Акарицидный противомикробный зоошампунь и способ его получения
Владельцы патента RU 2757490:
федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВО КФУ) (RU)
Изобретение относится преимущественно к ветеринарии, а именно к моющим средствам, зоошампуням, применяемым для лечения и профилактики грибковых и бактериальных заболеваний, а также для борьбы с акариформными клещами, относящимся к типу членистоногих к классу паукообразных к отряду клещей подотряду Sarcoptiformes надсемейству Sarcoptoidea, – чесоточными клещами. Акарицидный противомикробный зоошампунь содержит следующее соотношение исходных компонентов (мас.%): н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид – 0,01; 4,6-динитро-5-хлорбензофуроксан – 1,0; лауретсульфат натрия – 17,0; кокамидопропил бетаин – 5,0; кокамид диэтаноламин – 1,0; вода дистиллированная – остальное. Способ получения акарицидного противомикробного зоошампуня заключается в том, что сначала готовят мыльную основу, для чего берут 17,0 мас.% лауретсульфатнатрия, 5,0 мас.% кокамидпропилбетаина, 1,0 мас.% кокамид диэтаноламина и воду дистиллированную, перемешивают при комнатной температуре до получения однородной консистенции; затем готовят смесь действующих веществ, для чего берут 1,0 мас.% 4,6-динитро-5-хлорбензофуроксана, растворенного в этиловом спирте, добавляют 0,01 мас.% н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида, растворенного в этиловом спирте, полученную смесь перемешивают до получения однородной консистенции. Затем в мыльную основу добавляют при постоянном перемешивании смесь действующих веществ, перемешивание продолжают до получения однородной консистенции. Далее смесь подогревают до температуры 64,7°С, выдерживают при перемешивании до полного испарения этилового спирта и охлаждают при комнатной температуре. Предлагаемый акарицидный противомикробный зоошампунь обладает комбинированным акарицидным, антибактериальным и противогрибковым действием, имеет низкую токсичность для млекопитающих и высокую эффективность в отношении акариформных клещей, патогенных кожных грибков и бактерий. 2 н.п. ф-лы, 1 ил., 5 табл., 6 пр.
Изобретение относится преимущественно к ветеринарии, а именно к моющим средствам, зоошампуням, применяемым для борьбы с акариформными клещами, относящимся к типу членистоногих, к классу паукообразных, к отряду клещей, подотряду Sarcoptiformes, надсемейству Sarcoptoidea – чесоточными клещами, а также для лечения и профилактики грибковых и бактериальных заболеваний. Чесоточные клещи являются паразитами домашних и диких животных, вызывают микробные нагноения и расчесы, локализуются внутри или на коже и вызывают заболевание – чесотку, которая может передаваться и человеку.
Необходимость комплексного акарицидного, противогрибкового и антибактериального действия обусловлена тем, что клещи вступают в симбиотическое взаимодействие с бактериями и грибками, вследствие чего пораженная клещами кожа становится питательной средой для бактерий и грибов.
Далее заявителем представлены термины и понятийный аппарат, используемый в заявленном техническом решении, для исключения противоречий и более полного понимания сущности заявленного технического решения.
Акариформные клещи – беспозвоночные животные, относящиеся к типу членистоногих (Arthropoda), классу хелицеровых (Chelicerata), отряду Acariformes. Вызывают дерматиты, чесотку, аллергию, могут вызывать катаральные состояния дыхательных путей и желудочно-кишечного тракта. [https://бмэ.орг/index.php/%D0%90%D0%9A%D0%90%D0%A0%D0%98%D0%A4%D0%9E%D0%A0%D0%9C%D0%9D%D0%AB%D0%95_%D0%9A%D0%9B%D0%95%D0%A9%D0%98].
Инвазия – проникновение паразитов через эпителиальные баръеры хозяина [https://ru.wikipedia.org/wiki/Инвазия].
Саркоптоз (Sarcoptoses) — несезонное контагиозное (заразное) зудневое кожное заболевание животных, вызываемое акариформными клещами рода Sarcoptes. [https://ru.wikipedia.org/wiki/Саркоптоз].
Нотоэдроз (Notoedrosis) – акариаз человека и домашних животных, характеризующийся раздражением кожи, зудом.
Амитраз - органическое соединение синтетического происхождения, относящееся к группе триазопентадиеновых соединений; является членом семьи амидинов. Является действующим веществом ряда препаратов, используемых в растениеводстве, животноводстве и пчеловодстве как акарициды системного действия [https://ru.wikipedia.org/wiki/Амитраз].
