у последней удаляли (удаление Fmoc-защитных групп). К смоле присоединяли биотин, и после этого смолу подвергали полному расщеплению смолы (метод расщепления B) в течение 10 минут. Полученный остаток растворяли в ACN (10 мл) и воде (15 мл) и лиофилизовали с получением 44 мг сырого продукта. Раствор последнего (20 мг, 36,6 мкмоль, 1 экв.) в ДМФ (200 мкл) и раствор трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (59) (29,3 мг, 36,6 мкмоль, 1,0 экв.) в ДМФ (500 мкл) объединяли. После добавления к смеси HOAt (5,5 мг, 40,3 мкмоль, 1,1 экв.), DIPEA (12,7 мкл, 73,2 мкмоль, 2 экв.) и DIC (6,2 мкл, 45 мкмоль, 1,1 экв.), ее перемешивали в течение 24 часов. Все летучие вещества удаляли в вакууме. После обработки остатка смесью TIPS (50 мкл) и ТФУ (750 мкл) в течение 10 минут раствор направляли на очистку с помощью ЖХВР (от 25 до 45% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (20,45 мг, 16,1 мкмоль, 43,9%). ЖХВР: R_t=5,2 мин. МС: m/z=1271,56 ([M+H]⁺, рассчитано 1271,70). C₆₆H₉₈N₁₀O₁₃S (ММ=1271,61).

Пример 25: Конъюгация (60) с MAB1909 и MAB3035

Активированные NHS-сложным эфиром соединения широко используются для ковалентного конъюгирования таких соединений с белками (Bioconjugate Techniques, 2008, Academic Press). Активированные NHS-сложным эфиром соединения взаимодействуют с первичными аминами (N-концевая и ε-амино группа лизина) в условиях от физиологических до слегка щелочных (pH от 7,2 до 9) с получением стабильных амидных связей. Реакция высвобождает N-гидроксисукцинимид (NHS).

Реакцию конъюгации осуществляли в общем объеме равном 104 мкл при комнатной температуре. Соединение (60) растворяли в ДМСО с получением 1 мМ раствора. 4 мкл (4 нмоль) этого раствора добавляли к 100 мкл PBS, содержащего 667 пмоль антитела (MAB1909 или MAB3035). Реакционную смесь инкубировали 1 ч при легком перемешивании при комнатной температуре. Реакцию останавливали путем добавления 5 мкл 1 M глицина при pH 7. Конъюгат очищали с помощью повторного диализа (мембрана MWCO 20 КДа).

Пример 25: Анализ на связывание радиолиганда NTR1

Для определения аффинности связывания соединений, содержащих радиоактивную метку для NTR1, был проведен анализ на связывание радиолиганда. Радиолиганд представляет собой радиоактивное биохимическое вещество, которое используется для диагностики или для проведения исследований при изучении систем клеточных рецепторов организма. В системах in vivo он часто используется для количественного определения связывания исследуемой молекулы с сайтом связывания радиолиганда. Чем выше аффинность молекулы, тем больше радиолигандов вытесняется из сайтов связывания. Количество связанного радиолиганда может быть измерено с помощью сцинтилляционного счетчика и, таким образом, количественно определено. Этот анализ обычно используется для расчета константы связывания молекул с рецепторами. В этом примере показано, что конъюгаты по настоящему изобретению связываются с NTR1 с высокой аффинностью.

Анализ на связывание радиолиганда NTR1 проводили с помощью Cerep (Celle l'Evescault, Франция; номер в каталоге 0109) в соответствии с Vita et al., FEBS Lett., 1993, 317, 139-142. NTR1 получали из клеток СНО, экспрессирующих рекомбинантный рецептор человека, и инкубировали с 0,05 нМ ¹²⁵I-(Tyr3-нейротензин) и серийными разведениями исследуемых соединений. Через 60 мин инкубации при 4°С и промывки, для удаления несвязавшегося нейротензина, связанную радиоактивность измеряли с помощью сцинтилляционного счетчика. Результат для каждого исследуемого соединения выражали как концентрацию IC50 и определяли меру аффинности исследуемого соединения для NTR1.

Результаты этого анализа, проведенного на некоторых конъюгатах по настоящему изобретению, приведены в нижеследующей таблице 5.

Таблица 5: Результаты анализа на связывание радиолиганда

Соединение	IC50 [нМ]
(12)	2,5
(13)	2,2
(14)	2,4
(15)	4,7
(16)	0,14
(17)	0,32
(18)	2,7
(21)	10
(22)	9,1
(23)	6,7
(24)	9,9
(25)	7,5
(26)	6,5
(27)	17
(28)	1,2

Пример 26: Анализ на связывание радиолиганда B1R

Для определения аффинности связывания соединений, содержащих радиоактивную метку для B1R, был проведен анализ на связывание радиолиганда. Радиолиганд представляет собой радиоактивное биохимическое вещество, которое используется для диагностики или для проведения исследований при изучении систем клеточных рецепторов организма. В системах in vivo он часто используется для количественного определения связывания исследуемой молекулы с сайтом связывания радиолиганда. Чем выше аффинность молекулы, тем больше радиолигандов вытесняется из сайтов связывания. Количество связанного радиолиганда может быть измерено с помощью сцинтилляционного счетчика и, таким образом, количественно определено. Этот анализ обычно используется для расчета константы связывания молекул с рецепторами. В этом примере показано, что соединения по настоящему изобретению связываются с B1R с высокой аффинностью.

Анализ на связывания радиолиганда B1R проводили с помощью Cerep (Celle l'Evescault, Франция, номер в каталоге 1189) в соответствии с (Jonesetal.,EurJPharmacol,1999,374,423-433). B1R получали из клеток СНО, экспрессирующих рекомбинантный рецептор человека, и инкубировали с 0,35 нМ ³H-(desArg¹⁰-KD и серийными разведениями исследуемых соединений. Через 60 мин инкубации при 4°С и промывки, для удаления несвязавшегося лиганда, связанную радиоактивность измеряли с помощью сцинтилляционного счетчика. Результат для каждого исследуемого соединения выражали как процент ингибирования радиоактивности при связывании с 100 нМ концентрацией соединения и определяли меру аффинности исследуемого соединения для B1R.

Результаты этого анализа, проведенного на некоторых конъюгатах по настоящему изобретению, приведены в нижеследующей таблице 6.

Таблица 6: Результаты анализа на связывание радиолиганда.

Соединение	Ингибирование [при 100 нМ, %]
(26)	20
(27)	17

Пример 27: Функциональный анализ мобилизации Са²⁺

В цитозоле клеток ионы Ca²⁺, как правило, поддерживаются на наномолярном уровне и действуют в ряде путей передачи сигнала в качестве вторичных мессенджеров. Многие GPCR, в том числе рецептор нейротензина, образуют пары для индукции передачи сигналов с ионами кальция, и во многих анализах первичных клеточных культур используется определение концентрации внутриклеточных ионов кальция в качестве функциональных данных об активации GPCR. Изменение концентрации ионов кальция можно легко обнаружить стандартными протоколами анализа с помощью флуоресцентных красителей, которые излучают свет, когда происходит изменение концентрации внутриклеточных ионов Ca²⁺. Учитывая кратковременную природу этих ответов, их часто считывают измерительными приборами с возможностью «впрыска и индикации». Этот пример показывает, что соединения по настоящему изобретению не обладают какой-либо агонистической активностью в отношении NTR1-экспрессирующих клеток. Кроме того, этот пример показывает, что конъюгаты по настоящему изобретению связываются с NTR1 и ингибируют активность дополнительно присутствующего агониста NTR1.

Клетки HEK293, экспрессирующие HT29 или NTR1, обрабатывали трипсином и высевали в черные плоские 96-луночные планшеты с прозрачным дном (Corning, Амстердам, Нидерланды) в количестве 6×10⁵ клеток на лунку. Через 24 часа инкубации при температуре 37°С и при 5% CO₂ клетки дважды промывали буфером для промывки (130 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 10 мМ HEPES, 2 мМ CaCl₂, 10 мМ глюкозы, рН 7,4) и нагружали 100 мкл красителем Са5 (Molecular Devices, Биберах, Германия) в течение 1 ч при температуре 37°С и при 5% СО₂. Для анализа агонистов серийные разведения веществ-агонистов добавляли к клеткам, нагруженным красителем, и непрерывно в течение приблизительно 90 с регистрировали изменение флуоресцентного сигнала, используя FlexStation II (Molecular Devices, Биберах, Германия). Добавление буфера для промывки служило контролем. Таким образом вычисляли концентрации ЕС50 для каждого конъюгата и получали меру эффективности вещества. Для анализа антагонистов клетки, нагруженные 100 мкл красителем Са5, предварительно инкубировали с серийными разведениями веществ-антагонистов в течение 30 мин перед добавлением ЕС80-концентрации агониста к клеткам, и непрерывно в течение приблизительно 90 сек регистрировали изменение флуоресцентного сигнала. Таким образом вычисляли концентрации IC50 для каждого конъюгата и получали меру ингибирующей активности конъюгатов для NTR1.

Помехой для флуоресценции красителя Ca5 служила собственная флуоресценция конъюгата, содержащего флуоресцеин (19). Поэтому, для этого конъюгата не могли быть определены значения IC50 или EC50.

Для конъюгатов, сочетающих высокую активность агониста и антагониста NTR1 в одном конъюгате (например, (16) и (17)), показаны колоколообразные кривые ЕС50. Это подтверждает, что у конъюгата активны как свойства агониста, так и антагониста. ЕС50 определяли, используя восходящую часть кривой (фиг.2).

Результаты этого анализа, проведенного на некоторых конъюгатах по настоящему изобретению, приведены в нижеследующей таблице 7.

Таблица 7: Результаты функционального анализа мобилизации Са2+

Соединение	Антагонистический эффект IC50 [нМ]	Агонистический эффект EC50 [нМ]
(12)	2,5	>50000
(13)	6,1	>50000
(14)	2,3	>50000
(15)	2,3	>50000
(16)	3,8	4*
(17)	3,4	7*
(18)	3,8	>50000
(19)	н.о.	н.о.
(20)	32	>50000
(21)	18	>50000
(22)	21	>50000
(23)	15	>50000
(24)	38	>50000
(25)	12	>50000
(30)	1,0	>50000
(29)	3,3	>50000
(26)	38	>50000
(27)	19	>50000
(28)	10	>50000

*колоколообразные кривые

Пример 28: Анализ на конкурентное связывание αvβ6-интегрина

Латентно-ассоциированный пептид (LAP) трансформации TGF β1 представляет собой природный лиганд αvβ6 интегрина. Для определения IC50 тех конъюгатов, которые конкретно связываются с αvβ6-интегрином, микротитровальные планшеты покрывали LAP. Связывание αvβ6-интегрина с планшетами, покрытыми LAP, в присутствии конкурирующих конъюгатов обнаруживали вместе с антителом против αvβ6-интегрина.

Планшеты с девяноста шестью лунками MaxSorb (Nunc) покрывали 50 мкл/лунка 0,3 мкг/мл LAP (R&D Systems, номер в каталоге 246-LP) в буфере для покрытия (15 мМ Na₂CO₃, 35 мМ NaHCO₃, pН 9,6) в течение ночи. Планшеты три раза промывали буфером для промывки (150 мМ NaCl, 1 мМ CaCl₂, 1 мМ MgCl₂, 0,1% BSA, 25 мМ Tris, рН 7,5) и блокировали 100 мкл/лунка блокирующим буфером (3% BSA, 0,1% Tween 20 в PBS) в течение не менее 1 часа. Затем планшеты три раза промывали буфером для промывки. В буфере для промывки готовили серийные 1/3 разведения соединений. Затем 25 мкл каждого разведения, 25 мкл буфера для промывки и 25 мкл αvβ6-интегрина (R & D Systems, номер в каталоге 3817-AV, 1,5 мкг/мл в буфере для промывки) помещали в каждую лунку планшета для микротирования, покрытую LAP и блокированную. Планшет инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре и три раза промывали буфером для промывки, а затем добавляли 50 мкл/лунка антитела против αvβ6-интегрина (Merck Millipore, номер в каталоге MAB1978, 1:1000 в буфере для промывки). Планшет снова инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре и три раза промывали буфером для промывки, а затем добавляли 50 мкл/лунка вторичного HRP-меченного антитела против IgG мыши (Sigma, номер в каталоге А-5906, разведение 1:2000 в буфере для промывки). Планшет инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре и три раза промывали буфером для промывки. Затем наносили 50 мкл/лунка раствора ТМВ (Seramun Diagnostica GmbH), и последующую хромогенную трансформацию TMB под действием HRP определяли с помощью фотометрических измерений. Результаты этого анализа, проведенного на некоторых конъюгатах по настоящему изобретению, приведены в нижеследующей таблице 8.

Таблица 8: Результаты анализа на конкурентное связывание αvβ6-интегрина

Соединение	IC50 [нМ]
(21)	120
(22)	130
(23)	59
(24)	130
(25)	270

Пример 29: Анализ цитотоксичности

Для того чтобы определить силу цитотоксического эффектора в конъюгате (20), цитотоксичность паклитакселя сравнивали с цитотоксичностью конъюгата (20), используя коммерческий анализ цитотоксичности.

Анализ цитотоксичности (Roche, Cytotoxicity Detection LDH, набор, номер в каталоге 11644793001) основан на измерении активности цитоплазматических ферментов, освобожденных из разрушенных клеток. Было описано несколько анализов высвобожденных ферментов (например, для щелочной и кислой фосфатазы); однако многие из этих анализов затруднены из-за (i) низкого содержания эндогенного фермента, присутствующего во многих типах клеток, и (ii) cложных кинетических анализов, необходимых для количественного определения активности ферментов. В противоположность этому, лактатдегидрогеназа (ЛДГ) является стабильным цитоплазматическим ферментом, который присутствует во всех клетках. ЛДГ быстро высвобождается в клеточно-культуральный супернатант при разрушении плазматической мембраны. Культуральный супернатант собирали, и из него удаляли клетки. Бесклеточный супернатант инкубировали с субстратной смесью из набора. Активность ЛДГ определяли в реакции с иммобилизированным ферментом; в ходе этой реакции соль тетразолия INT восстанавливается до формазана. Этот краситель формазана легко проанализировать, так как он является водорастворимым и имеет широкий максимум поглощения при примерно 500 нм. В ходе анализа активность фермента ЛДГ в культуральном супернатанте возрастает при росте числа погибших клеток (или клеток с поврежденной плазматической мембраной). Увеличение активности ЛДГ в супернатанте напрямую коррелирует с количеством формазана, образовавшегося в течение времени.

Анализ проводили в соответствии с инструкциями изготовителей. Вкратце, клетки НТ29 обрабатывали трипсином и высевали в 96-луночные планшеты в количестве от 4000 до 10000 клеток на лунку. Через 20 часов инкубации при температуре 37°С и при 5% CO₂ к клеткам добавляли конъюгаты. Конечная концентрация ДМСО не превышала 0,7%. Клетки инкубировали в течение 48 ч при температуре 37°С и при 5% CO₂, а затем собирали супернатант клеточной культуры и начинали анализ ЛДГ. Супернатант из клеток, обработанных только 0,7% ДМСО, служил в качестве отрицательного контроля, который соответствует 0% цитотоксичности. Супернатант из клеток, обработанных только 0,7% ДМСО, которые лизировали, используя 2% Triton-Х100, служил в качестве положительного контроля, который соответствует 100% цитотоксичности. Концентрация соединения, которая вызывала 20%-ную цитотоксичность некоторых конъюгатов по изобретению, приведена в таблице 9.

Таблица 9: Результаты анализа цитотоксичности

Соединение	Концентрация [мкМ] при 20% цитотоксичности
Паклитаксель	70
(20)	18

Пример 30: Анализ титрования антитела

Для определения активности связывания MAB1909, (29), MAB3035 и (30) эти антитела и конъюгаты антител титровали на покрытых антигеном микротитрационных планшетах.

MAB1909 и (29):

Планшеты с девяноста шестью лунками PolySorb (Nunc) покрывали 50 мкл 10 мкг/мл рекомбинатным тенасцином, содержащим домен фибронектина 5, A1, A2, A3, A4, B, C и D (Trenzyme, Project № 1678) в буфере для покрытия (15 мM Na₂CO₃, 35 мM NaHCO₃, pH 9,6) в течение 2 ч при комнатной температуре. Планшеты три раза промывали буфером для промывки (PBS с 0,1% Tween 20) и блокировали 100 мкл/лунка блокирующим буфером (10% FCS, 0,1% Tween 20 в PBS) в течение не менее 1 часа. Затем планшеты три раза промывали буфером для промывки. В буфере для промывки готовили серийный разведения 1/2 MAB1909 или (29). Затем 50 мкл/лунку каждого разведения помещали в планшет для микротитрования, покрытый тенасцином и блокированный. Планшет инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре и три раза промывали буфером для промывки, а затем добавляли 50 мкл/лунка HRP-меченного антитела против IgG мыши (Sigma, номер в каталоге А-5906, разведение 1:2000 в буфере для промывки). Планшет инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре и три раза промывали буфером для промывки. Затем наносили 50 мкл/лунка раствора ТМВ (Seramun Diagnostica GmbH), и последующую хромогенную трансформацию TMB под действием HRP определяли с помощью фотометрических измерений. Кривые титрования выбранных конъюгатов приведены на фиг.3.

MAB3035 и (30):

Планшеты с девяноста шестью лунками PolySorb (Nunc) покрывали 50 мкл 1,25 мкг/мл рекомбинатным EphA2 (Celonic, номер в каталоге: 13926-H20B1) в буфере для покрытия (15 мM Na₂CO₃, 35 мM NaHCO₃, pH 9,6) в течение 2 ч при комнатной температуре. Планшеты три раза промывали буфером для промывки (25 мМ HEPES, 175 мМ NaCl, 5 мМ CaCl₂, 0,1% Tween 80) и блокировали 100 мкл/лунка блокирующим буфером (25 мМ HEPES, 175 мМ NaCl, 5 мМ CaCl2, 0,1% Tween 80, 2% бактериально-дрожжевой экстракт, 3% BSA) в течение не менее 1 часа. Затем планшеты три раза промывали буфером для промывки. В буфере для промывки готовили серийные разведения MAB3035 или (30). Затем 50 мкл/лунку каждого разведения помещали в планшет для микротитрования, покрытый EphA2 и блокированный. Планшет инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре и три раза промывали буфером для промывки, а затем добавляли 50 мкл/лунка HRP-меченного антитела против IgG мыши (Sigma, номер в каталоге А-5906, разведение 1:2000 в буфере для промывки). Планшет инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре и три раза промывали буфером для промывки. Затем наносили 50 мкл/лунка раствора ТМВ (Seramun Diagnostica GmbH), и последующую хромогенную трансформацию TMB под действием HRP определяли с помощью фотометрических измерений. Кривые титрования выбранных конъюгатов приведены на фиг.4.

Как можно видеть на фиг.3 и 4, характеристики связывания конъюгата по изобретению, содержащего в качестве первой адресующей части соединение формулы (1) и в качестве второй адресующей части указанный фрагмент антитела, не отличались от характеристик связывания указанного фрагмента антитела, когда указанный фрагмент антитела использовали самостоятельно, то есть без конъюгирования с первой адресующей частью.

