Система мероприятий по борьбе с эндо- и экзогенными стадиями кокцидий цыплят-бройлеров при напольной технологии их содержания
Владельцы патента RU 2751602:
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко" (ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН) (RU)
Изобретение относится к области ветеринарной паразитологии и может быть использовано в птицеводческих хозяйствах по выращиванию бройлеров для профилактики кокцидиозов птиц. Способ по борьбе с эндо- и экзогенными стадиями кокцидий цыплят-бройлеров при напольной технологии их содержания предусматривает перед заселением цыплят обработку объектов внешней среды комплексным средством в дозе 0,5 л на м2 при экспозиции 2 ч, содержащим в качестве исходных компонентов (масс. %): глутаровый альдегид - 4; 2-фенилфенол - 6,5; 4-хлор-3-метилфенил - 5; изопропанол - 16; молочная кислота - 3; поверхностно-активные вещества - 18; вода до 100. Также используют совместное назначение кормового кокцидиостатика салиномицина 12%-ного в дозе 500 г на тонну корму в течение периода выращивания и кокцидиостатика толтразурила 2,5%-ного с питьевой водой с 8-10 суток жизни в дозе из расчета 1 литр препарата на 1 тонну воды. Предлагаемый способ борьбы с эндо- и экзогенными стадиями кокцидий цыплят-бройлеров при напольной технологии их содержания является безопасным для человека, животного и птицы, не оказывает повреждающего действия на технологическое оборудование птичников, является эффективным против устойчивых эндогенных стадий кокцидий, повышает выживаемость и продуктивность птицы. 1 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области ветеринарной паразитологии и может быть использовано в птицеводческих хозяйствах промышленного типа при заболеваниях цыплят-бройлеров кокцидиозом.
Следует отметить, что в нашей стране по росту производства среди разных отраслей животноводства, птицеводство занимает достойное первое место. Учитывая мировые тенденции в развитии отрасли, за последние годы в птицеводстве изменилась технология производства, в первую очередь, в бройлерном производстве. Еще несколько десятилетий назад все бройлерное и яичное производство в нашей стране было сосредоточено на клеточном содержании птиц, но в настоящее время более 60% мясного молодняка птиц практикуют напольное содержания.
Проведенными исследованиями установлено влияние технологии содержания птиц на эпизоотическое состояние хозяйства. Доказано, что каждое птицеводческое хозяйство, практикующее напольное содержание птиц, неблагополучно по паразитарным болезням и, чаще всего, кокцидиозом. В кишечнике молодняка кур по данным литературы паразитируют девять видов эймерий (Eimeria spp.), а в числе наиболее распространенных и патогенных являются: Е. tenella, Е. necatrix, Е. maxima, Е. acervulina, Е. brunetti. Особенностью данной инвазии является то, что в условиях птицеводческих хозяйств часто у молодняка птиц имеет место смешанная инвазия, обусловленная паразитированием нескольких видов эймерий одновременно (1-5).
Эймериозом наиболее часто и тяжело болеют цыплята от 10 до 30-суточного возраста, иногда и старше. Больная эймериозом и переболевшая птица является источником данной инвазии. В неблагополучных птицеводческих хозяйствах передача инвазии происходит через загрязненные спорулированными ооцистами подстилку, кормушки, корма, воду и инвентарь. Механическими разносчиками ооцист эймерий часто становятся синантропные птицы, грызуны, насекомые: мухи, тараканы, сверчки, а также обслуживающий персонал - на обуви, одежде и предметах ухода за птицей. Способствует широкому распространению эймериоза среди цыплят различные нарушения технологии выращивания молодняка: повышенная влажность воздуха и подстилки, скученность птицы в помещениях, неполноценное кормление, контакт между цыплятами и птицей старших возрастных групп и нарушения ветеринарно-санитарных правил.
К тому же, ооцисты кокцидий птиц весьма устойчивы во внешней среде и даже в зонах с дождливым летом и холодными зимами ооцисты эймерий способны сохранять жизнеспособность больше года.