Амидин - кожный антисептик и дезинфицирующее средство с содержанием этилового спирта [https://infodez.ru/product/view1/9512_amidin_akva.html].
Основной задачей заявленного технического решения является разработка отечественного зоошампуня для борьбы с различными видами чесоточных клещей, а также для лечения и профилактики различных грибковых и бактериальных инфекций у домашних и сельскохозяйственных животных, вызванных экзогенными инфекционными факторами, и способа получения заявленного шампуня.
Данная инвазия наносит значительный экономический ущерб, который складывается из снижения продуктивности животных, ухудшения качества шкуры, затрат на проведение лечебно - профилактических мероприятий (Лашкова В.А. Акарицидные свойства спиртовых препаратов на основе клофентезина, гекситиазокса, тиабендазола, селенотеозина / В.А. Лашкова, А.Н. Токарев // Сборник научных трудов: Актуальные проблемы ветеринарной медицины - № 150. - Санкт-Петербург, 2019. – С. 19-20).
Течение саркоптозов может быть острым, хроническим и латентным, что в большинстве случаев связано с недостаточной эффективностью средств, используемых для лечения. Основные клинические признаки – это зуд, поражение кожи, интоксикация организма и угнетение центральной нервной системы. Поэтому поиск новых отечественных акарицидных лекарственных препаратов является актуальным и своевременным на дату представления заявочных материалов.
Сущность заявленного технического решения заключается в том, что в качестве акарицидного и противомикробного средства используется шампунь, в состав которого входит два действующих вещества в соотношении (1) : (2) = 0.01 : 1, где:
(1) – н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид;
(2) – 4,6-динитро-5-хлорбензофуроксан.
(1)
(2)
Из исследованного уровня техники заявителем выявлена противомикробная активность как таковая действующих веществ, входящих в заявленный шампунь.
Так, известно изобретение по патенту РФ № 2452477 «Антибактериальная и антимикотическая композиция широкого спектра действия на основе солей фосфония и замещенного бензофуроксана», сущностью является антибактериальная и антимикотическая композиция, содержащая галоидные соли четвертичного фосфония, на основе трибутил- и трифенилфосфинов с высшими галоидными алкилами и 5,7-дихлор-4,6-нитробензофуроксан в качестве активных компонентов при их эквимольном соотношении.
Также известна акарицидная активность действующих веществ, входящих в заявленный шампунь, из изобретения по патенту РФ № 2497508 «Акарицидная фармацевтическая композиция на основе соли четвертичного фосфония, замещенного динитробензофуроксана и ксимедонгидрохлорида», сущностью является средство для лечения от чесоточных клещей в ветеринарии, включающее четвертичную соль фосфония, замещенный динитробензофуроксан, ксимедонгидрохлорид и диметисульфоксид при их весовом соотношении 0,1:1:10:100, для лечения используется 1% эмульсия данного средства в диметилсульфоксиде.
Анализ исследованного заявителем уровня техники показал, что структурных аналогов заявленного акарицидного противомикробного шампуня для лечения и профилактики грибковых и бактериальных заболеваний, а также для борьбы с клещами на основе четвертичных солей фосфония (1) и смеси двух фуроксанов (2 и 3), на дату подачи настоящей заявки из исследованного уровня техники не выявлено.
Кроме того, не выявлены средства, в которых бы комбинировались как противомикробные, так и акарицидные свойства, что является весьма актуальным фактором. Заявителем на существующем рынке не выявлено наличие специальных моющих средств, имеющих максимально широкий спектр действия, при этом изготовленные в виде зоошампуня, применимого не только как моющее средство, но и как средство для борьбы с акариформными клещами, а также для лечения и профилактики грибковых и бактериальных заболеваний. При этом из исследованного уровня техники заявителем не выявлены средства, доступные для широкого спектра использования, в том числе и для лечения населения по доступной цене.
В связи с этим, одной из основных задач заявленного технического решения является создания эффективного нетоксичного зоошампуня, который включал бы в себя как акарицидные, так и противомикробные свойства. Так как заявителем из исследованного уровня техники не выявлены комбинированные моющие средства, были изучены отдельно акарицидные и отдельно противогрибковые средства и были сопоставлены их как качественные, так и потребительские свойства по сравнению с заявленным техническим решением. Далее заявителем представлен анализ выявленных средств в указанной выше по тексту последовательности.