Пример 31: ¹¹¹In-мечение некоторых соединений

Для того, чтобы служить в качестве диагностически или терапевтически активного агента, соединение должно быть меченным радиоактивным изотопом. Способ мечения должен быть целесообразным, чтобы обеспечить высокий радиохимический выход и чистоту радиоактивно меченого соединения по настоящему изобретению. В этом примере показано, что соединения по настоящему изобретению являются подходящими для радиомечения и могут быть мечены с высоким радиохимическим выходом и чистотой.

1,6 нмоль соединений формулы (IIIa), (13), (15), (18) и (22) растворяли в буфере (1 М ацетат аммония, рН 5) и смешивали с 50 МБк ¹¹¹In (растворенного в 0,04 М HCl). Смесь нагревали до температуры 70-95°C в течение от 10 до 20 мин. После охлаждения мечение анализировали с помощью ВЭЖХ. При ВЭЖХ меченный раствор анализировали с помощью колонки Phenomenex Kinetex С18. Градиент: MeCN, 0,1% ТФУ, градиент B: H₂O, 0,1% ТФУ, скорость потока 0,8 мл/мин; детектор: NaI (Raytest), DAD 254 нм. Время удерживания меченого продукта: 9,5-9,9 мин.

Радиохимический выход составлял ≥90%, радиохимическая чистота была ≥85%, удельная активность составляла: 30 МБк/нмоль.

Пример 32: Исследование визуализации и биораспределения

Радиоактивно меченные соединения могут быть определены методами визуализации, такими как ОФЭКТ и ПЭТ. Кроме того, данные, полученные с помощью таких методов, могут быть подтверждены прямым измерением радиоактивности, содержащейся в отдельных органах, полученным от животного, которому было введено радиоактивно меченное соединение по изобретению. Таким образом, биораспределение радиоактивно меченного соединения может быть определено и проанализировано. Этот пример показывает, что соединения по настоящему изобретению демонстрируют биораспределение, подходящее для диагностической визуализации и терапевтического лечения опухолей.

Все эксперименты на животных были проведены в соответствии с законами Германии о защите животных. Самки голых мышей SWISS (Crl:NU(Ico)-Foxn1nu; Charles River, Зульцфельд, Германия) были инокулированы 1×10⁷ клетками HT-29 в правый бок через 24-72 часа после облучения всего тела γ источником (2 Gy, ⁶⁰Co, BioMep, Бретеньер, Франция). Когда опухоли стали видны (спустя 14-21 дней), мышам, получившим 5-10 МБк ¹¹¹In-мечение, внутривенно через хвостовую вену вводили (IIIa), (13), (15), (18) или (22). Изображения получали на системе NanoSPECT/CT (Bioscan Ltd., Вашингтон, США). Сочетание данных ОФЭКТ и КТ осуществляли проводили программным обеспечением OsiriX Imaging Software.

Результаты исследований визуализации для некоторых соединений показаны на фиг.14 A и B. Как можно видеть на фиг.14 A и В, конъюгаты по настоящему изобретению, содержащие в качестве первой адресующую части соединение формулы (4), а также в качестве второй адресующей части (B-E) накапливаются в экспрессирующих NTR1 опухолях образом, сравнимым с соединением, содержащим только первую адресующую часть (A).

II ЧАСТЬ ПРИМЕРОВ

Аббревиатуры и сокращения, используемые в настоящей заявке и, в частности, в последующих примерах, являются следующими:

5-HT означает 5-гидрокситриптамин

5-HT1A означает 5-гидрокситриптаминовый рецептор 1A

5-HT1B означает 5-гидрокситриптаминовый рецептор 1B

5-HT2A означает 5-гидрокситриптаминовый рецептор 2A

5-HT2B означает 5-гидрокситриптаминовый рецептор 2B

5-HT-3 означает 5-гидрокситриптаминовый канал 3

5-HT5a означает 5-гидрокситриптаминовый рецептор 5a

5-HT6 означает 5-гидрокситриптаминовый рецептор 6

5-HT7 означает 5-гидрокситриптаминовый рецептор 7

% ID/г означает процент инъектируемой дозы на грамм

A1 означает аденозиновый рецептор 1

A2A означает аденозиновый рецептор 2A

A3 означает аденозиновый рецептор 3

альфа1 означает альфа1 адренергический рецептор

альфа2 означает альфа2 адренергический рецептор

ACN означает ацетонитрил

Ahx означает 6-аминогексановую кислоту

а.е.м. означает атомную единицу массы

водн. означает водный

AT1 означает ангиотензиновый рецептор 1

B2 означает брадикининовый рецептор 2

бета1 означает бета1 адренергический рецептор

бета2 означает бета2 адренергический рецептор

BSA означает альбумин бычьей сыворотки

BZD означает бензодиазепин

CB1 означает каннабиоидный рецептор 1

CCK1 означает холецистокининовый рецептор 1

CCR1 означает C-C хемокиновый рецептор типа 1

CHO означает яичник китайского хомячка

КТ означает компьютерную томографию

CXCR2 означает C-X-C хемокиновый рецептор типа 2

D1 означает допаминовый рецептор 1

D2S означает допаминовый рецептор 2S

DCM означает дихлорметан

дельта2 означает дельта2 опиоидный рецептор

DFO означает N'-{5-[ацетил(гидрокси)амино]пентил}-N-[5-({4-[(5-аминопентил)(гидрокси)амино]-4-оксобутаноил}амино)пентил]-N-гидроксисукцинамид

DIC означает N,N'-диизопропилкарбодиимид

DIPEA означает диизопропилэтиламин

DOTA означает 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусную кислоту

DOTA(tBu)₃-OH означает три-трет-бутил-1,4,7,10-тетраазацикло-додекан-1,4,7,10-тетраацетат

ДМФ означает N,N-диметилформамид

EC50 означает полумаксимальную концентрацию возбуждения

EP4 означает простагландиновый рецептор типа 4

ETA означает эндотелиновый рецептор A

Et₂O означает диэтиловый эфир

EtOAc означает этилацетат

Fmoc означает 9-флуоренилметоксикарбонил

GABA означает гамма-аминобутановую кислоту

GAL2 означает галаниновый рецептор 2

GPCR означает G-белок-связанный рецептор

ч означает час(ы)

H1 означает гистаминовый рецептор 1

H2 означает гистаминовый рецептор 2

HATU означает O-(7-азабензотриазол-1-ил)-N,N,N′,N′-тетраметилурония гексафторфосфат

HOAc означает уксусную кислоту

HOAt означает 1-гидрокси-7-азабензотриазол

ЖХВР означает жидкостную хроматографию высокого разрешения

IC50 означает концентрацию полумаксимального ингибирования

kappa означает опиоидный каппа-рецептор

ЖХ-МС означает жидкостную хроматографию с масс-спектрометрией

LiOH означает гидроксид лития

M1 означает мускариновый рецептор 1

M2 означает мускариновый рецептор 2

M3 означает мускариновый рецептор 3

макс. означает максимум

MC4 означает меланокортиновый рецептор 4

MeOH означает метанол

мин означает минуту(ы)

MT1 означает мелатониновый рецептор 1

MTBE означает метил-трет-бутиловый эфир

mu означает mu-опиоидный рецептор

NaHCO₃ означает гидрокарбонат натрия

NaCl означает хлорид натрия

Na₂SO₄ означает сульфат натрия

н.о. означает «не определено»

NK2 означает нейрокининовый рецептор 2

NK3 означает нейрокининовый рецептор 3

NMP означает 1-метил-2-пирролидон

NODAGA означает 1,4,7-триазациклононан-1-глутаровую кислоту-4,7-уксусную кислоту

NOP означает ноцицепторный рецептор

NT означает нейротензин

NTR1 означает рецептор нейротензина 1

ПЭТ означает позитронно-эмиссионную томографию

преп. означает препаративный

PyBOP означает бензотриазол-1-ил-окси-трис-пирролидино-фосфония гексафторфосфат

RLB означает анализ связывания радиолиганда

RP означает обращенную фазу

RT означает комнатную температуру

R_t означает время удерживания

насыщ. означает «насыщенный»

ОФЭКТ означает однофотонную эмиссионную компьютерную томографию

sst означает соматостатиновый рецептор

tBu означает трет-бутил

ТФУ означает трифторацетат или трифторуксусную кислоту

TIPS означает триизопропилсилан

ТСХ означает тонкослойную хроматографию

Ttds означает N-(3-{2-[2-(3-амино-пропокси)-этокси]-этокси}-пропил)-сукцинамовую кислоту

VPAC1 означает рецептор вазоактивного кишечного полипептида 1

Y1 означает рецептор 1 нейропептида Y

Y2 означает рецептор 2 нейропептида Y

при использовании в структурных формулах или фигурах обозначает функционализированный твердый материал (смола твердофазного синтеза)

Пример 1: Материалы и способы

Материалы и способы, а также общие способы дополнительно проиллюстрированы следующими примерами.

Растворители:

Растворители указанного качества использовались без дополнительной очистки. Ацетонитрил (градиентная чистота, Sigma-Aldrich); дихлорметан (AnalaR Normapur, VWR); этилацетат (химически чистый реактив, Fisher Scientific); N,N-диметилформамид (степень чистоты для пептидного синтеза, Biosolve); 1-метил-2-пирролидон (биотех. чистоты, Sigma-Aldrich) 1,4-диоксан (Emplura, Merck); метанол (ч.д.а., Merck).

Вода:

Milli-Q Plus, Millipore, деминерализованная.

Химические реагенты:

Химические реагенты были синтезированы в соответствии или по аналогии с литературными методиками или приобретены у компаний Sigma-Aldrich-Fluka (Дизенхофен, Германия), Bachem (Бубендорф, Швейцария), VWR (Дармштадт, Германия), Polypeptide (Страсбург, Франция), Novabiochem (Merck Group, Дармштадт, Германия), Acros Organics (дистрибьюторская компания Fisher Scientific GmbH, Шверте, Германия), Iris Biotech (Марктредвиц, Германия), Amatek Chemical (Цзянсу, Китай), Roth (Карлсруэ, Германия), Molecular Devices (Чикаго, США), Biochrom (Берлин, Германия), Peptech (Кембридж, Массачусетс, США), Synthetech (Олбани, Орегон, США), Pharmacore (Хай-Пойнт, Северная Каролина, США) и Anaspec (Сан-Хосе, Калифорния, США) или у других компаний и использовались по назначению без дополнительной очистки.

¹⁷⁷Lu-[NT(8-13)-Tle¹²] представляет собой DOTA-D-Lys-Ttds-Arg⁸-Arg⁹-Pro¹⁰-Tyr^11-Tle¹²-Leu¹³-OH, и он был синтезирован в соответствии со стандартным методом синтеза Fmoc-твердофазного-пептида, как описано в данной ссылке («Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis» Editors W. Chan, P. White, Oxford University Press, USA, 2000), Fmoc-Ttds-OH является коммерчески доступным от компании Polypeptide (Страсбург, Франция).

SR-142948 представляет собой (2-[(5-(2,6-диметокси-фенил)-1-{4-[(3-диметиламино-пропил)-метил-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-1H-пиразол-3-карбонил)-амино]-адамантан-2-карбоновую кислоту, >97%) и был приобретен у компании Tocris Bioscience (Бристоль, Великобритания).

Метиловый эфир 1-(4-карбокси-2-изопропил-фенил)-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (X) получали в соответствии с литературными методиками, как описано в US 5723483.

Клетки:

Клетки HT29 (номер по каталогу № 91072201) были приобретены у ECACC (Европейская коллекция клеточных культур) и Capan-1 (номер по каталогу № HTB-79) у ATCC (American Type Culture Collection). Клетки HEK293, экспрессирующие человеческий, мышиный и крысиный NTR1, были произведены в компании Trenzyme (Констанц, Германия). Клетки были стабильно трансфицированы с использованием системы экспрессирования, кодированной плазмидным вектором pExoIN2 (смотри фиг.5) и содержащей меченную эпитопом гемагглютинина (HA) пиромицин N-ацетилтрансферазу, слитую с N-концом убиквитина, который, в свою очередь, слит с N-концом NTR1. Такая система обеспечивает эффективную экспрессию трансфицированного белка. Создание стабильных клеточных линий и вектора pExoIN описаны Matentzoglu et al., BioTechniques, 2009, 46, 21-28.

Пластиковая лабораторная посуда для биохимических и клеточных анализов была приобретена у компании VWR (Дармштадт, Германия).

Концентрации указаны в виде объемных процентов, если не указано иного.

Анализ ЖХВР/МС осуществляли путем введения 5 мкл раствора образца, используя 2 стадийный градиент для всех хроматограмм (5-50% B в течение 5 мин, затем 50-100% B в течение 2 мин, A: 0,05% ТФУ в воде и B: 0,05% ТФУ в ACN). RP колонки были приобретены у компании Phenomenex (Type Luna C-18, 3 мкМ, 50×2,00 мм, поток 0,5 мл, ЖХВР при комнатной температуре); масс спектрометр: Thermo Finnigan Advantage и/или LCQ Classic (оба ионные ловушки), ионизатор ESI, в качестве действующего в ионной ловушке газа служил гелий. Для программного обеспечения использовали Excalibur, версия 1.4. УФ-детектирование проводили при λ=230 нм. Время удерживания (R_t) указано в десятичной системе (например, 1,9 мин=1 мин 54 сек) и относится к определению с помощью масс спектрометра. Мертвое время между введением и УФ-детектированием (ЖХВР) составляло 0,45 мин, и на хроматограмме задержка между УФ-детектированием и масс-детектированием корректировалась. Точность масс-спектрометра составляла прибл. ± 0,5 а.е.м.

Препаративная ЖХВР:

Разделение с помощью препаративной ЖХВР проводили с использованием колонок и градиентов, описанных в конкретных примерах. Для создания градиента были использованы следующие растворители:

A: 0,05% ТФУ в H₂O

B: 0,05% ТФУ в ACN

При всех разделениях использовали линейный бинарный градиент. Например, если градиент описывается как: «от 20 до 60% B за 30 мин», это означает линейный градиент от 20% B (и 80% A) до 60% B (и 40% A) в течение 30 мин. Скорость потока зависит от размера колонки: для колонки диаметром 25 мм она составляла 30 мл/мин, и для колонки диаметром 50 мм она составляла 60 мл/мин, соответственно.

Названия соединениям были даны с использованием AutoNom, версии 2.2 (Beilstein Informationssysteme Copyright© 1988-1998, Beilstein Institut für Literatur der Organischen Chemie licensed to Beilstein Chemiedaten and Software GmbH). Предпочтительно, чтобы избежать излишне сложных названий, в случае хелатор-содержащего соединения хелатор обозначается его общепринятой аббревиатурой, а не полным систематическим названием. В случае соединений, содержащих замещенную форму хелатора, предпочтительно, используется соответствующая аббревиатура хелатора вместе с указанием в скобках названий и числа защитных групп. Например, если хелатор представляет собой DOTA, аббревиатура DOTA- или DOTA(tBu)₃- в названии молекулы означает, что фрагмент DOTA или его трижды трет-бутил замещенная форма ковалентно присоединены в указанном положении молекулы с помощью одной из его групп карбоновой кислоты. В большинстве случаев для присоединения хелатора к молекуле используется группа карбоновой кислоты. Однако, если хелатор представляет собой DFO, аббревиатура DFO- в названии означает, что в указанном положении молекулы ковалентно присоединена аминогруппа DFO. Однако специалисту в данной области техники будет легко понять, какие функциональные группы или атомы хелатора способны к осуществлению соответствующего ковалентного присоединения к молекуле. Эти положения применимы к тем соединениям, которые представлены не только в части примеров настоящего описания, но и в каждой и любой его части, включая формулу изобретения.

Получение соединений:

Соединения по настоящему изобретению могут быть синтезированы с использованием способов, описанных далее, вместе со способами синтеза, известными в области синтетической органической химии или их вариантов, что понятно специалистам в данной области. Предпочтительные способы включают, но этим не ограничиваются, такие способы, которые описаны далее. Каждая из ссылок, приведенных ниже, включена в данный документ в качестве ссылки.

Конкретные варианты получения соединений по настоящему изобретению представлены в следующих примерах. Если не указано иное, все исходные материалы и реагенты имеют стандартную продажную степень чистоты и используются без дополнительной очистки, либо легко могут быть получены из таких материалов с помощью стандартных методов. Специалистам в области органического синтеза в свете данного описания будет понятно, что для получения соединений, охватываемых настоящим изобретением, можно варьировать исходные вещества и условия проведения реакции, включая дополнительные стадии.

Пример 2: Синтез трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты, присоединенного к тритиловой смоле (XVIII)

A. Присоединение N,N-бис[3-(метиламино)-пропил]метиламина к хлортритильной полистирольной смоле (фиг.11 стадия a)

Тритилхлоридной полистирольной смоле (начальная загрузка 1,8 ммоль/г, 1,11 г, 2 ммоль, 1,0 экв.) давали набухнуть в DCM в течение 30 мин. Затем к смоле добавляли N,N-бис[3-(метиламино)-пропил]метиламин (1,6 мл, 8 ммоль, 4 экв.) в DCM (6,5 мл), и смесь встряхивали в течение ночи. После этого смолу последовательно промывали ДМФ, DCM и диэтиловым эфиром (5×/3×/1×) и высушивали в вакууме.

B. Присоединение метилового эфира 1-(4-карбокси-2-изопропил-фенил)-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (фиг.1, стадия b)

Нагруженной N,N-бис[3-(метиламино)-пропил]метиламином тритильной смоле (1 г, 1,8 ммоль, 1,0 экв.) давали набухнуть в ДМФ в течение 30 мин. Смолу промывали смесью ДМФ/DIPEA (9/1) (для удаления оставшегося гидрохлорида N,N-бис[3-(метиламино)-пропил]метиламина) и ДМФ (3×/3×).

Метиловый эфир 1-(4-карбокси-2-изопропил-фенил)-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (X) (1,15 г, 2,7 ммоль, 1,5 экв.) [полученный, как описано в US 5723483], HATU (1,03 г, 2,7 ммоль, 1,5 экв.) и DIPEA (937 мкл, 5,4 ммоль, 3 экв.) растворяли в ДМФ (18 мл) и тщательно перемешивали в течение 1 мин. После добавления активированного структурного элемента смолу встряхивали в течение ночи. Смолу промывали (ДМФ пять раз, DCM три раза и диэтиловым эфиром) и высушивали в вакууме. Завершение реакции определяли следующим образом: Образец смолы обрабатывали раствором бензойной кислоты, HATU и DIPEA (1/1/2) в ДМФ в течение 30 мин. После промывки с помощью ДМФ и DCM к смоле добавляли ТФУ. Отсутствие по данным ЖХ-МС N,N-бис[3-(метиламино)-пропил]метиламида бензойной кислоты доказывало отсутствие на смоле свободной функциональной группы амино, что, таким образом, свидетельствовало о полном связывании метилового эфира 1-(4-карбокси-2-изопропил-фенил)-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты.