Для достижения устойчивых результатов в борьбе с кокцидиозами птиц усилиями ученых и практиков предложено большое количество препаратов как против эндогенных стадий, так и против экзогенных. К тому же, кокцидий имеют способность «привыкать» к используемым без системы препаратам. Проблема кокцидиозов птиц продолжает ставить задачи перед исследователями, а именно, совершенствовать меры борьбы с инвазией и разрабатывать комплексную программу по борьбе с эндо- и экзогенными стадиями кокцидий у цыплят-бройлеров при напольной технологии их содержания.
Из современных средств, которые применяют против экзогенных стадий кокцидий, известны: 4%-ный раствор едкого натра, который должен иметь температуру не ниже 80°С; 7%-ный раствор аммиака; 2%-ная эмульсия ортохлорфенола; 10%-ный раствор однохлористого йода, однако эффективность упомянутых выше средств не устраивает запросы птицеводства на промышленной основе, когда нужны комбинированные средства, состоящие из нескольких активных компонентов и вспомогательных веществ.
В числе таковых уместно рассматривать комплексное средство, который в своем составе в качестве действующих веществ содержит: глутаровый альдегид, 2-фенилфенол, 4-хлор-3-метилфенил, изопропанол, молочную кислоту и вспомогательные вещества, при их совместном применении в оптимальных концентрациях.
Первые четыре из отмеченных веществ: глутаровый альдегид, 2-фенилфенол, 4-хлор-3-метилфенил, изопропанол, известны как высокоэффективные дезинфицирующие средства для наружного применения. Следующее вещество, входящее в состав рассматриваемого средства, - молочная кислота, является антисептиком и оказывает действие на оболочку ооцист кокцидий, облегчает доступ действующим веществам (ДВ). Отмеченные выше вещества при совместном применении против ооцист кокцидий птиц оказывают синергическое действие на биологические объекты, а используемые вспомогательные компоненты - поверхностно активные вещества, обеспечивают очистку пола, стен и технологического оборудования от биозагрязнений и равномерно распределяют ДВ по поверхности, обеспечивая высокую эффективность.
В задачу наших исследований входило разработать систему мероприятий по борьбе с эндо- и экзогенными стадиями кокцидий цыплят-бройлеров при напольной технологии содержания доступными средствами, пригодными для применения как ручным, так и механизированным способом, не повреждая обрабатываемое технологическое оборудование.
Решение поставленной задачи достигается тем, что в качестве средства против экзогенных стадий кокцидий птиц для дезинвазии птичников было использовано составленное нами комплексное средство, имеющее следующий состав: глутаровый альдегид - 4%; 2-фенилфенол - 6,5%; 4-хлор-3-метилфенил - 5%; изопропанол - 16%, молочная кислота - 3%, вспомогательные компоненты - поверхностно активные вещества - 18%, вода до 100%.
Против эндогенных стадий кокцидий в птичниках с момента самостоятельного потребления корма цыплята-бройлеры получали ежедневно с кормом ионофорный кормовой антибиотик 12%-ный в дозе 500 г/тонну корма, который исключили из корма за пять дней до убоя. Механизм действия салиномицина состоит в образовании им липофильных комплексов с щелочными одно- и двухвалентными катионами, а также способности переносить их через клеточную стенку кокцидий. В результате нарушается осмотический баланс и происходит гибель паразита.
Учитывая особую устойчивость эндогенных стадий кокцидий к используемым препаратам на фоне применения ионофорного кормового кокцидиостатика салиномицина, пошли на комбинированное назначение всему поголовью цыплят-бройлеров в птичнике в возрасте восемь-10 дней с питьевой водой в рекомендованной дозе кокцидиоцида толтразурила 2,5%-ного в дозе из расчета один л препарата на 1000 л воды в течение 72 ч непрерывно.