Акарицидные средства
Из исследованного уровня техники заявителем выявлено средство перметрин — это синтетический инсектицид, акарицид, который относится к группе пиретринов, природных инсектицидов, содержащихся в цветках семейства астровых (хризантемы, астры). В низких дозах пиретрины действуют как репелленты и отпугивают насекомых. В более высоких дозах данные соединения поражают нервную систему насекомых, нарушая передачу нервных импульсов. Это провоцирует паралич насекомых и последующую смерть.
Так, известно изобретение по патенту РФ № 2409948 «Инсектицидный состав Дис», сущностью является инсектицидный состав для борьбы с резистентными к перметрину и пиретроидам вшам на различных стадиях развития, содержащий перметрин, неионогенное оксиэтилированное поверхностно-активное вещество, феноксиэтанол, уксусную кислоту, шампунь «Яблоко», отличающийся тем, что он дополнительно содержит пирипроксифен при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| Перметрин | 0,2-1,5 |
| Пирипроксифен | 0,001-0,1 |
| Неионогенное оксиэтилированное | |
| поверхностно-активное вещество | 1,4-10 |
| Феноксиэтанол | 3,0-9,0 |
| Уксусная кислота | 0,1-0,2 |
| Шампунь «Яблоко» | остальное |
Недостатком известного технического решения является то, что метаболизм перметрина происходит главным образом в печени. Основным ферментом, участвующим в этом процессе, является глюкоронозилтрансфераза. Известно, что данный фермент в печени кошки образуется гораздо в меньшем количестве, чем в печени собаки или человека [Richardson, J.A. (2000). Permethrin spot‐on toxicoses in cats. J. Vet. Emerg. Crit. Care 10: 103–106]. В связи с этим, использование перметрина в шампунях для кошек недопустимо, так как это может стать причиной летального исхода. Еще одним недостатком является непродолжительность действия данного компонента в форме шампуня.
Известно изобретение по заявке РФ № 97111096 «Инсектоакарицидный препарат для борьбы с эктопаразитами животных Моринилин», сущностью является инсекто-акарицидный препарат для борьбы с эктопаразитами животных, содержащий амитраз и гидрофобную основу, отличающийся тем, что дополнительно содержит дельтаметрин и диметилсульфоксид, а в качестве гидрофобной основы - полиэтиленоксид при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| Амитраз | 0,2 - 1,0 |
| Дельтаметрин | 0,005 - 0,02 |
| Диметилсульфоксид | 10 - 20 |
| Полиэтиленоксид | остальное |
Недостатком известного технического решения является риск отравления амитразом при неправильной дозировке. Известно, что большую часть времени отравление амитразом у животных, особенно у собак и кошек, протекает остро, наблюдается брадикардия и гипотензия, в некоторых случаях сгущается кровь [Gupta, R. C. (2012). Amitraz. Veterinary Toxicology, 599–603. Doi:10.1016/b978-0-12-385926-6.00049-1]. Таким образом известный препарат обладает низкой эффективностью при использовании по назначению.
Известно изобретение по заявке РФ №2006136805/15 от 17.03.2005 «Крем-гель, содержащий Ивермектин», сущностью по отношению к композиции является фармацевтическая композиция на основе соединения семейства авермектина в форме крем-геля, включающая в физиологически приемлемой среде масляную фазу, диспергированную в водной фазе с помощью полимерного эмульгатора, который не является поверхностно-активным веществом, причем указанная масляная фаза включает масла с температурой плавления ниже 30°С и свободна от твердых жиров с температурой плавления выше 30°С. Сущностью по отношению к способу является способ получения композиции по любому из пп.1-17 при комнатной температуре, включающий следующие стадии: а) компоненты жирной фазы смешивают до тех пор, пока указанная фаза не станет гомогенной; b) компоненты водной фазы растворяют в воде до получения полной гомогенности; с) полимерный эмульгатор и необязательный карбомер диспергируют в водной фазе до получения гомогенного геля; d) при умеренном перемешивании жирную фазу вводят в гомогенный гель, полученный на стадии с), таким образом, чтобы получить эмульсию; е) смешивают компоненты активной фазы; ивермектин солюбилизируют в полученной смеси; полученную фазу затем вводят в эмульсию при умеренном перемешивании; f) при умеренном перемешивании вводят нейтрализующий агент таким образом, чтобы получить требуемое значение рН.
Основным недостатком известного технического решения по отношению к композиции служит нейротоксичность известного препарата для животных, которая может проявляться в виде угнетения центральной нервной системы млекопитающих с последующей атаксией.