C. Гидролиз сложного метилового эфира (фиг.11, стадия c)

Смолу (1,64 г, 1,75 ммоль, 1,0 экв.), описанную выше, в течение ночи обрабатывали диоксаном (35 мл) и гидратом LiOH (689 мг, 16 ммоль, 10 экв.) в воде (12 мл). Процедуру повторяли еще один раз, смолу последовательно промывали водой, ДМФ и DCM (3/3/3) и высушивали в вакууме.

D. Присоединение трет-бутилового эфира 2-амино-адамантан-2-карбоновой кислоты (фиг.11 стадия d)

Смоле (0,7 г, 0,75 ммоль, 1,0 экв.), описанной выше, давали набухнуть в ДМФ в течение 30 мин. Затем HOAt (153 мг, 1,13 ммоль, 1,5 экв.), DIC (232 мкл, 1,5 ммоль, 2,0 экв.) и трет-бутиловый эфир 2-амино-адамантан-2-карбоновой кислоты (942 мг, 3,75 ммоль, 5,0 экв.) растворяли в смеси ДМФ и DCM (2:1) (6 мл) и потом добавляли в смолу. Через 2,5 часа добавляли дополнительное количество DIC (232 мкл, 1,5 ммоль, 2,0 экв.). Смолу оставляли встряхиваться в течение 60 часов, после чего реакция завершалась. После этого смолу промывали ДМФ и DCM (3/3) и высушивали в вакууме.

Пример 3: Синтез трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (XIX)

Смолу с трет-бутиловым эфиром 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (XIX) (0,7 г, 0,75 ммоль, 1,0 экв.) обрабатывали четыре раза смесью ТФУ, TIPS и DCM (2/5/93). Чтобы предотвратить преждевременную потерю защитных DOTA групп, образовавшийся раствор сразу выливали в водный буферный раствор (10 мл, pH=8, 100 мМ NH₄(CO₃)₂). Все DCM-буферные смеси объединяли, и органический слой уменьшали до минимума путем упаривания. К оставшемуся водному раствору добавляли ACN (5 мл), и смесь сушили вымораживанием с получением 800 мг сырого продукта.

Остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 15 до 45% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (210 мг, 26,3 мкмоль, 35,0%). ЖХВР: R_t=5,5 мин. МС: m/z=799,4 ([M+H]⁺, рассчитано 799,5). C₄₆H₆₆N₆O₆ (ММ=799,05).

Пример 4: Синтез 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (III)

Смолу с трет-бутиловым эфиром 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (XIX) (0,7 г, 0,75 ммоль, 1,0 экв.) в течение 2 ч обрабатывали смесью ТФУ и DCM (1/4). Расщепленный раствор упаривали досуха с получением 709 мг сырого продукта.

Остаток очищали с помощью ЖХВР (от 20 до 50% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (155,5 мг, 0,21 ммоль, 28%). ЖХВР: R_t=4,7 мин. МС: m/z=743,4 ([M+H]⁺, рассчитано 742,4). C₄₂H₅₇N₆O₆ (ММ=741,94).

Пример 5: Синтез 2-{[1-{4-[(3-{[3-(DOTA-метил-амино)-пропил]-метил-амино}-пропил)-метил-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновой кислоты (IIIa)

A. Метиловый эфир 1-{4-[(3-{[3-(DOTA(tBu)₃-метил-амино)-пропил]-метил-амино}-пропил)-метил-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (XI)

DOTA(tBu)₃-OH (500 мг, 0,873 ммоль, 1,0 экв.) растворяли в сухом ДМФ (5 мл). После добавления N,N'-диметил-N-(3-метиламино-пропил)-пропан-1,3-диамина (3,5 мл, 17,5 ммоль, 20 экв.) и DIPEA (0,389 мл, 2,27 ммоль, 2,6 экв.) смесь охлаждали до температуры 0°C. PyBOP (590 мг, 1,13 ммоль, 1,3 экв.) растворяли в сухом ДМФ (5 мл). В реакционную смесь каждые 5-10 мин добавляли по 0,5 мл этого раствора PyBOP до полного добавления всего раствора. Через 1 ч ДМФ удаляли в вакууме. Оставшийся осадок растворяли в EtOAc (100 мл) и экстрагировали водой (5×5 мл). Органический слой сушили над Na₂SO₄ и упаривали с получением 1,01 г сырого продукта.

Этот сырой продукт (1,01 г, макс. 0,873 ммоль) растворяли в сухом ДМФ (4 мл). В отдельной колбе в сухом ДМФ (2,5 мл) растворяли метиловый эфир 1-(4-карбокси-2-изопропил-фенил)-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (X) (445 мг, 1,05 ммоль, 1,2 экв.) [полученный, как описано в US 5723483]. HATU (398 мг, 1,05 ммоль, 1,2 экв.) и затем добавляли DIPEA (0,359 мл, 2,10 ммоль, 2,4 экв.), и реакционную смесь перемешивали в течение десяти минут. Растворенный сырой продукт с первой стадии (DOTA модифицированный диамин) добавляли по каплям к этому раствору HATU-активированной карбоновой кислоты. Через 1 ч добавляли дополнительное количество раствора HATU-активированной карбоновой кислоты [карбоновая кислота формулы (X) (102 мг, 0,24 ммоль, 0,27 экв.) в сухом ДМФ (0,5 мл), HATU (91 мг, 0,24 ммоль, 0,27 экв.) DIPEA (0,082 мл, 0,48 ммоль, 0,55 экв.), 10 минутная предварительная активация]. Через 15 ч добавляли дополнительное количество предварительно активированной карбоновой кислоты формулы (X) [карбоновая кислота формулы (X) (148 мг, 0,35 ммоль, 0,40 экв.) в сухом ДМФ (0,75 мл), HATU (133 мг, 0,35 ммоль, 0,40 экв.), DIPEA (0,120 мл, 0,698 ммоль, 0,80 экв.), 10 минутная предварительная активация]. Спустя 2 ч после последнего добавления ДМФ упаривали, и оставшиеся растворители удаляли в высоком вакууме.

Оставшееся масло растворяли в смеси ACN/вода 1/1 (прибл. 10 мл) и разделяли с помощью преп. ЖХВР (от 20 до 60% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 50×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (585 мг, 0,516 ммоль, 59%). ЖХВР: R_t=5,4 мин. МС: m/z=1134,7 ([M+H]⁺, рассчитано 1134,7). C₆₀H₉₅N₉O₁₂ (ММ=1134,45).

B. 1-{4-[(3-{[3-(DOTA(tBu)₃-метил-амино)-пропил]-метил-амино}-пропил)-метил-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбоновая кислота (XII)

Метиловый эфир формулы (XI) (294 мг, 0,259 ммоль) растворяли в 1,4-диоксане (1,35 мл). Добавляли по каплям 1 M водный раствор LiOH (1,04 мл, 1,04 ммоль, 4 экв.). После перемешивания в течение 5 ч с помощью HOAc (0,373 мл) pH устанавливали равным 5-6. После добавления ACN (18 мл) и воды (225 мл) мутный раствор помещали на твердофазную экстракционную колонку (3,0 г Varian Bondesil-ENV в 60 мл полистирольном шприце, предварительно промытым метанолом (3×20 мл) и водой (3×20 мл). Колонку элюировали 60 мл 10% ACN в воде в качестве первой фракции, и каждую из последующих фракций элюировали 60 мл 50% ACN в воде, содержащей 0,1% ТФУ. После лиофилизации от 3 до 8 фракций получали указанное в заголовке соединение (248 мг, 86%). ЖХВР: R_t=4,9 мин. МС: m/z=1120,7 ([M+H]⁺, рассчитано 1120,7). C₅₉H₉₃N₉O₁₂ (ММ=1120,42).

C. 2-{[1-{4-[(3-{[3-(DOTA(tBu)₃-метил-амино)-пропил]-метил-амино}-пропил)-метил-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновая кислота (XIII)

Карбоновую кислоту формулы (XII) (248 мг, 0,222 ммоль) растворяли в сухом NMP (3 мл). В виде твердого вещества добавляли HATU (84,3 мг, 0,222 ммоль, 1,0 экв.). К этой смеси добавляли DIPEA (76 мкл, 0,443 ммоль, 2,0 экв.). После перемешивания в течение 5 мин этот раствор переносили в течение 5 мин в суспензию 2-амино-адамантан-2-карбоновой кислоты (43,3 мг, 0,222 ммоль, 1,0 экв.) в сухом NMP (6,5 мл). Через 1 ч выдерживания при комнатной температуре колбу нагревали на масляной бане при температуре бани 65°C. Спустя 6 ч добавляли DIPEA (38 мкл, 0,222 моль, 1,0 экв.), и нагревание продолжали еще 18 ч. После охлаждения добавляли смесь ACN/вода 1:1, и раствор лиофилизовали. К оставшемуся твердому веществу добавляли смесь 100 мкл ДМСО/200 мкл HOAc и 1 мл ACN и суспензию фильтровали. Фильтрат разделяли с помощью преп. ЖХВР (от 20 до 60% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм), и получали указанное в заголовке соединение (74 мг, 0,057 ммоль, 26%-ный выход). ЖХВР: R_t=5,1 мин. МС: m/z=1297,7 ([M+H]⁺, рассчитано 1197,8). C₇₀H₁₀₈N₁₀O₁₃ (ММ=1297,67).

D. 2-{[1-{4-[(3-{[3-(DOTA-метил-амино)-пропил]-метил-амино}-пропил)-метил-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновая кислота (IIIa)

К раствору трис-tBu-эфира формулы (XIII) (74 мг, 0,057 ммоль) и триизобутилсилана (600 мкл) в сухом DCM (2,4 мл) добавляли ТФУ (9 мл). Спустя 5 ч выдерживания при комнатной температуре смесь упаривали при пониженном давлении и очищали с помощью преп. ЖХВР (от 15 до 50% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм). Это давало указанное в заголовке соединение (43 мг, 0,038 ммоль, 66%-ный выход) в виде соли с ТФУ. ЖХВР: R_t=5,3 мин. МС: m/z=1129,7 ([M+H]⁺, рассчитано 1129,6). C₅₈H₈₄N₁₀O₁₃ (ММ=1129,35).

Пример 6: Синтез комплексов DOTA-переходный металл

A. Общий способ синтеза комплексов DOTA-переходный металл

1 мМ раствор соответствующей соли металла (от 3,0 экв. до 5,0 экв.) разбавляли 5-кратным объемом ацетатного буфера (pH 5,0, 0,4 M). Этот раствор добавляли к DOTA-содержащему соединению (от 3 до 10 мг, 1,0 экв.). Реакционную смесь помещали на масляную баню (температура бани 90°C). Через 20 мин реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и наносили на твердофазную экстракционную колонку (250 мг Varian Bondesil-ENV в 15 мл полистирольном шприце, предварительно промытым метанолом (1×5 мл) и водой (2×5 мл). Колонку элюировали водой (2×5 мл), 5 мл 50% ACN в воде в качестве первой фракции, и каждую из последующих фракций элюировали 5 мл 50% ACN в воде, содержащей 0,1% ТФУ. Фракции, содержащие чистый продукт, собирали и лиофилизовали.

B. Индиевый комплекс соединения формулы (IIIa): In-(IIIa)

Комплексообразование проводили в соответствии с общим способом (пример 6 A), используя следующие реагенты: соединение формулы (IIIa) (5,0 мг), InCl₃×4 H₂O (3,9 мг), получая указанное в заголовке соединение (4,26 мг, 3,4 мкмоль, 78%). ЖХВР: R_t=4,4 мин. МС: m/z=1241,6 ([M+H]⁺, рассчитано 1241,5). C₅₈H₈₁InN₁₀O₁₃ (ММ=1241,14).

C. Галлиевый комплекс соединения формулы (IIIa): Ga-(IIIa)

Комплексообразование проводили в соответствии с общим способом (пример 6 A), используя следующие реагенты: соединение формулы (IIIa) (3,0 мг) и гидрат Ga(NO₃)₃ (3,9 мг), получая указанное в заголовке соединение (2,61 мг, 2,2 мкмоль, 82%). ЖХВР: R_t=4,4 мин. МС: m/z=1195,6 ([M+H]⁺, рассчитано 1195,5). C₅₈H₈₁GaN₁₀O₁₃ (ММ=1196,05).

D. Иттриевый комплекс соединения формулы (IIIa): Y-(IIIa)

Комплексообразование проводили в соответствии с общим способом (пример 6 A), используя следующие реагенты: соединение формулы (IIIa) (3,0 мг) и Y(NO₃)₃⋅6H₂O (3,1 мг), получая указанное в заголовке соединение (2,54 мг, 2,1 мкмоль, 79%). ЖХВР: R_t=4,5 мин. МС: m/z=1215,6 ([M+H]⁺, рассчитано 1215,5). C₅₈H₈₁N₁₀O₁₃Y (ММ=1216,24).

E. Лютециевый комплекс соединения формулы (IIIa): Lu-(IIIa)

Комплексообразование проводили в соответствии с общим способом (пример 6 A), используя следующие реагенты: соединение формулы (IIIa) (3,0 мг) и LuCl₃ (2,2 мг), получая указанное в заголовке соединение (2,88 мг, 2,2 мкмоль, 83%). ЖХВР: R_t=4,4 мин. МС: m/z=1301,5 ([M+H]⁺, рассчитано 1301,5). C₅₈H₈₁LuN₁₀O₁₃ (ММ=1301,30).

Пример 7: 2-{[1-(4-{[3-({3-[(DOTA-Ttds)-метил-амино]-пропил}-метил-амино)-пропил]-метил-карбамоил}-2-изопропил-фенил)-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновая кислота (IIIb)

A. Синтез N-{3-[2-(2-{3-[2-(4,7,10-трис-трет-бутоксикарбонилметил-1,4,7,10-тетрааза-циклододек-1-ил)-ацетиламино]-пропокси}-этокси)-этокси]-пропил}-сукцинамовой кислоты (DOTA(tBu)₃-Ttds-OH) (XX)

После набухания хлортритильной смолы (167 мг, 0,3 ммоль, 1,0 экв.) в DCM в течение 1 ч добавляли раствор Fmoc-Ttds-OH (326 мг, 0,6 ммоль, 2,0 экв.) и DIPEA (155 мкл, 0,9 ммоль, 3,0 экв.) в DCM (4 мл). Через 2,5 ч раствор отфильтровывали, и смолу последовательно промывали DCM, MeOH, DCM и ДМФ (1/1/1/3). Смолу обрабатывали два раза 20%-ным пиперидином в ДМФ (2 мин и 20 мин) и после этого промывали пять раз ДМФ. Далее смесь три-трет-бутил-1,4,7,10-тетраазацикло-додекан-1,4,7,10-тетраацетата (DOTA(tBu)₃-OH) (322 мг, 0,56 ммоль, 1,9 экв.), HATU (214 мг, 0,56 ммоль, 1,9 экв.) и DIPEA (195 мкл, 1,13 ммоль, 3,8 экв.) встряхивали в течение 5 мин и потом добавляли в смолу. После перемешивания в течение 2 ч смолу промывали ДМФ и DCM (5/2) и затем высушивали в вакууме. Смолу в течение 5 мин обрабатывали четыре раза смесью ТФУ, TIPS и DCM (5/5/90). Чтобы предотвратить преждевременную потерю защитных DOTA групп, образовавшиеся растворы сразу выливали в водный буферный раствор (10 мл, pH=8, 100 мМ NH₄(CO₃)₂). Значение pH смеси поддерживали около pH=7 путем добавления 4н раствора NaOH. DCM-буферные смеси, содержащие целевое соединение, объединяли, фазы разделяли, водную фазу два раза экстрагировали DCM, и органическую фазу упаривали досуха. Остаток вновь растворяли в смеси ACN/вода (1/1) и лиофилизовали.

Остаток очищали с помощью ЖХВР (от 15 до 45% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (118,6 мг, 0,136 ммоль, 45%). ЖХВР: R_t=4,3 мин. МС: m/z=875,5 ([M+H]⁺, рассчитано 875,6). C₄₂H₇₈N₆O₁₃ (ММ=875,10).

B. Синтез 2-{[1-(4-{[3-({3-[(DOTA-Ttds)-метил-амино]-пропил}-метил-амино)-пропил]-метил-карбамоил}-2-изопропил-фенил)-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновой кислоты (IIIb)

трет-Бутиловый эфир 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (XIX) (24,9 мг, 31,1 мкмоль, 1 экв.) растворяли в ДМФ (0,5 мл). К раствору добавляли DIPEA (32,4 мкл, 187 мкмоль, 6 экв.) до достижения значения pH, равного pH=7. К раствору добавляли N-{3-[2-(2-{3-[2-(4,7,10-трис-трет-бутоксикарбонилметил-1,4,7,10-тетрааза-циклододек-1-ил)-ацетиламино]-пропокси}-этокси)-этокси]-пропил}-сукцинамовую кислоту (DOTA(tBu)₃-Ttds-OH) (XX) (30,0 мг, 34,3 мкмоль, 1,1 экв.), затем HOAt (16,9 мг, 124,4 мкмоль, 4 экв.) и DIC (14,5 мкл, 93,3 мкмоль, 3 экв.). После перемешивания смеси в течение 24 ч растворитель удаляли путем упаривания. К оставшемуся осадку добавляли воду (1 мл) и EtOAc (2 мл). Органическую фазу разделяли, сушили и упаривали. Остаток обрабатывали ТФУ, фенолом, водой и TIPS (18/1/1/2) (330 мкл) в течение 8 ч. Все летучие вещества удаляли в вакууме.

Остаток очищали с помощью ЖХВР (от 15 до 45% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (7,0 мг, 4,9 мкмоль, 15,8%). ЖХВР: R_t=4,7 мин. МС: m/z=1431,9 ([M+H]⁺, рассчитано 1431,8). C₇₂H₁₁₀N₁₂O₁₈ (ММ=1431,71).

Пример 8: Лютециевый комплекс IIIb: Lu-(IIIb)

Комплексообразование проводили в соответствии с общим способом (пример 6 A), используя следующие реагенты: соединение формулы (IIIb) (4,0 мг) и LuCl₃ (2,35 мг), получая указанное в заголовке соединение (2,61 мг, 1,6 мкмоль, 57%). ЖХВР: R_t=4,7 мин. МС: m/z=1603,8 ([M+H]⁺, рассчитано 1603,7). C₇₂H₁₀₇LuN₁₂O₁₈ (ММ=1603,66).