Следует отметить, что входящий в комплексную программу толтразурил 2,5%-ный обладает кокцидиоцидным действием в отношении всех внутриклеточных стадий цикла развития эймерий. У шизонтов первого и второго поколения наблюдается изменение внутриклеточных структур, множественные цитоплазматические вакуоли и неполная мерогония. Мерозойты имеют такие же изменения. Микро- и макрогаметоцисты вздуты и полностью теряют внутриклеточные структуры. Несмотря на кокцидиоцидный эффект толтразурила 2,5%-ного, он не препятствует развитию иммунитета. Свободные формы паразита в просвете кишечника, на которые препарат не действует, стимулируют иммунитет, к тому же толтразурил 2,5%-ный усиливает формирование иммунитета к кокцидиозу, что связано с разрушением внутриклеточных форм развития кокцидий, являющихся антигенами. Кокцидий, уничтоженные на внутриклеточном уровне, сильно стимулируют иммунную систему. Кроме того, предлагаемая терапия толтразурилом 2,5%-ным увеличивает временной интервал развития адаптации кокцидий к применяемым кормовым кокцидиостатикам, снижает уровень уже приобретенной резистентности и направлена на увеличение производственных показателей. Из доступных заявителю источников информации не известна указанная совокупность существующих признаков, позволяющих получать указанный технический результат, поэтому заявляемое изобретение соответствует условно патентоспособности «новизна».
Заявителю не известны средства аналогичного назначения, в которых были раскрыты отличительные признаки заявляемого изобретения с получением от использования его в какой-либо совокупности признаков указанного технического результата. Следовательно, заявляемое изобретение соответствует условно патентоспособности «изобретательский уровень».
Доказательства промышленной применимости заявляемого приводятся в следующих примерах.
Пример 1. Приготовление рабочих растворов, разведение культуры ооцист кокцидий птиц и проведение лизис-теста с разными концентрациями средства дезинвазии
Исследования по отмеченной проблеме проводили в условиях лаборатории «Всероссийского научно-исследовательского института фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений имени К.И. Скрябина» («ВНИИП») - филиала ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН (г. Москва).
Рабочий раствор с разными концентрациями комбинированного дез. средства готовили в следующей последовательности. В приготовленные четыре стеклянные колбы на один л наливали по 600 мл дистиллированной воды и в первые три из них добавляли по 30; 40 и 50 мл средства, тщательно размешивали в течение пяти минут, объем доводили до одного литра. Снова размешивали в течение пяти минут и раствор был готов к использованию. В четвертую колбу к 600 мл воды добавляли 40 г кристаллического фенола, размешивали, объем доводили до одного л, снова размешивали, дали отстояться и раствор был готов к использованию.
Приготовление культуры ооцист Eimeria spp.
Фекалии спонтанно зараженных эймериями бройлеров трех-четырех-недельного возраста при напольной технологии их содержания на птицефабрике были использованы для сбора ооцист. Полученный материал от зараженных бройлеров исследовали флотационным методом Фюллеборна. С помощью паразитологической петли из проб фекалий от зараженных бройлеров снимали поверхностную пленку и собирали в чашку Петри с водой, трижды отмывали ооцист от соли, подсчитывали их количество в одной капле, затем в одном миллилитре, добавляли консервант - 2%-ный раствор бихромата калия и использовали в дальнейшей работе при культивировании их в условиях лаборатории при температуре +24°С. Процесс культивирования проходил в течение пяти дней, ежедневно проводили аэрацию и с третьего дня делали осмотр и оценку культуры ооцист под микроскопом. Через пять дней после культивирования проводили заключительную оценку, определяли процент споруляции, который составил 96,0%. Для разведения готовой культуры использовали буфер. При приготовлении буфера SWH к 3300 мл дистиллированной воды добавили 17,5 мл 10%-ного раствора хлорида кальция и пять мл 10%-ного раствора сульфата магния, автоклавировали в течение 15 минут при 120°С, рН раствора определяли с помощью прибора «Аквилон-410».