Основным недостатком известного технического решения по отношению к способу является низкая технологичность, высокие энергетические затраты. При этом последовательность действий известного способа существенно отличается от заявленного технического решения. Таким образом, основываясь на вышеизложенном, известный препарат (крем-гель) обладает низкой эффективностью при использовании по назначению.
На дату представления заявленного технического решения наиболее эффективными, удобными и перспективными для практического применения являются пероральные препараты изоксазолинового класса. При этом следует акцентировать внимание на том, что из исследованного уровня техники в целом не выявлено ни одного случая выработки резистентности у клещей к этим соединениям, что является основополагающим фактором для его использования по назначению.
Однако данных о безопасности известных препаратов по отношению к применению на животных на дату представления заявленных материалов явно недостаточно. Тем не менее, Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) США опубликовало предупреждение о возможных побочных эффектах для данных препаратов [https://www.fda.gov/animal-veterinary/cvm-updates/animal-drug-safety-communication-fda-alerts-pet-owners-and-veterinarians-about-potential-neurologic Дата обращения: 30.04.2020]. В нем сообщалось о принципиальной возможном появлении тремора, атаксии, различных неврологических припадках и судорогах у собак. Также фиксировалась потеря аппетита, общая вялость, рвота и понос.
Противогрибковые средства
Для борьбы и профилактики различных грибковых инфекций выявлены ряд шампуней, обладающих противогрибковой активностью. В качестве активного вещества используются такие соединения, как хлоргексидин, триклозан, миконазол или кетоконазол.
Так, заявителем выявлено изобретение по патенту US5776430A «Антимикробное очищающее средство для местного применения, содержащее глюконат хлоргексидина и спирт», сущностью является антимикробный шампунь широкого спектра действия, где хлоргексидин является наружным антисептиком и дезинфицирующим средством, содержащем:
(а) от примерно 0,65 до 0,85 мас. % хлоргексидина или его фармацевтически приемлемой соли;
(b) от примерно 0,1 до 0,4 мас. % цетилактата или его фармацевтически приемлемой соли;
(c) примерно от 50 до 60 мас. % этиловый спирт;
(d) от примерно 1,0 до 2,0 мас. % эмульгирующего воска NF; и,
(e) аэрозольный пропеллент.
Недостатком известного технического решения является то, что применение хлоргексидина в качестве активного вещества в зоошампуне имеет ряд ограничений: наличие сульфатных ПАВ инактивируют хлоргексидин; для проявления противомикробной активности шампунь должен находиться на шерсти животного не менее 7 минут, что может вызывать сухость кожи и аллергию.
Наиболее эффективным, по мнению заявителя, и часто встречающимся в лечебных шампунях компонентом является кетоконазол – противогрибковый лекарственный препарат, производное имидазола.
Из исследованного уровня техники заявителем также выявлены ряд других технических решений с использованием кетоконазола в качестве действующего вещества: изобретения по патентам РФ № 2246291 «Шампунь на основе кетоконазола», РФ № 2611410 «Шампунь для очищения волос и кожи головы (варианты)», US7732450B2 «Противогрибковая композиция кетоконазола для местного применения», EP0758879B1 «Улучшенный шампунь от перхоти».
В связи с тем, что кетоконазол в основном используется в качестве компонента шампуня для людей, он был взят заявителем в качестве репера при микробиологических исследованиях для сопоставления с заявленным техническим решением.
Таким образом, из исследованного уровня техники не выявлено аналогов заявленного технического решения как по отношению как к составу, так и по отношению к способу его получения. Основываясь на изложенном, независимые пункты формулы изобретения составлены без ограничительной части.
Целями и техническим результатом заявленного технического решения является создание принципиально нового отечественного акарицидного и противомикробного зоошампуня и способа его получения, обладающего (зоошампунь):
- комбинированным акарицидным, антибактериальным и противогрибковым действием;
- низкой токсичностью за счет оптимально подобранного состава и соотношения активных компонентов и их низкого содержания в заявленном шампуне;
- удобной формой выпуска в виде шампуня, предполагающей использование как в качестве лечебного, так и профилактического средства.
- высокой эффективностью при использовании по назначению по сравнению с известными в мире аналогами на дату подачи заявки техническими решениями.