Пример 9: 2-{[1-(4-{[3-({3-[(DOTA-Ahx)-метил-амино]-пропил}-метил-амино)-пропил]-метил-карбамоил}-2-изопропил-фенил)-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновая кислота (IIIc)

A. Синтез 6-[2-(4,7,10-трис-трет-бутоксикарбонилметил-1,4,7,10-тетрааза-циклододек-1-ил)-ацетиламино]-гексановой кислоты (DOTA(tBu)₃-Ahx-OH) (XXI)

После набухания хлортритильной смолы (167 мг, 0,3 ммоль, 1,0 экв.) в DCM в течение 1 ч добавляли раствор Fmoc-Ahx-OH (212 мг, 0,6 ммоль, 2,0 экв.) и DIPEA (155 мкл, 0,9 ммоль, 3,0 экв.) в DCM (4 мл). Через 1 ч раствор отфильтровывали, и смолу последовательно промывали DCM, MeOH, DCM и ДМФ (1/1/1/3). Смолу обрабатывали два раза 20%-ным пиперидином в ДМФ (2 мин и 20 мин) и после этого промывали пять раз ДМФ. Далее смесь три-трет-бутил 1,4,7,10-тетраазацикло-додекан-1,4,7,10-тетраацетата (DOTA(tBu)₃-OH, 322 мг, 0,56 ммоль, 1,9 экв.), HATU (214 мг, 0,56 ммоль, 1,9 экв.) и DIPEA (195 мкл, 1,13 ммоль, 3,8 экв.) встряхивали в течение 5 мин и потом добавляли в смолу. После перемешивания в течение 4 ч смолу промывали ДМФ и DCM (5/2) и затем высушивали в вакууме. Смолу в течение 5 мин обрабатывали четыре раза смесью ТФУ, TIPS и DCM (5/5/90). Чтобы предотвратить преждевременную потерю защитных DOTA групп, образовавшиеся растворы сразу выливали в водный буферный раствор (10 мл, pH=8, 100 мМ NH₄(CO₃)₂). Значение pH смеси поддерживали около pH=7 путем добавления 4н раствора NaOH. Все DCM-буферные смеси объединяли, фазы разделяли, водную фазу экстрагировали два раза DCM, и органическую фазу упаривали досуха. Остаток вновь растворяли в смеси ACN/вода (1/1) и лиофилизовали с получением 185 мг сырого продукта.

Остаток растворяли в воде и минимальном количестве ACN и подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 20 до 45% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (86,2 мг, 0,125 ммоль, 42%). ЖХВР: R_t=4,5 мин. МС: m/z=686,3 ([M+H]⁺, рассчитано 686,5). C₃₄H₆₃N₅O₉ (ММ=685,89).

B. Синтез 2-{[1-(4-{[3-({3-[(DOTA-Ahx)-метил-амино]-пропил}-метил-амино)-пропил]-метил-карбамоил}-2-изопропил-фенил)-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновой кислоты (IIIc)

трет-Бутиловый эфир 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (XIX) (12,7 мг, 15,9 мкмоль, 1 экв.) растворяли в ДМФ (0,3 мл). К раствору добавляли DIPEA (16,6 мкл, 95,4 мкмоль, 6 экв.) до достижения значения pH, равного pH=7. К раствору добавляли 6-[2-(4,7,10-трис-трет-бутоксикарбонилметил-1,4,7,10-тетрааза-циклододек-1-ил)-ацетиламино]-гексановую кислоту (DOTA(tBu)₃-Ahx-OH) (XXI) (16,4 мг, 23,85 мкмоль, 1,5 экв.), затем HOAt (8,7 мг, 63,6 мкмоль, 4 экв.) и DIC (7,4 мкл, 47,7 мкмоль, 3 экв.). После перемешивания смеси в течение 72 ч растворитель удаляли путем упаривания. К оставшемуся осадку добавляли воду (1 мл) и EtOAc (2 мл). Органическую фазу разделяли, сушили и упаривали. Остаток в течение 8 ч обрабатывали ТФУ, фенолом, водой и TIPS (18/1/1/2) (330 мкл). Все летучие вещества удаляли в вакууме.

Остаток очищали с помощью ЖХВР (от 20 до 50% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (7,78 мг, 6,3 мкмоль, 39,4%). ЖХВР: R_t=4,6 мин. МС: m/z=1242,8 ([M+H]⁺, рассчитано 1242,7). C₆₄H₉₅N₁₁O₁₄ (ММ=1242,50).

Пример 10: 2-{[1-(4-{[3-({3-[(NODAGA)-метил-амино]-пропил}-метил-амино)-пропил]-метил-карбамоил}-2-изопропил-фенил)-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновой кислоты (IIId)

трет-Бутиловый эфир 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (XIX) (13,4 мг, 16,7 мкмоль, 1 экв.) растворяли в ДМФ (0,3 мл). К раствору добавляли DIPEA (17,4 мкл, 100 мкмоль, 6 экв.) до достижения значения pH, равного pH=7. К раствору добавляли 1-трет-бутиловый эфир 2-(4,7-бис-трет-бутоксикарбонилметил-[1,4,7]триазонан-1-ил)-пентандионовой кислоты (NODAGA(tBu)₃-OH) (10,0 мг, 18,4 мкмоль, 1,1 экв.), затем HOAt (9,1 мг, 66,8 мкмоль, 4 экв.) и DIC (7,8 мкл, 50,1 мкмоль, 3 экв.). После перемешивания смеси в течение 24 ч растворитель удаляли путем упаривания. К оставшемуся осадку добавляли воду (1 мл) и EtOAc (2 мл). Органическую фазу разделяли, сушили и упаривали. Остаток в течение 5,5 ч обрабатывали ТФУ, фенолом, водой и TIPS (90/5/5/3) (1030 мкл). После этого все летучие вещества удаляли в вакууме.

Остаток очищали с помощью ЖХВР (от 20 до 50% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (7,64 мг, 6,9 мкмоль, 41,6%). ЖХВР: R_t=4,9 мин. МС: m/z=1100,7 ([M+H]⁺, рассчитано 1100,6). C₅₇H₈₁N₉O₁₃ (ММ=1100,31).

Пример 11: Галлиевый комплекс соединения формулы (IIId): Ga-(IIId)

Комплексообразование проводили в соответствии с общим способом (пример 6 A), используя следующие реагенты: соединение формулы (IIId) (10,0 мг) и гидрат Ga(NO₃)₃ (7,47 мг), получая указанное в заголовке соединение (7,46 мг, 6,4 мкмоль, 70%). ЖХВР: R_t=4,8 мин. МС: m/z=1166,6 ([M+H]⁺, рассчитано 1166,5). C₅₇H₇₈GaN₉O₁₃ (ММ=1167,0).

Пример 12: 2-{[1-(4-{[3-({3-[(NODAGA-Ttds)-метил-амино]-пропил}-метил-амино)-пропил]-метил-карбамоил}-2-изопропил-фенил)-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновая кислота (IIIe)

A. Синтез трет-бутилового эфира 2-(4,7-бис-трет-бутоксикарбонилметил-[1,4,7]триазонан-1-ил)-4-[3-(2-{2-[3-(3-карбокси-пропиониламино)-пропокси]-этокси}-этокси)-пропилкарбамоил]-бутановой кислоты (NODAGA(tBu)₃-Ttds-OH) (XXII)

После набухания хлортритильной смолы (556 мг, 1,0 ммоль, 1,0 экв.) в DCM в течение 1 ч добавляли раствор Fmoc-Ttds-OH (1085 мг, 2,0 ммоль, 2,0 экв.) и DIPEA (516 мкл, 3,0 ммоль, 3,0 экв.) в DCM (10 мл). Через 2,5 ч раствор отфильтровывали, и смолу последовательно промывали DCM, MeOH, DCM и ДМФ (1/1/1/3). Смолу обрабатывали два раза 20%-ным пиперидином в ДМФ (2 мин и 20 мин), промывали ДМФ и DCM (5/2) и высушивали в вакууме с получением 760 мг H-Ttds-тритильной смолы (загрузка на основе массы увеличивалась: приблизительно 0,8 ммоль/г). H-Ttds-тритильной смоле (375 мг, 0,3 ммоль, 1,0 экв.) давали набухнуть в ДМФ в течение 30 мин. Затем смесь 1-трет-бутилового эфира 2-(4,7-бис-трет-бутоксикарбонилметил-[1,4,7]триазонан-1-ил)-пентандионовой кислоты (NODAGA(tBu)₃-OH) (245 мг, 0,45 ммоль, 1,5 экв.), HATU (171 мг, 0,45 ммоль, 1,5 экв.) и DIPEA (150 мкл, 0,9 ммоль, 3,0 экв.) встряхивали в течение 5 мин и потом добавляли в смолу. После перемешивания в течение 24 ч смолу промывали ДМФ и DCM (5/2) и потом высушивали в вакууме. Смолу обрабатывали сначала один раз смесью ТФУ, TIPS и DCM (2/5/93) и после этого в течение 5 мин четыре раза смесью ТФУ, TIPS и DCM (5/5/90). Чтобы предотвратить преждевременную потерю защитных NODAGA групп, образовавшиеся растворы сразу выливали в водный буферный раствор (10 мл, pH=8, 100 мМ NH₄(CO₃)₂). Значение pH смеси поддерживали около pH=7 путем добавления 4н раствора NaOH. DCM-буферные смеси, содержащие целевое соединение, объединяли (растворы, полученные в результате 1^ой и 2^ой обработки), фазы разделяли, водную фазу экстрагировали два раза DCM, и органическую фазу упаривали досуха. Остаток вновь растворяли в смеси ACN/вода (1/1) и лиофилизовали.

Остаток очищали с помощью ЖХВР (от 25 до 50% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (105 мг, 0,120 ммоль, 40%). ЖХВР: R_t=5,2 мин. МС: m/z=845,5 ([M+H]⁺, рассчитано 846,5). C₄₁H₇₅N₅O₁₃ (ММ=846,06).

B. 2-{[1-(4-{[3-({3-[(NODAGA-Ttds)-метил-амино]-пропил}-метил-амино)-пропил]-метил-карбамоил}-2-изопропил-фенил)-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновая кислота (IIIe)

трет-Бутиловый эфир 2-(4,7-бис-трет-бутоксикарбонилметил-[1,4,7]триазонан-1-ил)-4-[3-(2-{2-[3-(3-карбокси-пропиониламино)-пропокси]-этокси}-этокси)-пропилкарбамоил]-бутановой кислоты (NODAGA(tBu)₃-Ttds-OH) (XXII) (65 мг, 76 мкмоль) растворяли в ДМФ (0,5 мл). 0,3 мл этого раствора (содержащего 39 мг NODAGA(tBu)₃-Ttds-OH (XXII), 46 мкмоль, 1,3 экв.) использовали для растворения трет-бутилового эфира 2-({5-(2,6-диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метил-амино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновой кислоты (XIX) (32,0 мг, 35 мкмоль, 1 экв.). К раствору добавляли DIPEA (42 мкл, 250 мкмоль, 7 экв.) до достижения значения pH, равного pH=7. Затем к смеси добавляли HOAt (22 мг, 162 мкмоль, 4,5 экв.) и DIC (19 мкл, 122 мкмоль, 3,5 экв.), после этого перемешивали в течение 6 ч. Затем добавляли дополнительное количество приготовленного заранее раствора (50 мкл, содержащего 6,5 мг NODAGA(tBu)₃-Ttds-OH (XXII), 7,7 мкмоль, 0,2 экв.) и DIC (10 мкл, 64 мкмоль, 1,8 экв.), и смесь перемешивали в течение ночи. Все летучие вещества удаляли в вакууме, остаток растворяли в DCM и водном растворе лимонной кислоты (10%). Органический слой разделяли, сушили и упаривали досуха. Остаток обрабатывали ТФУ, TIPS и водой (95/2,5/2,5).

Расщепленный раствор направляли на очистку с помощью ЖХВР (от 20 до 45% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (23,96 мг, 17,1 мкмоль, 48,8%). ЖХВР: R_t=4,8 мин. МС: m/z=1402,8 ([M+H]⁺, рассчитано 1402,8). C₇₁H₁₀₇N₁₁O₁₈ (ММ=1402,67).

Пример 13: 2-({5-(2,6-Диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-{1-метил-3-[4-(3-DFO-тиоуреидо)-фенил]-тиоуреидо}-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновая кислота (IIIf)

2-({5-(2,6-Диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновую кислоту (III) (30 мг, 40,4 мкмоль, 1,5 экв.) и N-[5-({3-[5-(ацетил-гидрокси-амино)-пентилкарбамоил]-пропионил}-гидрокси-амино)-пентил]-N'-гидрокси-N'-{5-[3-(4-изотиоцианато-фенил)-тиоуреидо]-пентил}-сукцинамид (20,3 мг, 26,9 мкмоль, 1,0 экв.) растворяли в ДМФ (1,0 мл). После добавления DIPEA (9,3 мкл, 53,8 мкмоль, 2,0 экв.) смесь перемешивали в течение 1 ч при температуре 50°C. После этого растворитель упаривали.

Остаток очищали с помощью ЖХВР (от 15 до 45% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (15,6 мг, 10,4 мкмоль, 38,8%). ЖХВР: R_t=5,1 мин. C₇₅H₁₁₀N₁₄O₁₄S₂ (ММ=1495,89).

Анализ ЖХ-МС соединения осложнялся образованием циркониевого комплекса соединения в условиях ЖХ-МС (МС (m/z): 1581,5 [M-3H⁺+ZR⁴⁺]⁺, C₇₅H₁₀₇N₁₄O₁₄S₂Zr⁺, R_t=5,1 мин). Когда непосредственно перед инъекцией соединение обрабатывали 25 мМ раствором FeCl₃, преимущественно обнаруживался комплекс с железом. (МС (m/z): 1549,4 [M-3H⁺+Fe+H]⁺, C₇₅H₁₀₇N₁₄O₁₄S₂Fe, R_t=5,3 мин). Это обнаружение показывало, что в условиях ЖХ-МС определения соединение (IIIf) образовывало циркониевый комплекс, хотя на самом деле присутствовало в несвязанном в комплекс состоянии.

Пример 14: Циркониевый комплекс соединения формулы (IIIf): Zr-(IIIf)

2-({5-(2,6-Диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-{1-метил-3-[4-(3-DFO-тиоуреидо)-фенил]-тиоуреидо}-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновую кислоту (IIIf) (9,85 мг, 6,58 мкмоль, 1,0 экв.) и циркониевый(IV)ацетилацетонат (12,95 мг, 26,3 мкмоль, 4,0 экв.) растворяли в MeOH. После перемешивания в течение 1 ч растворитель упаривали.

Остаток направляли на очистку с помощью ЖХВР (от 25 до 50% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (2,5 мг, 1,6 мкмоль, 24,2%). ЖХВР: R_t=5,1 мин. МС: m/z=1581,6 ([M]⁺, рассчитано 1581,7). C₇₅H₁₀₇N₁₄O₁₄S₂Zr⁺ (ММ=1584,09).

Анализ ЖХ-МС соединения осложнялся образованием циркониевого комплекса из-за несвязанного в комплекс соединения в условиях ЖХ-МС. Когда непосредственно перед инъекцией соединение обрабатывали 25 мМ раствором FeCl₃, в качестве второстепенного компонента обнаруживался комплекс с железом. (МС (m/z): 1549,4 [M-3H⁺+Fe+H]⁺, C₇₅H₁₀₇N₁₄O₁₄S₂Fe, R_t=5,3 мин). Напротив, когда несвязанное в комплекс соединение (IIIf) подвергали анализу ЖХ-МС с предварительной обработкой FeCl₃, комплекс железа представлялся основным соединением. Эти данные показывают, что комплексообразование циркония с соединением (IIIf) было успешным.

Пример 15: 2-{[5-(2,6-Диметокси-фенил)-1-(4-{[3-({3-[(4-фтор-бензоил)-метил-амино]-пропил}-метил-амино)-пропил]-метил-карбамоил}-2-изопропил-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновая кислота (IIIg)

2-({5-(2,6-Диметокси-фенил)-1-[2-изопропил-4-(метил-{3-[метил-(3-метиламино-пропил)-амино]-пропил}-карбамоил)-фенил]-1H-пиразол-3-карбонил}-амино)-адамантан-2-карбоновую кислоту (III) (10 мг, 13,4 мкмоль, 1,0 экв.) растворяли в DCM (0,4 мл). Значение pH раствора доводили до pH=7 путем постепенного добавления DIPEA. После добавления по каплям раствора 4-фторбензоилхлорида (2,13 мг, 13,4 мкмоль, 1,0 экв.) в DCM (0,1 мл) реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Затем добавляли воду (0,1 мл), смесь перемешивали в течение 10 мин, и все летучие вещества удаляли в вакууме.

Маслянистый остаток подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 25 до 55% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (3,24 мг, 3,75 мкмоль, 28,0%). ЖХВР: R_t=5,7 мин. МС: m/z=865,5 ([M+H]⁺, рассчитано 865,58) C₄₉H₆₁FN₆O₇, (ММ=865,03).

Пример 16: трет-Бутиловый эфир 2-{[1-{4-[(3-амино-пропил)-(3-диметиламино-пропил)-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновой кислоты, присоединенный к тритиловой смоле (XXIII)

A. Присоединение к хлортритильной смоле N,N-диметилдипропилентриамина (фиг.12 стадия a)

Тритилхлоридной смоле (начальная загрузка 1,8 ммоль/г, 334 мг г, 0,6 ммоль, 1,0 экв.) давали набухнуть в DCM в течение 30 мин. Затем к смоле добавляли N,N-диметилдипропилентриамин (0,54 мл, 3 ммоль, 5 экв.) и DIPEA (0,2 мл, 1,2 ммоль, 2,0 экв.) в DCM (4 мл), и смесь встряхивали в течение ночи. После этого смолу промывали ДМФ, DCM, MeOH и диэтиловым эфиром (5/3/1) и высушивали в вакууме.

B. Присоединение метилового эфира 1-(4-карбокси-2-изопропил-фенил)-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (фиг.12, стадия b)

Нагруженной N,N-диметилдипропилентриамином тритильной смоле (0,6 ммоль, 1,0 экв.) давали набухнуть в ДМФ в течение 30 мин. Метиловый эфир 1-(4-карбокси-2-изопропил-фенил)-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (382 мг, 0,9 ммоль, 1,5 экв.), HATU (342 мг, 0,9 ммоль, 1,5 экв.) и DIPEA (312 мкл, 2,7 ммоль, 3 экв.) растворяли в ДМФ (6 мл) и тщательно перемешивали в течение 1 мин. После добавления активированного структурного элемента смолу встряхивали в течение 3 ч. Смолу промывали (смесью ДМФ/DCM/диэтиловый эфир 5/3/1) и высушивали в вакууме.

C. Гидролиз сложного метилового эфира (фиг.12, стадия c)

Смоле (0,6 ммоль, 1,0 экв.), описанной выше, давали набухнуть в диоксане в течение 30 мин и после этого обрабатывали диоксаном (30 мл) и гидратом LiOH (504 мг, 12 ммоль, 20 экв.) в воде (4 мл) при температуре 50°C. Процесс продолжали при комнатной температуре в течение ночи, после этого смолу промывали водой, DCM и Et₂O (3/3/3) и высушивали в вакууме.

D. Присоединение трет-бутилового эфира 2-амино-адамантан-2-карбоновой кислоты (фиг.12 стадия d)

Смоле (0,6 ммоль, 1,0 экв.), описанной выше, давали набухнуть в ДМФ в течение 1 ч. Затем HOAt (327 мг, 2,4 ммоль, 4,0 экв.), DIC (279 мкл, 1,8 ммоль, 3,0 экв.) и трет-бутиловый эфир 2-амино-адамантан-2-карбоновой кислоты (453 мг, 1,8 ммоль, 3,0 экв.) растворяли в смеси ДМФ и DCM (2:1) (6 мл) и добавляли к смоле. Смолу оставляли встряхиваться в течение 60 часов, после чего реакция завершалась. Смолу промывали ДМФ и DCM (3/3) и высушивали в вакууме.