Для проведения лизис-теста приготовленные средства дезинвазии (3; 4 и 5%-ные растворы средства и 4%-ный фенол) и буфер WSH по отдельности поместили по 50 мл в 250 мл колбы Эрленмейера и добавили по 50 мл раствора с ооцистами кокцидий в концентрации 2000 ооцист/мл. Затем эти колбы ставили на вибростолик со скоростью вращения 100 об/мин на два часа. По истечении времени содержимое из колбы выливали в пластиковую бутылку с завинчивающейся крышкой объемом 1500 мл, колбу с остатком раствора ополаскивали несколько раз и сливали в пластиковую бутылку и объем доводили буфером до 1500 мл. Затем бутылку переворачивали несколько раз (три раза) и оставляли при комнатной температуре (20±2°С) в течение 24 часов. После чего раствор сливали до отметки 30 мл, а осадок переливали в новую емкость объемом 100 мл, пластиковую бутылку ополаскивали несколько раз с использованием буфера, доводя объем до 50 мл.
Пример 2. Биопроба по экспериментальному заражению цыплят-бройлеров для определения эффективности средства для дезинвазии птичников
Испытание разных концентраций средства для дезинвазии проводили в условиях экспериментального хозяйства ранее отмеченного института на 60 цыплятах 14-дневного возраста, свободных от кокцидий и их корма не содержали антикокцидийные препараты. Для концентрации спорулированных ооцист кокцидий (2000 экз/мл) использовали камеру Мак Мастера и микроскоп МБС, а для разведения применяли буфер SWH с таким расчетом, чтобы задавать каждому цыпленку 1 мл суспензии. Опытных цыплят подвергали клиническому обследованию, индивидуальной нумерации, взвешиванию и по принципу аналогов разделили на шесть групп по 10 цыплят в каждой.
Цыплятам 1, 2 и 3 групп назначали по одному мл суспензии ооцист эймерий, обработанной 3; 4 и 5%-ной концентрацией дез. средства внутрь при помощи микропипетки постепенно. Цыплятам 4 группы задавали по одному мл суспензии ооцист эймерий, обработанной 4%-ным раствором фенола (базовое средство). Цыплята 5-й группы получали по одному мл суспензии, содержащей 2000 ооцист/мл - зараженный контроль. Цыплята 6-й группы получали по одному мл буферного раствора и служили «чистым» контролем.
В процессе опыта цыплята всех шести групп находились в аналогичных условиях содержания и имели одинаковый рацион. За ними вели ежедневные клинические наблюдения: за общим состоянием, их поведением, приемом корма и воды, видимыми физиологическими изменениями.
Для установления выделения ооцист эймерий в фекалиях от цыплят каждой группы отдельно с шестые по 12 сутки собирали ежедневно весь помет, взвешивали, добавляли воду до массы 2000 г, смешивали смесителем в течение пяти минут. Для дальнейших исследований из каждой группы отбирали пробы в количестве 25 г, которые консервировали 4%-ным раствором бихромата калия, размешивали до однородной массы, затем перекладывали в пластиковые миниконтейнеры с завинчивающейся крышкой и хранили в лабораторном холодильнике при температуре +4°С.
Наличие ооцист в фекалиях определяли флотационным методом Фюллеборна с использованием насыщенного раствора натрия хлористого, плотностью 1,18 г/см3, а количество ооцист/г фекалий подсчитывали с использованием камеры Мак Мастера.
Эффективность разных концентраций средства и 4%-ной концентрации фенола определяли, исходя из процента снижения выделения ооцист эймерий после воздействия на них отмеченными концентрациями средств дезинвазии, по сравнению с цыплятами контрольной группы, которым давали по 2000 ооцист/мл.
Проведенные исследования по установлению ооцист эймерий в фекалиях опытных цыплят, собранных с шестые по 12-е сутки после назначения обработанных средствами дезинвазии суспензий, показали, что их определенное количество находили во всех группах, но оно было разное. Так, при исследовании опытных цыплят первой группы, которым назначали суспензию ооцист, обработанную 3%-ной концентрацией дез. средства, ооцист в фекалиях находили во все сроки исследований и средний показатель в одной камере за все сроки исследований составил 1,9. Количество ооцист/г помета по этой группе составило 380 экз., что в проценте от контроля 7,69%. Отсюда, интенсэффективность средства в 3%-ной концентрации дез. средства или процент снижения количества ооцист после воздействия на них отмеченной концентрации средства составила 92,31% (табл. 1).