Сущностью заявленного технического решения является акарицидный противомикробный зоошампунь, характеризующийся тем, что содержит следующее соотношение компонентов, мас.%:
| н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид | 0,01 |
| 4,6-динитро-5-хлорбензофуроксан | 1,0 |
| лауретсульфат натрия | 17,0 |
| кокамидопропил бетаин | 5,0 |
| кокамид диэтаноламин | 1,0 |
| вода дистиллированная | остальное |
Способ получения акарицидного противомикробного зоошампуня по п.1, заключающийся в том, что сначала готовят мыльную основу, для чего берут 17,0 мас.% лауретсульфатнатрия, 5,0 мас.% кокамидпропилбетаина, 1,0 мас.% кокамид диэтаноламина, остальное – вода дистиллированная, перемешивают при комнатной температуре до получения однородной консистенции; затем готовят смесь действующих веществ, для чего берут 1,0 мас.% 4,6-динитро-5-хлорбензофуроксана, растворенного в этиловом спирте, добавляют 0,01 мас.% н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида, растворенного в этиловом спирте, полученную смесь перемешивают до получения однородной консистенции; затем в мыльную основу добавляют при постоянном перемешивании смесь действующих веществ, перемешивание продолжают до получения однородной консистенции, далее смесь подогревают до температуры 64,7°С, выдерживают при перемешивании до полного испарения этилового спирта; далее смесь охлаждают при комнатной температуре.
Заявленное техническое решение иллюстрируется Фиг. 1 – Фиг. 5.
На Фиг. 1 представлена Таблица 1, в которой приведена антибактериальная и противогрибковая активность действующих веществ (1) и (2) (Пример 2).
На Фиг. 2 представлена Таблица 2, в которой приведена антибактериальная и противогрибковая активность готового заявленного акарицидного противомикробного зоошампуня (Пример 3).
На Фиг. 3 представлены:
– Таблица 3, в которой приведена антибактериальная и противогрибковая активность готового заявленного акарицидного противомикробного зоошампуня после разбавления;
– график, на котором приведены величины зоны задержки роста микробов (Пример 4).
На Фиг. 4 представлена Таблица 4, в которой приведено акарицидное действие различных концентраций заявленного акарицидного противомикробного зоошампуня на чесоточных клещей (Пример 5).
На Фиг. 5 представлена Таблица 5, в которой приведена сравнительная эффективность заявленного зоошампуня по сравнению с известными акарицидными средствами при нотоэдрозе кошек (Пример 6).
Далее заявителем приведено более детальное описание заявленного технического решения, начиная с получения исходных компонентов, описанных в выявленных заявителем из известных как таковых источников информации.
Компоненты заявленного зоошампуня получают следующим образом.
Н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид (1) получают по известному способу [Старке Ч.М. Межфазный катализ. Химия, катализаторы и применение / Ред. Ч.М. Старкс. М.: Химия, 1991. - 157 с.].
4,6-Динитро-5-хлорбензофуроксан (2) получают по известному способу [Бузыкин Б.И., Губайдуллин А.Т., Литвинов И.А., Юсупов Л.М. Бутлеровские сообщения, 2005, 6(2), 29-32].
Лауретсульфатнатрия, кокамидпропилбетаин и кокамид диэтаноламин являются известными как таковыми) компонентами мыльной основы, выпускаемыми промышленным способом.
Заявленный зоошампунь получают заявленным способом по следующим основным этапам.
Этап 1. Приготовление мыльной основы из лауретсульфата натрия, кокамидопропил бетаина, кокамид диэтаноламина и воды дистиллированной.
Этап 2. Приготовление смеси спиртовых растворов действующих веществ н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида (1), 4,6-динитро-5-хлорбензофуроксана (2).
Этап 3. Приготовление готового зоошампуня смешиванием мыльной основы и смеси действующих веществ по заявленной последовательности действий.
Далее заявителем приведены примеры осуществления заявленного технического решения.
Пример 1. Приготовление заявленного акарицидного противомикробного зоошампуня по заявленному способу
Этап 1. Приготовление мыльной основы
Готовят мыльную основу, для чего берут 17 мас.% лауретсульфатнатрия (например, 17 г), 5 мас.% кокамидпропилбетаина (например, 5 г), 1 мас.% кокамид диэтаноламина (например, 1 г), остальное – вода дистиллированная (до 100 мас.% общей массы шампуня, например, 75,99 г), перемешивают при комнатной температуре до получения однородной консистенции, например, на магнитной мешалке.
Этап 2. Приготовление смеси действующих веществ
Действующие вещества предварительно растворяют в этиловом спирте.
Берут 1,0 мас.% 4,6-динитро-5-хлорбензофуроксана (например, 1 г), растворенного, например, в 10 мл этилового спирта, добавляют 0,01 мас.% н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида (например, 0,01 г), растворенного, например, в 1 мл этилового спирта. Полученную смесь перемешивают до получения однородной консистенции при комнатной температуре, например, на магнитной мешалке.