Пример 17: трет-Бутиловый эфир 2-{[1-{4-[(3-амино-пропил)-(3-диметиламино-пропил)-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновой кислоты (XXIV)

(фиг.12, стадия e)

Смолу с трет-бутиловым эфиром 2-{[1-{4-[(3-амино-пропил)-(3-диметиламино-пропил)-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновой кислоты (XXIII) (570 мкмоль, 1,0 экв.) обрабатывали пять раз смесью ТФУ, TIPS и DCM (2/5/93). Чтобы предотвратить преждевременную потерю защитных DOTA групп, образовавшиеся растворы сразу выливали в водный буферный раствор (10 мл, pH=8, 100 мМ NH₄(CO₃)₂). Все DCM-буферные смеси, содержащие целевую молекулу, объединяли, и органический слой уменьшали до минимума путем упаривания. К оставшемуся водному раствору добавляли ACN (5 мл), и смесь сушили вымораживанием.

Остаток, содержащий указанное в заголовке соединение (410 мг, 520 мкмоль, 91%), использовали без дополнительной очистки в виде сырого продукта. ЖХВР: R_t=5,8 мин. МС: m/z=785,4 ([M+H]⁺, рассчитано 785,5) C₄₅H₆₄N₆O₆, (ММ=785,03).

Пример 18: 2-{[1-{4-[(3-Амино-пропил)-(3-диметиламино-пропил)-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновая кислота (V)

Смолу с трет-бутиловым эфиром 2-{[1-{4-[(3-амино-пропил)-(3-диметиламино-пропил)-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновой кислоты (XXIV) (41 мг, 30 мкмоль, 1,0 экв.) в течение 2 ч обрабатывали ТФУ, фенолом, водой и TIPS (36/2/2/1) (2 мл). Расщепленный раствор выливали в смесь циклогексан/MTBE (1/1) (20 мл).

Осадок подвергали очистке с помощью ЖХВР (от 15 до 45% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (9,52 мг, 13,1 мкмоль, 43,5%). ЖХВР: R_t=4,8 мин. МС: m/z=729,4 ([M+H]⁺, рассчитано 729,4) C₄₁H₅₆N₆O₆, (ММ=728,92).

Пример 19: Синтез 2-{[1-{4-[(3-DOTA-амино-пропил)-(3-диметиламино-пропил)-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновой кислоты (Va)

Способ A

A. Метиловый эфир 1-{4-[(3-DOTA(tBu)₃-амино-пропил)-(3-диметиламино-пропил)-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (XIV)

DOTA(tBu)₃-OH (200 мг, 0,349 ммоль, 1,0 экв.) и PyBOP (236 мг, 0,454 ммоль, 1,3 экв.) растворяли в сухом ДМФ (5 мл). Через одну минуту добавляли N¹-(3-диметиламино-пропил)-пропан-1,3-диамин (0,315 мл, 1,75 ммоль, 5 экв.) и DIPEA (0,155 мл, 0,98 ммоль, 2,6 экв.) в сухом ДМФ (2 мл). Спустя 90 мин ДМФ удаляли в вакууме. Оставшийся осадок растворяли в EtOAc (30 мл) и два раза экстрагировали водой. Органический слой сушили над Na₂SO₄ и упаривали с получением 0,41 г сырого продукта.

Этот сырой продукт (0,41 г, макс. 0,349 ммоль) растворяли в сухом ДМФ (25 мл). В отдельной колбе метиловый эфир 1-(4-карбокси-2-изопропил-фенил)-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (X) (178 мг, 0,419 ммоль, 1,2 экв.) [полученный, как описано в US 5723483] растворяли в сухом ДМФ (1,0 мл), последовательно добавляли HATU (159 мг, 0,419 ммоль, 1,2 экв.) и DIPEA (0,143 мл, 0,838 ммоль, 2,4 экв.). Растворенное сырое вещество с первой стадии, модифицированный DOTA диамин, добавляли по каплям к этому активированному HATU раствору. После перемешивания в течение 45 мин ДМФ упаривали, и оставшиеся растворители удаляли в высоком вакууме.

Оставшееся масло растворяли в смеси ACN/вода/AcOH (100 мкл/100 мкл/1 мл) и разделяли на 2 партии с помощью преп. ЖХВР (от 15 до 45% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (229 мг, 0,205 ммоль, 59%). ЖХВР: R_t=4,7 мин. МС: m/z=1120,5 ([M+H]⁺, рассчитано 1120,7) C₄₁H₅₆N₆O₆, (ММ=1120,42).

B. 1-{4-[(3-DOTA(tBu)₃-амино-пропил)-(3-диметиламино-пропил)-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбоновая кислота (XV)

Метиловый эфир формулы (XIV) (370 мг, 0,330 ммоль) растворяли в 1,4-диоксане (1,72 мл). Добавляли по каплям 1 M водный раствор LiOH (1,32 мл, 1,32 ммоль, 4 экв.). После перемешивания в течение 5 ч pH устанавливали равным 4 с помощью HOAc (0,475 мл). После добавления ACN (18 мл) и воды (100 мл) мутный раствор сушили замораживанием. Данное вещество растворяли в ACN (24 мл) и воде (300 мл) и наносили на твердофазную экстракционную колонку (4,0 г Varian Bondesil-ENV в 60 мл полистирольном шприце, предварительно промытым метанолом (3×25 мл) и водой (3×25 мл). Колонку элюировали 80 мл 10% ACN в воде в качестве первой фракции, и каждую из последующих фракций элюировали 80 мл 50% ACN в воде, содержащей 0,1% ТФУ. После лиофилизации от 4 до 6 фракций получали указанное в заголовке соединение (313 мг, 86%). ЖХВР: R_t=4,4 мин. МС: m/z=1106,5 ([M+H]⁺, рассчитано 1106,7) C₅₈H₉₁N₉O₁₂, (ММ=1106,40).

C. 2-{[1-{4-[(3-(DOTA(tBu)₃-амино-пропил)-(3-диметиламино-пропил)-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновая кислота (XVI)

Карбоновую кислоту формулы (XV) (287 мг, 0,260 ммоль) растворяли в сухом NMP (3,7 мл). В виде твердого вещества добавляли HATU (98,7 мг, 0,260 ммоль, 1,0 экв.), и к этой смеси добавляли DIPEA (89 мкл, 0,52 ммоль, 2,0 экв.). После перемешивания в течение 5 мин данный раствор переносили в течение 5 мин в суспензию 2-амино-адамантан-2-карбоновой кислоты (50,7 мг, 0,260 ммоль, 1,0 экв.) и DIPEA (44 мкл, 0,26 ммоль, 1,0 экв.) в сухом NMP (7,6 мл). Через 1 ч выдерживания при комнатной температуре колбу нагревали на масляной бане при температуре бани 65°C. Спустя 6 ч добавляли дополнительное количество 2-амино-адамантан-2-карбоновой кислоты (50,7 мг, 0,260 ммоль, 1,0 экв.) и DIPEA (44 мкл, 0,26 ммоль, 1,0 экв.), и нагревание продолжали еще 18 ч. После охлаждения добавляли смесь ACN/вода 1:1, и раствор лиофилизовали. Оставшийся твердый продукт разделяли с помощью преп. ЖХВР (от 20 до 60% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм), и получали указанное в заголовке соединение (40 мг, 0,031 ммоль, 12%-ный выход). ЖХВР: R_t=5,0 мин. МС: m/z=1283,7 ([M+H]⁺, рассчитано 1283,8) C₆₉H₁₀₆N₁₀O₁₃, (ММ=1283,64).

D. 2-{[1-{4-[(3-DOTA-амино-пропил)-(3-диметиламино-пропил)-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновая кислота (Va)

К раствору трис-tBu-сложного эфира формулы (XVI) (40 мг, 36 мкмоль) добавляли ТФУ (4,8 мл) и триизобутилсилан (320 мкл) в сухом DCM (1,3 мл). После выдерживания 3,5 ч при комнатной температуре смесь упаривали при пониженном давлении и очищали с помощью преп. ЖХВР (от 15 до 55% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм). Это давало указанное в заголовке соединение (24 мг, 19 мкмоль, 52%) в виде соли с ТФУ. ЖХВР: R_t=4,0 мин. МС: m/z=1115,6 ([M+H]⁺, рассчитано 1115,6) C₅₇H₈₂N₁₀O₁₃, (ММ=1115,32).

Способ B:

трет-Бутиловый эфир 2-{[1-{4-[(3-амино-пропил)-(3-диметиламино-пропил)-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновой кислоты (XXIV) (24,4 мг, 31,1 мкмоль, 1,0 экв.) растворяли в ДМФ (0,5 мл), и к раствору добавляли DIPEA (33 мкл, 187 мкмоль, 6 экв.) до достижения значения pH, равного pH=7. Добавляли три-трет-бутил-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетраацетат (DOTA(tBu)₃-OH, 16,9 мг, 34,3 мкмоль, 1,1 экв.). Затем к смеси добавляли HOAt (16,9 мг, 125 мкмоль, 4,0 экв.) и DIC (14,5 мкл, 95 мкмоль, 3,0 экв.), далее перемешивали в течение 24 ч. Все летучие вещества удаляли в вакууме, и остаток растворяли в EtOAc и воде. Органический слой сушили и упаривали. Остаток перемешивали с ТФУ, фенолом, водой и TIPS (18/1/1/2) (0,3 мл) в течение 12 ч.

Расщепленный раствор направляли на очистку с помощью ЖХВР (от 20 до 45% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (3,7 мг, 3,3 мкмоль, 10,6%). ЖХВР: R_t=4,4 мин. МС: m/z=1115,6 ([M+H]⁺, рассчитано 1115,6) C₅₇H₈₂N₁₀O₁₃, (ММ=1115,32).

Пример 20: Индиевый комплекс соединения формулы (Va): In-(Va)

Комплексообразование проводили в соответствии с общим способом (пример 6 A), используя следующие реагенты: соединение формулы (Va) (3,0 мг) и InCl₃⋅4H₂O (2,4 мг), получая указанное в заголовке соединение (2,48 мг, 2,0 мкмоль, 75%). ЖХВР: R_t=4,3 мин. МС: m/z=1227,6 ([M+H]⁺, рассчитано 1227,5) C₅₇H₇₉InN₁₀O₁₃, (ММ=1227,11).

Пример 21: 2-{[5-(2,6-Диметокси-фенил)-1-(4-{(3-диметиламино-пропил)-[3-(DOTA-Ttds-амино)-пропил]-карбамоил}-2-изопропил-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновая кислота (Vb)

трет-Бутиловый эфир 2-{[1-{4-[(3-амино-пропил)-(3-диметиламино-пропил)-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-адамантан-2-карбоновой кислоты (XXIV) (24,4 мг, 31,1 мкмоль, 1,0 экв.) растворяли в ДМФ (0,5 мл), и к раствору добавляли DIPEA (33 мкл, 187 мкмоль, 6 экв.) до достижения значения pH, равного pH=7. Добавляли N-{3-[2-(2-{3-[2-(4,7,10-трис-трет-бутоксикарбонилметил-1,4,7,10-тетрааза-циклододек-1-ил)-ацетиламино]-пропокси}-этокси)-этокси]-пропил}-сукцинамовую кислоту (DOTA(tBu)₃-Ttds-OH) (XX) (30 мг, 34,3 мкмоль, 1,1 экв.). Затем к смеси добавляли HOAt (16,9 мг, 125 мкмоль, 4,0 экв.) и DIC (14,5 мкл, 95 мкмоль, 3,0 экв.), после этого перемешивали в течение 24 ч. Все летучие вещества удаляли в вакууме, и остаток растворяли в EtOAc и воде. Органический слой сушили и упаривали. Остаток перемешивали с ТФУ, фенолом, водой и TIPS (18/1/1/2) (0,3 мл) в течение 12 ч.

Расщепленный раствор направляли на очистку с помощью ЖХВР (от 20 до 45% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм) с получением указанного в заголовке соединения (4,0 мг, 2,8 мкмоль, 9%). ЖХВР: R_t=4,4 мин. МС: m/z=1417,9 ([M+H]⁺, рассчитано 1417,8) C₇₁H₁₀₈N₁₂O₁₈, (ММ=1417,69).

Пример 22: Синтез (S)-2-{[1-{4-[(3-{[3-(DOTA-метил-амино)-пропил]-метил-амино}-пропил)-метил-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-5-(2,6-диметокси-фенил)-1H-пиразол-3-карбонил]-амино}-циклогексил-уксусной кислоты (IVa)

Данный твердофазный синтез осуществляли в стандартном 2 мл пластиковом шприце, снабженном фильтром в нижней части шприца. В этом реакторе для твердофазного синтеза нагруженной L-циклогексилглицином 2-Cl-Trt-смоле (75 мг смолы, 50 мкмоль) [полученной согласно обычному методу: «Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis» Editors W. Chan, P. White, Oxford University Press, USA, 2000] давали набухнуть в ДМФ (2 мл) в течение 20 мин. В колбе в сухом NMP (0,5 мл) растворяли карбоновую кислоту формулы (XII) (70,0 мг, 0,0625 ммоль, 1,25 экв.) и добавляли HATU (18,3 мг, 0,0625 ммоль, 1,25 экв.) и DIPEA (16,2 мкл, 0,125 ммоль, 2,5 экв.). После 5 мин предварительной активации данный раствор переносили в шприц со смолой. Шприц закрывали и встряхивали в течение ночи. Через 15 ч реакционную смесь удаляли в вакууме и смолу промывали ДМФ (3×1,5 мл) и DCM (2×1,5 мл). После высушивания смолы при пониженном давлении (1 мбар) смолу обрабатывали смесью триизобутилсилана (0,1 мл) в ТФУ (1,9 мл) в течение 2 ч. Расщепленный раствор упаривали при пониженном давлении и очищали с помощью преп. ЖХВР (от 25 до 45% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм). Это давало указанное в заголовке соединение (31 мг, 28 мкмоль, 57%) в виде соли с ТФУ. MS (m/z): ЖХВР: R_t=4,4 мин. МС: m/z=1091,6 ([M+H]⁺, рассчитано 1091,6) C₅₅H₈₂N₁₀O₁₃, (ММ=1091,30).

В основном, подходящим являлся данный способ. Ряд других соединений были получены аналогичным образом, исходя из по-разному предварительно нагруженных тритильных смол (с другими аминокислотами или низкомолекулярными пептидами). Соединение формулы (IIIa) было получено также в соответствии с данным способом.

Пример 23: Индиевый комплекс соединения формулы (IVa): In-(IVa)

Комплексообразование проводили в соответствии с общим способом (пример 6 A), используя следующие реагенты: соединение (IVa) (3,0 мг) и InCl₃⋅4H₂O (2,42 мг), получая указанное в заголовке соединение (2,8 мг). ЖХВР: R_t=4,4 мин. МС: m/z=1203,5 ([M+H]⁺, рассчитано 1203,5) C₅₅H₇₉InN₁₀O₁₃, (ММ=1203,09).

Пример 24: Синтез [2-(2-DOTA-амино-этилкарбамоил)-адамантан-2-ил]-амида 5-(2,6-диметокси-фенил)-1-{4-[(3-диметиламино-пропил)-метил-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (XVII)

A. [2-(2-DOTA(tBu₃)-Амино-этилкарбамоил)-адамантан-2-ил]-амид 5-(2,6-диметокси-фенил)-1-{4-[(3-диметиламино-пропил)-метил-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-1H-пиразол-3-карбоновая кислота (XVIII)

DOTA(tBu)₃-OH (100 мг, 0,175 ммоль, 1,0 экв.) растворяли в сухом ДМФ (0,5 мл), добавляли HATU (66,4 мг, 0,175 ммоль, 1,0 экв.), растворенный в сухом ДМФ (0,5 мл), и коллидин (46,1 мкл, 0,350 ммоль, 2,0 экв.). Через 5 мин данную смесь медленно добавляли к охлажденному до 0°C раствору этилендиамина (0,873 ммоль. 5,0 экв.) в сухом ДМФ (1,5 мл). После перемешивания в течение 19 ч ДМФ упаривали, оставшееся масло растворяли в EtOAc (5 мл) и экстрагировали водой (0,5 мл), насыщ. водн. NaHCO₃ (0,5 мл) и насыщ. водн. NaCl (0,5 мл). Органический слой сушили над Na₂SO₄, упаривали, и остаток очищали с помощью флеш хроматографии с помощью DCM, смеси DCM/метанол 20/1 и смеси DCM/метанол 10/1 в качестве элюентов. Это давало 45 мг моноацилированного этилендиамина. Раствор этого вещества (18 мг, 29 мкмоль) в сухом ДМФ (0,2 мл) добавляли к предварительно активированному в течение 10 мин раствору SR-142948 (20 мг, 29 мкмоль) [HATU (11,1 мг, 29 мкмоль) и DIPEA (10 мкл, 58 мкмоль, 2 экв.) в сухом ДМФ (0,4 мл)]. Через 15 ч добавляли моноацилированный этилендиамин (9 мг, 15 мкмоль, 0,5 экв.) в сухом ДМФ (0,1 мл). Спустя 5 ч реакционную смесь нагревали до температуры 60°C в течение 30 мин. Затем растворители упаривали, и вещество очищали с помощью преп. ЖХВР (от 15 до 55% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм). Это давало указанное в заголовке соединение формулы (XVIII) (15 мг, 12мкмоль, 40%). ЖХВР: R_t=3,9 мин. МС: m/z=1282,7 ([M+H]⁺, рассчитано 1282,8) C₆₉H₁₀₇N₁₁O₁₂, (ММ=1282,65).

B. [2-(2-DOTA-амино-этилкарбамоил)-адамантан-2-ил]-амид 5-(2,6-диметокси-фенил)-1-{4-[(3-диметиламино-пропил)-метил-карбамоил]-2-изопропил-фенил}-1H-пиразол-3-карбоновая кислота (XVII)

К раствору трис-tBu-сложного эфира формулы (XVIII) (15 мг, 11 мкмоль) и триизобутилсилана (100 мкл) в сухом DCM (0,4 мл) добавляли ТФУ (1,5 мл). Через 4 ч выдерживания при комнатной температуре смесь упаривали при пониженном давлении и очищали с помощью преп. ЖХВР (от 15 до 45% B за 30 мин, Agilent PLRP-S 25×150 мм). Это давало указанное в заголовке соединение (6,3 мг, 5,7 мкмоль, 48%) в виде соли с ТФУ. ЖХВР: R_t=3,4 мин. МС: m/z=1114,6 ([M+H]⁺, рассчитано 1114,6) C₅₇H₈₃N₁₁O₁₂, (ММ=1114,33).

Пример 25: Функциональный анализ мобилизации Са²⁺

В цитозоле клеток ионы Ca²⁺, как правило, поддерживаются на наномолярном уровне и действуют в ряде путей передачи сигнала в качестве вторичных мессенджеров. Многие GPCR, в том числе рецептор нейротензина, образуют пары для индукции передачи сигналов с ионами кальция, и во многих анализах первичных клеточных культур используется определение концентрации внутриклеточных ионов кальция в качестве функциональных данных об активации GPCR. Изменение концентрации ионов кальция можно легко обнаружить стандартными протоколами анализа с помощью флуоресцентных красителей, которые излучают свет, когда происходит изменение концентрации внутриклеточных ионов Ca²⁺. Учитывая кратковременную природу этих ответов, их часто считывают измерительными приборами с возможностью «впрыска и индикации». Этот пример показывает, что соединения по настоящему изобретению, не обладают какой-либо агонистической активностью в отношении NTR1-экспрессирующих клеток. Кроме того, этот пример показывает, что соединения по настоящему изобретению связываются с NTR1 и ингибируют активность дополнительно присутствующего агониста NTR1.