Результаты исследований проб помета от цыплят 2 и 3-й групп, которые получали суспензию ооцист, обработанную 4 и 5%-ной концентрацией комплексного средства, соответственно, показали, что среднее количество ооцист в одной камере составило 1,4 и 1,22. Количество ооцист/г помета по этим группам составило 280 и 244 экз., что в проценте от контроля 5,67 и 4,94%. Интенсэффективность в 4%-ной концентрации против ооцист эймерий равнялась 94,33%, а в 5%-ной - 95,06%.
В четвертой группе цыплят после назначения суспензии ооцист, обработанной 4%-ной концентрацией фенола, средний показатель в одной камере составил 6,9, а количество ооцист/г помета составило 1380 экз., что составляет 27,93% от контроля. Интенсэффективность фенола в 4%-ной концентрации против ооцист эймерий составила 72,1%.
Цыплята пятой группы, получавшие 2000 спорулированных ооцист/мл, во все сроки исследований с пометом выделяли ооцист эймерий и средний показатель в одной камере за период исследований составил 24,7 экз. Количество ооцист/г помета по группе зараженного контроля составило 4940 экз. и данный показатель был использован как исходный при расчете процента снижения количества ооцист при испытании разных концентраций дезинфектантов.
Цыплята шестой группы, получавшие буфер без ооцист, во все сроки исследований оставались свободными от эймерий.
При определении интенсэффективности испытуемых средств дезинвазии использовали следующую формулу:
где ИЭ - интенсэффективность дез. средства, %,
КОк - количество ооцист у цыплят контрольной группы, экз.,
КОд - количество ооцист у цыплят, получавших обработанные средством дезинвазии ооцисты, экз.
Используя полученные нами в опыте данные, определяли интенсэффективность средства дезинвазии в 3%-ной концентрации:
В концентрациях 4 и 5%-ных средство показало против ооцист эймерий 94,33 и 95,06%-ную интенсэффективность, соответственно.
Интенсэффективность использованного нами в качестве базового средства фенола 4%-ного составила 72,1%.
Интенсэффективность комплексного дез. средства в разных концентрациях против ооцист кокцидий птиц колебалась от 92,31 до 95,06%. Исходя из того, что эффективность дез. средства в 4 и 5%-ной концентрации по данному показателю практически не отличалась (94,33 и 95,06% соответственно) для обработки птичников в период подготовки к заселению цыплятами мы рекомендуем его использовать в 4%-ной концентрации.
Источники информации
1. Акбаев М.Ш., Василевич Ф.И., Акбаев P.M. и др. Паразитология и инвазионные болезни животных. - М., 2008. - 776 с.
2. Вершинин И.И. Кокцидиозы животных и их дифференциальная диагностика. - Екатеринбург, 1996. - 264 с.
3. Методические рекомендации по борьбе с эймериозами изоспорозами животных. - М., 1994, РАСХН. - 30 с.
4. Сафиуллин Р.Т., Забашта А.П. Эффективность и экономичность монлара, кокцисана и элонкограна при эймериозе цыплят // Труды ВИГИС.- М., 2002. - Т.38. - С. 30-35.
5. Черепанов А.А. Методические рекомендации по испытанию средств дезинвазии в ветеринарии. - М., 1999. - 16 с.
Способ борьбы с эндо- и экзогенными стадиями кокцидий цыплят-бройлеров при напольной технологии их содержания, характеризующийся тем, что перед заселением цыплят проводят обработку объектов внешней среды комплексным средством в дозе 0,5 л на м2 при экспозиции 2 ч, содержащим в качестве исходных компонентов (масс. %):
| Глутаровый альдегид | 4 |
| 2-фенилфенол | 6,5 |
| 4-хлор-3-метилфенил | 5 |
| Изопропанол | 16 |
| Молочная кислота | 3 |
| Поверхностно активные вещества | 18 |
| Вода | до 100 |
и используют совместное назначение кормового кокцидиостатика салиномицина 12%-ного в дозе 500 г на тонну корма в течение периода выращивания и кокцидиостатика толтразурила 2,5%-ного с питьевой водой с 8-10 суток жизни в дозе из расчета 1 литр препарата на 1 тонну воды.