Этап 3. Приготовление готового зоошампуня
В мыльную основу, приготовленную по Этапу 1, добавляют при постоянном перемешивании, например, на магнитной мешалке, смесь действующих веществ (1) и (2), приготовленную по Этапу 2, перемешивание продолжают до получения однородной консистенции. Затем смесь подогревают до температуры 64,7 °С, например, на водяной бане, выдерживают при перемешивании до полного испарения этилового спирта. Далее смесь охлаждают при комнатной температуре с получением заявленного зоошампуня.
Далее заявителем приведены примеры подтверждения антимикробной и акарицидной активности заявленного зоошампуня.
Пример 2. Исследование антимикробной (антибактериальной и противогрибковой) активности действующих веществ (1) и (2)
Для изучения антимикробных свойств действующих веществ (1) и (2) использовался седиментационный метод исследования воздуха, предложенный Р. Кохом.
Данный метод заключается в культивировании бактерий воздуха помещений на питательных средах, обработанных исследуемыми веществами. В соответствии с этим методом проводили культивирование бактерий воздуха помещений на питательных средах, обработанных спиртовым раствором действующих веществ (1) и (2) в концентрации 1%, с последующим определением качественного состава патогенных колоний.
Приготовленную агаризированную питательную среду в стерильном боксе разливали в стерильные чашки Петри.
Изучение проводили на примере микроорганизмов E. Coli, B. Cereus, S. Aureus, Candida albicans.
Для изучения антимикробных свойств смеси действующих веществ (1) и (2) в питательную среду каждой чашки, заселенную микроорганизмами, вносили 5 капель смеси и распределяли ее по всей поверхности питательной среды.
Чашку хранили в термостате в течение 5 дней при температуре 29 – 30°С, постоянно следя за процессом роста колоний. Делали описание культуральных и морфологических признаков колоний в каждой чашке Петри.
Результаты измерения антибактериальной и противогрибковой активность смеси действующих веществ (ДВ) (1) и (2) приведена в Таблице 1 на Фиг.1.
Из данных, приведенных в Таблице 1, можно сделать вывод, что смесь действующих веществ (1) и (2) заявленного зоошампуня обладает высокой антибактериальной и противогрибковой активностью. Причем указанная активность проявляется в приготовленном зоошампуне при весьма низкой концентрации ДВ, в пределах около 1 мас.% (см. Примеры и Фигуры).
При этом следует акцентировать внимание на факте того, что высокая эффективность заявленного технического решения сохраняется даже при его значительном разведении – в 2, 4, 8, 16, 32 и 64 раза (при концентрации ДВ 0,5 – 0,016 мас.% соответственно – см. Таблицу 3 на Фиг.3), принимая во внимание факт того, что исходная концентрация действующих веществ изначально составляет величину нескольким более 1 мас.%. По мнению заявителя, это является доказательством того, что заявленное техническое решение является весьма эффективным при использовании по назначению, так как из исследованного уровня техники известно, что аналоги проявляют только частичный лечебный эффект (антибактериальный и противогрибковый) при более высоких концентрациях действующих веществ – от 0,2 до 3,0 мас.%, а именно:
хлоргексидин – 0,65–0,85 мас.% (US5776430A);
кетоконазол – 0,3–3,0 мас.% (РФ № 2246291)
кетоконазол или элубиол – 0,3-3,0 мас.% (EP0758879B1);
перметрин – 0,2-1,5 мас.% (РФ № 2409948).
Пример 3. Исследование антимикробной (антибактериальной и противогрибковой) активности заявленного акарицидного противомикробного зоошампуня
Для изучения антимикробных свойств готового заявленного зоошампуня также использовался седиментационный метод исследования воздуха Р. Коха.
Для контроля был выбран известный шампунь с содержанием 2 мас.% кетоконазола.
Приготовленную агаризированную питательную среду в стерильном боксе разливали в стерильные чашки Петри.
Для изучения антимикробных свойств шампуней в питательную среду каждой чашки, заселенную микроорганизмами, вносили соответственно по 5 капель 1% заявленного зоошампуня и 2% шампуня с кетоконазолом в качестве сравнения, и распределяли его по всей поверхности питательной среды.
Чашки хранили в термостате в течение 5 дней при температуре 29 – 30 °С, постоянно следя за процессом роста колоний. Делали описание культуральных и морфологических признаков колоний в каждой чашке Петри.