Клетки HEK293, экспрессирующие HT29 или NTR1, обрабатывали трипсином и высевали в черные плоские 96-луночные планшеты с прозрачным дном (Corning, Амстердам, Нидерланды) в количестве 6×10⁵ клеток на лунку. Через 24 часа инкубации при температуре 37°С и 5% CO₂ клетки дважды промывали буфером для промывки (130 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 10 мМ HEPES, 2 мМ CaCl₂, 10 мМ глюкозы, рН 7,4) и нагружали 100 мкл красителем Са5 (Molecular Devices, Биберах, Германия) в течение 1 ч при температуре 37°С и при 5% СО₂. Для анализа агонистов серийные разведения веществ-агонистов добавляли к клеткам, нагруженным красителем, и непрерывно в течение приблизительно 90 с регистрировали изменение флуоресцентного сигнала, используя FlexStation II (Molecular Devices, Биберах, Германия). Добавление буфера для промывки служило контролем. Таким образом, вычисляли концентрации ЕС50 для каждого конъюгата и получали меру эффективности вещества. Для анализа антагонистов клетки, нагруженные 100 мкл красителем Са5, предварительно инкубировали с серийными разведениями веществ-антагонистов в течение 30 мин перед добавлением ЕС80-концентрации агониста к клеткам, и непрерывно в течение приблизительно 90 сек регистрировали изменение флуоресцентного сигнала. Таким образом вычисляли концентрации IC50 для каждого конъюгата и получали меру ингибирующей активности соединений для NTR1.

Результаты этого анализа, проведенного на некоторых соединениях в соответствии с настоящим изобретением, приведены в нижеследующей таблице 1 вместе с результатами анализа связывания радиолиганда (пример 26).

Пример 26: Анализ на связывание радиолиганда

Для определения аффинности связывания соединений, содержащих радиоактивную метку для NTR1, был проведен анализ на связывание радиолиганда. Радиолиганд представляет собой радиоактивное биохимическое вещество, которое используется для диагностики или для проведения исследований при изучении систем клеточных рецепторов организма. В системах in vivo он часто используется для количественного определения связывания исследуемой молекулы с сайтом связывания радиолиганда. Чем выше аффинность молекулы, тем больше радиолигандов вытесняется из сайтов связывания. Количество связанного радиолиганда может быть измерено с помощью сцинтилляционного счетчика и, таким образом, определено количественно. Этот анализ обычно используется для расчета константы связывания молекул с рецепторами. В этом примере показано, что соединения по настоящему изобретению связываются с NTR1 с высокой аффинностью.

Анализ на связывания радиолиганда NTR1 проводили с помощью Cerep (Celle l'Evescault, Франция, номер в каталоге 0109) в соответствии с Vita et al., FEBS Lett., 1993, 317, 139-142. NTR1 получали из клеток СНО, экспрессирующих рекомбинантный рецептор человека, и инкубировали с 0,05 нМ ¹²⁵I-(TyR³-нейротензин) и серийными разведениями исследуемых соединений. Через 60 мин инкубации при 4°С и промывки для удаления несвязавшегося нейротензина, связанную радиоактивность измеряли с помощью сцинтилляционного счетчика. Результат каждого исследуемого соединения выражали как концентрацию IC50 и определяли меру аффинности исследуемого соединения для NTR1.

Результаты этого анализа, осуществленного на некоторых соединениях в соответствии с настоящим изобретением, приведены в следующей таблице 1.

Таблица 1: Результаты анализа мобилизации Ca (Ca) и анализа на связывание радиолиганда (RLB)

Соединение	Пример (II часть примеров)	Линкер	Акцептор	Эффектор	IC50 [нМ]Ca	IC50 [нМ]RLB
(III)	4	R7=H	-	-	7,54	0,87
(IIIa)	5	-	DOTA	-	20,0	2,9
In-(IIIa)	6 B	-	DOTA	In	5,35	0,76
Ga-(IIIa)		-	DOTA	Ga	7,28	1,0
Y-(IIIa)	6 D	-	DOTA	Y	6,10	1,2
Lu-(IIIa)	6 E	-	DOTA	Lu	5,95	0,59
(IIIb)	7	Ttds	DOTA	-	16,6	5,2
Lu-(IIIb)	8	Ttds	DOTA	Lu	10,2	1,6
(IIIc)	9	Ahx	DOTA	-	11,8	5,7
(IIId)	10	-	NODAGA	-	14,5	3,7
Ga-(IIId)	11	-	NODAGA	Ga	7,00	0,94
(IIIe)	12	Ttds	NODAGA	-	21,4	4,9
(IIIf)	13	1,4-(-CS-NH-)2-Фенил	DFO	-	17,5	3,0
Zr-(IIIf)	14	1,4-(-CS-NH-)2-Фенил	DFO	Zr	21,3	2,1
(IIIg)	15	-	Бензойная кислота	F (пара)	14,5	2,3
(V)	18	R7=H	-	-	8,95	5,3
(Va)	19	-	DOTA	-	12,6	3,4
In-(Va)	20	-	DOTA	In	14,4	1,3
(Vb)	21	Ttds	DOTA	-	26,0	2,4
(IVa)	22	-	DOTA	-	125	н.о.
In-(IVa)	23	-	DOTA	In	75	н.о.
(XVII)	24	Не применимый	Не применимый	Не применимый	Нет ингибирования	н.о.

Все соединения с указанным IC50 являются полными антагонистами и не вызывают сигналы в анализе агонистов с Ca.

Реализация структурного элемента подобно группе формулы (II)

которая, например, может содержать хелатор, такой как DOTA, в структуре формулы (I), является частью настоящего изобретения. Специалист в данной области мог бы использовать свободную карбоновую кислоту структуры формулы (I), для того, чтобы присоединить хелатор, такой как DOTA. Характерный пример в результате такого подхода представляет собой соединение формулы (XVII). Отсутствие активности у соединения формулы (XVII) в функциональном Ca-анализе показало, что изменения в этом положении структуры формулы (I) разрушают аффинность NTR-1. Однако, это соединение формулы (XVII) не находится в пределах объема настоящего изобретения (и не охватывается структурной формулой (I)), так как группа формулы (II) отсутствует в положениях, определенных в соответствии с настоящем изобретением. С другой стороны, соединения по настоящему изобретению, как, например, соединение формулы (IIIa), где группа формулы (II) представлена R⁴ или R⁵ (а также соединения, как, например, соединение формулы (Va) с группой формулы (II) представленной R³), обладают очень сильной аффинностью NTR-1 в отношении к соответствующим Ca IC50=20 нМ и RLB IC50=2,9 нМ. Как показано более подробно в таблице 1 выше, соответствующие комплексы металлов, например, соединения формул (IIIa) или (Va), также проявляют сильную или обычно даже еще более сильную аффинность связывания НТР-1, чем их аналоги, не являющиеся комплексами.

Кроме того, результаты, показанные в таблице 1, представляют доказательство, что в соединениях в соответствии с настоящим изобретением их NTR1-связывающая часть действует в выражении NTR1-аффинности, независимо от природы хелатора, а также oт присутствия или отсутствия линкеров различных структур и свойств. Немодифицированные карбоновые кислоты в структурах формулы (I) являются важным элементом для высокой аффинности по отношению к NTR-1, но не поддаются модификации, такой как присоединение эффекторного фрагмента, о чем свидетельствует отсутствие активности у соединения формулы (XVII).

Пример 27: Анализ стабильности плазмы

Анализ стабильности плазмы проводили для определения разложения соединений по настоящему изобретению в плазме. Это является важной характеристикой соединений в качестве таких соединений, за исключением пролекарств, которые быстро разлагаясь в плазме обычно показывают слабую in vivo эффективность.

Для определения стабильности соединений формул (IIIa) и (Va) в человеческой и мышиной плазме проводили анализ стабильности плазмы. Результаты показывают, что соединения формул (IIIa) и (Va) являются высоко стабильными в человеческой и мышиной плазме. Стабильность является достаточной для диагностического, терапевтического и тераностического использования указанных соединений в соответствии с настоящим изобретением.

В плазму добавляли 10 мМ раствор аналита в диметилсульфоксиде до конечной концентрации 10 мкМ, перемешивали и отбирали аликвоты образцов по 50 мкл. Две аликвоты хранили при -20°С до дальнейшей обработки. Еще две аликвоты инкубировали с использованием Eppendorf Thermomixer при температуре 37°С в течение 1, 4 и 24 ч. Очистку образца проводили с использованием планшета для осаждения белка (Phenomenex Strata Impact, 64722-1-324-1) и с использованием ацетонитрила в качестве осадителя. Фильтрат сушили в вакуумной центрифуге и растворяли в 50 мкл 25%-ного водного раствора ацетонитрила. Аликвоту в 10 мкл разбавляли 90 мкл 0,1% раствором водной трифторуксусной кислоты. Определение аналита в прозрачных растворах образцов осуществляли на тройном квадрупольном масс-спектрометре Thermo TSQ Quantum Ultra, оснащенном термо Surveyor ЖХВР. Хроматографическое разделение проводили на колонке ЖХВР Phenomenex Kinetex XB-C18 (50×2 мм, размер частиц 2,5 мкМ) с градиентным элюирование с использованием смеси 0,01% трифторуксусной кислоты и 0,05% муравьиной кислоты в воде в качестве элюента A и метанола в качестве элюента B (от 20% B до 100% за 8 мин, 400 мкл/мин, 40°C). Для масс-спектрометрического детектирования использовали контроль селективных реакций (SRM).

Количественное определение проводили с помощью внешней калибровочной матрицы с использованием внутреннего стандарта.

Параметры ЖХ-МС:

анализируемое соединение формулы (IIIa)

время удерживания: 4,3 мин

МС/МС переход: 1063,5→296,3 (48 В)

анализируемое соединение формулы (Va)

время удерживания: 4,5 мин

МС/МС переход: 565,4→542,6 (19 В)

Результаты этого анализа, осуществленного на некоторых соединениях в соответствии с настоящим изобретением, приведены в следующей таблице 2.

Таблица 2: Результаты анализа стабильности плазмы

	% оставшейся после 24 ч инкубирования
Соединение	Человеческая плазма	Мышиная плазма
(IIIa)	>90%	>80%
(Va)	>70%	>60%

Пример 28: Анализ на связывание с белками плазмы

Эффективность лекарственного средства может зависеть от степени, в которой он связывается с белками внутри плазмы крови. Лекарственное средство в крови существует в двух формах: связанной и несвязанной. В зависимости от аффинности конкретного лекарственного средства к белкам плазмы, часть лекарственного средства может стать связанной с белками плазмы, а остальная часть несвязанной. Примечательно, что несвязанная фракция является такой, которая проявляет фармакологические эффекты. Кроме того, она представляет собой фракцию, которая может быть метаболизирована и/или выведена из организма. Связывание с белками может влиять на биологический период полураспада лекарственного средства в организме. Связанная часть может действовать в качестве резервуара или депо, из которого препарат медленно высвобождается в виде несвязанной формы.

Для определения связывающих характеристик соединений по настоящему изобретению, как представлено в следующей таблице в отношении белка человеческой или мышиной плазмы, соответственно, проводили анализ на связывание с белками плазмы. Все соединения обладали свойством связывания белка плазмы, которое является подходящим для диагностического, терапевтического и тераностического применения указанных соединений в соответствии с настоящим изобретением.

Связывание исследуемых веществ и белков человеческой и мышиной плазмы изучали с помощью Cerep (Celle l'Evescault, Франция; номер в каталоге 2194 [человек] и 2223 [мыши]) в соответствии с Banker et al., J. Pharm. Sci., 2003, 92, 967-974. Исследуемые соединения инкубировали с белками человеческой и мышиной плазмы в течение 4 ч при температуре 37°C. После этого фракционные соединения, связанные с белками плазмы, определяли с помощью равновесного диализа и ЖХВР-МС/МС определения. Результат для каждого исследуемого соединения дается как процент связывания с белком плазмы.

Результаты этого анализа, осуществленного на некоторых соединениях в соответствии с настоящим изобретением, приведены в следующей таблице 3.

Таблица 3: Результаты анализа связывания с белками плазмы

Соединение	% связывания [человек]	% связывания [мышь]
(IIIa)	99	89
In-(IIIa)	92	64
Ga-(IIIa)	Не определено	74
Lu-(IIIa)	95	67
Y-(IIIa)	96	76
In-(Va)	84	46
In-(IVa)	84	41

Пример 29: Скрининг специфичности

Скрининг специфичности проводили с целью исследования неспецифического связывания соединений по настоящему изобретению. Специфичность NTR1 исследовали с использованием стандартной группы устройств для анализов («ExpresSProfile»), включающей 55 анализов на GPCR, ионные каналы и транспортерные белки. Данный анализ осуществляли с помощью Cerep (Celle l̓Evescault, France; ссылка по каталогу P1).

Неспецифическое связывание в соответствии с данным скринингом специфичности наблюдалось, если ингибирование контрольного специфического связывания составляло примерно 50%. Помимо самого NTR1 это наблюдалось только для NK2 (66%) при концентрации, которая является чрезвычайно высокой (10^-5 M). Результаты показывают, что соединение формулы (IIIa) обладает высокой специфичностью и хорошо подходит для диагностического, терапевтического и тераностического применения этих соединений в соответствии с настоящим изобретением.

Результаты этого анализа, осуществленного на соединении по настоящему изобретению, представлены в следующей таблице 4.

Таблица 4: Результаты скрининга специфичности (ExpresSProfile) соединения формулы (IIIa).