Данные об антимикробной активности 1% заявленного акарицидного противомикробного зоошампуня, а также взятого в качестве сравнения 2% шампуня с кетоконазолом приведены в Таблице 2 на Фиг.2.
Из данных, приведенных в Таблице 2, можно сделать вывод, что заявленный зоошампунь, помимо противогрибковой, проявляет антибактериальную активность.
Также можно сделать вывод, что заявленный зоошампунь проявил соизмеримую с кетоконазолом противогрибковую активность, при этом содержание активных компонентов в заявленном зоошампуне значительно (примерно в два раза) ниже, чем в шампуне с кетоконазолом.
Пример 4. Исследование антимикробной (антибактериальной и противогрибковой) активности заявленного акарицидного противомикробного зоошампуня после разбавления при использовании его по назначению
Применение шампуня, как известно, предполагает разбавление водой, поэтому было важно определить концентрацию, при которой бы достигался эффективный противобактериальный эффект.
Растворы заявленного акарицидного противомикробного зоошампуня приготавливались методом разбавления.
Были приготовлены образцы, разбавленные в 2, 4, 8, 16, 32 и 64 раза соответственно.
Исследования проводились аналогично Примеру 3.
Результаты приведены в Таблице 3 и на диаграмме, представленных на Фиг.3.
Из данных, приведенных в Таблице 3 и на диаграмме (Фиг. 3), можно сделать вывод, что наиболее активным в отношении патогенной микрофлоры оказались 1% и 0.5%-е растворы зоошампуня.
Это означает, что при соотношении зоошампуня и воды в пропорциях 1:1 также будет достигаться максимально возможный терапевтический эффект.
При этом следует обратить внимание на факт того, что даже при разбавлении шампуня в 64 раза наблюдался ярко выраженный противогрибковый эффект в отношении Candida albicans, а также антибактериальный эффект в отношении B. Cereus.
Испытания при дальнейшем разбавлении заявителем не проводились, однако из полученных данных заявитель делает логический вывод, что заявленный зоошампунь при практическом использовании будет оказывать антибактериальный и противогрибковый эффект и за пределами исследованных концентраций.
Данный факт не только подтверждает высокий терапевтический потенциал заявленного зоошампуня, но и положительно отражается на экономических составляющих при использовании по назначению.
Пример 5. Изучение акарицидной активности заявленного акарицидного противомикробного зоошампуня в отношении клещей Psoroptes cuniculi in vitro
Исследования проводили в условиях in vitro на изолированных клещах P. cuniculi, взятых от спонтанно инвазированных кроликов по методике Ильященко В.И. (Ильященко В.И. Саркоптоидозные клещи, совершенствование методов диагностики и борьбы с ними.: Автореф. дис. докт. биолог, наук. С.-П., 1993. - 36 с.).
На фильтровальную бумагу, в чашке Петри, смоченную 1-2 мл заявленного зоошампуня в концентрации от 0,005 до 1%, соответственно, помещали по 20 живых клещей и накрывали их вторым листом бумаги, пропитанными тем же шампунем.
Закрытые чашки помещали в термостат при температуре 30°С, обеспечивая при этом доступ кислорода.
Наблюдение за клещами вели после воздействия препаратов по времени: через 10, 20, 30 мин, 1, 2, 4, 24 и 72 часа после нанесения препаратов соответственно.
Контролем служили 20 клещей, помещенных на фильтровальную бумагу, смоченную дистиллированной водой.
Данные исследований приведены в Таблице 4 на Фиг. 4.
Из данных, приведенных в Таблице 4, видно, что:
• Через 60 минут после нанесения заявленного зоошампуня:
– в 0,005 % концентрации мертвыми оказались 12 клещей из 20,
– в 0,01% концентрации мертвыми оказались 13 клещей из 20,
– в 0,05 - 1,0% концентрациях живых клещей не было выявлено.
• Через 24 и 72 часа после нанесения заявленного зоошампуня в использованных концентрациях от 0,05 до 1,0 живых клещей не было выявлено – заявленный зоошампунь оказал 100 % акарицидное действие.
В контроле (вода) клещи во все сроки исследования оставались живыми.
Пример 6. Изучение эффективности заявленного акарицидного противомикробного зоошампуня при нотоэдрозе кошек
Лечению подвергали больных нотоэдрозом кошек, вызванным возбудителем Notoedres cati, паразитирующим на коже головы.
Перед применением заявленный зоошампунь растворяли в воде, предварительно подогретой до 30-35 °С. Обработку проводили путем тщательного обмывания – сначала пораженных участков головы, где локализуются возбудители болезни, затем кошек мыли полностью.