Анализ	Ссылка по каталогу	Исследуемая концентрация (М)	% Ингибирование контрольного специфического связывания	% Контрольного специфического связывания	SEM % Контроля	Ссылочное соединение	Ki Ref (M)	nH Ref
				1ое	2ое	Значение
A1 (h) антагонистический радиолиганд Townsend-Nicholson et al., J. Biol. Chem.,1994, 269: 2373-2376	0002	1,0E-05	-24	142,9	104,5	123,7	19,2	DPCPX	6,2E-10	0,8
A2A (h) агонистический радиолиганд Luthin et al., Mol Pharmacol.,1995, 47, 307-313	0004	1,0E-05	5	104,2	85,6	94,9	9,3	NECA	3,5E-08	1,1
A3 (h) агонистический радиолиганд Salvatore et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.,1993, 90, 10365-10369	0006	1,0E-05	-41	129,0	153,9	141,4	12,4	IB-MECA	4,8E-10	1,0
альфа 1 (неселективный) антагонистический радиолиганд Greengrass et al., Eur. J. Pharmacol., 1979, 55, 323-326	0008	1,0E-05	-9	106,2	111,1	108,7	2,5	празозин	5,8E-11	1,2
альфа 2 (неселективный) антагонистический радиолиганд Uhlen et al., Pharmacol. Toxicol., 1991, 69, 341-350	0011	1,0E-05	-10	114,4	106,1	110,3	4,2	йохимбин	3,8E-08	0,7
бета 1 (h) агонистический радиолиганд Levin et al., J. Biol.Chem., 2002, 277, 30429-30435	0018	1,0E-05	2	89,9	106,1	98,0	8,1	атенолол	2,7E-07	0,9
бета 2 (h) агонистический радиолиганд Joseph et al., Naun.-Sch. Arch. Pharm., 2004, 369, 525-532	0020	1,0E-05	-2	107,2	96,5	101,8	5,4	ICI 118551	1,9E-10	0,9
AT1 (h) антагонистический радиолиганд Le et al., Eur. J. Pharmacol., 2005, 513, 35-45	0024	1,0E-05	-18	118,7	116,8	117,7	1,0	саралазин	4,4E-10	0,6
BZD (центральный) агонистический радиолиганд Speth et al., Life Sci., 1979, 24, 351-358	0028	1,0E-05	-16	109,4	122,6	116,0	6,6	диазепам	7,5E-09	1,1
B2 (h) агонистический радиолиганд Pruneau et al., Brit. J. Pharmacol., 1998, 125, 365-372	0033	1,0E-05	11	98,7	79,9	89,3	9,4	NPC 567	9,9E-09	0,9
CB1 (h) агонистический радиолиганд Rinaldi-Carmona et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 278, 871-878	0036	1,0E-05	11	96,0	82,5	89,3	6,8	CP 55940	1,6E-10	0,8
CCK1 (CCKA) (h) агонистический радиолиганд Bignon et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1999, 289, 742-751	0039	1,0E-05	-18	101,6	135,3	118,5	16,8	CCK-8s	6,5E-11	0,6
D1 (h) антагонистический радиолиганд Zhou et al., Nature, 1990, 347, 76-80	0044	1,0E-05	-5	114,0	96,3	105,2	8,8	SCH 23390	9,0E-11	0,9
D2S (h) антагонистический радиолиганд Grandy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1989, 86, 9762-9766	0046	1,0E-05	-9	112,8	104,7	108,8	4,1	(+)бутакламол	2,7E-10	1,0
ETA (h) агонистический радиолиганд Buchan et al., Brit. J. Pharmacol., 1994, 112, 1251-1257	0054	1,0E-05	-10	114,3	105,4	109,8	4,5	эндотелин-1	3,6E-11	1,1
GABA (неселективный) агонистический радиолиганд Tsuji et al., Antimicrob. Agents Chemother., 1988, 32, 190-194	0057	1,0E-05	-6	101,9	109,9	105,9	4,0	GABA	1,7E-08	0,8
GAL2 (h) агонистический радиолиганд Bloomquist et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 1998, 243, 474-479	0410	1,0E-05	1	96,5	102,1	99,3	2,8	галанин	2,9E-09	0,9
CXCR2 (IL-8B) (h) агонистический радиолиганд White et al., J. Biol. Chem., 1998, 273, 10095-10098	0419	1,0E-05	-9	118,7	99,6	109,1	9,5	IL-8	5,6E-11	1,4
CCR1 (h) агонистический радиолиганд Neote et al., Cell, 1993, 72, 415-425	0361	1,0E-05	-6	103,2	109,1	106,1	3,0	MIP-1альфа	4,1E-11	1,1
H1 (h) антагонистический радиолиганд Smit et al., Brit. J. Pharmacol.,1996, 117, 1071-1080	0870	1,0E-05	-12	121,2	103,3	112,3	9,0	пириламин	7,6E-10	1,1
H2 (h) антагонистический радиолиганд Leurs et al., Brit. J. Pharmacol., 1994, 112, 847-854	1208	1,0E-05	-4	105,9	101,7	103,8	2,1	циметидин	4,7E-07	1,2
MC4 (h) агонистический радиолиганд Schioth et al., Neuropeptides, 1997, 31, 565-571	0420	1,0E-05	-8	113,2	103,7	108,5	4,7	NDP-альфа-MSH	2,8E-10	0,9
MT1 (ML1A) (h) агонистический радиолиганд Witt-Enderby et al., Mol Pharmacol., 1996, 50, 166-174	1538	1,0E-05	1	102,6	95,9	99,3	3,3	мелатонин	1,3E-10	0,9
M1 (h) антагонистический радиолиганд Dorje et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1991, 256, 727-733	0091	1,0E-05	-25	111,0	138,4	124,7	13,7	пирензепин	1,4E-08	1,2
M2 (h) антагонистический радиолиганд Dorje et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1991, 256, 727-733	0093	1,0E-05	-17	123,7	110,8	117,2	6,4	метокрамин	7,6E-09	0,9
M3 (h) антагонистический радиолиганд Peralta et al., Embo. J., 1987, 6, 3923-3929	0095	1,0E-05	-23	122,5	124,5	123,5	1,0	4-DAMP	2,7E-10	1,1
NK2 (h) агонистический радиолиганд Aharony et al., Mol Pharmacol., 1993, 44, 356-363	0102	1,0E-05	66	34,5	33,7	34,1	0,4	[Nleu10]-NKA (4-10)	2,5E-09	0,8
NK3 (h) антагонистический радиолиганд Sarau et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1997, 281, 1303-1311	0104	1,0E-05	-1	102,5	98,5	100,5	2,0	SB 222200	4,3E-09	0,9
Y1 (h) агонистический радиолиганд Wieland et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1995, 275, 143-149	0106	1,0E-05	-34	127,5	141,4	134,4	6,9	NPY	5,8E-11	0,7
Y2 (h) агонистический радиолиганд Fuhlendorff et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1990, 87, 182-186	0107	1,0E-05	-23	130,5	116,0	123,2	7,2	NPY	4,4E-11	0,9
NTS1 (NT1) (h) агонистический радиолиганд Vita et al., FEBS Lett., 1993, 317, 139-142	0109	1,0E-05	99	2,7	-0,1	1,3	1,4	нейротензин	2,4E-10	0,8
дельта 2 (DOP) (h) агонистический радиолиганд Simonin et al., Mol Pharmacol., 1994, 46, 1015-1021	0114	1,0E-05	-6	106,9	105,2	106,1	0,8	DPDPE	2,0E-09	0,9
kappa (KOP) агонистический радиолиганд Meng et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1993, 90, 9954-9958	1971	1,0E-05	-2	111,0	92,3	101,6	9,4	U 50488	4,4E-10	1,2
mu (MOP) (h) агонистический радиолиганд Wang et al., FEBS Lett., 1994, 338, 217-222	0118	1,0E-05	0	108,3	92,6	100,5	7,9	DAMGO	4,4E-10	1,0
NOP (ORL1) (h) агонистический радиолиганд Ardati et al., Mol Pharmacol., 1997, 51, 816-824	0358	1,0E-05	-7	104,5	108,8	106,6	2,2	носисептин	1,3E-10	1,2
EP4 (h) агонистический радиолиганд Abramovitz et al., Biochem. Biophys. Acta., 2000, 1483, 285-293	0441	1,0E-05	8	89,2	95,5	92,3	3,2	PGE2	2,4E-10	1,1
5-HT1A (h) агонистический радиолиганд Mulheron et al., J. Biol. Chem., 1994, 269, 12954-12962	0131	1,0E-05	-29	129,9	128,6	129,2	0,6	8-OH-DPAT	6,7E-10	1,1
5-HT1B антагонистический радиолиганд Hoyer et al., Eur. J. Pharmacol., 1985, 118, 1-12	0132	1,0E-05	-7	107,0	106,3	106,7	0,3	серотонин	7,3E-09	0,9
5-HT2A (h) антагонистический радиолиганд Bonhaus et al., Brit. J. Pharmacol., 1995, 115, 622-628	0135	1,0E-05	-2	100,7	103,0	101,9	1,2	кетансерин	4,4E-10	1,0
5-HT2B (h) агонистический радиолиганд Choi et al., FEBS Lett., 1994, 352, 393-399.	1333	1,0E-05	-22	118,0	125,1	121,6	3,5	(±)DOI	3,1E-09	1,0
5-HT3 (h) антагонистический радиолиганд Hope et al., Brit. J. Pharmacol., 1996, 118, 1237-1245	0411	1,0E-05	-8	107,6	107,5	107,5	0,0	MDL 72222	4,2E-09	0,8
5-HT5a (h) агонистический радиолиганд Rees et al., FEBS Lett., 1994, 355, 242-246	0140	1,0E-05	-2	109,4	95,2	102,3	7,1	серотонин	1,2E-07	0,8
5-HT6 (h) агонистический радиолиганд Monsma et al., Mol Pharmacol., 1993, 43, 320-327	0142	1,0E-05	-6	106,5	105,4	105,9	0,6	серотонин	6,6E-08	0,8
5-HT7 (h) агонистический радиолиганд Shen et al., J. Biol. Chem., 1993, 268, 18200-18204	0144	1,0E-05	2	96,6	99,7	98,2	1,6	серотонин	9,4E-11	1,2
sst (неселективный) (агонистический радиолиганд) Brown et al., J. Biol. Chem., 1990, 265, 17995-18004	0149	1,0E-05	-11	111,6	110,0	110,8	0,8	соматостатин-14	1,1E-10	0,8
VPAC1 (VIP1) (h) агонистический радиолиганд Couvineau et al., Biochem. J., 1985, 231, 139-143	0157	1,0E-05	-6	103,9	107,3	105,6	1,7	VIP	1,5E-10	2,0
V1a (h) агонистический радиолиганд Tahara et al., Brit. J. Pharmacol., 1998, 125, 1463-1470	0159	1,0E-05	6	94,1	93,0	93,5	0,5	[d(CH2)51,Tyr(Me)2]-AVP	9,1E-10	1,6
Ca2+ канал (L, верапамиловый участок) (фенилалкиламин) антагонистический радиолиганд Reynolds et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1986, 237, 731-738	0163	1,0E-05	0	96,1	103,7	99,9	3,8	D 600	5,9E-09	0,5
KV канал антагонистический радиолиганд Sorensen et al., Mol Pharmacol., 1989, 36, 689-698	0166	1,0E-05	-4	104,3	104,2	104,3	0,0	альфа-дендротоксин	2,0E-10	1,7
SKCa канал антагонистический радиолиганд Hugues et al., J. Biol. Chem., 1982, 257, 2762-2769	0167	1,0E-05	4	97,3	95,2	96,2	1,1	апамин	8,4E-12	1,3
Cl-канал (GABA-управляемый) антагонистический радиолиганд Lewin et al., Mol Pharmacol., 1989, 35, 189-194	0170	1,0E-05	2	106,5	89,1	97,8	8,7	пикротоксин	9,3E-08	0,9
пикро (h) антагонистический радиолиганд Pacholczyk et al., Nature, 1991, 350, 350-354	0355	1,0E-05	-12	118,9	105,0	111,9	7,0	протриптилин	3,8E-09	0,9
транспортер допамин (h) антагонистический радиолиганд Pristupa et al., Mol Pharmacol., 1994, 45, 125-135	0052	1,0E-05	-15	123,5	106,4	114,9	8,5	BTCP	3,7E-09	1,0
5-HT транспортер (h) антагонистический радиолиганд Tatsumi et al., Eur. J. Pharmacol., 1999, 368, 277-283	0439	1,0E-05	-13	102,6	122,8	112,7	10,1	имипрамин	1,2E-09	2,1

Пример 30: Количественная оценка участков связывания рецепторов на срезах тканей

Авторадиография позволяет определять связывание вещества с его рецепторами на срезах ткани. Поэтому данный метод был использован для определения связывания некоторых соединений по настоящему изобретению, и было подсчитано число участков связывания рецепторов в ткани. Неожиданно обнаружилось, что при сравнении агониста и антагониста со сходной аффиностью к рецептору антагонист распознает большее число сайтов связывания, чем агонист. Это подчеркивает особую эффективность соединений по настоящему изобретению в качестве диагностически или терапевтически активных средств.

Все ткани замораживали в жидком азоте или на сухом льду сразу после хирургической резекции и хранили при -70°С. Рецепторную авторадиографию проводили на криостатических срезах образцов ткани толщиной 20 мкм (HM 500, Microm), помещенных на слайды для микроскопа, а затем хранили при -20°С в течение, по крайней мере, 3-х дней для улучшения адгезии ткани на слайд. Срезы сначала инкубировали в 50 мМ Tris-HCl буфере с рН 7,4, содержащем 0,02% BSA, в течение 3-х раз в 5 мин. Для авторадиографии были выбраны два соединения со сходной аффинностью к рецептору, и они были меченными ¹⁷⁷Lu в соответствии с методикой примера 31. Затем их инкубировали с ¹⁷⁷Lu-(IIIa) (антагонист) или ¹⁷⁷Lu-[NT(8-13)-Tle¹²] (агонист), используя 8000 cpm/мин 100 мкл в 50 мМ Tris-HCl буфере с рН 7,4, содержащем 0,02% BSA, 1 мМ о-фенантролина и 1 мМ MgCl₂ при комнатной температуре в течение 1 ч. После инкубации срезы промывали 5 раз в охлажденном на льду Tris-HCl (50 мМ, рН 7,4), содержащем 0,02% BSA и дважды в охлажденном на льду Tris-HCl без BSA. Срезы сушили в течение 15 мин в потоке холодного воздуха, а затем подвергали действию пленок Biomax MR (Kodak) в течение от 6 часов до 7 дней (в зависимости от плотности рецепторов на опухолевой ткани), при температуре 4°С. Для неспецифического связывания срезы инкубировали с 10^-6 M нейротензина. Авторадиограммы количественно анализировали с помощью системы обработки изображений на компьютере.

В результате, ¹⁷⁷Lu-(IIIa) связывал в 1,3 (± 0,5) раза больше рецепторов на мг ткани по сравнению с ¹⁷⁷Lu-[NT(8-13)-Tle¹²]. Принимая во внимание наличие BSA в инкубационном буфере и связывание ¹⁷⁷Lu-(IIIa) с белками плазмы, результат должен учитывать свободную фракцию вещества, определенную в анализе связывания белков плазмы (пример 28). При корректировке результатов для BSA-связывания ¹⁷⁷Lu-(IIIa), ¹⁷⁷Lu-(IIIa) связывал в среднем в 4,4 раза больше рецепторов, чем эквивалентный агонист ¹⁷⁷Lu-[NT(8-13)-Tle¹²].

Пример 31: ¹¹¹In-мечение некоторых соединений

Для того, чтобы служить в качестве диагностически или терапевтически активного агента, соединение должно быть меченным радиоактивным изотопом. Способ мечения должен быть целесообразным, чтобы обеспечить высокий радиохимический выход и чистоту радиоактивно меченого соединения по настоящему изобретению. В этом примере показано, что соединения по настоящему изобретению являются подходящими для радиомечения и могут быть помечены с высоким радиохимическим выходом и чистотой.

35 нмоль соединения формулы (IIIa) растворяли в буфере (0,4 M ацетата, 0,325 M гентизиновой кислоты, pH 5) и смешивали с 150 МБк ¹¹¹In (растворенного в 0,04 M HCl). Смесь нагревали до температуры 95°C в течение 30 мин. После охлаждения мечение анализировали с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) и ЖХВР. Для анализа ТСХ 2 мкл меченого раствора анализировали с использованием системы IТСХ SA (Varian, 10×1 см) в цитратном буфере (0,1 M, pH 5) и Raytest Minigita. Для ЖХВР, 10 мкл меченого раствора анализировали с использованием Aeris PEPTIDE 3,6 мкМ XB-C18; 100×4,6 мм (Phenomenex). Градиент A: MeCN, 0,1% ТФУ, градиент B: H₂O, 0,1% ТФУ, скорость потока 0,8 мл/мин; детектор: NaI (Raytest), DAD 254 нм. Время удерживания меченого продукта: 9,5-9,9 мин.

Радиохимический выход составлял ≥95%, радиохимическая чистота была ≥95%, удельная активность составляла: 4 МБк/нмоль.

Мечение ¹⁷⁷Lu осуществляли аналогично данному протоколу с таким же выходом и чистотой.

Пример 32: Исследование визуализации и биораспределения

Радиоактивно меченные соединения могут быть определены методами визуализации, такими как ОФЭКТ и ПЭТ. Кроме того, данные, полученные с помощью таких методов, могут быть подтверждены прямым измерением радиоактивности, содержащейся в отдельных органах, полученным от животного, которому было введено радиоактивно меченное соединение по изобретению. Таким образом, биораспределение радиоактивно меченного соединения может быть определено и проанализировано. Этот пример показывает, что соединения по настоящему изобретению демонстрируют биораспределение, подходящее для диагностической визуализации и терапевтического лечения опухолей.

Все эксперименты на животных были проведены в соответствии с законами Германии о защите животных. Самки мышей CD-1 Nu/Nu (в возрасте от 6 до 8 недель, Charles River, Зульцфельд, Германия) были инокулированы либо 5×10⁶ клетками HT-29 в один бок и 5×10⁶ клетками Capan-1 в другой бок, либо 1×10⁷ клетками HEK293 в плечевую зону. Когда опухоли стали пальпируемыми (после 14-18 дней), мышам, получившим 5-50 МБк ¹¹¹In-мечение, внутривенно через хвостовую вену вводили (IIIa). Изображения получали на системе NanoSPECT/CT (BioScan Ltd., Вашингтон, США). Сочетание данных ОФЭКТ и КТ осуществляли с помощью программного обеспечения OsiriX Imaging Software.

Для исследований биораспределения животных умерщвляли путем декапитации в различные моменты времени после введения (3, 6, 12 и 24 ч после введения), а затем расчленяли. Различные органы и ткани собирали и взвешивали, и определяли радиоактивность с помощью γ-счетчика. На одну временную точку использовали не менее трех животных. Результаты выражали в виде процента от введенной дозы на грамм ткани (% ID/г).

Результаты исследования визуализации и биораспределения некоторых соединений показаны на фиг.6-10.

Признаки настоящего изобретения, раскрытые в описании, в формуле изобретения, в списке последовательностей и/или на фигурах, могут как по отдельности, так и в любой их комбинации быть материалом для осуществления изобретения в его различных формах.

--->

Список последовательностей

<110> 3B Pharmaceuticals GmbH

<120> Конъюгат, содержащий лиганд рецептора нейротензина, и его применение

<130> D 10021 PCT

<150> EP 14 001 992.8

<151> 2014-06-10

<150> EP 14 002 002.5

<151> 2014-06-11

<160> 24

<170> PatentIn версия 3.3

<210> 1

<211> 13

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<220>

<221> Пептид

<222> (1)..(13)

<223> Нейротензин

<400> 1

Glu Leu Tyr Glu Asn Lys Pro Arg Arg Pro Tyr Ile Leu

1 5 10

<210> 2

<211> 8

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(8)

<223> Восемь C-концевых аминокислот нейротензина

<400> 2

Lys Pro Arg Arg Pro Tyr Ile Leu

1 5

<210> 3

<211> 6

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(6)

<223> Шесть C-концевых аминокислот нейротензина

<400> 3

Arg Arg Pro Tyr Ile Leu

1 5

<210> 4

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)succinamic

acid

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa представляет собой гамма-аминомасляную кислоту

<400> 4

Xaa Xaa Lys Xaa Xaa

1 5

<210> 5

<211> 3

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa представляет собой гамма-аминомасляную кислоту

<400> 5

Xaa Lys Xaa

1

<210> 6

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa is 6-aminohexanoic acid

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa представляет собой лизинамид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<400> 6

Xaa Xaa Lys Xaa Xaa

1 5

<210> 7

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (8)..(8)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<223> Xaa представляет собой лизинамид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<400> 7

Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

1 5 10

<210> 8

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa представляет собой гамма-аминомасляную кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa представляет собой трет-бутилглицин

<400> 8

Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Arg Arg Pro Tyr Xaa Leu

1 5 10

<210> 9

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa представляет собой гамма-аминомасляную кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa представляет собой трет-бутилглицин

<400> 9

Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Arg Arg Pro Tyr Xaa Leu

1 5 10

<210> 10

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (8)..(8)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<223> Xaa представляет собой гамма-аминомасляную кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (14)..(14)

<223> Xaa представляет собой трет-бутилглицин

<400> 10

Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Arg Pro Tyr Xaa Leu

1 5 10 15

<210> 11

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa представляет собой лизинамид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa is glutamic acid

<400> 11

Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Xaa

1 5

<210> 12

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa представляет собой лизинамид

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой

<400> 12

Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Xaa

1 5

<210> 13

<211> 25

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa представляет собой гамма-аминомасляную кислоту

<400> 13

Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Asn Ala Val Pro Asn Leu Arg Gly Asp Leu Gln

1 5 10 15

Val Leu Ala Gln Lys Val Ala Arg Thr

20 25

<210> 14

<211> 30

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (21)..(21)

<223> Xaa представляет собой гамма-аминомасляную кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (22)..(22)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (23)..(23)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (24)..(24)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (26)..(26)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (27)..(27)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (28)..(28)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> Xaa представляет собой лизинамид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (30)..(30)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<400> 14

Asn Ala Val Pro Asn Leu Arg Gly Asp Leu Gln Val Leu Ala Gln Lys

1 5 10 15

Val Ala Arg Thr Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

20 25 30

<210> 15

<211> 30

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (21)..(21)

<223> Xaa представляет собой гамма-аминомасляную кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (22)..(22)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (23)..(23)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (24)..(24)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (26)..(26)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (27)..(27)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (28)..(28)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> Xaa представляет собой цистеин амид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (30)..(30)

<223> Xaa представляет собой 3-(N-малеимидо)пропионовую кислоту

<400> 15

Asn Ala Val Pro Asn Leu Arg Gly Asp Leu Gln Val Leu Ala Gln Lys

1 5 10 15

Val Ala Arg Thr Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

20 25 30

<210> 16

<211> 27

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa представляет собой лизинамид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (26)..(26)

<223> Xaa представляет собой гамма-аминомасляную кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (27)..(27)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<400> 16

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Ala Val Pro Asn Leu Arg Gly Asp Leu Gln

1 5 10 15

Val Leu Ala Gln Lys Val Ala Arg Thr Xaa Xaa

20 25

<210> 17

<211> 27

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa представляет собой лизинамид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (26)..(26)

<223> Xaa представляет собой гамма-аминомасляную кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (27)..(27)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<400> 17

Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Asn Ala Val Pro Asn Leu Arg Gly Asp Leu Gln

1 5 10 15

Val Leu Ala Gln Lys Val Ala Arg Thr Xaa Xaa

20 25

<210> 18

<211> 14

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa представляет собой гамма-аминомасляную кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<223> Xaa представляет собой гидроксипролин

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (11)..(11)

<223> Xaa представляет собой циклогесаламин

<400> 18

Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Lys Arg Pro Xaa Gly Xaa Ser Pro Leu

1 5 10

<210> 19

<211> 14

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa представляет собой гамма-аминомасляную кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa представляет собой орнитин

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (8)..(8)

<223> Xaa представляет собой октагидроиндол-2-карбоновую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (11)..(11)

<223> Xaa представляет собой альфа-метил-L-фенилаланин

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (13)..(13)

<223> Xaa представляет собой D-2-нафтилаланин

<400> 19

Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Xaa Arg Xaa Pro Gly Xaa Ser Xaa Ile

1 5 10

<210> 20

<211> 4

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa представляет собой лизинамид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<400> 20

Xaa Xaa Xaa Xaa

1

<210> 21

<211> 4

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa представляет собой лизинамид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa представляет собой глутаровую кислоту