Кошки были разделены на 3 группы (по 3 головы в каждой):
– кошек 1 группы обрабатывали 0,05% заявленным зоошампунем в дозе 0,5 мл, 2 раза с интервалом в 6 дней.
– кошек 2 группы обрабатывали контрольными препаратами для сравнения – лекарственным препаратом «Ивермек спрей», затем 0,05% шампунем с кетоконазолом в дозе 0,5 мл, 2 раза с интервалом в 6 дней.
– кошки 3 группы лечению не подвергались (контроль).
Учет результатов исследований проводили путем осмотра обработанной поверхности кожи и исследованием соскобов на наличие инвазионного начала через 7, 15 и 30 дней после обработки соответственно.
Результаты приведены в Таблице 5 на Фиг.5.
Из данных, приведенных в Таблице 5, видно, что до лечения в соскобах кожи больных кошек обнаружили как клещей Notoedres cati, так и яйца. При акарологическом исследовании кошек 1 группы через 7, 15 и 30 дней соответственно после лечения имаго и яйца клещей не были обнаружены.
У кошек 2 группы на 7 сутки после лечения соответственно в соскобах с кожи выявлены яйца клещей. В последующие сроки исследований результаты акарологических исследований были отрицательные.
Кошки 3-й, контрольной, группы были заражены нотоэдрозом во все сроки исследования.
Таким образом, из описанного выше можно сделать вывод, что заявителем достигнуты поставленные цели и заявленный технический результат, а именно – создан новый высокоэффективный отечественный акарицидный и противомикробный зоошампунь и разработан способ его получения. Заявленный зоошампунь, полученный по заявленному способу, обладает:
- комбинированным акарицидным, антибактериальным и противогрибковым действием;
- низкой токсичностью за счет оптимально подобранного состава и соотношения активных компонентов и их низкого содержания в заявленном шампуне;
- удобной формой выпуска в виде шампуня, предполагающей использование как в качестве лечебного, так и профилактического средства.
- высокой эффективностью при использованию по назначению по сравнению с известными в мире аналогами на дату подачи заявки техническими решениями.
Заявленное техническое решение соответствует условию патентоспособности «новизна», предъявляемому к изобретениям, так как на дату предоставления заявочных материалов заявителем из исследованного уровня техники не выявлены источники, обладающие совокупностью признаков, идентичными совокупности признаков заявленного технического решения.
Заявляемое техническое решение не является заведомо очевидным для специалиста в анализируемой области техники. Более того, заявляемое техническое решение позволяет решить ряд разноплановых задач, а именно, в сочетании с низкой концентрацией действующих веществ, заявляемый зоошампунь проявляет высокую антибактериальную, противогрибковую и акарицидную активность. Таким образом, заявленное техническое решение соответствует критерию «изобретательский уровень», предъявляемому к изобретениям.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «промышленная применимость», предъявляемому к изобретениям, т.к. заявляемый зоошампунь может быть получен посредством использования общеизвестных отечественных компонентов с применением стандартного оборудования и известных приемов.
1. Акарицидный противомикробный зоошампунь, характеризующийся тем, что содержит следующее соотношение исходных компонентов, мас.%:
| н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид | 0,01 |
| 4,6-динитро-5-хлорбензофуроксан | 1,0 |
| лауретсульфат натрия | 17,0 |
| кокамидопропил бетаин | 5,0 |
| кокамид диэтаноламин | 1,0 |
| вода дистиллированная | остальное |
2. Способ получения акарицидного противомикробного зоошампуня по п.1, заключающийся в том, что сначала готовят мыльную основу, для чего берут 17,0 мас.% лауретсульфат натрия, 5,0 мас.% кокамидпропил бетаина, 1,0 мас.% кокамид диэтаноламина и воду дистиллированную, перемешивают при комнатной температуре до получения однородной консистенции, затем готовят смесь действующих веществ, для чего берут 1,0 мас.% 4,6-динитро-5-хлорбензофуроксана, растворенного в этиловом спирте, добавляют 0,01 мас.% н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида, растворенного в этиловом спирте, полученную смесь перемешивают до получения однородной консистенции, затем в мыльную основу добавляют при постоянном перемешивании смесь действующих веществ, перемешивание продолжают до получения однородной консистенции, далее смесь подогревают до температуры 64,7°С, выдерживают при перемешивании до полного испарения этилового спирта, далее смесь охлаждают при комнатной температуре.