<400> 21

Xaa Xaa Xaa Xaa

1

<210> 22

<211> 4

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<400> 22

Gly Phe Leu Gly

1

<210> 23

<211> 4

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<400> 23

Ala Leu Ala Leu

1

<210> 24

<211> 24

<212> Белок

<213> Искусственный

<220>

<223> Синтетический

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa представляет собой N-(1-(4,4-диметил-2,6-диоксоциклогексилиден)этил)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa представляет собой

N-(3-{2-[2-(3-аминопропокси)этокси]этокси}пропил)сукцинамовую кислоту

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa представляет собой гамма-аминомасляную кислоту

<400> 24

Xaa Lys Xaa Xaa Asn Ala Val Pro Asn Leu Arg Gly Asp Leu Gln Val

1 5 10 15

Leu Ala Gln Lys Val Ala Arg Thr

20

<---

1. Конъюгат, представленный общей структурной формулой (1)

[TM1]-[AD1]-[LM]-[AD2]-[TM2] (1),

где TM1 представляет собой первую адресующую часть, где первая адресующая часть способна связываться с первой мишенью,

AD1 представляет собой первый соединительный фрагмент или отсутствует,

LM представляет собой линкерный фрагмент, где линкерный фрагмент LM представлен общей формулой

-[X]_a-[Y]-[Z]_b- (VIII),

где [X]_a представляет собой фрагмент структурного элемента, образованный количеством «a» структурных элементов X, или отсутствует,

[Y] представляет собой разветвленный фрагмент или отсутствует, где, когда присутствует, [Y] содержит реакционноспособную группу, которая дает возможность образовать связь с соответствующей дополняющей реакционноспособной группой, представленной дополнительной группой AD3, где связь выбрана из группы, включающей амидную связь, уреидную связь, тиоуреидную связь и аминную связь,

[Z]_b представляет собой фрагмент структурного элемента, образованный количеством «b» структурных элементов Z, или отсутствует,

и где «a» и «b», индивидуально и независимо друг от друга, обозначают любое целое число 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и 20 при условии, что a+b обозначает 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 или 0, предпочтительно «a» и «b», индивидуально и независимо друг от друга, обозначают любое целое число 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10, более предпочтительно любое целое число из 0, 1, 2, 3, 4 и 5, и

где каждый из фрагментов структурного звена Х, разветвленного фрагмента Y и фрагмента структурного элемента Z независимо представлен общей формулой

где Lin², если присутствует, и Lin³, если присутствует, каждый и независимо, выбраны из группы, включающей -CO-, -NR¹⁰-, -S-, -CO-NR¹⁰-, -CS-NR¹⁰-, -O-, -сукцинимид- и -CH₂-CO-NR¹⁰-;

где «-сукцинимид-» означает

R¹⁰ выбран из группы, состоящей из водорода и (C₁-C₄)алкила;

и азот во всех содержащих азот фрагментах связан с R⁹;

и где R⁹ выбран из -(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₃-C₈)карбоцикло-, -арилена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-арилена-, -арилен-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-арилен-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)карбоцикло-, -(C₃-C₈)карбоцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)карбоцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₃-C₈)гетероцикло-, (C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)гетероцикло-, -(C₃-C₈)гетероцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)гетероцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(CH₂CH₂O)_r-, и -(CH₂)_s-(CH₂CH₂O)_r-(CH₂)_t-;

и где r обозначает любое целое число из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10;

s обозначает любое целое число из 0, 1, 2, 3 и 4; и

t обозначает любое целое число из 0, 1, 2, 3 и 4;

где фрагмент структурного элемента [X]_a связан с соседним фрагментом посредством связи, где эта связь индивидуально и независимо выбрана из группы, включающей амидную связь, уреидную связь, карбаматную связь, сложноэфирную связь, простую эфирную связь, тиоэфирную связь и дисульфидную связь, и где соседний фрагмент выбран из группы, включающей разветвленный фрагмент [Y], фрагмент структурного элемента [Z]_b, второй соединительный фрагмент AD2, вторую адресующую часть TM2, первый соединительный фрагмент AD1 и первую адресующую часть TM1;

разветвленный фрагмент [Y] связан с соседним фрагментом посредством связи, где эта связь индивидуально и независимо выбрана из группы, включающей амидную связь, уреидную связь, карбаматную связь, сложноэфирную связь, простую эфирную связь, тиоэфирную связь и дисульфидную связь, и где соседний фрагмент выбран из группы, включающей фрагмент структурного элемента [X]_a, первый соединительный фрагмент AD1, первую адресующую часть TM1, фрагмент структурного элемента [Z]_b, второй соединительный фрагмент AD2 и вторую адресующую часть TM2; и

фрагмент структурного элемента [Z]_b связан с соседним фрагментом посредством связи, где эта связь индивидуально и независимо выбрана из группы, включающей амидную связь, уреидную связь, карбаматную связь, сложноэфирную связь, простую эфирную связь, тиоэфирную связь и дисульфидную связь, и где соседний фрагмент выбран из группы, включающей разветвленный фрагмент [Y], фрагмент структурного элемента [X]_a, первый соединительный фрагмент AD1, первую адресующую часть TM1, второй соединительный фрагмент AD2 и вторую адресующую часть TM2;

AD2 представляет собой второй соединительный фрагмент или отсутствует, и

TM2 представляет собой вторую адресующую часть, где вторая адресующая часть способна связываться со второй мишенью;

где каждый и любой из первого соединительного фрагмента AD1 и второго соединительного фрагмента AD2 перед образованием связи независимо представлен общей формулой

RG3-R8-RG4 (10),

где RG3 представляет собой реакционноспособную группу, которая используется для образования связи, выбранную из группы, включающей амино, карбоновую кислоту, активированную карбоновую кислоту, хлор, бром, йод, сульфгидрил, гидроксил, сульфоновую кислоту, активированную сульфоновую кислоту, сложные эфиры сульфоновой кислоты, такие как мезилат или тозилат, акцепторы Михаэля, напряженные алкены, такие как транс-циклооктен, изоцианат, изотиоцианат, альдегид, кетон, аминоокси, гидразид, гидразин, азид, алкин и тетразин;

где RG4 представляет собой реакционноспособную группу, которая используется для образования связи, выбранную из группы, включающей амино, карбоновую кислоту, активированную карбоновую кислоту, хлор, бром, йод, сульфгидрил, гидроксил, сульфоновую кислоту, активированную сульфоновую кислоту, сложные эфиры сульфоновой кислоты, такие как мезилат или тозилат, акцепторы Михаэля, напряженные алкены, такие как транс-циклооктен, изоцианат, изотиоцианат, альдегид, кетон, аминоокси, гидразид, гидразин, азид, алкин и тетразин; и

где R8 выбран из -(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₃-C₈)карбоцикло-, -O-(C₁-C₈)алкила-, -арилена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-арилена-, -арилен-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)карбоцикло, -(C₃-C₈)карбоцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(C₃-C₈)гетероцикло-, (C₁-C₁₀)алкилиден-(C₃-C₈)гетероцикло-, -(C₃-C₈)гетероцикло-(C₁-C₁₀)алкилидена-, -(CH₂CH₂O)_r- и -(CH₂CH₂O)_r-CH₂-;

и r обозначает любое целое число из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10;

где первый соединительный фрагмент AD1 опосредует связь с первой адресующей частью TM1 и с соседним фрагментом, где соседний фрагмент выбран из группы, включающей линкерный фрагмент LM, фрагмент структурного элемента [X]_a, разветвленный фрагмент Y, фрагмент структурного элемента [Z]_b, второй соединительный фрагмент AD2 и вторую адресующую часть TM2, где связь, индивидуально и независимо, выбрана из группы, включающей амидную связь, сульфонамидную связь, уреидную связь, тиоэфирную связь, простую эфирную связь, карбаматную связь, аминную связь, триазольную связь, оксимную связь, гидразоновую связь, дисульфидную связь, пиразиновую связь и дигидропиразиновую связь;

второй соединительный фрагмент AD2 опосредует связь со второй адресующей частью TM2 и с соседним фрагментом, где соседний фрагмент выбран из группы, включающей линкерный фрагмент LM, фрагмент структурного элемента [Z]_b, разветвленный фрагмент Y, фрагмент структурного элемента [X]_a, первый соединительный фрагмент AD1 и первую адресующую часть TM1, где связь индивидуально и независимо выбрана из группы, включающей амидную связь, сульфонамидную связь, уреидную связь, тиоэфирную связь, простую эфирную связь, карбаматную связь, аминную связь, триазольную связь, оксимную связь, гидразоновую связь, дисульфидную связь, пиразиновую связь и дигидропиразиновую связь;

AD3 представляет собой третий соединительный фрагмент или отсутствует, и, если присутствует, третий соединительный фрагмент AD3 опосредует связь между разветвленным фрагментом [Y] и эффекторным фрагментом EM, или, если присутствует, соединительный фрагмент AD3 опосредует связь между второй адресующей частью TM2 и эффекторным фрагментом EM, где

зффекторный фрагмент EM выбран из группы, включающей эффектор, акцептор и -[акцептор-эффектор], где

акцептор представляет собой фрагмент, который опосредует связывание эффектора с третьим соединительным фрагментом AD3, если он присутствует, или акцептор представляет собой фрагмент, который опосредует связывание эффектора с разветвленным фрагментом [Y], и

эффектор выбран из группы, включающей диагностически активный агент и терапевтически активный агент,

где первая адресующая часть и/или вторая адресующая часть представляет собой соединение формулы (2)

где R¹ представляет собой метил;

AA-COOH представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей 2-амино-2-адамантанкарбоновую кислоту, циклогексилглицин и 9-амино-бицикло[3,3,1]нонан-9-карбоновую кислоту;

R² представляет собой (C₁-C₆)алкил;

ALK представляет собой (C₂-C₅)алкилиден;

R³, R⁴ и R⁵, каждый и независимо, выбраны из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил, при условии, что один из R³, R⁴ и R⁵ представлен следующей формулой (3):

где ALK̓ представляет собой (C₂-C₅)алкилиден;

R⁶ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил; и

R⁷ представляет собой связь; и

где вторая адресующая часть и/или первая адресующая часть представляет собой соединение формулы (2), как определено выше, или выбрана из группы, включающей антитело, связывающие антиген фрагменты антитела, тяжелую цепь верблюжьего IgG (hcIgG), антитело IgNAR хрящевых рыб (например, акулы), белковый каркас, мишень-связывающий пептид, пептидную нуклеиновую кислоту (PNA), мишень-связывающий полипептид или белок, мишень-связывающую молекулу нуклеиновой кислоты, углевод, липид и мишень-связывающую малую молекулу;

при условии, что по меньшей мере одна из адресующих частей ТМ1 или ТМ2 представляет собой соединение формулы (2), определенное выше;

или его фармакологически приемлемая соль.

2. Конъюгат по п.1, где R8 представляет собой

а) –(CH₂-CH₂-O)_r-CH₂-, где r обозначает любое целое число из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10, предпочтительно r равен 2; или

b) -(C₁-C₁₀)алкилиден-, предпочтительно –(CH₂)_n-, где n обозначает любое целое число из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10, предпочтительно n равен 1, 2, 3, 4 или 5.

3. Конъюгат по любому из пп.1 и 2, где каждый из [X]_a фрагмента структурного элемента [X]_a, разветвленного фрагмента [Y] и фрагмента структурного элемента [Z]_b представляет собой пептид.

4. Конъюгат по любому из пп.1-3, где конъюгат содержит эффекторный фрагмент, где эффекторный фрагмент содержит или способен содержать эффектор, указанный эффектор выбран из группы, включающей диагностически активный агент, терапевтически активный агент и их комбинацию.

5. Конъюгат по любому из пп.1-4, где R¹ представляет собой метил.

6. Конъюгат по любому из пп.1-5, где R³, R⁴ и R⁵, каждый и независимо, выбраны из группы, включающей водород и метил, при условии, что один из R³, R⁴ и R⁵ представлен следующей формулой (3):

где ALK̓ представляет собой (C₂-C₅)алкилиден;

R⁶ выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)алкил.

7. Конъюгат по любому из пп.1-6, где первая адресующая часть выбрана из группы, включающей соединение формулы (4), соединение формулы (5) и соединение формулы (6), где

соединение формулы (4) представляет собой

соединение формулы (5) представляет собой

соединение формулы (6) представляет собой

8. Конъюгат по п.1, где акцептор представляет собой хелатор, предпочтительно хелатор выбран из группы, включающей DOTA, NOTA, DTPA, TETA, EDTA, NODAGA, NODASA, TRITA, CDTA, BAT, DFO или HYNIC, более предпочтительно хелатор представляет собой DOTA.

9. Конъюгат по любому из пп.1-8, выбранный из группы, включающей конъюгаты формул (12), (12a), (13), (13a), (14), (14a), (15), (15a), (16), (16a), (17), (17a),(18), (18a), (19), (19a), (20), (20a), (21), (21a), (22), (22a), (23), (23a), (24), (24a), (25), (25a), (26), (26a), (27), (27a), (28), (29) и (30):

10. Конъюгат по любому из пп.4-9, предпочтительно по пп.8 и 9, где эффектор представляет собой диагностически активный нуклид, предпочтительно диагностически активный радионуклид, или терапевтически активный нуклид, предпочтительно терапевтически активный радионуклид.

11. Конъюгат по любому из пп.1-9, где эффектор выбран из группы, включающей малую молекулу, антитело, антигенсвязывающий фрагмент антитела, антикалин, аптамер, шпигельмер, антипролиферативный агент, антимиграционный агент, антиангиогенный агент, цитостатический агент, цитотоксический агент, антитромботический агент, противовоспалительный агент, антифлогистонный агент, антикоагулянтный агент, антибактериальный агент, противовирусный агент, противогрибковый агент, эндогенный флуорофор, полициклическое ароматическое соединение, кумарин, хинолин, индол, имидазол, флуорофор с УФ-возбуждением, флуоресцеин, родамин, краситель на основе нафтоксантена, фенантридин, краситель BODIPY, цианин, фталоцианин, ксантен, акридин, оксазин, полиены, оксонол, бензимидазол, азаметин, стирил, тиазол, антрахинон, нафталимид, аза[18]аннулен, порфин, металл-лиганд-комплекс, скварен, 8-гидроксихинолин-производное, полиметин, нанокристалл, флуоресцентный белок, белок, перилен, фталоцианин, ап-конверсионный краситель, дикетопирролoпиррол, молекулу семейства порфиринов, включая, но этим не ограничиваясь, производное гематопорфирина и молекулу на основе производного гематопорфирина, производное бензопорфирина, 5-аминолевулиновую кислоту и тексапирин; молекулу семейства хлорофиллов, включая, но этим не ограничиваясь, хлорин, пурпурин и бактериохлорин; краситель, включая, но этим не ограничиваясь, фталоцианин и нафталоцианин, небольшой одноядерный или многоядерный парамагнитный хелат, металлопорфирин, полимерный или макромолекулярный носитель, предпочтительно ковалентно или нековалентно меченный парамагнитным хелатом, дисперную CA, включая фторированную или нефторированную парамагнитную мицеллу или липосому и парамагнитную или супермагнитную частицу, например оксид железа, Gd3+-меченый цеолит, диамагнитный полимер CEST; диамагнитный гиперполяризационный зонд, включая, но этим не ограничиваясь, газы и аэрозоли, ¹³C-меченое соединение или ион, улучшающий ультразвуковой контраст агент, содержащий оболочку и ядро, где оболочка предпочтительно состоит из вещества, выбранного из группы, включающей фосфолипид, поли(D,L-лактид-со-гликолид) (PLGA), сывороточный альбумин, полимер, перфлутрен, коллоид на основе углерода для определения смещения фаз, перфлексан, липид/галактозу, гексафторид серы, перфтороктил бромид, поверхностно-активное вещество, олигопептид и галактозу, и ядро предпочтительно состоит из вещества, выбранного из группы, включающей воздух, перфторуглерод, декафторбутан, октафторпропан, додекафторпентан и перфторбутан, углеродную нанотрубку, предпочтительно однослойную углеродную нанотрубку или многослойную углеродную нанотрубку, фуллерен, дендример, квантовую точку, липосому, кремниевую наночастицу, магнитную наночастицу, липидную наночастицу, включая, но этим не ограничиваясь, наноэмульсию, полимерную наночастицу, наночастицу на основе альбумина и нанокристалл; и нуклеиновую кислоту, малую молекулу, аминокислоту, пептид, белок, углевод, липид, гликобелок, гликан или липобелки, предпочтительно обладающие антипролиферативными, антимиграционными, антиангиогенными, цитостатическими и/или цитотоксическими свойствами.

12. Конъюгат по любому из пп.1-11, где первая адресующая часть TM1 нацелена на NTR, предпочтительно на NTR1, и где вторая адресующая часть TM2 нацелена на мишень, отличающуюся от рецептора нейротензина 1, предпочтительно мишенью, на которую нацелена вторая адресующая часть TM2, является мишень, экспрессированная опухолевой клеткой.

13. Конъюгат по п.12, где вторая адресующая часть выбрана из группы, включающей антитело, связывающий антиген фрагмент антитела, тяжелую цепь верблюжьего IgG (hcIgG), антитело IFNAR хрящевых рыб, белковый каркас, мишень-связывающий пептид, пептидная нуклеиновая кислота (PNA), мишень-связывающий полипептид или белок, мишень-связывающую молекулу нуклеиновой кислоты, углевод, липид и мишень-связывающую малую молекулу.

14. Конъюгат по любому из пп.1-13 для применения в способе диагностики заболевания.

15. Конъюгат по любому из пп.1-13 для применения в способе лечения заболевания.

16. Конъюгат по любому из пп.1-13 для применения в способе идентификации пациента, будет ли пациент реагировать или, вероятно, не будет реагировать на лечение заболевания, где способ идентификации пациента включает проведение способа диагностики с использованием соединения по любому из пп.1-13, предпочтительно способ диагностики заболевания, как описано в п.14.

17. Конъюгат по любому из пп.1-13 для применения в способе выбора пациента из группы пациентов, которые возможно будут реагировать или, вероятно, не будут реагировать на лечение заболевания, где способ выбора пациента из группы пациентов включает проведение способа диагностики с использованием соединения по любому из пп.1-13, предпочтительно способ диагностики заболевания, как описано в п.14.

18. Конъюгат по любому из пп.1-13 для применения в способе для стратификации группы пациентов на пациентов, которые, вероятно, отреагируют на лечение заболевания, и на пациентов, которые, вероятно, не отреагируют на лечение заболевания; где способ стратификации группы пациентов включает проведение способа диагностики с использованием соединения по любому из пп.1-13, предпочтительно способ диагностики заболевания, как описано в п.14.

19. Конъюгат по любому из пп.1-13 для применения в способе доставки эффектора к рецептору нейротензина, предпочтительно рецептору нейротензина 1, или для применения в способе доставки эффектора к мишени, на которую нацелена либо первая адресующая часть TM1, либо вторая адресующая часть TM2, где эффектор выбран из группы, включающей диагностически активный агент и терапевтически активный агент.

20. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью лиганда на NTR1, где композиция содержит эффективное количество соединения по любому из пп.1-13 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.